miRNA参与许多生物学活动，其异常表达与不可治愈的疾病有关，是一类很有前途的标志物。有许多PCR方法分析miRNA的表达水平。基于自有专利技术，美国Signosis开发了一种高灵敏、高分辨的实时PCR方法，用于检测miRNA的表达，其应用寡核苷酸连接和基于实时PCR的SYBR green。该方法可用于总RNA或细胞裂解物中的miRNA表达的定量分析，无需进行cDNA转换。 　　A. 优点： 　　美国Signosis公司miRNA实时PCR检测试剂具有以下优点： 　　·便利---试剂盒包含了从细胞裂解到PCR所有试剂。 　　·无需RNA制备---细胞裂解物可直接用于反转录，尽管用总RNA更好。 　　·实时---分析可以实时监测 　　B. 原理： 　　该方法中，靶miRNA分子与二对oligo连接，形成RNA/DNA复合物。当序列完全匹配时，这二对oligo与miRNA连接，二对oligo的节点通过DNA酶连接。miRNA之间单个寡核苷酸的差异就会阻止杂交或连接。寡核苷酸对连接上后，连接分子可进行实时PCR。

　　miR-17-92基因簇编码有miR-17-5p、miR-17-3p、miR-18a、miR-19a、miR-19b、miR-20a和miR-92。这些miRNA的表达促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、诱导肿生成。最新研究表明这些miRNA的基本功能不仅表现在肿的形成而且表现在心肺和免疫系统的正常发育。已有许多PCR的方法分析miRNA的表达。参与许多生物学活动，其异常表达与不可治愈的疾病有关，是一类很有前途的标志物。有许多PCR方法分析miRNA的表达水平。基于自有专利技术，美国Signosis开发了一种高灵敏、高分辨的实时PCR方法，用于同时检测miRNA的表达，其应用寡核苷酸连接和基于实时PCR的SYBR green。该方法可用于总RNA或细胞裂解物中的miRNA表达的定量分析，无需进行cDNA转换。 　　A. 优点： 　　miR-17-92实时PCR检测试剂具有以下优点： 　　·分辨力强---可鉴别miR-17-92及其同源。 　　·无需RNA制备---细胞裂解无需RNA制备可直接用于分析。 　　·实时---分析可以实时监测。 　　·多重分析---8个miRNA可同时分析。 　　B. 原理： 　　该方法中，靶miRNA分子与二对oligo连接，形成RNA/DNA复合物。当序列完全匹配时，这二对oligo与miRNA连接，二对oligo的节点通过DNA酶连接。miRNA之间单个寡核苷酸的差异就会阻止杂交或连接。寡核苷酸对连接上后，连接分子可进行实时PCR。一种miRNA带有一种标示序列，标示序列用作扩增引物之一，同源而不同miRNA如miR-19a和miR-19b进行PCR可被鉴别。

　　Let7家族调节从线虫到人的各种类生物的增殖和分化过程。成熟体(谓之let7a到let7i)与let7a序列在1到4位置有区别。同源体的表达水平不一样，其在器官发育和疾病起因上也不同。鉴别这些同源体将有助于阐明let7的功能。基于自有专利技术，美国Signosis开发了一种高灵敏、高分辨的实时PCR方法来测定miRNA的表达，同时分析let7同源体(Let7a, Let7b, Let7c, Let7d, Let7e, Let7f, Let7g 和 Let7i)。该方法应用寡核苷酸连接和基于实时PCR的SYBR green，其可用于总RNA或细胞裂解物中的miRNA表达的定量分析，无需进行cDNA转换。 　　A. 优点： 　　let7同源miRNA实时PCR检测试剂具有以下优点： 　　·分辨力强---可鉴别let7及其同源。 　　·无需RNA制备---细胞裂解无需RNA制备可直接用于分析。 　　·实时---分析可以实时监测。 　　·多重分析---8个miRNA可同时分析。 　　B. 原理： 　　该方法中，靶miRNA分子与二对oligo连接，形成RNA/DNA杂合体。当序列完全匹配时，这二对oligo与miRNA连接，二对oligo的节点通过DNA酶连接。miRNA之间单个寡核苷酸的差异就会阻止杂交或连接。寡核苷酸对连接上后，连接分子可进行实时PCR。一种miRNA带有一种标示序列，标示序列用作扩增引物之一，同源而不同miRNA进行PCR可被鉴别。

　　通过与mRNAs在特异位点的结合，切割靶位点或抑制转录(翻译)，MicroRNAs可调控基因表达。 MiRNA与靶的相互作用是由RNA诱导的沉默复合体(RISC)介导的。RISC介导的成熟miRNA与位点相互作用依赖于miRNA和靶位点的序列互补性以及在3 ' UTR结合位点的总数量。 许多重要的调节基因受miRNAs调控，如Ers受let-7, Bcl-2受miR15和miR16，ERs 受 miR206, TPM1 受 miR-21, 和 PTEN 受 miR-19a调控。 基于细胞分析方法的荧光素酶报告载体常用于监测受miRNAs调控的基因。 　　A. 优点: 　　MiRNA 荧光素酶报告载体具有以下优点: 　　· 功能性检测 –是一种功能性的分析方法，用于监测细胞内miRNA介导的靶基因的调控 　　· 可定量分析 - miRNAs介导的调控可以通过荧光素酶基因的表达进行定量监测 　　· 可构建稳定细胞系 –载体可用于构建表达报告基因的稳定细胞系. 　　B. 原理： 　　pLuc-3UTR报告载体是一系列基于荧光素酶报告的构建体，用于监测miRNA介导的细胞内靶基因调控。每个载体含有CMV启动子、荧光素酶基因、3 ' UTR 靶基因和SV40终止子序列。MiRNA的表达并与3 ' UTR结合，导致荧光素酶基因表达的抑制。因此miRNA介导的特异靶的调控可通过荧光素酶活性进行监测。比较二个样本荧光素酶活性，可解析调控，明确差异。

　　pMiR-LucTM是一系列基于荧光素酶的报告载体，用于定量测定细胞中的miRNA表达。每种载体含有CMV启动子、荧光素酶基因、独特的3 ' UTR miRNA靶位点和SV40终止子序列。 靶位点是与特定miRNA完全互补的序列。 当miRNA表达时，miRNA与该序列结合，导致荧光素酶基因表达的抑制。 因此，荧光素酶的活性代表miRNA的表达的活性。 当pMiR-Luc报告载体转染哺乳动物细胞时，可用于检测内源性的miRNA表达和活性或者用于监测miRNAs的上调或下调。 　　A. 优点: 　　MiRNA 荧光素酶报告载体具有以下优点: 　　· 功能性检测 –是一种功能性的分析方法，用于监测细胞内的miRNA表达. 　　· 可定量分析 - miRNAs表达和活性通过荧光素酶基因表达的抑制进行监测. 　　· 可构建稳定细胞系 –载体可用于构建表达报告基因的稳定细胞系 　　B. 原理： 　　MiRNA在荧光素酶RNA下游的3' UTR与靶位点结合，抑制荧光素酶表达，使酶活性下降。 通过比较二个样品中的酶的活性， miRNA是上调还是下调可以定量测定。MiRNA报告载体见下表(如需要表中未列出的，可订制)。

　　microRNAs (miRNAs)在基因表达的调控方面具有重要作用。哺乳动物30%的基因由miRNAs调控。 人的染色体上确定有500多种 miRNAs，其中许多miRNA只相差一个或者几个核苷酸。 成熟miRNAs的表达是组织特异的。miRNAs丰度可相差几个数量级。 更重要的是miRNA表达的错误调控涉及到人的不可治愈症。 系统检测miRNA表达显示一些不可治愈症存在独有的特征。 　　A. 优点: 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7转录扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单---步骤简单、流畅 　　B. 原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同：(1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大(2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。 所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。 一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但是这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每条引物只识别miRNA一半的序列。其中的一个引物中含有标示序列(Tag)，另外一个引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两条引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者随后连接的失败。这也是T7-OLA技术产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一条引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两引物在T4连接酶的作用下，被连接成一个DNA片断。随后经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司miRNA芯片I试剂测定60个最有影响的miRNAs及其同源的表达。 步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA引导下两引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断。

　　microRNAs (miRNAs)在基因表达的调控方面具有重要性。哺乳动物30%的基因由miRNAs调控。 到目前为止，人的染色体上确定有500多种 miRNAs，其中许多miRNA只相差一个或者几个核苷酸。 成熟miRNAs的表达是组织特异的。miRNAs丰度可相差几个数量级。 更重要的是miRNA表达的错误调控涉及到人的不可治愈症。 系统检测miRNA表达显示一些不可治愈症存在独有的特征。 　　A. 优点: 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7转录扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单---步骤简单、流畅 　　B. 原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同： (1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大 (2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每条引物只识别miRNA一半的序列。其中的一条引物中含有标示序列(Tag)，另外一条引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两个引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者随后连接的失败。这也是T7-OLA技术的产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一条引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两引物在T4连接酶的作用下，被连接成一条DNA片断。随后经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司miRNA芯片II试剂测定72个最有影响的miRNAs及其同源的表达。 步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA引导下两引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断。

　　microRNAs (miRNAs)在基因表达的调控方面具有重要性。哺乳动物30%的基因由miRNAs调控。 到目前为止，人的染色体上确定有500多种 miRNAs，其中许多miRNA只相差一个或者几个核苷酸。 成熟miRNAs的表达是组织特异的。miRNAs丰度可相差几个数量级。 更重要的是miRNA表达的错误调控涉及到人的不可治愈症。 系统检测miRNA表达显示一些不可治愈症存在独有的特征。人miRNA芯片检测试剂III可检测132种miRNA。 　　A. 优点: 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7转录扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单---步骤简单、流畅 　　B. 原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同： (1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大 (2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每条引物只识别miRNA一半的序列。其中的一条引物中含有标示序列(Tag)，另外一条引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两个引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者随后连接的失败。这也是T7-OLA技术的产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一条引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两引物在T4连接酶的作用下，被连接成一条DNA片断。随后经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司miRNA芯片II试剂测定72个最有影响的miRNAs及其同源的表达。 步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA引导下两引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断。

　　microRNAs (miRNAs)在基因表达的调控方面具有重要性。哺乳动物30%的基因由miRNAs调控。 到目前为止，人的染色体上确定有500多种 miRNAs，其中许多miRNA只相差一个或者几个核苷酸。 成熟miRNAs的表达是组织特异的。miRNAs丰度可相差几个数量级。 更重要的是miRNA表达的错误调控涉及到人的不可治愈症。 系统检测miRNA表达显示一些不可治愈症存在独有的特征。人miRNA芯片检测试剂IV可检测100种miRNA。 　　A. 优点: 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7转录扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单---步骤简单、流畅 　　B. 原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同： (1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大 (2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每条引物只识别miRNA一半的序列。其中的一条引物中含有标示序列(Tag)，另外一条引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两个引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者随后连接的失败。这也是T7-OLA技术的产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一条引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两引物在T4连接酶的作用下，被连接成一条DNA片断。随后经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司miRNA芯片II试剂测定72个最有影响的miRNAs及其同源的表达。 步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA引导下两引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断

　　MicroRNAs (miRNAs)是非编码的小RNA分子，调控30%哺乳动物基因的表达。人染色体上确定有500多种 miRNAs，其中许多miRNA只相差一个或者几个核苷酸。 成熟miRNAs的表达是组织特异的。miRNAs丰度可相差几个数量级。MiRNAs异常表达与人的癌症有关。系统检测miRNA的表达显示出癌症独有的特点，比较一组miRNA的表达显示不同的癌症是有区别的。美国Signosis公司肿瘤miRNA芯片专注于检测与癌症相关的miRNAs。 　　A. 优点： 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点： 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7转录扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单---步骤简单、流畅 　　B. 原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同： (1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大(2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。 所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但是这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每条引物只识别miRNA一半的序列。其中的一条引物中含有标示序列(Tag)，另外一条引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两条引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者随后连接的失败。这也是T7-OLA技术的产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一个引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两引物在T4连接酶的作用下，被连接成一个DNA片断。随后，经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司的癌miRNA芯片试剂测定132个最有影响的的miRNAs及其同源的表达。 步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA引导下两引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断。(详见：http://www.zhongzhibio.com/kysj/590.htm )

　　microRNAs (miRNAs)是非编码的小分子， 30%哺乳动物的基因由miRNAs调控。 到目前为止，小鼠的染色体上已确定有数百种 miRNAs，其中许多miRNA只相差一个或者几个核苷酸。 成熟miRNAs的表达是组织特异的。miRNAs丰度可相差几个数量级。美国Signosis公司小鼠芯片可检测119种小鼠的miRNAs。 　　A. 优点: 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7转录扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单–--步骤简单、流畅 　　B. 原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同：(1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大 (2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每个引物只识别miRNA一半的序列。其中的一个引物中含有标示序列(Tag)，另外一个引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两个引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者连接失败。这也是T7-OLA技术的产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一个引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两个引物在T4连接酶的作用下，被连接成一个DNA片断。随后经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司小鼠miRNA芯片试剂测定119个鼠miRNAs及其同源的表达。步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA引导下两个引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断。

　　凋亡涉及一系列生化活动，这些活动导致特征性的细胞形态和死亡，包括细胞膜的变化，细胞收缩，核碎裂，染色质浓缩，染色体DNA断裂。在发育期和机体均衡期，把不要的细胞除去是非常重要的。过渡凋亡引起营养不足，如脑缺血损伤;而不充分的凋亡导致细胞增殖失控。MicroRNAs (miRNAs)是非编码的小RNA分子，调控30%哺乳动物基因的表达。许多miRNAs对凋亡细胞信号调控有影响，如miR-145，miR-216，miR-182，miR-96 miRNAs的过渡表达导致天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3的活性下降。美国Signosis公司开发的miRNA芯片检测凋亡相关的52种miRNAs。检测这些miRNAs的表达有助于揭示凋亡的miRNAs调控机制。 　　A. 优点: 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7启动子扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单---步骤简单、流畅 　　B. 原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同：(1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大(2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但是这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每个引物只识别miRNA一半的序列。其中的一个引物中含有标示序列(Tag)，另外一个引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两个引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者随后连接的失败。这也是T7-OLA技术的产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一个引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两个引物在T4连接酶的作用下，被连接成一个DNA片断。随后，经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司miRNA芯片试剂测定52个凋亡相关的miRNAs及其同源的表达。 步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA下两个引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断。

　　在胚胎发育的过程中，干细胞可以分化形成所有的胚胎组织。在成人有机体，干细胞和祖细胞作为身体的修复系统，重新补充专业细胞，以维持再生器官正常转交，例如血液、皮肤或者小肠组织。 最近研究提出干细胞的维护和分化是由microRNAs (miRNA)调控的。miRNA是一段小的非编码RNA分子(大约20个核苷酸长)，对基因的表达调控和细胞分化起着重要的作用。研究发现干细胞的正常维持和分化是受到miRNA严格调控的。在干细胞中，miRNA的表达水平也不一样。例如，在神经线性分化的过程中，脑组织特异性的miR-124a和miR-9的表达差别很大。据报导miRNA也调控癌症干细胞。干细胞miRNA芯片是专门检测干细胞维持和分化相关的69种miRNA表达水平，可以用于人源，小鼠，以及大鼠的样品。对干细胞miRNA表达的研究可以帮助了解干细胞的调控机制。 　　A. 优点: 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7转录扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单---步骤简单、流畅 　　B.原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同(1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大 (2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。 所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。 一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每个引物只识别miRNA一半的序列。其中的一个引物中含有标示序列(Tag)，另外一个引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两个引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者随后连接的失败。这也是T7-OLA技术的产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一个引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两个引物在T4连接酶的作用下，被连接成一个DNA片断。随后经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司miRNA芯片试剂测定69种干细胞相关的miRNAs及其同源的表达。 步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA引导下两个引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断。

　　哺乳动物miRNAs在组织中的丰度变化很大，例如，miR-133在骨骼肌中表达很高，在心脏中等 ，其它组织未检测到。要检测低表达的miRNA需要高灵敏的方法。美国Signosis高敏miRNA Northern Blot 试剂较常规基于生物素的化学发光检测的敏感10-100倍。 　　A.优点： 　　高敏miRNA Northern Blot 试剂具有下列优点： 　　·灵敏度高---较常规基于单生物素检测灵敏10-100倍。 　　·步骤简单---用总RNA点样杂交，HRP检测。 　　·无同位素---基于化学发光检测。 　　·探针预制---用生物素预标记和多生物素放大探针。 　　B.原理： 　　RNA样品经过凝胶电泳分离、转移至膜上。特定的miRNA的表达通过生物素标记探针---与miRNA互补的序列和标示序列进行检测，标示序列通过多生物素放大试剂检测。

　　人或组织的miRNA的表达具有差异性。miRNA芯片可用来了解众多miRNA差异表达的水平。MiRNA表达、组织分布和芯片检定方法常常要用Northern Blot，以便直接观察miRNA表达的差异及成熟miRNA大小(以内参照RNU48 RNA做比较)。美国Signosis公司 miRNA Northern 印迹检测试剂是一种非放射性的、简单的、高灵敏的分析工具，试剂盒提供了Northern 印迹分析所需要的所有组分。更重要的是，该方法不需要放射性标记探针，可提供生物素预标记的多种不同探针。 　　A. 优点 　　和市场上同类产品相比， 该产品具有以下优点： 　　· 无同位素----基于化学发光检测 　　· 勿需制备探针---- 提供生物素预标记探针 　　· 试剂盒提供试验全部所需---提供凝胶，膜，RNA转移液，杂交液，检测液 　　· 实验步骤简单 ---操作简单流畅 　　B. 原理 　　RNA样品通过胶凝胶电泳分离并转移到膜上。 特定miRNA表达用生物素标记的探针检测。

　　miRNA是小的非编码RNAs，通过选择性的与互补的mRNA序列结合控制着转录水平的基因表达。近30%哺乳动物基因受小RNA分子的调控，从而调节各种生物功能，包括发育、细胞分化、增殖、凋亡、维持stemness和impriting。Northern blot是分析各种miRNAs常用的方法，尽管最近出现了一些新的方法，如实时定量PCR和定量测定miRNAs的侵入者探针法，但Northern blot分析的灵敏度低、通量差仍是其主要不足，实时定量PCR和侵入者探针法需要cDNA转换。美国Signosis基于其自有的专利技术-miRNA微孔板检测无需将miRNA分子转换成cDNAs，检测步骤主要是孵育和洗涤，非常简单。 　　miR-133和miR-1在心脏和骨骼肌中优势表达。在心脏细胞的分化、增殖和凋亡中发挥重要作用。二者聚集在相同的染色体位点，在发育过程中，以一种组织特异的方式共同转录，但在肌肉增殖、分化和凋亡中有不同的功能。许多重要的靶已得以认识和明确，如成肌纤维母细胞增殖中miR-133的靶是血清反应因子(SRF)，mygenesis中miR-1的靶是histone deacetylase (HDAC4)，miR-133的靶是caspase-9，心肌细胞凋亡中miR-1的靶HSP60和HSP70，细胞外基质蛋白增加(纤维变性)中miR-133和miR-1的靶是结缔组织生长因子(CTGF)，更为重要的是miRNA表达的异常调节与病人患病的心脏相关联，因此具有做为心血管病诊断标记物和治疗靶点的巨大潜力。下图2所示miR-133和miR-1是Signosis的miRNA微孔板检测试剂分析检测结果。 　　A.优点： 　　美国Signosis基于其自有专利技术的miRNA微孔板检测试剂具有下列优点： 　　·操作简单---做miRNA试验象做ELISA试验，无需用酶转换miRNA成cDNA，检测步骤只是孵育和洗涤。 　　·灵敏度高---较miRNA Northern blotting分析敏感100倍。 　　·分辨力强---在分辨同源miRNA 时，较Northern blot有更高的分辨力。 　　·差别定量---二个或二个以上特定miRNA表达的差异可定量分析。 　　B.原理： 　　基于自有专利miRNA微孔板检测中，一个miRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接，一个连接oligo与捕获oligo和待测的miRNA部分杂交，另一个连接oligo与检测oligo和待测的miRNA另一部分杂交，杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固者在微孔板上，再由辣根酶标记链酶亲和素和发光底物检测，这种杂交体结构对miRNA分子序列非常敏感，一个核苷酸的差异即会阻止杂交体的形成，从而可分辨同源miRNA，而Northern blot则很难鉴别同源miRNA，此外该方法的敏感性较Northern blot高。

　　miRNAs参与调解各种生物过程，如细胞死亡和细胞增殖。miRNA可以做为原癌基因和肿瘤抑制基因，在肿瘤形成中起着重要作用。miRNAs表达水平的变化是与其相应的蛋白编码的靶基因功能不正常有关，其中许多参与癌症的发生和发展。例如，BCL2原癌基因是miR-15a和miR-16的靶向基因，PTEN肿瘤抑制物是miR-21、HOXD10是miR-10b、Pak是miR-7、MYOD1和ER是miR-206、Her2是miR-125a的靶向基因。美国Signosis研发的肿瘤miRNA微孔板检测试剂I是定量检测7种有名的癌相关miRNAs的表达，分别是miR-15a、miR-16、miR-21、miR-21、miR-10b、miR-7、miR-125a和miR-206。RNU48用于试剂盒的标准化。 　　A.优点： 　　美国Signosis基于其自有专利技术的miRNA微孔板检测试剂具有下列优点： 　　·操作简单---做miRNA试验象做ELISA试验，无需用酶转换miRNA成cDNA，检测步骤只是孵育和洗涤。 　　·灵敏度高---较miRNA Northern blotting分析敏感100倍。 　　·分辨力强---在分辨同源miRNA 时，较Northern blot有更高的分辨力。 　　·差别定量---二个或二个以上样本的miRNA簇表达的差异可定量分析。 　　B.原理： 　　基于自有专利miRNA微孔板检测中，一个miRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接，一个连接oligo与捕获oligo和待测的miRNA部分杂交，另一个连接oligo与检测oligo和待测的miRNA另一部分杂交，杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固者在微孔板上，再由辣根酶标记链酶亲和素和发光底物检测，这种杂交体结构对miRNA分子序列非常敏感，一个核苷酸的差异即会阻止杂交体的形成，从而可分辨同源miRNA，而Northern blot则很难鉴别同源miRNA，此外该方法的敏感性较Northern blot高。捕获的miRNAs进一步用辣根酶标记的亲和素检测，发光信号的强度用发光仪检测，miRNAs表达水平直接与发光度值成正比。

　　miRNA调控着30%哺乳动物基因的表达。miRNAs的异常表达表明与癌症相关。检测miRNA表达显示在不同癌症中有独特的一组组miRNAs。美国Signosis公司开发了一系列miRNA微孔板检测试剂来分析这些分子。 　　A.优点： 　　美国Signosis基于其自有专利技术的miRNA微孔板检测试剂具有下列优点： 　　·操作简单---做miRNA试验象做ELISA试验，无需用酶转换miRNA成cDNA，检测步骤只是孵育和洗涤。 　　·灵敏度高---较miRNA Northern blotting分析敏感100倍。 　　·分辨力强---在分辨同源miRNA 时，较Northern blot有更高的分辨力。 　　·差别定量---二个或二个以上特定miRNA表达的差异可定量分析。 　　B.原理： 　　基于自有专利miRNA微孔板检测中，一个miRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接，一个连接oligo与捕获oligo和待测的miRNA部分杂交，另一个连接oligo与检测oligo和待测的miRNA另一部分杂交，杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固者在微孔板上，再由辣根酶标记链酶亲和素和发光底物检测，这种杂交体结构对miRNA分子序列非常敏感，一个核苷酸的差异即会阻止杂交体的形成，从而可分辨同源miRNA，而Northern blot则很难鉴别同源miRNA，此外该方法的敏感性较Northern blot高。

　　一种多顺反子miRNA族miR-17-92在细胞增殖和血管生成的控制中起着重要作用，该族由7个miRNAs组成：miR-17-5p，miR-17-3p，miR-18a，miR-19a，miR-19b，miR-20a，miR-92。如E2F1基因，该族由原Ca基因c-Myc转录激活，由于二个表达的miRNAs抑制E2F1的翻译，E2F1蛋白的水平受这种反馈机制的调节，因此过量的E2F1的堆积受到阻止，凋亡的细胞状态或细胞分化受到控制。此外，c-Myc 介导的miR-17-92族的诱导，导致抗血管生成的溶血栓蛋白-1和相关蛋白的负调控，如结缔组织生长因子2，从而促进血管生成。近期研究表明，该组在脂肪细胞分化的克隆扩张期明显上调。miR-17-92族与许多类型肿瘤的致Ca基因有牵连。有效监测该组miRNAs的表达有助于更好理解miRNA族的改变对Ca发展的促进作用以及阐明miRNA活动的分子机制。 　　A.优点： 　　美国Signosis基于其自有专利技术的miRNA微孔板检测试剂具有下列优点： 　　·操作简单---做miRNA试验象做ELISA试验，无需用酶转换miRNA成cDNA，检测步骤只是孵育和洗涤。 　　·灵敏度高---较miRNA Northern blotting分析敏感100倍。 　　·分辨力强---在分辨同源miRNA 时，较Northern blot有更高的分辨力。 　　·差别定量---二个或二个以上特定miRNA表达的差异可定量分析。 　　B.原理： 　　基于自有专利miRNA微孔板检测中，一个miRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接，一个连接oligo与捕获oligo和待测的miRNA部分杂交，另一个连接oligo与检测oligo和待测的miRNA另一部分杂交，杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固者在微孔板上，再由辣根酶标记链酶亲和素和发光底物检测，这种杂交体结构对miRNA分子序列非常敏感，一个核苷酸的差异即会阻止杂交体的形成，从而可分辨同源miRNA，而Northern blot则很难鉴别同源miRNA，此外该方法的敏感性较Northern blot高。

　　小干扰RNA(siRNAs)是双链RNA分子，长度在20-25个核苷酸。2001年时表明合成的siRNAs能够诱导RNAi进入哺乳动物细胞，siRNAs引起了生物医学和药物研发的极大关注，从而被广泛应用于沉默基因表达。监测siRNA的运送和表达对保证敲除成功是非常重要的。Northern blot是分析这些分子常用的方法，但该方法不够敏感，操作相对繁琐。美国Signosis开发了一种高敏的siRNA微孔板检测方法，比Northern Blot敏感100倍，此外该方法只是简单的孵育，如同ELISA，更重要的是可以同时分析大量样本。根据客户提供的特定的siRNA序列，美国Signosis会设计一套oligos，然后提供给客户相应的检测试剂。 　　A.优点： 　　美国Signosis基于其自有专利技术的siRNA微孔板检测试剂具有下列优点： 　　·操作简单---做siRNA检测象做ELISA，整个试验步骤只是孵育和洗涤。 　　·灵敏度高---较siRNA Northern blotting分析敏感100倍。 　　·定量分析---特定siRNA的表达可以定量分析。 　　B.原理： 　　基于自有专利siRNA微孔板检测中，一个siRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接，其中一个连接oligo与捕获oligo和待测的siRNA部分杂交，另一个连接oligo与检测oligo和待测的siRNA另一部分杂交，杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固着在微孔板上，再由辣根酶标记的链酶亲和素和发光底物检测。