【评价原理】苯肼导致红细胞外翻和氧化应激产生，红细胞外翻能够引起血细胞聚集，氧化应激产生导致内皮细胞损伤，进而导致血小板聚集、纤维蛋白原形成，最终诱导血栓发生。斑马鱼的造血遗传网络在进化上和人类高度保守，适合于血栓形成机制和治疗药物的评价。躯干出现血栓后，回心血量便会减少。经过血红细胞特异性染色（呈红色），患有血栓的斑马鱼心脏红细胞比正常斑马鱼心脏红细胞明显减少，由于斑马鱼血液系统发育过程透明的特点，可以明显被观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用血管疏通剂组。其中正常对照组未摄入苯肼，模型对照组与服用血管疏通剂组都摄入了等量的苯肼（苯肼通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用血管疏通剂组在加入苯肼的同时摄入阿司匹林、氯吡格雷之类的血管疏通剂。服用一段时间血管疏通剂后，我们对斑马鱼整体做血红细胞特异性染色，观察心脏红细胞变化。【结果展示】图1. 斑马鱼血栓表型图黄色虚线区域为心脏，心脏内红色为红细胞可以看到，服用血管疏通剂组的肝脏情况与未摄入苯肼的正常对照组比较相似，没有明显的红细胞减少。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用血管疏通剂组的心脏红细胞数量与未摄入苯肼的正常对照组相似，并未出现模型对照组的心脏红细胞数量减少的情况。2.本实验证实了阿司匹林、氯吡格雷和养血清脑颗粒具有显著的疏通血管（抗血栓）功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

环特斑马鱼技术，完美契合《化妆品功效宣称评价指导原则》新规要求——是您开展功效宣称备案检测的理想之选！环特生物，利用斑马鱼模型实验，为化妆品企业提供化妆品功效宣称评价、人体功效评价、功效备案检测、毒理安全性评价、原料筛选验证、微生物检测等服务，周期短、费用低、直观高效。助力化妆品企业做好研发、品控和宣传推广。化妆品功效评价（人体功效/斑马鱼评价）- 备案检测化妆品安全性评价-毒理评价化妆品及原料评价检测项目更多化妆品评价检测项目及内容，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）。环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²化妆品功效实验室。环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。

【评价原理】正常人的皮肤颜色主要由黑色素决定，通常我们说的色斑、色沉也与黑色素有关。目前认可的黑色素形成途径主要为酪氨酸在酶催化下经过多巴氧化等过程，最终形成黑色素。由于斑马鱼拥有与人类相似的皮肤结构，黑色素的形成机理也与人类高度相似。而且斑马鱼的幼鱼身体透明，表皮的黑色素易于观察，因此可以用来观察产品的美白淡斑效果。由于斑马鱼通体透明，斑马鱼的黑色素可以被明显地观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和美白淡斑产品组（美白淡斑产品熊果苷、曲酸等通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用一段时间美白淡斑产品后，我们对斑马鱼头部进行拍照，观察斑马鱼头部色素的变化情况。【结果展示】图1. 斑马鱼美白淡斑表型图红色虚线区域为头部分析区域，区域内黑色部分为黑色素可以看到，美白淡斑产品组的黑色素相比正常对照组明显减少。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用美白淡斑产品组的色素相比正常对照组明显减少。2.本实验证实了熊果苷、曲酸美白产品具有美白淡斑功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼和哺乳动物的心脏有相似的功能，包括血流方向、由专门的心内膜肌肉组织驱动的高压系统、由电子系统调节的心律以及与起搏活动相关的心跳。斑马鱼对典型的心脏毒素的药理学反应与人类相似。斑马鱼受精后48 h，心血管系统功能全面，呈现出例子通道和代谢过程的复杂性。因此，可以应用斑马鱼评价药物对心衰的防治作用。维拉帕米是苯烷胺类钙离子拮抗剂,其诱导心力衰竭的药理学基础有以下三方面: （1）对心脏的抑制作用,即负性频率、负性传导及负性肌力作用,且为剂量依赖性;（2）扩张血管作用,即对外周血管具有明显的扩张作用,使外周阻力降低,平均动脉压下降; （3）减少冠脉血流,降低心肌血供。我们用维拉帕米建立斑马鱼心衰模型。患有心衰的斑马鱼与正常斑马鱼比较，出现心包水肿、静脉瘀血、心搏出量减少和血流速度减慢，由于斑马鱼通体透明的特点，可以明显被观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和抗心衰药物组。其中正常对照组未摄入维拉帕米，模型对照组与抗心衰药物组都摄入了等量的维拉帕米（维拉帕米通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。抗心衰药物组在摄入维拉帕米的同时加入地高辛、美托洛尔类的抗心衰药物。服用一段时间抗心衰药物后，观察斑马鱼心包水肿和静脉淤血的情况；用心跳血流分析系统检测心搏出量和血流速度的情况。【结果展示】图1. 斑马鱼心衰表型图黄色虚线区域为心脏，绿色虚线区域为静脉淤血可以看到，服用抗心衰药物组的心包面积和静脉瘀血面积与未摄入维拉帕米的正常对照组基本相似，没有明显的心衰情况。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用抗心衰药物组的心包面积和静脉瘀血面积与未摄入维拉帕米的正常对照组基本相似，没有出现模型对照组心包水肿、静脉瘀血的情况。2.本实验证实了地高辛、美托洛尔具有明显的心衰防治（心脏功能改善）作用。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

 服 务 内 容 ● 基础研究  ● 品系构建  ● 基因编辑  ● 行为学分析● 药效与安全评价  ● 保健食品功效与毒理评价  ● 病理学和影像学分析  ● 生化和分子生物学分析一、哺乳动物品系● 小鼠常规品系：C57BL/6J，ICR，BLAB/C-Nude（裸鼠）等。● 小鼠疾病品系：代谢紊乱（糖尿病、三高），免疫缺陷，神经退化，自发性肿瘤，人源化模型等。● 其它哺乳动物常规品系：大鼠SD/Wistar，新西兰白兔，青紫蓝兔，比格犬等。● 体外模型：大小鼠原代神经元模型，原代神经干细胞模型，原代胶质细胞模型等。● 特色 - 转基因猪定制服务：环特具备全国领先的基因编辑猪技术。根据客户构建基因编辑克隆胚胎，以业内顶尖妊娠率与出产率提供成体的基因编辑猪模型。● 特色 - 基因编辑金黄地鼠定制服务：环特具备特色基因编辑金黄地鼠技术平台，拥有全国最尖端的基因敲除、定点突变和大片段插入技术，成功建立多种转基因品系，包括免疫缺陷、代谢紊乱、激素调节异常和条件性敲除模型等。二、功效和安全性分析三、行为学分析四、病理学和影像学分析五、生化和分子生物学分析● 分子生物学检测：原位杂交、质粒构建、基因组提取与测序、彗星电泳、Real-Time PCR等。● 生物化学和组学检测：酶联免疫吸附试验、流式细胞仪检测、肠道菌群组学分析、代谢组学分析、蛋白质组学分析等。 服 务 案 例  平 台 简 介 环特哺乳动物技术平台，专注于药物/保健食品相关研究和基因编辑服务，通过定制动物模型与服务方案以支持各类药物/保健食品的开发、临床前研究和临床研究。平台具备大量的技术经验和专业知识，以SPF级标准饲养环境下的大鼠、小鼠、兔、犬、金黄地鼠以及专业的基因编辑猪为模型基础，为客户提供高质量的转基因动物品系、疾病造模、功效与安全性评价以及行为学分析等专业服务。环特哺乳动物技术平台提供“设计-实验-分析”等各方面的全面支持和服务：（1）方案设计：平台可以根据需求提供合适的动物模型与服务方案策划，以确保能获得最佳的研究结果。（2）体内/外研究：平台可以提供动物模型的繁育和饲养、实验过程中各项体征的观察记录、以及对血液/组织/器官样品的提取、处理和相关分子生物学、生物化学、免疫组化/荧光、蛋白质组学、代谢组学等指标检测。（3）专业数据分析：平台提供行为学实验等结果的全面数据分析和统计服务，以确保研究成果准确可靠。环特哺乳动物技术平台致力于为客户提供高质量、全面和个性化的动物模型和研究服务，以支持各种药物和保健食品的研发和临床应用。 服 务 咨 询 更多大小鼠等动物实验服务内容，请拨电话咨询：0571-83782130，手机 17364531293（微信同号）。环特拥有实验动物生产和使用许可证，已通过CNAS、CMA、AAALAC认证，自有8500m²动物试验实验室。

环特生物，利用斑马鱼模型实验，为功能食品/保健食品企业提供产品功效评价、功能检测、毒理安全性评价、原料筛选验证及安全检测、微生物检测等服务，周期短、费用低、直观高效。助力企业做好研发、品控和推广。功效评价检测安全性评价-毒理评价检测食品/保健食品及原料 评价检测项目更多的食品/保健食品评价检测项目及内容，请拨电话咨询：0571-83782130环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²斑马鱼生物评价实验室。环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。

【评价原理】通常来说，炎症是机体的一种抗病反应，机体蒙受损坏后，机体的内坏境以及内境界和外坏境之间达到新的均衡的过程中会引发组装细胞的损坏，使片面组装细胞显现变性、坏死。利用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼（MPO）作为模型，当体内炎症水平上升的时候，中性粒细胞的数量也就相对的增高，在荧光显微镜下，中性粒细胞的数量也就是表现出炎症反应程度的一个重要指标。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照与供试品组，通过服用/注射供试品一段时间后，我们在荧光显微镜下观察斑马鱼中性粒细胞的数量，同时检测体内炎症因子IL-6的表达情况。【结果展示】图1. 斑马鱼中性粒细胞数量（白色箭头为斑马鱼侧线中性粒细胞）从实验结果可以看到，供试品组相对正常对照组斑马鱼侧线位置中性粒细胞数显著增多。图2：斑马鱼体内的中性粒细胞数量及体内炎症因子表达水平的变化从实验结果可以看到，斑马鱼供试品组相对正常对照组，IL-6炎症因子相对表达量下降。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，相对于正常对照组，服用或者注射供试品组之后，中性粒细胞增多和炎症因子上升。2.本实验证实了供试品组等具有增加中性粒细胞数量，以及促进炎性因子表达的功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

服务项目环特CRISPR/Cas9基因编辑技术，可构建转基因、基因敲除（KO）、基因敲入（KI）、点突变（PM）等各类基因编辑小鼠模型，为客户提供现大小鼠模型定制、联合研发等服务。找大小鼠基因编辑公司，选环特生物，一站式大小鼠基因编辑服务！大小鼠基因编辑定制流程图：技术介绍Cas9/gRNA复合物在靶位点进行切割，产生双链断裂，迫使细胞进行紧急修复。通常条件下，细胞偏向于使用非同源末端连接的方式对断裂的双链进行修复，进而造成靶位点基因的插入/缺失突变。CRISPR/Cas9技术采用独特的受精卵处理方式让受精卵偏好同源重组修复路径，大大提高同源重组效率，使得DNA大片段敲入（KI）及条件性敲除（CKO）得以实现。四大优势● 周期短，效率高； ● 高嵌合率，生殖遗传稳定； ● 可实现DNA大片段敲入； ● 可实现条件性敲除。服务流程和周期：基因敲除小鼠模型构建完全性基因敲除小鼠通过CRISPR /Cas9基因敲除技术，针对靶基因设计和构建gRNA与Cas9表达质粒，造成目的基因的功能区域被敲除，获得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的小鼠模型。CRISPR-Pro完全性基因敲除包括：移码突变、片段基因敲除、双/多基因敲除。条件性基因敲除小鼠通过把两个LoxP位点插入到目的基因的一个或几个重要外显子的两端以制备出有两个floxed小鼠。该floxed小鼠在与表达Cre重组酶小鼠杂交之前，该基因表达正常；当floxed小鼠与组织特异性表达Cre酶的小鼠进行杂交后，可实现在特定的组织或细胞中敲除该基因，而在其它组织或细胞中该基因表达正常。▲小鼠基因敲除（Cas9-KO）方案图基因敲入小鼠模型构建利用CRISPR/Cas9基因敲入技术，针对靶基因设计、构建相应的 gRNA质粒和donor vector，通过Cas9核酸酶的切割作用和同源臂的同源重组，引入特定的突变或外源基因。比如在目的基因上引入点突变(模拟人类遗传疾病模型)或将报告基因(如EGFP，mRFP，mCherry，mYFP，或LacZ等)引入目的基因的特定位点，从而可以通过报告基因来跟踪目标基因的表达；也可以用报告基因取代大小鼠本身的基因，使KO/KI同时发生。▲小鼠基因敲入（Cas9-KO）方案图CRISPR/Cas9基因敲入小鼠包括：点突变、片段基因敲入。▲点突变（Cas9-PM）方案图转基因小鼠模型构建制作转基因大小鼠最常用的一种方法是DNA原核显微注射。DNA原核显微注射是指将外源DNA通过显微注射的方法注射到受精卵的原核内，注射DNA整合到小鼠受精卵的基因组中，并稳定遗传给后代。 四大优势● 更高的整合效率和目的基因表达概率； ● 更大的目的片段的插入； ● 更“精确”拷贝数的插入； ● 可自由移除插入片段。服务流程和周期质粒或BAC载体构建（2~3周）→ 原核显微注射：大小鼠（3周）→ 大小鼠的鉴定（1~2周）。建立转基因大小鼠品系系原则与流程1、原核显微注射导入的目的基因是将目的基因随机整合到小鼠或者大鼠的基因组，因此首代转基因鼠（F0）将会有不同的整合位点。整合基因的拷贝数可能在不 同的首代转基因鼠中也不同。因此，每只F0代鼠需要作为一个独立的谱系研究，并且与其它F0代鼠分开进行繁殖。由于外源基因一般只整合在二倍体动物的其中 一条染色体上，属于半合子，其后代只有一部分个体带有整合的基因，需要进行筛选鉴定。2、 原核显微注射获得PCR阳性F0代杂合子鼠。3、 F0代鼠达到性成熟后（8周）与野生型鼠进行交配，获得F1代鼠。4、 对交配获得的F1代鼠进行基因型鉴定，理论上，F1代鼠中有50%为转基因杂合子鼠，50%为野生型鼠。转基因小鼠类型● 过表达转基因小鼠； ● RNAi转基因小鼠； ● microRNA转基因小鼠； ● 可诱导性/组织特异性转基因小鼠； ● 可诱导性/组织特异性转基因小鼠。全新基因编辑Immediate-Phenotype技术全新基因编辑Immediate-Phenotype技术可实现三个月内拿到超过100只有表型小鼠，并可得到靶标基因所带来的表型变化，同时实现长达50KB片段基因编辑。目前我们可实现基因敲除 、基因敲入和点突变的Immediate-Phenotype，尤其是点突变技术在遗传性疾病发现和疾病研究上有重大意义，可快速实现罕见病的定性。在商业价值上，可实现生产成本和时间成本大幅降低。 服 务 咨 询 更详细的基因编辑服务内容，请拨电话咨询：0571-83782130，手机 17364531293（微信同号）。环特拥有实验动物生产和使用许可证，已通过CNAS、CMA、AAALAC认证，自有8500m²动物试验实验室。

【评价原理】由于斑马鱼拥有与人类相似的消化系统，如肝脏、肠道等，消化和营养的吸收及运输与人类高度相似。斑马鱼的卵黄囊70%左右是中性脂肪，如果能够促进斑马鱼卵黄囊的吸收，就相当于可以促进脂肪的分解和代谢，类似于体内脂肪燃烧。经过脂肪特异性荧光染色（呈红色），斑马鱼的卵黄囊被染红，可以明显被观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组和服用燃脂产品组。其中正常对照组未摄入其他物质，服用燃脂产品组摄入了白藜芦醇之类的燃脂产品（燃脂产品通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用一段时间燃脂产品后，我们对斑马鱼卵黄囊做脂肪特异性荧光染色，观察卵黄囊的脂肪颜色变化。【结果展示】图1. 斑马鱼卵黄囊脂肪表型图黄色虚线区域为斑马鱼卵黄囊可以看到，服用燃脂产品的斑马鱼卵黄囊荧光强度与正常对照组明显减弱。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用燃脂产品组卵黄囊荧光强度与正常对照组比较明显减弱。2.本实验证实了白藜芦醇具有明显燃脂（促进脂肪代谢）功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【斑马鱼高通量技术】斑马鱼高通量技术，是一种可支持同时间对数十、上百样品进行检测，并以相应的数据库支持整个实验体系高效运转的高可靠性筛选技术。目前，环特通过实验设计和数据分析等重要节点进行深度优化，强势推出斑马鱼高通量筛选技术。该技术可将项目交付周期缩短至10-15天，并衍生出三个梯度的技术方案。【显著优势】高效：斑马鱼胚胎发育速度快，其1天生长相当于鼠类8～10天，实验周期大幅缩短，效率更高。高可靠：基因相似度与人体达87%，与人体对应性强，雌鱼单次产卵超200枚，样本量大、个体差异小，结果更可靠。高性价比：斑马鱼实验用样量仅为小鼠的1/1000～1/100，加之实验效率大幅提升后，带来极具吸引力的成本优势。定制灵活：方案设计灵活，可定制化程度高，能满足不同样品数量和实验目的需求。【实验方案】【实验结果】基于斑马鱼的高通量筛选技术，以上三个梯度方案，实现项目交付周期短至10-15天。相比其它动物高通量筛选方案，斑马鱼更高效、更可靠、性价比更高、周期更短。【合作案例】【服务流程】1、提出需求及样品信息 → 2、提供解决方案 → 3、确认报价及周期 → 4、支付首付款开始实验 → 5、验收实验支付尾款。【附】：高通量药物筛选服务项目（部分）更多高通量筛选项目及内容，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293。环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²生物评价实验室。环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。