【评价原理】OECD近年大力推崇的“有害结局路径”（Adverse Outcome Pathway，AOP）毒性评估策略来测试类雌激素这一大类有害物质。本方法参照粮农组织和世界卫生组织（FAO/WHO，2000）关于雌激素物质最高日摄取量来评估测试物的安全性，通过转基因标记技术表达的绿色荧光蛋白含量来量化类雌激素物质含量，绿色荧光蛋白特异性地在肝脏表达，一旦供试品中含一定量的类雌激素化学物质，雌激素转基因斑马鱼暴露后肝脏部位会出现绿色荧光，可用绿色荧光量化供试品中的类雌激素物质含量，从而达到检测效果。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。摄入供试品一段时间后，我们在荧光显微镜下观察斑马鱼肝脏荧光。【结果展示】图1.含类雌激素物质的供试品处理后斑马鱼荧光表型图黄色曲线部位为肝脏，绿色荧光量化类雌激素含量可以看到，摄入供试品组肝脏部位有明显的绿色荧光。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，摄入含类雌激素物质的供试品组斑马鱼肝脏荧光明显，与正常对照组存在明显差别。2.本实验证实了该供试品含有类雌激素物质。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】过敏原/致敏因子诱导组织学上肥大细胞脱颗粒，释放活性介质如组胺、5-HT，前列腺素D、白三烯、血小板活化因子等，表现为平滑肌收缩，毛细血管扩大和通透性增强，腺体分泌物增多等，诱发多种过敏症状。 类胰蛋白酶是肥大细胞内预先合成的中性蛋白酶，是临床上检验人体是否过敏的重要指标。斑马鱼产生过敏反应时，亦诱导肥大细胞分泌类胰蛋白酶。C48/80作为肥大细胞活化剂，可以诱导组织学上肥大细胞脱颗粒，释放类胰蛋白酶。我们检测过敏有两种方法。1. 类胰蛋白酶的含量：用酶标仪检测类胰蛋白酶的含量。2. 肥大细胞数量：制作病理切片，经过过碘酸雪夫染色，肥大细胞呈蓝色，肥大细胞释放的组胺和白三烯等物质呈红色。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成四组，分别是正常对照组和滴注致敏剂低、中、高剂量组。其中正常对照组未滴注C48/80，滴注致敏剂组均滴注C48/80低、中、高剂量（C48/80通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。滴注C48/80一段时间后，利用酶标仪检测类胰蛋白酶含量（吸光度值），同时制作病理切片进行过碘酸雪夫染色。【结果展示】图1. 斑马鱼类胰蛋白酶含量（吸光度值）与正常对照组比较，*p < 0.05，***p < 0.001可以看到，滴注中、高浓度致敏剂组类胰蛋白酶含量与正常对照组比较明显升高。图2. 斑马鱼体内肥大细胞染色典型图箭头指示为肥大细胞从病理切片中也能看出来，滴注致敏剂组斑马鱼的肥大细胞与正常对照组相比数量明显上升。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，滴注致敏剂组斑马鱼类胰蛋白酶含量和肥大细胞数量与正常对照组相比数量明显上升。2.本实验证实了C48/80具有明显的致敏作用。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】光毒物质在特定的波长光线刺激下，形成单线态和三线态后，可迅速与细胞小分子物质结合形成特异的光激活物质。这种物质在体内会降解为普通毒物或再次成为光毒物质，对机体造成伤害。在急性光毒性反应中，皮肤在照射紫外线后数分钟至数小时内出现红斑、水疱等。在慢性光毒性中可引起照射处皮肤色素的沉着过多以及皮肤增厚。斑马鱼皮肤包括表皮、真皮和真皮下组织，结构与人高度相似。因此，斑马鱼适合评价化妆品的光毒性。我们评价斑马鱼光毒性有2个指标：1.毒性表型；2.LC50。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成12个组，分别是避光正常对照组，5个避光供试品组，光照正常对照组，5个光照供试品组。供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内。皮肤吸收一段时间供试品后，我们记录斑马鱼各组斑马鱼死亡率，以软件计算供试品LC50；并记录拍照记录明显毒性表型。【结果展示】图1：光毒性表型图可以看到，正常对照组和光照处理正常对照组未诱发任何毒性表型。供试品组诱发卵黄囊吸收延迟，光照处理的供试品组诱发心血管毒性和肾毒性等。图2. 供试品LC50可以看到，未光照的供试品与光照过的供试品LC50有明显差异。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，光照过的供试品诱发毒性表型较未光照的供试品严重，且与正常对照组存在明显的差别；未光照的供试品与光照过的供试品LC50有明显差异。2.本实验证实了供试品具有光毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

环特生物，利用斑马鱼模型实验，为药品企业提供药效评价、药物功效与安全性评价、毒性毒理实验、临床前研究、药物筛选、活性成分筛选等生物检测服务，周期短、费用低、高效专业。助力药品企业做好研发、品控和宣传推广。药物评价-药物筛选-毒性实验检测项目药效评价-药物功效评价模型药物安全性评价-毒性评价模型更多药物评价筛选等项目及内容，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²生物评价实验室。环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。

【评价原理】 皮肤弹性作为皮肤组织的重要生物力学特性，对生理病理状态的分析、诊断、治疗有着极其重要的参考价值和指导作用，是评价皮肤功能的重要指标。皮肤的液体含量(血液、淋巴液)、弹力纤维和肌纤维的特性及神经组织的紧张度是决定皮肤弹性高低的重要因素。皮肤的弹性和胶原蛋白有关，人体内的胶原蛋白不足时，便会出现皮肤的弹性下降。I型是在大多数结缔组织中发现的原纤维形成胶原，在骨骼，角膜，真皮和肌腱中含量丰富。在人体内，I型胶原是一种三聚体，主要由两条α1链和一条α2链组成，分别由col1a1和col1a2基因编码。相反，在斑马鱼中，存在三种I型胶原基因，分别编码α1（I），α3（I）和α2（I）链的col1a1a，col1a1b和col1a2。在胚胎和幼虫发育过程中，三种I型胶原基因显示出相似的时空表达模式，表明它们在这些阶段的共同调控和相互依赖性。通过检测皮肤弹性相关基因（皮肤胶原蛋白col1a2基因、col1a1a和col1a1b基因）相对表达量来表明产品的增加皮肤弹性功效。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和皮肤弹性产品组（皮肤弹性产品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。皮肤吸收皮肤弹性产品一段时间后，我们通过qPCR检测皮肤胶原蛋白col1a2基因（推荐）、col1a1a和col1a1b基因的转录水平，并计算其相对表达量。【结果展示】以col1a2基因为例，提供柱状图图1. 斑马鱼体内col1a2相对表达量与正常对照组比较，*** p< 0.001可以看到，摄入皮肤弹性产品组的斑马鱼col1a2基因相对表达量较正常对照组明显增加。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用皮肤弹性产品组的col1a2基因、col1a1a和col1a1b基因相对表达量较正常对照组明显增加。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

环特生物是中国首家斑马鱼生物技术研究开发企业，专注于药物与大健康产品研发及毒理学评价等领域的技术外包服务，是中国首家通过AAALAC国际认证的斑马鱼研发机构，也是国家高新技术企业和国家火炬计划企业，并通过了中国合格评定国家认可委员会（CNAS，China National Accreditation Service for Conformity Assessment）和中国计量认证/认可（CMA，China Metrology Accredidation）的认证，检验检测项目表如下。CNAS是由国家认证认可监督管理委员会批准设立并授权的国家认可机构，主要负责认证机构、实验室和检查机构等相关机构的认可工作。中国合格评定国家认可委员会是国际认可论坛（IAF）、国际实验室认可合作组织（IL-AC）、亚太实验室认可合作组织（APLAC）和太平洋认可合作组织（PAC）的正式成员，获得CNAS认证的实验室，也得到上述国际组织认可。CMA是对检测机构的检测能力及可靠性进行全面的认证及评价。认证对象为所有对社会出具公正数据的产品质量监督检验机构及其他各类实验室如各种产品质量监督检验站、环境检测站、疾病预防控制中心等等。下图为CNAS检测项目表：更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，斑马鱼血液系统与人类血液系统的血小板和凝血因子有许多共同点。大剂量肾上腺素（AH）能够引起动物血管内皮损伤和血小板活性增强，造成体内处于高凝状态。肾上腺素的大量增加模拟人体暴怒、大怒，导致气机阻滞，气滞血瘀。经过特异性红细胞染色（邻联茴香胺染色），患有血栓的斑马鱼在尾部静脉会布满红细胞，可以明显被观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用抗血栓药物组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组与服用抗血栓药物组都摄入了等量的AH（AH通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用抗血栓药物组在摄入AH的同时摄入阿司匹林、氯吡格雷等抗血栓药物。服用一段时间抗血栓药物后，我们对斑马鱼整体进行特异性红细胞染色，观察尾部静脉血栓情况。【结果展示】图1. 斑马鱼尾部静脉血栓表型图可以看到，服用抗血栓药物组的尾部静脉血栓情况与正常对照组比较相似，没有明显的血栓。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用抗血栓药物组的血栓情况与正常对照组相似，并未出现模型对照组尾部静脉大量血栓的情况。2.本实验证实了阿司匹林和氯吡格雷具有明显抗血栓作用。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】花生四烯酸主要为AA在TXA2合成酶作用下生成TXA2，激活血小板，活化血小板通过GPⅡb／III a受体与纤维蛋白原交联在一起形成血栓。斑马鱼拥有凝血因子、血小板受体，并对临床应用的抗凝血和抗血栓药物具有很好的反应，适合于血栓形成机制和治疗药物的评价。躯干出现血栓后，血流速度便会减慢，回心血量便会减少。经过红细胞特异性染色（呈红色），患有血小板聚集性血栓的斑马鱼心脏红细胞数量比正常斑马鱼明显减少。由于斑马鱼血液系统发育过程透明的特点，可以明显被观察到。患有血小板聚集性血栓的斑马鱼血流速度会明显比正常斑马鱼明显减慢，在血流分析仪下可以明显观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和抗血栓药物组。其中正常对照组未摄入花生四烯酸，模型对照组与服用/注射抗血栓药物组都摄入了等量的花生四烯酸（花生四烯酸通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。抗血栓药物组在摄入花生四烯酸的同时摄入阿司匹林、氯吡格雷、丹参多酚酸、盐酸地尔硫卓、血栓通、血塞通之类的抗血栓药物。服用一段时间抗血栓药物后，我们（1）对斑马鱼做红细胞特异性染色，观察心脏红细胞数量的变化；（2）观察血流速度的变化。【结果展示】图1. 斑马鱼心脏红细胞表型图绿色虚线区域为心脏，心脏内红色为红细胞可以看到，服用抗血栓药物组的心脏情况与模型对照组比较，红细胞数量明显增多。图2. 斑马鱼血流速度与模型对照组比较，*** p < 0.001可以看到，服用抗血栓药物组的血流情况与模型对照组比较，血流速度明显加快。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用抗血栓药物组与模型对照组比较，心脏红细胞数量明显增加、血流速度明显加快。2.本实验证实了阿司匹林、氯吡格雷、丹参多酚酸、盐酸地尔硫卓、血栓通和血塞通具有显著的抗血栓作用。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

一、概述依托领先业界的斑马鱼实验能力和创新平台资源，环特生物可为科研单位或个人提供基于斑马鱼技术的课题设计、中期审核、结题报告、实验场地、仪器设备、科研咨询、文献检索、样品安全与功效检测、文章发表、专利申请等科研课题整体解决方案。斑马鱼，作为一种新的科研工具，其特色优势显著：可靠、快速、高效、高通量、高性价比，且创新性强，易于从众多课题项目中脱颖而出，能针对性地提供快速、准确、可靠的科研数据，协助科研人员发表论文专著、申报专利，实现项目顺利结题。在科研合作前期，会针对性地对每个项目进行全方位的可行性评估，后期对该项目提供实验执行和技术支持等全面的科研服务，实现双方的学术共赢。借助本单位的资源优势，环特生物可助您：快速清除毕业、职称晋升阶段的技术障碍。即使面临繁忙工作的困扰，也一样能获得快速成长，高效实现科研目标。二、服务内容（1）基金写作与申请指导科研思路把握；立题及开题设计；资料格式优化；标书内容编撰优化；预算评估；分配方案设计（2）课题设计文献搜索查询；实验思路可行性分析；实验方法技术指标分析；整体设计协助（3）结题报告数据整理与统计；结题报告撰写；结题资料整理改进；专家审评；资料校稿、排版与装订；组织专家组考核（4）中期审核实验数据整理；报告整改；预算审计与评估；专家审核；课题进度优化（5）论文发表期刊文章撰写；文章内容查重；投稿；投稿答复；实验补充（6）专利申请专利查新；专利设计；专利撰写；审核意见答复三、公司介绍杭州环特生物科技股份有限公司，是亚洲第一家斑马鱼技术公司，是专注服务于大健康和美妆产业的一站式功效与安全研发检测解决方案提供商。凭借在斑马鱼技术领域逾20年的深厚积累，环特生物将原本用于基础研究的斑马鱼生物技术，开创性地运用到药物、保健食品、化妆品和食品及农产品的研究与评价中。公司研发团队由经验丰富的毒理学、药理学、食品化学、生物化学、生物信息学等各领域专业技术人员组成。技术团队成员中，具有硕博以上学历或高级以上职称占比70%以上。实验室场地面积超过1500平方米，拥有荧光显微镜、斑马鱼行为分析系统、斑马鱼心跳血液分析系统、GC-MS/MS等专业分析测试设备。拥有国际一流的斑马鱼养殖设施，养殖中心现有40,000尾成年斑马鱼，周产胚胎斑马鱼100,000条以上供实验研究用，领先、完善的设施设备，从硬件层面有效保障了项目顺利开展。知识产权成果方面，环特生物在斑马鱼应用领域已牵头起草、发布团体标准3项，申请国家发明专利57项、授权27项（截止2021年5月）。公司自主开发斑马鱼技术模型150多种，发表SCI及核心期刊论文99篇（IF=12）、英文专著1部。有7个新药项目，成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报。两项成果分获浙江省科学技术进步奖三等奖和神农中华农业科技奖一等奖，并作为核心技术方承担2022年杭州“亚运果蔬类食品农药残留非靶向快筛斑马鱼模型构建研究”的项目。两项斑马鱼产业化项目成果鉴定，经张伯礼院士和孙宝国院士技术专家审核评定，分获“国内领先水平”和“先进水平”。截止目前，环特生物已通过国家CNAS实验室认可、CMA资质认定及 AAALAC国际实验动物认证。多项技术成果先后荣获德国纽伦堡国际发明金奖、英国国际发明展金奖及杰出创新奖、俄罗斯“新时代”第十六届国际发明与新技术展金奖、第48届日内瓦国际发明展银奖等国际权威大奖。近年来，环特生物承担省级（含）以上科研项目8项，相继被评为国家高新技术企业、浙江省科技型中小企业，且设有院士专家工作站、省级高新技术企业研发中心、浙江省博士后工作站等科研平台，并与中国农科院质标所成立了“农业农村部农产品质量标准研究中心生物评价实验室”的联合创新平台。