生长因子是能够刺激细胞生长、增殖和分化的蛋白质家族,典型的是通过与细胞表面的受体结合作为信号分子。 许多生长因子有相当多的功能,一些生长因子刺激许多不同类型细胞的分裂,而另一些生长因子是特异的针对特定细胞类型。 多个生长因子经常一起参与细胞的活动。 例如, VEGF、FGF和EGF刺激血管形成。 所以,描绘出生长因子的表达方式为阐述细胞活动的生物学机制提供了宝贵的视野。美国 Signosis的生长因子复合酶免试剂可定量地描绘和测定8种蛋白 VEGF、EGF、TNFa、IFNr、PDGF-BB、PIGF、b-NGF和SCF。 A. 优点: · 多种复合---单一ELISA板条可同时测定8种生长因子 · 灵活弹性---单一板块可比较2个样品到12个样品 · 差别定量---不同于膜芯片方法,样品中各个蛋白的区别可以定量比较。另外, EA-1062为做标准曲线提供标准品。 · 勿需贵重仪器---不同于珠式的检测方法,勿需贵重仪器 · 操作简单---一12x 8孔预包被板的完整操作系统. B. 原理 板条每个孔包被有针对生长因子的特异抗体,8个孔包被有8种不同抗体,一个板条8个孔可测定8种不同蛋白质。待测样品中的生长因子在固相抗体和酶标记抗体之间,可与二个抗体组成的抗体对反应。孵育后,洗涤板孔除去未结合的标记抗体。 加入HRP底物TMB,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。生长因子的浓度与待测样品颜色深浅成正比。 450 nm处测定吸光值进行定量。
免疫共沉淀是一种研究蛋白质相互作用的常用方法,其应用抗体免疫沉淀抗原,以共沉淀相互作用的蛋白。传统的免疫共沉淀方法用琼脂糖蛋白A或G共洗脱抗体轻、重链,这会掩盖重要结果。Signosis C-Myc标签免疫共沉淀试剂盒提供了一种简单快速的方法,用连接有抗C-Myc标签抗体的磁珠研究带C-Myc标签的蛋白,抗体和磁珠的共价连接形成的沉淀产物进行WB检测时背景较低,高亲和性和特异性抗体包埋的磁珠高效特异的免疫沉淀或共沉淀相互作用物。 A. 优点: ·C-Myc免疫共沉淀试剂盒具有下列优势: · 快速---高亲和性的抗·C-Myc抗体交联的磁珠免疫沉淀带·C-Myc标签的蛋白或免疫共沉淀相互作用物,无需前分离步骤,缩短孵育时间。 · 噪音低--- 抗体与磁珠的共价连接,形成的沉淀终产物无抗体污染。 ·结果一致性高---磁珠易于通过磁架分离,少而快的洗涤无样品丢失。 ·简便---试剂盒包含全部试剂组份。 B. 原理: Myc标签的表达载体用于转染靶细胞。转染后,特异蛋白表达Myc抗原决定部位标签,与反应蛋白结合。复合物与相应蛋白可以快速高效的与抗Myc抗体免疫共沉淀,共沉淀复合物通过磁力架进一步与未结合的蛋白分开,洗涤后,复合物高效彻底的从磁珠上洗脱下来,用SDS-PAGE分离以进一步WB分析。磁珠上固相的Myc抗体在低PH洗脱条件下通过阻止轻链和重链的解离提供更好的WB检测。
转录因子(TF)的转录活性常常是通过报告载体测定的,载体含有TF的顺式因子(DNA结合序列)和荧光素酶样的报告基因。报告体导入细胞,激活的TF与顺式因子结合,介导报告基因的启动。这种启动可以通过生化分析报告基因的产物进行测定。然而这是一种单项测定,一次测一个TF。由于细胞的变化会导致多种TF的激活,检测这些TF就需要多次转染和生化测定。此外,由于被导入到不同的细胞培养孔,还需要标准化规范转染。美国Signosis 公司基于自有专利开发一种同时检测7种TF活性的技术。 A. 优点: 美国Signosis 公司基于自有专利技术研发的TF报告体微孔板阵列试剂,具有下列优势: · 基于细胞的方法---基于细胞的方法检测TF 的活性 · 多种复合---单一板条可测定7种TF的活性 · 定量比较---二个或以上样本可同时定量分析 B. 原理 基于自有专利技术可同时检测多种TF活性。在该项技术中,构建一系列报告载体,每个载体含有顺式因子和报告体标示序列。当载体做为文库导入细胞,TF的激活将使其与相应的载体结合,介导标示序列的表达。表达的标示序列采用cDNA微孔板芯片分析。该芯片中,每个特异的靶序列由相应的捕获寡核苷酸识别,该捕获寡核苷酸固相在对应的微孔中。在转录因子(TF)报告体微孔板芯片试剂I中,7个TF报告载体合在一起可同时检测7种TF的激活,其中有NFkB、HIF-1、AP1、ISRE、Stat1、Stat3和P53以及无顺式因子的TA对照载体。
血管内皮细胞生长因子(VEGF)是最强的和最特异的血管生成因子之一。VEGF是被用于缺氧细胞促进血管生长的。它结合到在内皮细胞表面的特定受体引导构建新的血管。 一些抗血管生成的药物显示能够减少血管的数量。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对小鼠VEGF的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: 小鼠VEGF试剂为固相酶免法。方法采用兔抗鼠VEGF抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗鼠VEGF抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测,待测样品小鼠VEGF夹在捕获抗体和标记抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。小鼠VEGF的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对小鼠VEGF的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: 小鼠VEGF试剂为固相酶免法。方法采用兔抗鼠VEGF抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗鼠VEGF抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测,待测样品小鼠VEGF夹在捕获抗体和标记抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。小鼠VEGF的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。
miRNA调控着30%哺乳动物基因的表达。miRNAs的异常表达表明与癌症相关。检测miRNA表达显示在不同癌症中有独特的一组组miRNAs。美国Signosis公司开发了一系列miRNA微孔板检测试剂来分析这些分子。 A.优点: 美国Signosis基于其自有专利技术的miRNA微孔板检测试剂具有下列优点: ·操作简单---做miRNA试验象做ELISA试验,无需用酶转换miRNA成cDNA,检测步骤只是孵育和洗涤。 ·灵敏度高---较miRNA Northern blotting分析敏感100倍。 ·分辨力强---在分辨同源miRNA 时,较Northern blot有更高的分辨力。 ·差别定量---二个或二个以上特定miRNA表达的差异可定量分析。 B.原理: 基于自有专利miRNA微孔板检测中,一个miRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接,一个连接oligo与捕获oligo和待测的miRNA部分杂交,另一个连接oligo与检测oligo和待测的miRNA另一部分杂交,杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固者在微孔板上,再由辣根酶标记链酶亲和素和发光底物检测,这种杂交体结构对miRNA分子序列非常敏感,一个核苷酸的差异即会阻止杂交体的形成,从而可分辨同源miRNA,而Northern blot则很难鉴别同源miRNA,此外该方法的敏感性较Northern blot高。
miRNA已知参与了许多生物活动,其异常表达与人类疾病相关。许多方法如芯片或微珠的方法常用于同时检测多种miRNA的表达,不过这些方法在分析时需要把miRNA转换成cDNA探针。中帜生物研发出一种简单的miRNA直接杂交微孔板阵列方法,该方法中用于杂交的总RNA无需预处理,方法简单只是杂交和检测,重要的是用此简单方法可同时分析比较48种miRNA。 A.优点: 中帜生物基于其自有专利技术的miRNA直接杂交微孔板阵列方法具有下列优点: ·操作简单——检测48种miRNA的表达如ELISA试验一样简单,无需用酶转换miRNA成cDNA,检测步骤只是孵育和洗涤 ·灵敏度高——较miRNA Northern blotting分析敏感100倍 ·分辨力强——在分辨同源miRNA 时,较Northern blot有更高的分辨力 ·差别定量——二个或更多标本miRNA表达的差异可定量分析 B.原理: 中帜生物的miRNA直接杂微孔板交阵列方法是简单的二步法。板杂交和链霉亲和素-辣根酶检测。微孔板包被上oligo mix,其包括一对oligo—与特定靶miRNA并列杂交的相应oligo、通用捕获oligo和生物素标记oligo。该方法中,总RNA直接用于杂交。当RNA中存在靶miRNA时,其做为桥将生物素标记的oligo与捕获oligo连接起来,这样可以通过链霉亲和素辣根酶结合物以及化学发光底物检测。如果不存在靶miRNA时,生物素标记的探针就被冲洗掉,因此无检测信号。在微孔板阵列中,48个孔包被上不同的oligo mix来检测不同的miRNA,96孔板可定量测定和比较二个样品中48种miRNA,U6用于标化。
干扰素-r诱导蛋白(IP-10)是细胞因子中属于趋化因子家族的成员,是在各种细胞对r-干扰素和脂多糖应答时诱导的,由一些细胞包括单核细胞,内皮细胞和成纤维细胞分泌。 IP-10有若干作用,例如对单核细胞/巨噬细胞、T细胞、NK细胞和树状T细胞的趋化性,促进T细胞对内皮细胞的黏附, 抗肿瘤活性,抑制骨髓集落形成。 数种类型细胞对IFN-r反应时, IP-10是体内血管形成的强抑制剂。 A. 优点: · 性价比高---高质量,低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对人IP-10的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: IP-10试剂为固相酶免法。 方法采用兔抗人IP-10抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗人IP-10抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测, 待测样品IP-10夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。IP-10的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
人瘦素(leptin)由167氨基酸组成的蛋白,在调控能量摄取和能量消耗时发挥重要作用,包括调节食欲(减退)和代谢(增加)。瘦素由脂肪组织产生,循环中的瘦素的水平与身体中的脂肪总量呈正比。一旦瘦素与Ob-Rb受体结合即激活Stat3,被磷酸化并移动到细胞核,介导基因表达。其中基因表达的一个主要作用是下调内源性大麻素的表达。有许多功能的内源性大麻素负责增加食欲。瘦素激活的有其它细胞内通路,但是较少知道它们是怎样在这个系统中起作用的。瘦素是减少食欲的一个循环信号,一般来说,对瘦素作用有抵抗的肥胖人群瘦素的循环浓度特别的高,对胰岛素作用有抵抗的II型糖尿病人也是同样的。已发现瘦素刺激内皮细胞增殖和血管形成。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对人瘦素的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: 人瘦素试剂为固相酶免法。方法采用鼠抗人瘦素不同决定簇单克隆抗体做为微孔板的固相捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的鼠抗人瘦素抗体做检测抗体,待测样品瘦素夹在捕获抗体和检测抗体之间与二者反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。瘦素的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对人瘦素的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: 人瘦素试剂为固相酶免法。方法采用鼠抗人瘦素不同决定簇单克隆抗体做为微孔板的固相捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的鼠抗人瘦素抗体做检测抗体,待测样品瘦素夹在捕获抗体和检测抗体之间与二者反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。瘦素的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。
ERs(ERa和ERb)参与雌激素的细胞信号传递,属于转录因子核受体家族。ERs调控的作用机制是在靶基因启动子部位或通过蛋白与蛋白的相互作用,与配体结合的ERs直接与雌激素反应因子结合。美国Signosis 公司研发的ERs滤板法检测试剂与常规的凝胶迁移试验不同,它是一种高通量的检测方法,可同时分析多个标本,而且该方法在分析少量标本时较非放射的凝胶迁移试验简单的多,较基于P32的凝胶迁移试验安全的多。 A. 优点: 美国Signosis 公司基于自有知识产权技术研发的ERs滤板法检测试剂,具有下列优势: · 简单快速---比凝胶迁移试验简单、快速 · 高通量筛选---多个样品可在一个试验中得到分析 · 费用低廉---与基于ELISA的检测方法相比花费更少 · 定量比较---二个或以上样本可同时定量分析 B. 原理 美国Signosis 公司研发的ER滤板法检测试剂,是基于微孔板检测ER活性的分析方法,该方法中使用二块板---过滤板和杂交板,预标记的ER结合因子(ERE)与核抽体物混合,形成ER/探针复合物。过滤板用于保留结合的DNA序列,除去游离的DNA序列。结合的预标记的DNA序列随后从过滤板上洗脱、收集,用于微孔板杂交。捕获的DNA序列进一步用辣根酶标记的链霉亲和素检测,在微孔板发光检测仪上读取发光度值(RLUs)。