细胞因子参与许多生物活动,如病毒感染、炎症、免疫和造血。细胞因子是许多类型细胞对不同刺激反应的产物。细胞因子基因的表达由复杂的机制调控。一种细胞因子基因的表达可由多种细胞因子调控。细胞因子基因表达调控的异常可由染色体改变或导致表达机制激活或失活的病毒感染引起。因此,检测细胞因子基因表达为揭示调控的潜在机制提供了一种实用的方法。美国Signosis公司研发的细胞因子cDNA微孔板阵列检测试剂可检测20多种细胞因子基因表达。 A. 优点: 美国Signosis公司基于其自有的cDNA微孔板阵列专利技术研发的小鼠细胞因子cDNA微孔板阵列检测试剂具有以下优点: ·操作简单---做基因表达试验像做ELISA酶免试验一样简单。 ·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 ·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 B. 原理: 美国Signosis 公司自有的cDNA微孔板阵列专利检测技术是基于微孔板杂交的检测方法,该方法是将mRNA反转录成cDNA来检测多种基因的表达。与芯片分析方法相似,加入生物素-dUTP后,总RNA先转录成生物素标记的cDNA。通过预包被在微孔板上的特异的寡核酸,将靶基因捕获到微孔板上(而不是膜上)。捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物,cDNA的浓度与待测标本的发光强度成正比。
YY1在正常的生物学过程中如胚胎发育、分化、复制和细胞增殖中发挥着重要作用。YY1通过与启动子区的YY1识别位点(一致性序列)结合的过程发挥作用。YY1功能异常与细胞增殖异常、凋亡有关。美国Signosis 公司研发的YY1滤板法检测试剂用于检测YY1的DNA结合活性,可同时分析多个标本。 A. 优点: 美国Signosis 公司基于自有知识产权技术研发的YY1滤板法检测试剂,具有下列优势: · 简单快速---比凝胶迁移试验简单、快速 · 高通量筛选---多个样品可在一个试验中得到分析 · 费用低廉---与基于ELISA的检测方法相比花费更少 · 定量比较---二个或以上样本可同时定量分析 B. 原理 美国Signosis 公司研发的YY1滤板法检测试剂,是基于微孔板检测YY1活性的分析方法,预标记YY1的DNA结合序列与核抽体物混合,形成YY1-DNA复合物。过滤板用于保留结合的YY1探针,除去游离的DNA探针。结合的预标记的YY1探针随后从过滤板上洗脱、收集,与相应孔的杂交板杂交。捕获的YY1探针进一步用辣根酶标记的链霉亲和素检测,在微孔板发光检测仪上读取发光度值(RLUs)。
NFkB 是一种广泛存在的转录因子,在细胞对各种刺激的反应中起着重要作用,这些刺激包括:压力、细胞因子、自由基、紫外线照射、氧化的LDL、细菌和病毒的抗原。NFkB的异常调节与炎症、自身免疫性疾病、脓毒性休克、病毒感染和不适当的免疫进展相关联。NFkB激活时,与其抑制剂IkB解离,从细胞质移到细胞核,在此与靶DNA 结合,正调节基因的转录,参与免疫和炎症反应、细胞调节以及凋亡。通过结合CLTM cDNA合成试剂 (该试剂无需RNA制备,直接用细胞裂解液进行反转录), 美国Signosis公司研发了一种基于微孔板杂交阵列直接检测细胞裂解液中20多种NFkB调节基因表达。 A. 优点: 细胞裂解液中人NFkB调控的cDNA检测试剂具有以下优点: ·操作简单---无需RNA制备,直接用细胞裂解液合成cDNA。此外试验ELISA一样简单。 ·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 ·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 B. 原理: 与常规的需要总RNA进行反转录不同,美国Signosis开发了一种基于CLTM cDNA合成的微孔板阵列试剂。该试剂无需RNA制备,直接用用细胞裂解液通过反转录合成cDNA,然后用合成的cDNA探针进行微孔板阵列的杂交。通过预包被在微孔板上特异的寡核苷酸,靶基因被特异的捕获,捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物,发光程度用微孔板发光检测仪表示为RLUs,基因表达水平直接与发光强度成正比。
肿瘤坏死因子-a (TNFa),是在急性炎症时由巨噬细胞或单核细胞产生的炎症细胞因子,对细胞内的各种信号事件负责,引起坏死或凋亡。 TNFa对实体瘤生长、进展和转移关键性的血管形成也很重要。 此外, TNFa同肥胖症联系在一起。 它在肥胖啮齿类动物和人脂肪组织慢性升高,也许代表了肥胖和胰岛素抵抗之间的一个重要联系。 在肥胖鼠和人 脂肪组织中的TNFa过渡表达。 TNFa抑制胰岛素信号,至少部分是通过阻断胰岛素受体酪氨酸激酶活性和导致胰岛素受体基体1 (IRS-1)的丝氨酸磷酸化。然而还不清楚肥胖症期间由脂肪细胞产生的TNF-a的生理刺激物是什么,IRS-1在细胞TNF-a处理后如何抑止胰岛素受体酪氨酸激酶的活性。 更好理解TNF-a和胰岛素信号通路之间的联系对发现肥胖症期间胰岛素抵抗状态的治疗是非常重要的。 A. 优点: · 性价比高---高质量,低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对人TNFa的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: 人TNFa试剂为固相酶免法。 方法采用鼠抗人TNFa抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的羊抗人TNFa检测抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测, 待测样品TNFa夹在捕获抗体和检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。TNFa的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
快速生长的肿瘤会出现缺氧区,大部分细胞对缺氧的反应是(1)产生VEGF和其它缺氧诱导的血管生成因子以促进增加血管生成,从而增加组织的氧合(2)从有氧的磷酸化到缺氧的糖酵解的代谢转换。缺氧诱导因子-1(HIF-1)是在缺氧反应过程中有重要作用的一种氧调控转录激动剂。HIF-1a亚单位是氧依赖性泛素化和蛋白酶体降解。细胞因子如白介素-1和肿瘤坏死因子-a刺激HIF-1依赖的基因表达。HIF-1增加促进血流及炎症的数种基因的表达,如血管生成因子(VEGF)。通过结合CL(TM )cDNA合成试剂 (该试剂无需RNA制备,直接用细胞裂解液进行反转录), 美国Signosis公司研发了一种基于微孔板杂交阵列直接检测细胞裂解液中20多种HIF调节基因表达。 A. 优点: 细胞裂解液中人HIF调控的cDNA检测试剂具有以下优点: ·操作简单---无需RNA制备,直接用细胞裂解液合成cDNA。此外试验ELISA一样简单。 ·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 ·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 B. 原理: 与常规的需要总RNA进行反转录不同,美国Signosis开发了一种基于CL(TM )cDNA合成的微孔板阵列试剂。该试剂无需RNA制备,直接用细胞裂解液通过反转录合成cDNA,然后用合成的cDNA探针进行微孔板阵列的杂交。通过预包被在微孔板上特异的寡核苷酸,靶基因被特异的捕获,捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物,发光程度用微孔板发光检测仪表示为RLUs,基因表达水平直接与发光强度成正比。
CA 15-3多数由腺上皮表达,特别是在哺乳期的和恶性变的乳腺表达增加 。 CA 15-3水平升高也可以是非癌的情况,例如良性乳腺或卵巢疾病、子宫内膜异位、盆腔炎和肝炎。 怀孕和哺乳期也可引起CA 15-3水平上升。 美国Signosis CA 15-3酶免试剂为CA 15-3的定量测定提供一个快速,敏感和可靠的分析方法,该试剂的灵敏度为5 U/ml。 A. 优点: · 性价比高---高质量,低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对CA15-3的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: CA 15-3酶免试剂为固相酶免法。 方法采用针对CA 15-3不同抗原决定簇的鼠单克隆抗体做为微孔板的固相捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗CA 15-3抗体做检测抗体, 待测样品同时与捕获抗体和标记抗体反应后,CA 15-3夹在二者之间。孵育后,洗去未结合的标记抗体。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。CA 15-3的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
转录因子(TF)的转录活性常常是通过报告载体测定的,载体含有TF的顺式因子(DNA结合序列)和荧光素酶样的报告基因。报告基因导入细胞,激活的TF与顺式因子结合,介导报告基因的启动。这种启动可以通过生化分析报告基因的产物进行测定。然而这是一种单项测定,一次测一个TF。由于细胞的变化会导致多种TF的激活,检测这些TF就需要多次转染和生化测定。此外,由于被导入到不同的细胞培养孔,还需要标准化规范转染。美国Signosis 公司基于自有专利开发一种多重转录因子(TF)报告基因实时PCR检测试剂以同时检测多种TF,检测试剂中所选24种TF代表了大多重要的信号转导通路。在多重转录因子报告基因实时PCR检测试剂I中,24种TF报告载体混合物是一次性转染入细胞。24种TF活性用实时PCR SYBR green同时检测,采用试剂盒内自带的CLTM细胞裂解液,直接用细胞裂解物,勿需进行RNA制备。 A. 优点: 美国Signosis 公司基于自有专利技术研发的多重转录因子报告基因实时PCR检测试剂,具有下列优势: · 基于细胞的方法---基于细胞的方法检测TF 的活性 · 多重复合---24种TF活性可一次转染,同时检测 · 无需RNA制备---细胞裂解物可直接用于cDNA合成 · 定量比较---二个或以上样本可同时用实时PCR定量分析 B. 原理 多重转录因子报告基因实时PCR检测试剂I是一种实时方法,可同时定量检测24种TF活性。该技术中,构建一系列报告载体,每一种含有一个顺序因子和针对一种特异TF的载体标识序列。当载体做为文库加入96孔板某一孔,TF的激活将使其与相应的载体结合,介导标示序列的表达。细胞裂解物制备后,转录成cDNA,再进行实时PCR,TF的差异通过二个样本的比较进行区别。
血管形成从无血管状态转变成有血管状态是生长维持的一个关键因素。 血管形成作为一种生物学的转换过程由促进和抑制血管形成的许多因素控制,包括血管内皮细胞生长因子(VEGF), 碱性成纤维细胞生长因子(FGFb),表皮生长因子(EGF)和促生长因子b(TGF-b)。 这些因子的作用机制是不同的,就象它们的来源和它们产生的刺激物一样。 血管形成的转换通常是促进和抑制血管形成因素之间的平衡结果。所以,描绘这些因素对了解血管形成至关重要。 美国Signosis 8种血管生成细胞因子复合酶免法平行检测试剂可同时检测8种血管形成细胞因子:TNFa、IGF-1、VEGF、IL-6、FGFb、TGFb、EGF和Leptin。板条每个孔包被有针对血管形成蛋白的特异抗体,一个板条8个孔可测定8不同蛋白质。二个样品之间蛋白质的区别可以通过数据比较加以测定。 A. 优点: · 多种复合---单一ELISA板条可同时测定8种血管形成细胞因子 · 灵活弹性---单一板块可比较2个样品到12个样品 · 差别定量---不同于膜芯片方法,样品中各个蛋白的区别可以定量比较。另外, EA- 1012为做标准曲线提供标准品。 · 勿需贵重仪器---不同于珠式的检测方法,勿需贵重仪器 · 操作简单---12x 8孔预包被板的完整试剂系统. B. 原理 板条每个孔包被有针对血管形成细胞因子的特异抗体,8个孔包被有8不同抗体,一个板条8个孔可测定8不同细胞因子。待测样品可同时与二个抗体组成的抗体对反应,血管形成细胞因子夹在固相抗体和酶标记抗体中间。 孵育后,洗涤板孔除去未结合的标记抗体。 加入HRP底物TMB,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。450 nm处测定吸光值。 血管形成细胞因子的浓度与待测样品颜色深浅成正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
药物中毒主要是由药物代谢引起的。药物可以由药物代谢酶生物转化成为毒性或非毒性代谢物。许多蛋白家族如P450s、UDP-glucuronosyltransferases、sulfotransferases、阴离子转运蛋白和多种药物抗性蛋白参与药物代谢过程,催化内用药物的氧化。这些酶表达水平的变化是药物代谢个体差异的主要因素。美国Signosis公司的人药物毒性cDNA微孔板阵列检测试剂可检测22 种药物代谢相关基因的表达。 A.优点: 美国Signosis公司基于其自有的cDNA微孔板阵列专利技术研发的药物毒性cDNA微孔板阵列检测试剂具有以下优点: ·操作简单---做基因表达试验像做ELISA酶免试验一样简单。 ·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 ·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 B. 原理: 美国Signosis 公司自有的cDNA微孔板阵列专利检测技术是基于微孔板杂交的检测方法,该方法是将mRNA反转录成cDNA来检测多种基因的表达。与芯片分析方法相似,加入生物素-dUTP后,总RNA先转录成生物素标记的cDNA。通过预包被在微孔板上的特异的寡核酸,将靶基因捕获到微孔板上(而不是膜上)。捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物,cDNA的浓度与待测标本的发光强度成正比。
血管形成从无血管状态转变成有血管状态是生长维持的一个关键因素。 血管形成作为一种生物学的转换过程由促进和抑制血管形成的许多因素控制,包括血管内皮细胞生长因子(VEGF), 碱性成纤维细胞生长因子(FGFb),表皮生长因子(EGF)和促生长因子b(TGF-b)。 这些因子的作用机制是不同的,就象它们的来源和它们产生的刺激物一样。 血管形成的转换通常是促进和抑制血管形成因素之间的平衡结果。所以,描绘这些因素对了解血管形成至关重要。 美国Signosis 小鼠8种血管生成细胞因子复合酶免法平行检测试剂可同时检测8种血管形成细胞因子:TNFa、IGF-1、VEGF、IL-6、FGFb、TGFb、EGF和Leptin。板条每个孔包被有针对血管形成蛋白的特异抗体,一个板条8个孔可测定8不同蛋白质。二个样品之间蛋白质的区别可以通过数据比较加以测定。 A. 优点: · 多种复合---单一ELISA板条可同时测定8种血管形成细胞因子 · 灵活弹性---单一板块可比较2个样品到12个样品 · 差别定量---不同于膜芯片方法,样品中各个蛋白的区别可以定量比较。另外, EA- 1022为做标准曲线提供标准品。 · 勿需贵重仪器---不同于珠式的检测方法,勿需贵重仪器 · 操作简单---12x 8孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理 板条每个孔包被有针对血管形成细胞因子的特异抗体,8个孔包被有8不同抗体,一个板条8个孔可测定8不同细胞因子。待测样品可同时与二个抗体组成的抗体对反应,血管形成细胞因子夹在固相抗体和酶标记抗体中间。 孵育后,洗涤板孔除去未结合的标记抗体。 加入HRP底物TMB,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。450 nm处测定吸光值。 血管形成细胞因子的浓度与待测样品颜色深浅成正比,待测样品 450 nm处测定吸光值进行定量。