【评价原理】正常人的皮肤颜色主要由黑色素决定，通常我们说的色斑、色沉也与黑色素有关。目前认可的黑色素形成途径主要为酪氨酸在酶催化下经过多巴氧化等过程，最终形成黑色素。由于斑马鱼拥有与人类相似的皮肤结构，黑色素的形成机理也与人类高度相似。而且斑马鱼的幼鱼身体透明，表皮的黑色素易于观察，因此可以用来观察产品的美白淡斑效果。由于斑马鱼通体透明，斑马鱼的黑色素可以被明显地观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和美白淡斑产品组（美白淡斑产品熊果苷、曲酸等通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用一段时间美白淡斑产品后，我们对斑马鱼头部进行拍照，观察斑马鱼头部色素的变化情况。【结果展示】图1. 斑马鱼美白淡斑表型图红色虚线区域为头部分析区域，区域内黑色部分为黑色素可以看到，美白淡斑产品组的黑色素相比正常对照组明显减少。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用美白淡斑产品组的色素相比正常对照组明显减少。2.本实验证实了熊果苷、曲酸美白产品具有美白淡斑功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】人类在整个生命周期中,不断地更新血液成分、骨骼肌、皮肤等, 修复骨骼、 肌肉、指尖等部位较小的损伤。斑马鱼鱼鳍相当于人的手臂或腿，其修复再生能力比人类更加强大。紫外线通过破坏和蛋白质等生物大分子的结构，进而影响细胞和生物组织的正常生长和发育，引起细胞异常凋亡和发育畸形。长期暴露于紫外线辐射是导致皮肤光老化、光损伤和光致癌发生的主要环境因素，表现为皮炎、皮肤松弛增厚、变硬、皱纹增多、胶原降解和皮肤癌。被紫外线照射的斑马鱼尾鳍也会变得粗糙、皱缩并发生细胞凋亡。在较短的时间内，斑马鱼尾鳍可完成修复，表现为在显微镜下可以被观察到尾鳍面积的恢复，同时用特异性的荧光染色（凋亡细胞呈绿色）可被观察到凋亡细胞的减少。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和使用防晒剂组。其中正常对照组未照射紫外线，模型对照组与使用防晒剂组都照射了同等强度的紫外线。防晒剂主要使用茶多酚、SOD等。使用防晒剂一段时间后，我们将斑马鱼置于解剖显微镜下观察斑马鱼尾鳍面积变化；同时，使用特异性荧光染色，观察斑马鱼尾鳍凋亡细胞数量。【结果展示】图1. 斑马鱼紫外线照射尾鳍面积表型图绿色虚线区域为斑马鱼尾鳍可以看到，使用防晒剂组的斑马鱼尾鳍与未照射紫外线的正常对照组比较相似，没有模型的尾鳍面积缩小。图2. 斑马鱼紫外线照射尾鳍凋亡细胞表型图白色箭头指向尾鳍凋亡细胞可以看到，使用防晒剂组的斑马鱼尾鳍凋亡细胞个数与未照射紫外线的正常对照组比较相似，没有明显的细胞凋亡。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，使用防晒剂组的尾鳍面积、凋亡细胞个数与未照射紫外线的正常对照组比较相似，没有模型对照组尾鳍面积缩小和细胞凋亡增多的情况。2.本实验证实了茶多酚、SOD等具有显著的防晒（晒后修复）功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】利用物理/化学方法损伤斑马鱼肌肉、皮肤，伤口愈合过程中黑色素细胞会募集到伤口部位，伤口愈合相关基因表达量（如皮肤胶原蛋白colla1b基因）会显著增加以促进伤口愈合。由于斑马鱼通体透明的特点，可以明显被观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和伤口愈合促进剂组。其中正常对照组未经过物理/化学损伤，模型对照组与伤口愈合促进组都经过了同程度的损伤。服用伤口愈合促进组在损伤后摄入胶原蛋白等伤口愈合促进剂。服用一段时间伤口愈合促进剂后，观察伤口色素变化，并用实时荧光定量PCR仪检测伤口愈合相关基因的表达量。【结果展示】图1.伤口部位色素募集表型图黄色虚线内为损伤部位可以看出，伤口愈合促进剂组的伤口黑色素募集程度与同等程度损伤的模型对照组比较明显减轻。 图2. 斑马鱼体内cola1b基因相对表达量与模型对照组比较，***p < 0.001 可以看出，服用伤口愈合促进剂组cola1b相对表达量明显高于模型对照组。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用伤口愈合促进剂组的黑色素募集情况较模型对照组明显减轻，cola1b相对表达量也明显高于模型对照组。2.本实验证实了胶原蛋白具有促进伤口愈合功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

皮肤亮白是东方女性一直以来对美的直观追求，因此美白类化妆品成为了市场的宠儿。人体皮肤变黑的主要原因是酪氨酸酶的存在促进了黑色素的合成和黑色素基因的表达，而在斑马鱼皮肤上也有类似的表达过程，因此，可以通过斑马鱼技术有效评价化妆品的美白功效。【评价原理】斑马鱼在发育初期全身透明，胚胎发育至 24 h时黑色素开始从视网膜上皮生长。色素细胞起源于背部外胚层分化的一群细胞—神经嵴细胞，然后增殖、迁徙、分化成色素母细胞。在黑色素形成的过程中进行干预，可抑制黑色素的形成。【实验方案】我们将斑马鱼分成若干组，含正常对照组和供试品组。正常对照组不做处理，供试品组使用受试化妆品，孵育48 hpf后，对斑马鱼头部进行拍照，利用高级图像处理软件分析斑马鱼头部的黑色素信号强度，从而评价其美白功效。此外，将斑马鱼进行匀浆处理，分别提取其中的酪氨酸酶和黑色素蛋白，进行OD值测定，通过酪氨酸酶活性和黑色素蛋白的含量反映化妆品的美白功效。【结果展示】（展示图片仅供参考，实际实验组别依据合同而定）图1. 斑马鱼头部黑色素表型图（蓝色为分析区域）阳性对照组和化妆品组与正常对照组对比分析，得出美白功效作用。图2 斑马鱼酪氨酸酶活力与正常对照组比较，**p<0.01供试品组与正常对照组相比，酪氨酸酶活性显著降低。图3 斑马鱼黑色素蛋白含量与正常对照组比较，***p<0.001供试品组与正常对照组相比，黑色素含量显著降低。【评价结论】1.经过各组斑马鱼对比实验，阳性对照组和化妆品组与正常对照组对比，斑马鱼头部只有少量的黑色素。2.经过对斑马鱼进行匀浆和蛋白质提取处理，可见供试品组与正常对照组相比，酪氨酸酶活性和黑色素蛋白含量均减少。3.本实验证实了该化妆品具有美白的作用。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

过敏反应通常会引起许多皮肤症状，比如皮肤发红、发痒，严重的患者还会出现刺痛或者面部出现红斑、风团、丘疹或丘疱疹等症状。一些医美类化妆品除具有常规护肤功效外还能起到抗过敏作用。通过斑马鱼技术能有效评价化妆品及其原料对过敏反应的抑制作用。【评价原理】过敏反应的主要原因是过敏原/致敏因子诱导组织学上肥大细胞脱颗粒，释放多种活性介质进而诱发各种过敏症状。其中类胰蛋白酶是肥大细胞内预先合成的中性蛋白酶，是临床上检验人体是否过敏的重要指标。斑马鱼产生过敏反应时，同样会诱导肥大细胞分泌类胰蛋白酶。因此，通过检测斑马鱼整体类胰蛋白酶水平可以判断化妆品及其原料的抗过敏作用。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成若干组，分别含正常对照组、模型对照组和化妆品组。其中正常对照组未经C48/80处理，模型对照组和化妆品组都用C48/80处理（C48/80通过溶解到标准稀释水中的方式摄入到斑马鱼体内，C48/80是一种能让皮肤表面产生过敏反应的物质），化妆品组另需加入相应浓度的化妆品样品。处理24 h后，利用酶标仪检测各组吸光度值（OD值），以类胰蛋白酶的表达水平评价化妆品抗过敏作用。此外，可以通过斑马鱼病理切片，用PAS染色后观察肠道壁上肥大细胞的状况反映化妆品的抗敏作用。【结果展示】（展示图片仅供参考，实际实验组别依据合同而定）图1. 化妆品处理后斑马鱼吸光度值与模型对照组比较，*p < 0.05图2. 化妆品处理后斑马鱼的致敏作用与模型对照组比较，*p < 0.05可以看到，使用化妆品的浓度组类胰蛋白酶含量与模型对照组比较明显降低。图3. 斑马鱼体内肥大细胞染色典型图（箭头指示为肥大细胞，PAS 1000×）从病理切片中也能看出来，模型对照组斑马鱼的肠道壁上的肥大细胞与正常对照组相比数量显著上升，而经色甘酸钠和化妆品处理的斑马鱼肠道肥大细胞相对于模型对照组明显减少。【评价结论】1.经过各组斑马鱼的对比实验，模型对照组斑马鱼的肠道壁上的肥大细胞与正常对照组相比数量显著上升，而经色甘酸钠和化妆品处理的斑马鱼肠道肥大细胞相对于模型对照组明显减少。2.本实验证实了色甘酸钠和该化妆品具有抗过敏功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

人体皮肤逐渐衰老的重要原因是活性氧自由基对皮肤的长期氧化作用，具有抗氧化活性的化妆品能够清除皮肤表面自由基，通过斑马鱼技术可以有效评价化妆品及其原料清除自由基的能力。【评价原理】甲萘醌能产生活性氧自由基，当自由基产生量大于机体清除能力时就发生氧化应激反应，通过斑马鱼卵黄囊荧光强度评价供试品抗氧化作用。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成若干组，含正常对照组、模型对照组和化妆品组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组和化妆品组都加入等量的甲萘醌（甲萘醌通过溶解到标准稀释水中的方式摄入到斑马鱼体内）。化妆品组在加入甲萘醌的同时加入一定浓度的化妆品。使用化妆品24 hpf后，，我们对斑马鱼整体进行特异性荧光染色，观察斑马鱼卵黄囊活性氧自由基产生情况。【结果展示】（展示图片仅供参考，实际实验组别依据合同而定）图1. 斑马鱼卵黄囊荧光表型图黄色为分析区域，绿色荧光代表氧自由基可以看到，阳性对照组和化妆品组与正常对照组相似，卵黄囊中只有少量的活性氧自由基。【评价结论】1.经过各组斑马鱼对比实验，阳性对照组和化妆品组与正常对照组相似，卵黄囊中只有少量的活性氧自由基。2.本实验证实了该化妆品具有抗氧化的作用。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

肤色暗沉是体内外多种因素共同作用的结果，其中重要的一种因素是由活性氧自由基引起的氧化应激反应，导致皮肤色素沉着，看上去黯淡无光。通过斑马鱼技术能有效评价化妆品提亮肤色的功效作用。【评价原理】甲萘醌能产生活性氧自由基，当自由基产生量大于机体清除能力时就发生氧化应激反应,最终导致皮肤色素沉着。用甲萘醌处理后的斑马鱼，被供试品作用后，在白光条件下分析皮肤局部亮度，通过亮度的增加程度反映受试物提亮肤色的功效。【实验方案】我们将斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。正常对照组不做处理，模型对照组用甲萘醌处理，供试品组用甲萘醌处理后再用供试品处理，孵育一定时间后，对斑马鱼进行拍照，利用高级图像处理软件分析斑马卵黄囊部分的色素信号强度，从而评价其提亮肤色功效。【结果展示】图1. 斑马鱼卵黄囊色素表型图（红色为分析区域）【评价结论】1.经过各组斑马鱼对比实验，供试品组与模型对照组对比，斑马鱼卵黄囊部分的色素明显降低，亮度增加。2.本实验证实了该供试品具有提亮肤色的功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

皮肤组织中由于存在胶原蛋白、弹性蛋白等多种蛋白成分而具有一定的弹性，皮肤弹性是衡量皮肤健康与否的重要标志，很多针对熟龄肌的化妆品是由于提高了皮肤弹性而具有抗衰老功效。通过斑马鱼技术能有效评价化妆品增加皮肤弹性的功效。【评价原理】通过检测皮肤弹性相关基因的相对表达量（皮肤胶原蛋白col1a1a、col1a1b、col1a2基因）来表明样品是否具有增加皮肤弹性作用。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成若干组，含正常对照组和化妆品组。其中正常对照组未经任何处理，化妆品组添加受试化妆品。使用化妆品24 hpf后，我们对每组斑马鱼进行收样，使用试剂盒提取RNA后，使用q-PCR检测目的基因的转录水平，通过斑马鱼皮肤胶原蛋白基因相对表达量评价化妆品增加皮肤弹性作用。【结果展示】（展示图片仅供参考，实际实验组别依据合同而定）图1. 斑马鱼体内col1a1b基因相对表达量可以看到，化妆品高浓度组的col1a1b相对表达量较正常对照组显著增加。【评价结论】1.经过各组斑马鱼和两组平行对照的对比实验，化妆品高浓度组的col1a1b相对表达量较正常对照组显著增加。2.本实验证实了该化妆品具有增加皮肤弹性的作用。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

一、促进组织再生功效评价【评价原理】机械损伤将产生皮肤组织的结构性破坏，斑马鱼尾鳍具有自我再生功能，通过对尾鳍再生速度的观察可以评价受试物促进组织再生功效。【实验方案】将斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。正常对照组不做处理，模型对照组和供试品组均采用手术方法定量切断尾鳍，从而完成造模处理，供试品组中添加一定浓度的受试化妆品。避光孵育一段时间后，将各组斑马鱼在体视显微镜下拍照并保存图片，用高级图像分析软件对斑马鱼尾鳍面积进行定量分析，以尾鳍面积的增量评价受试化妆品促进组织再生功效。【结果展示】斑马鱼尾鳍面积图1. 斑马鱼尾鳍面积表型图红色区域为分析区域可以看到，孵育相同时间后，供试品组斑马鱼尾鳍面积明显大于模型对照组，说明该化妆品具有促进组织再生功效。【评价结论】1.经过斑马鱼对比实验，供试品组与模型对照组相比，斑马鱼尾鳍面积明显增加。2.本实验证实了该化妆品具有促进组织再生功效。二、促进伤口愈合（抗炎）功效评价【评价原理】斑马鱼幼鱼的再生能力非常强大：切断尾鳍后，伤口立即紧缩、上皮细胞覆盖，数小时内便出现炎症反应，伤口处中性粒细胞的数量可以反映炎症反应的程度。转基因中性粒细胞荧光斑马鱼的中性粒细胞可在荧光显微镜下被明显观察，因此可以通过实时观察斑马鱼伤口附近的中性粒细胞数量评价受试物的抗炎功效。【实验方案】将斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。正常对照组不做处理，模型对照组和供试品组均采用手术方法定量切断尾鳍，从而完成造模处理，供试品组中添加一定浓度的受试化妆品。避光孵育一段时间后，将各组斑马鱼在荧光显微镜下拍照并保存图片，用高级图像分析软件对斑马鱼尾鳍损伤部位的中性粒细胞进行计数，以中性粒细胞相比于模型对照组的减少量评价受试化妆品促进组织再生功效。此外，可通过Q-PCR检测IL-1β、IL-6和IL-10等炎症因子的表达，通过相关炎症因子表达量的降低评价受试化妆品的抗炎功效。【结果展示】1、尾鳍损伤部位中性粒细胞（推荐）图2 斑马鱼尾鳍中性粒细胞表型图黄色虚线区域为计算区域，绿色荧光点为中性粒细胞可以看到，供试品组斑马鱼的中性粒细胞数目比模型对照组明显减少。2、炎症因子的表达量（提供柱状图）【评价结论】1.经过各组斑马鱼的对比实验，水溶给予供试品组的斑马鱼中性粒细胞数目及炎症因子的相对表达量与模型对照组相比明显减少。2.本实验证实了该供试品具有促进伤口愈合（抗炎）功效。三、促进疤痕淡化【评价原理】    冰乙酸对皮肤伤口具有一定的损伤作用，斑马鱼皮肤表面被注射冰乙酸后，伤口部位将出现色素的聚集，口修复过程中色素含量逐渐减少。通过观察对伤口部位的色素含量的减少量可以评价受试物对伤口的愈合作用。【实验方案】将斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。正常对照组不做处理，模型对照组和供试品组均采用注射方式在斑马鱼躯干部位定量注射冰乙酸，受试化妆品以一定浓度水溶添加到供试品组中。各实验组在避光条件下孵育一段时间后，在显微镜下拍照保存图片，用高级图像处理软件分析斑马鱼伤口部位色素的不透光总和，计算供试品组相对于模型对照组的色素减少量，从而评价受试化妆品的促进伤口愈合功效。【结果展示】图3 斑马鱼躯干色素表型图可以看到，供试品组斑马鱼躯干部位的色素含量比模型对照组明显减少。【评价结论】1.经过各组斑马鱼的对比实验，水溶给予供试品组的斑马鱼躯干部位色素含量与模型对照组相比明显减少。2.本实验证实了该供试品具有促进疤痕淡化功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

环特斑马鱼技术，完美契合《化妆品功效宣称评价指导原则》新规要求——是您开展功效宣称备案检测的理想之选！环特生物，利用斑马鱼模型实验，为化妆品企业提供化妆品功效宣称评价、人体功效评价、功效备案检测、毒理安全性评价、原料筛选验证、微生物检测等服务，周期短、费用低、直观高效。助力化妆品企业做好研发、品控和宣传推广。化妆品功效评价（人体功效/斑马鱼评价）- 备案检测化妆品安全性评价-毒理评价化妆品及原料评价检测项目更多化妆品评价检测项目及内容，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）。环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²化妆品功效实验室。环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。