快速生长的肿瘤会出现缺氧区,大部分细胞对缺氧的反应是(1)产生VEGF和其它缺氧诱导的血管生成因子以促进增加血管生成,从而增加组织的氧合(2)从有氧的磷酸化到缺氧的糖酵解的代谢转换。缺氧诱导因子-1(HIF-1)是在缺氧反应过程中有重要作用的一种氧调控转录激动剂。HIF-1a亚单位是氧依赖性泛素化和蛋白酶体降解。细胞因子如白介素-1和肿瘤坏死因子-a刺激HIF-1依赖的基因表达。HIF-1增加促进血流及炎症的数种基因的表达,如血管生成因子(VEGF)。通过结合CL(TM )cDNA合成试剂 (该试剂无需RNA制备,直接用细胞裂解液进行反转录), 美国Signosis公司研发了一种基于微孔板杂交阵列直接检测细胞裂解液中20多种HIF调节基因表达。 A. 优点: 细胞裂解液中人HIF调控的cDNA检测试剂具有以下优点: ·操作简单---无需RNA制备,直接用细胞裂解液合成cDNA。此外试验ELISA一样简单。 ·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 ·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 B. 原理: 与常规的需要总RNA进行反转录不同,美国Signosis开发了一种基于CL(TM )cDNA合成的微孔板阵列试剂。该试剂无需RNA制备,直接用细胞裂解液通过反转录合成cDNA,然后用合成的cDNA探针进行微孔板阵列的杂交。通过预包被在微孔板上特异的寡核苷酸,靶基因被特异的捕获,捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物,发光程度用微孔板发光检测仪表示为RLUs,基因表达水平直接与发光强度成正比。
白介素-2 (IL-2)是在微生物感染中发挥重要作用的细胞因子,主要由激活的T细胞产生。 IL-2通过与T细胞、 B细胞、NK细胞和抗原呈递细胞表达的IL-2受体结合发挥其功能。 IL-2和IL-2R之间相互作用, 通过活化特定基因的表达,刺激抗原选择的细胞毒T细胞的生长、分化和生存。 IL-2在胸腺T细胞发育期间也是独特的T细胞亚群成熟所必需的。 A. 优点: · 性价比高---高质量,低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对人IL-2的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统. B. 原理: IL-2试剂为固相酶免法。 方法采用羊抗人IL-2抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的羊抗人IL-2抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测, 待测样品IL-2夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。IL-2的浓度与待测样品的颜色呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
纤溶酶原激活抑制因子(PAI-1)是抑制纤溶酶原激活剂蛋白家族成员之一。PAI-1是47 kDa分子量的单链糖蛋白。PAI-1是tPA和血液中其它纤溶酶原激活剂的主要抑制剂。PAI-1主要是由内皮细胞产生,脂肪组织也合成。在胰岛素抵抗患者中可观察到血浆PAI-1水平升高的脂肪组织产生的PAI-1。PAI-1水平升高显示与一些动脉粥样硬化的风险因素相关。胰岛素和前胰岛素与PAI-1水平相关。胰岛素抵抗综合症状和糖尿病患者有增加PAI-1水平的倾向。减肥和降低甘油三酯和/或胆固醇的治疗也显示可降低PAI-1水平。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对人PAI-1的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: PAI-1试剂为固相酶免法。方法采用鼠抗人PAI-1抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的羊抗人PAI-1抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测,待测样品PAI-1夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。PAI-1的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。
肿瘤抑制蛋白P53是一种多功能分子,可调控细胞周期,DNA修复和凋亡,这种调控作用的发挥是通过与许多其它分子的相互作用来进行,这些分子包括TFIID、TFIIH、casein kinase 2、HIPK2、JNK1、HIF-1a、Ref-1、HDAC1、p300/CBP、MDM2、p63、p73 等等。这种相互作用通过转录激活活性和蛋白稳定性调控P53。美国Signosis 提供一种有效的P53免疫共沉淀试剂盒以系统研究P53相互作用。试剂盒包括Myc标签的P53表达载体,抗-Myc抗体结合的磁珠,以及免疫共沉淀P53和P53相关蛋白的全部试剂。 A. 优点: · P53免疫共沉淀试剂盒具有下列优势: · 快速---高亲和性的抗·C-Myc抗体交联的磁珠免疫沉淀带·C-Myc标签的蛋白或免疫共沉淀相互作用物,无需前分离步骤,缩短孵育时间。 · 噪音低--- 用于WB检测时,非特异信号低。 ·结果一致性高---磁珠易于通过磁架分离,少而快的洗涤无样品丢失。 ·简便---试剂盒包含全部试剂组份。 B. 原理: Myc标签的P53表达载体用于转染靶细胞。转染后,P53表达Myc抗原决定部位标签,与反应蛋白结合。复合物与P53可以快速高效的与包埋在磁珠上的抗Myc抗体免疫共沉淀,共沉淀复合物通过磁力架进一步与未结合的蛋白分开,洗涤后,复合物高效彻底的从磁珠上洗脱下来,用SDS-PAGE分离以进一步WB分析。磁珠上固相的Myc抗体在低PH洗脱条件下通过阻止轻链和重链的解离提供更好的WB检测。
IL1a和IL-1ß 是介导炎症和免疫调节作用的强激动剂。 二者由巨噬细胞、单核细胞和树状突细胞产生,是针对感染后炎症反应的重要部分。 它们增加内皮细胞黏附因子的表达,转运白细胞到感染部位。 IL1a是参与各种免疫反应、炎症过程和造血作用的多功能细胞因子,由许多类型细胞产生,但是仅由单核细胞和巨噬细胞分泌。 (详见:http://www.zhongzhibio.com/kysj/552.htm) A. 优点: · 性价比高---高质量,低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对鼠IL1a的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: 鼠IL1a试剂为固相酶免法。 方法采用兔抗鼠IL1a抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗鼠IL1a抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测, 待测样品鼠IL1a夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。鼠IL1a的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
研究基因表达常常需要RNA制备后再进行cDNA合成和PCR。不过要获得用于RNA制备的大量细胞之困难成为一些研究工作的瓶颈,如激光切割的样本,FACS分拣的细胞和在96孔板中培养的细胞。细胞数量有限(
NFkB 是一种广泛存在的转录因子,在细胞对各种刺激的反应中起着重要作用,这些刺激包括:压力、细胞因子、自由基、紫外线照射、氧化的LDL、细菌和病毒的抗原。NFkB的异常调节与炎症、自身免疫性疾病、脓毒性休克、病毒感染和不适当的免疫进展相关联。激活时NFkB参与免疫和炎症反应、细胞调节以及凋亡的相关基因的表达。为了方便在少量细胞中监测与细胞生物功能相关基因的表达, 美国Signosis公司研发了一种直接在细胞裂解物中或总RNA中分析8种NFkB调节基因实时PCR方法。 A. 优点: Signosis公司NFkB调控基因的实时PCR检测试剂具有以下优点: ·便利---从细胞裂解、反转录直到PCR,试剂盒包含了所有试剂。 ·无需RNA制备---细胞裂解液可直接用于反转录。 ·实时---分析可以实时监测 B. 原理: Signosis公司实时PCR检测试剂通过mRNA反转录成cDNA以及实时PCR监测8种因子的表达,纯化的总RNA或细胞裂解物先反转录成cDNA,靶基因再通过实时PCR分析。
Wnt信号通路对胚胎发育生成非常重要。β-Catenin,通路的中心部分,做为转录因子TCF/LEF家族的辅因子进行活动,通过与下游靶基因启动子结合激活Wnt靶基因的转录参与细胞增殖、生存和转移。许多蛋白包括APC和Axin参与Wnt信号通路的调控。美国Signosis公司Wnt/b-Catenin信号通路cDNA微孔板阵列试剂可同时测定20多个参与此通路的相关基因表达。不同样本这些基因表达差异可应用该试剂盒进行测定。 A. 优点: 美国Signosis公司基于其自有的cDNA微孔板阵列专利技术研发的人Wnt/b-Catenin调控的cDNA微孔板阵列检测试剂具有以下优点: ·操作简单---做基因表达试验像做ELISA酶免试验一样简单。 ·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 ·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 B. 原理: 美国Signosis 公司自有的cDNA微孔板阵列专利检测技术是基于微孔板杂交的检测方法,该方法是将mRNA反转录成cDNA来检测多种基因的表达。与芯片分析方法相似,加入生物素-dUTP后,总RNA先转录成生物素标记的cDNA。通过预包被在微孔板上的特异的寡核酸,将靶基因捕获到微孔板上(而不是膜上)。捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物,cDNA的浓度与待测标本的发光强度成正比。
巨噬细胞炎症蛋白-1 (MIP-1)是体外有促炎活性包括白细胞趋化性的细胞因子C-C子族的成员,它是细菌内毒素刺激后巨噬细胞产生的的一个主要因子。MIP-1可激活粒细胞(嗜中性、嗜酸性和嗜碱性细胞) 导致急性中性白细胞炎症,它还可诱导其它促炎细胞因子合成和释放例如来自成纤维细胞和巨噬细胞的IL-1、IL-6和TNFa。除促炎活性外,MIP-1在体内和体外抑制造血干细胞的增殖。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对鼠MIP-1a的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: 鼠MIP-1试剂为固相酶免法。方法采用兔抗鼠MIP-1a抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗鼠MIP-1抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测,待测样品鼠MIP-1夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。鼠MIP-1的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对鼠MIP-1a的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: 鼠MIP-1试剂为固相酶免法。方法采用兔抗鼠MIP-1a抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗鼠MIP-1抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测,待测样品鼠MIP-1夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。鼠MIP-1的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。
CEA是细胞表面200-kd的糖蛋白。CEA通常是在在胎儿发育期间产生。CEA的产生在出生前停止,通常健康成人血液中不存在。CEA存在于某些种类的不可治愈症中,特别是大肠(结肠和直肠),也存在于胰腺、乳腺、卵巢的病人。CEA水平在手术或其它治疗之前时异常升高,在成功切除所有癌的手术之后,预计下降到正常水平。中帜生物CEA酶免试剂为CEA水平的定量测定提供一个快速,敏感和可靠的分析方法,该试剂的灵敏度为1.0 ng/ml。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对CEA的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: CEA酶免试剂为固相酶免法。方法采用针对CEA不同抗原决定簇的鼠单克隆抗体做为微孔板的固相捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗CEA鼠单克隆抗体做检测抗体,待测样品同时与捕获抗体和标记抗体反应后,CEA夹在二者之间。孵育后,洗去未结合的标记抗体。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。CEA的浓度与待测样品的颜色呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对CEA的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: CEA酶免试剂为固相酶免法。方法采用针对CEA不同抗原决定簇的鼠单克隆抗体做为微孔板的固相捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗CEA鼠单克隆抗体做检测抗体,待测样品同时与捕获抗体和标记抗体反应后,CEA夹在二者之间。孵育后,洗去未结合的标记抗体。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。CEA的浓度与待测样品的颜色呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。