人结缔组织生长因子(CTGF)ELISA Kit

• 品牌：BPRO

• 货号：BPE10091

• 规格：48T/96T

• 储存：2-8度

• 产品描述：人结缔组织生长因子(CTGF)ELISA Kit试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中结缔组织生长因子(CTGF)的水平。

适用范围：血清、血浆、组织及相关液体样本

工作原理：本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中结缔组织生长因子(CTGF)的水平。向预先包被了结缔组织生长因子(CTGF)单克隆抗体的酶标孔中加入结缔组织生长因子(CTGF)，温育；温育后，加入生物素标记的抗结缔组织生长因子(CTGF)抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中结缔组织生长因子(CTGF)的浓度呈正相关。

标本要求:A 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心

B 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右

C 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

D细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

E 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

F 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

G不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作程序:

A标准品的稀释：向5号标准品试管中加标准品原液240ul， 由5号标准品试管中吸取120ul标准品原液放入4号标准品试管中并加入120ul标准品稀释液，充分混合后从4号标准品试管中吸取120ul标准品混合液放入3号标准品试管中并加入120ul标准品稀释液充分混合，按照以上方法梯度稀释出2号标准品和1号标准品

（见示意图）。

B根据待测样品量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

C加样：

1）空白孔：空白对照孔不加样品，生物素标记的结缔组织生长因子(CTGF)抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂A&B和终止液，其余各步操作相同；

2）标准品孔：加入标准品50μl，链霉素-HRP50μl（标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加）；

3)待测样品孔:加入样本40μl，然后各加入抗-结缔组织生长因子(CTGF)抗体10μl、链酶亲和素-HRP50μl，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育60分钟。

D配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

E洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

F显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。

G终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

H测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。

I根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算

注意事项

A从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

B各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。

C严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

D为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

E不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

F底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

G手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

结果判断

A以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的P-selectin标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的P-selectin含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度。

B灵敏度：样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

C重复性：板内、板间变异系数≤10%