干细胞转录因子活性多重检测阵列试剂I

　　干细胞是重要细胞，其能够自我更新或者分化成多种类型的细胞，这种能力由细胞信号传导和转录调控所控制，因此转录调控在细胞识别和功能实现过程中起决定作用。干细胞逐步成熟成为终末分化细胞，需要由重要的转录因子适时的激活级联转录程序，多种转录因子和靶基因广泛报告与干细胞的自我更新和多能性有关，包括EGR1, OCT4, FOXD3, FOXO, Nanog, SOX2, SOX18, ETS, GLI, KLF4, MEF2, Myc, RNUX1, Pax6, TCF/LEF 和GATA。分析这些TF的活性可以为干细胞的研究和应用提供有价值的线索。美国Signosis 公司开发一种干细胞转录因子活性多重检测阵列试剂，以同时分析哺乳动物样本中16种干细胞特异的TF，该方法可以用1000-10000个细胞的全细胞裂解物进行。 　　A. 优点: 　　美国Signosis 公司基于自有技术研发的干细胞转录因子活性多重检测阵列试剂，具有下列优势： 　　· 多重分析---一次分析可以检测16种干细胞相关的TF 　　· 定量比较---二个样本的差异可以定量分析和比较。 　　· 步骤简单---探针温育、柱分离、板杂交和HRP检测 　　· 无需贵重仪器---无需如luminex那样的贵重仪器 　　B. 原理 　　干细胞转录因子活性多重检测阵列试剂用于同时检测多种TF活性。该技术中，基于TF DNA结合位点的一致性序列，制备一系列生物素标记的探针。当探针混合物与核提取物一起温育时，每个探针寻找相应的TF，形成TF/探针复合物，通过柱离心纯化可以很容易与游离探针分开。结合的探针从混合物中分离出来，通过板杂交分析。板孔中预包被上与探针互补的特异序列，捕获的DNA探针进一步用链酶亲和素-HRP检测，化学发光检测仪测定发光强度(RLUs)。