生长因子是能够刺激细胞生长、增殖和分化的蛋白质家族,典型的是通过与细胞表面的受体结合作为信号分子。 许多生长因子有相当多的功能,一些生长因子刺激许多不同类型细胞的分裂,而另一些生长因子是特异的针对特定细胞类型。 多个生长因子经常一起参与细胞的活动。 例如, VEGF、FGF和EGF刺激血管形成。 所以,描绘出生长因子的表达方式为阐述细胞活动的生物学机制提供了宝贵的视野。美国 Signosis的生长因子复合酶免试剂可定量地描绘和测定8种蛋白 VEGF、EGF、TNFa、IFNr、PDGF-BB、PIGF、b-NGF和SCF。 A. 优点: · 多种复合---单一ELISA板条可同时测定8种生长因子 · 灵活弹性---单一板块可比较2个样品到12个样品 · 差别定量---不同于膜芯片方法,样品中各个蛋白的区别可以定量比较。另外, EA-1062为做标准曲线提供标准品。 · 勿需贵重仪器---不同于珠式的检测方法,勿需贵重仪器 · 操作简单---一12x 8孔预包被板的完整操作系统. B. 原理 板条每个孔包被有针对生长因子的特异抗体,8个孔包被有8种不同抗体,一个板条8个孔可测定8种不同蛋白质。待测样品中的生长因子在固相抗体和酶标记抗体之间,可与二个抗体组成的抗体对反应。孵育后,洗涤板孔除去未结合的标记抗体。 加入HRP底物TMB,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。生长因子的浓度与待测样品颜色深浅成正比。 450 nm处测定吸光值进行定量。
白介素-2 (IL-2)是在微生物感染中发挥重要作用的细胞因子,主要由激活的T细胞产生。 IL-2通过与T细胞、 B细胞、NK细胞和抗原呈递细胞表达的IL-2受体结合发挥其功能。 IL-2和IL-2R之间相互作用, 通过活化特定基因的表达,刺激抗原选择的细胞毒T细胞的生长、分化和生存。 IL-2在胸腺T细胞发育期间也是独特的T细胞亚群成熟所必需的。 A. 优点: · 性价比高---高质量,低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对人IL-2的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统. B. 原理: IL-2试剂为固相酶免法。 方法采用羊抗人IL-2抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的羊抗人IL-2抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测, 待测样品IL-2夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。IL-2的浓度与待测样品的颜色呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
神经增长因子(NGF)是特定靶神经元(神经细胞)分化和存续的小分泌蛋白。 NGF最近被认为是新的血管生成分子,对心血管系统和内皮细胞有各种作用。 NGF通过自分泌和旁分泌机制对内皮细胞进行支持、存续和功能化。 bNGF结构上与BDNF、NT-3和NT-4有关。 NGF通过其受体bNGFR发信号,在感觉和交感神经系统的发育和维持上起重要作用,是强的神经营养性因子。 bNGF也作为B淋巴细胞的成长和分化因素,提高B细胞生存期。 A. 优点: · 性价比高---高质量,低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对人b-NGF的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统. B. 原理: b-NGF试剂为固相酶免法。 方法采用兔抗人b-NGF抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗人b-NGF抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测, 待测样品b-NGF夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。b-NGF的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
血管内皮细胞生长因子(VEGF)是最强的和最特异的血管生成因子之一。VEGF是被用于缺氧细胞促进血管生长的。它结合到在内皮细胞表面的特定受体引导构建新的血管。 一些抗血管生成的药物显示能够减少血管的数量。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对小鼠VEGF的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: 小鼠VEGF试剂为固相酶免法。方法采用兔抗鼠VEGF抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗鼠VEGF抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测,待测样品小鼠VEGF夹在捕获抗体和标记抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。小鼠VEGF的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对小鼠VEGF的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: 小鼠VEGF试剂为固相酶免法。方法采用兔抗鼠VEGF抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗鼠VEGF抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测,待测样品小鼠VEGF夹在捕获抗体和标记抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。小鼠VEGF的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。
干细胞因子(SCF)是多种类型细胞的生长因子,在神经胶质瘤细胞内和各种脑损伤时表达。肿导致的脑损伤以及脑细胞介导的SCF表达,通过营造支持血管形成和肿进展的环境。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对小鼠SCF的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: 小鼠SCF试剂为固相酶免法。方法采用兔抗鼠SCF抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗鼠SCF抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测,待测样品SCF夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。SCF的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对小鼠SCF的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: 小鼠SCF试剂为固相酶免法。方法采用兔抗鼠SCF抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗鼠SCF抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测,待测样品SCF夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。SCF的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。
IL1a和IL-1ß 是介导炎症和免疫调节作用的强激动剂。 二者由巨噬细胞、单核细胞和树状突细胞产生,是针对感染后炎症反应的重要部分。 它们增加内皮细胞黏附因子的表达,转运白细胞到感染部位。 IL1a是参与各种免疫反应、炎症过程和造血作用的多功能细胞因子,由许多类型细胞产生,但是仅由单核细胞和巨噬细胞分泌。 (详见:http://www.zhongzhibio.com/kysj/552.htm) A. 优点: · 性价比高---高质量,低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对鼠IL1a的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: 鼠IL1a试剂为固相酶免法。 方法采用兔抗鼠IL1a抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗鼠IL1a抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测, 待测样品鼠IL1a夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。鼠IL1a的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
快速生长的瘤会出现缺氧区,大部分细胞对缺氧的反应是(1)产生VEGF和其它缺氧诱导的血管生成因子以促进增加血管生成,从而增加组织的氧合(2)从有氧的磷酸化到缺氧的糖酵解的代谢转换。缺氧诱导因子-1(HIF-1)是在缺氧反应过程中有重要作用的一种氧调控转录激动剂。HIF-1a亚单位是氧依赖性泛素化和蛋白酶体降解。细胞因子如白介素-1和瘤坏死因子-a刺激HIF-1依赖的基因表达。HIF-1增加促进血流及炎症的数种基因的表达,如血管生成因子(VEGF)。美国Signosis公司的小鼠HIF-1调控的cDNA微孔板阵列检测试剂可检测20 多种相关的基因。 A. 优点: 美国Signosis公司基于其自有的cDNA微孔板阵列专利技术研发的小鼠HIF-调控的cDNA微孔板阵列检测试剂具有以下优点: ·操作简单---做基因表达试验像做ELISA酶免试验一样简单。 ·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 ·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 B. 原理: 美国Signosis 公司自有的cDNA微孔板阵列专利检测技术是基于微孔板杂交的检测方法,该方法是将mRNA反转录成cDNA来检测多种基因的表达。与芯片分析方法相似,加入生物素-dUTP后,总RNA先转录成生物素标记的cDNA。通过预包被在微孔板上的特异的寡核酸,将靶基因捕获到微孔板上(而不是膜上)。捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物,cDNA的浓度与待测标本的发光强度成正比。
转录因子(TF)的转录活性常常是通过报告载体测定的,载体含有TF的顺式因子(DNA结合序列)和荧光素酶样的报告基因。报告体导入细胞,激活的TF与顺式因子结合,介导报告基因的启动。这种启动可以通过生化分析报告基因的产物进行测定。然而这是一种单项测定,一次测一个TF。由于细胞的变化会导致多种TF的激活,检测这些TF就需要多次转染和生化测定。此外,由于被导入到不同的细胞培养孔,还需要标准化规范转染。美国Signosis 公司基于自有专利开发一种同时检测7种TF活性的技术。 A. 优点: 美国Signosis 公司基于自有专利技术研发的TF报告体微孔板阵列试剂,具有下列优势: · 基于细胞的方法---基于细胞的方法检测TF 的活性 · 多种复合---单一板条可测定7种TF的活性 · 定量比较---二个或以上样本可同时定量分析 B. 原理 基于自有专利技术可同时检测多种TF活性。在该项技术中,构建一系列报告载体,每个载体含有顺式因子和报告体标示序列。当载体做为文库导入细胞,TF的激活将使其与相应的载体结合,介导标示序列的表达。表达的标示序列采用cDNA微孔板芯片分析。该芯片中,每个特异的靶序列由相应的捕获寡核苷酸识别,该捕获寡核苷酸固相在对应的微孔中。在转录因子(TF)报告体微孔板芯片试剂I中,7个TF报告载体合在一起可同时检测7种TF的激活,其中有NFkB、HIF-1、AP1、ISRE、Stat1、Stat3和P53以及无顺式因子的TA对照载体。
干细胞是重要细胞,其能够自我更新或者分化成多种类型的细胞,这种能力由细胞信号传导和转录调控所控制,因此转录调控在细胞识别和功能实现过程中起决定作用。干细胞逐步成熟成为终末分化细胞,需要由重要的转录因子适时的激活级联转录程序,多种转录因子和靶基因广泛报告与干细胞的自我更新和多能性有关,包括EGR1, OCT4, FOXD3, FOXO, Nanog, SOX2, SOX18, ETS, GLI, KLF4, MEF2, Myc, RNUX1, Pax6, TCF/LEF 和GATA。分析这些TF的活性可以为干细胞的研究和应用提供有价值的线索。美国Signosis 公司开发一种干细胞转录因子活性多重检测阵列试剂,以同时分析哺乳动物样本中16种干细胞特异的TF,该方法可以用1000-10000个细胞的全细胞裂解物进行。 A. 优点: 美国Signosis 公司基于自有技术研发的干细胞转录因子活性多重检测阵列试剂,具有下列优势: · 多重分析---一次分析可以检测16种干细胞相关的TF · 定量比较---二个样本的差异可以定量分析和比较。 · 步骤简单---探针温育、柱分离、板杂交和HRP检测 · 无需贵重仪器---无需如luminex那样的贵重仪器 B. 原理 干细胞转录因子活性多重检测阵列试剂用于同时检测多种TF活性。该技术中,基于TF DNA结合位点的一致性序列,制备一系列生物素标记的探针。当探针混合物与核提取物一起温育时,每个探针寻找相应的TF,形成TF/探针复合物,通过柱离心纯化可以很容易与游离探针分开。结合的探针从混合物中分离出来,通过板杂交分析。板孔中预包被上与探针互补的特异序列,捕获的DNA探针进一步用链酶亲和素-HRP检测,化学发光检测仪测定发光强度(RLUs)。
免疫共沉淀是一种研究蛋白质相互作用的常用方法,其应用抗体免疫沉淀抗原,以共沉淀相互作用的蛋白。传统的免疫共沉淀方法用琼脂糖蛋白A或G共洗脱抗体轻、重链,这会掩盖重要结果。Signosis C-Myc标签免疫共沉淀试剂盒提供了一种简单快速的方法,用连接有抗C-Myc标签抗体的磁珠研究带C-Myc标签的蛋白,抗体和磁珠的共价连接形成的沉淀产物进行WB检测时背景较低,高亲和性和特异性抗体包埋的磁珠高效特异的免疫沉淀或共沉淀相互作用物。 A. 优点: ·C-Myc免疫共沉淀试剂盒具有下列优势: · 快速---高亲和性的抗·C-Myc抗体交联的磁珠免疫沉淀带·C-Myc标签的蛋白或免疫共沉淀相互作用物,无需前分离步骤,缩短孵育时间。 · 噪音低--- 抗体与磁珠的共价连接,形成的沉淀终产物无抗体污染。 ·结果一致性高---磁珠易于通过磁架分离,少而快的洗涤无样品丢失。 ·简便---试剂盒包含全部试剂组份。 B. 原理: Myc标签的表达载体用于转染靶细胞。转染后,特异蛋白表达Myc抗原决定部位标签,与反应蛋白结合。复合物与相应蛋白可以快速高效的与抗Myc抗体免疫共沉淀,共沉淀复合物通过磁力架进一步与未结合的蛋白分开,洗涤后,复合物高效彻底的从磁珠上洗脱下来,用SDS-PAGE分离以进一步WB分析。磁珠上固相的Myc抗体在低PH洗脱条件下通过阻止轻链和重链的解离提供更好的WB检测。