核因子-kB(NF-kB)是一种转录因子，调控参与免疫反应、凋亡和细胞周期的基因表达。NF-kB可以由各种刺激物激活，这些刺激物有细胞因子、T、B细胞有丝分裂原、病毒蛋白、压力诱导物。刺激导致其抑制物IkB的磷酸化，使NF-kB从IkB复合物中释放出来。解离后，NF-kB从细胞质转至细胞核，与靶DNA因子结合，正向调节靶基因的转录。检测NF-kB的活性对研究NF-kB的激活及相关通路的潜在机制至关重要。美国Signosis 公司研发的NF-kB滤板法检测试剂与常规的凝胶迁移试验不同，它是一种高通量的检测方法，可同时分析多个标本，而且该方法较非放射的凝胶迁移试验简单的多，较基于P32的凝胶迁移试验安全的多。 　　A. 优点: 　　美国Signosis 公司基于自有知识产权技术研发的NF-kB滤板法检测试剂，具有下列优势： 　　· 简单快速---比凝胶迁移试验简单、快速 　　· 高通量筛选---多个样品可在一个试验中得到分析 　　· 费用低廉---与基于ELISA的检测方法相比花费更少 　　· 定量比较---二个或以上样本可同时定量分析 　　B. 原理 　　美国Signosis 公司研发的NF-kB滤板法检测试剂，是基于微孔板检测NFkB活性的分析方法，该方法中使用二块板---过滤板和杂交板，预标记NFkB的DNA结合序列与核抽体物混合，形成NFkB与预标记的DNA序列。过滤板用于保留结合的DNA序列，除去游离的DNA序列。结合的预标记的DNA序列随后从过滤板上洗脱、收集，用于微孔板杂交。捕获的DNA序列进一步用辣根酶标记的链霉亲和素检测，在微孔板发光检测仪上读取发光度值(RLUs)。

　　细胞因子是信号分子，在细胞生长、分化、基因表达、迁移、免疫和炎症的许多生物过程中发挥重要的作用。细胞因子由细胞分泌，与细胞表面受体结合，激活细胞信号传导通路，传递细胞间的讯息。细胞因子的功能异常导致许多疾病，如关节炎、急慢性肝病、肠炎、心脏相关疾病。许多细胞因子常常涉及一种生物学或疾病过程。因此全面分析多种细胞因子的表达可以有效揭示疾病的潜在机制。人细胞因子微孔板阵列试剂以高通量的方式同时监测31种人类细胞因子，该方法快速敏感的同时定量检测不同样本多种细胞因子的水平。 　　(详见：http://www.zhongzhibio.com/kysj/423.htm) 　　A. 优点: 　　· 多重复合—— 一次ELISA试验可同时测定3份样品的31种细胞因子 　　· 敏感性高——只需少量样本 　　· 勿需贵重仪器——与珠式方法不同，不需要贵重仪器 　　· 操作简单—— 试剂盒包括预包被板等所有组分 　　B. 原理： 　　96孔白板分成3个区，每个区有4列，每个区31种特异的细胞因子捕获抗体分别包被在31个孔，1孔未包被任何抗体用作空白对照。样品如细胞培养悬液、细胞裂解液、组织匀浆、血清或血浆样品与微孔板温育，捕获的细胞因子蛋白用混合的生物素化抗体同时检测，待测样本与捕获抗体和检测抗体结合温育后，洗涤除去未接合的标记抗体，加入酶及TMB底物，产生蓝色变化，加入终止液变成黄色，细胞因子的浓度与呈色的强度成正比，测定450nm的吸光度值。 　　A. 优点: 　　· 多重复合—— 一次ELISA试验可同时测定3份样品的31种细胞因子 　　· 敏感性高——只需少量样本 　　· 勿需贵重仪器——与珠式方法不同，不需要贵重仪器 　　· 操作简单—— 试剂盒包括预包被板等所有组分 　　B. 原理： 　　96孔白板分成3个区，每个区有4列，每个区31种特异的细胞因子捕获抗体分别包被在31个孔，1孔未包被任何抗体用作空白对照。样品如细胞培养悬液、细胞裂解液、组织匀浆、血清或血浆样品与微孔板温育，捕获的细胞因子蛋白用混合的生物素化抗体同时检测，待测样本与捕获抗体和检测抗体结合温育后，洗涤除去未接合的标记抗体，加入酶及TMB底物，产生蓝色变化，加入终止液变成黄色，细胞因子的浓度与呈色的强度成正比，测定450nm的吸光度值。

　　人肿瘤坏死因子(TNF-a)是一种炎症细胞因子。TNF-a有多种功能，尽管许多功能还没有得到完全认识。TNF-a由不同类型的细胞产生，特别是由巨噬细胞产生。包括TNF-a在内的炎症细胞因子，其表达的改变与各种疾病相关，例如炎症性肠病。因此监测这些细胞因子的表达是分析这些疾病潜在分子机制的常用方法。此外分子医学的出现需要定量分析这些分子。美国Signosis研发了一种多生物素信号放大技术(MBSA)，该技术比基于单生物素检测的方法敏感1000倍。应用MBSA，美国Signosis研发了人TNF-a mRNA微孔板定量检测试剂，该试剂可定量测定低至fg量的TNF-a mRNA。 　　A.优点： 　　美国Signosis mRNA微孔板定量检测试剂具有下列优势： 　　· 准确定量---TNF-a mRNA应用体外RNA中的TNF做参比。 　　· 敏感性高---可测定低至500个分子，并具有较宽的线性范围。 　　· 操作简单---总RNA直接用于板杂交，勿需酶转换mRNA成cDNA，方法步骤是“孵育和洗涤”。 　　B. 原理： 　　在MBSA中，多生物素加到一个聚合物上，其序列有标示互补序列可与连接序列杂交，连接序列含有靶序列和标示序列。各连接序列的标示序列相同，但会有不同靶序列与靶基因不同区杂交，因此是在二个层级上放大---多个区和多个生物素。mRNA微孔板定量检测试剂应用了MBSA技术，靶mRNA通过捕获oligo捕获到微孔板上，捕获的mRNA分子与许多连接序列杂交，从而靶定mRNA的不同区，多生物素随后与连接序列杂交，捕获的生物素分子用链酶亲和素辣根酶结合物与发光底物检测。

　　小鼠瘦素在调控能量摄取和能量消耗时发挥重要作用，包括调节食欲(减退)和代谢(增加)。瘦素由脂肪组织产生，循环中的瘦素的水平与身体中的脂肪总量呈正比。一旦瘦素与Ob-Rb受体结合即激活Stat3，被磷酸化并移到细胞核，介导基因表达。其中基因表达的一个主要作用是下调内源性大麻素的表达。有许多功能的内源性大麻素负责增加食欲。瘦素激活的有其它细胞内通路，但是较少知道它们是怎样在这个系统起作用的。瘦素是减少食欲的一个循环信号，一般来说，对瘦素作用有抵抗的肥胖人群，瘦素的循环浓度特别高，对胰岛素作用有抵抗的病人也是同样的。已发现瘦素刺激内皮细胞增殖和血管形成。 　　A. 优点： 　　· 性价比高——高质量，低价格 　　· 高效灵活——多个样品可同时分析，灵活确定分析试样的数量 　　· 特异性强——优选高度特异的针对小鼠瘦素的配对抗体 　　· 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 　　B. 原理： 　　小鼠瘦素试剂为固相酶免法。方法采用兔抗鼠瘦素抗体做为微孔板的固相捕获抗体，生物素标记的兔抗鼠瘦素抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测，待测样品小鼠瘦素夹在捕获抗体和标记抗体之间与二者反应，随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后，洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物，产生蓝色反应，加入终止液后转成黄色。小鼠瘦素的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比，450nm处测定吸光值进行定量。 　　A. 优点： 　　· 性价比高——高质量，低价格 　　· 高效灵活——多个样品可同时分析，灵活确定分析试样的数量 　　· 特异性强——优选高度特异的针对小鼠瘦素的配对抗体 　　· 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 　　B. 原理： 　　小鼠瘦素试剂为固相酶免法。方法采用兔抗鼠瘦素抗体做为微孔板的固相捕获抗体，生物素标记的兔抗鼠瘦素抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测，待测样品小鼠瘦素夹在捕获抗体和标记抗体之间与二者反应，随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后，洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物，产生蓝色反应，加入终止液后转成黄色。小鼠瘦素的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比，450nm处测定吸光值进行定量。

　　白介素-4 (IL-4)是有许多生物学作用的细胞因子，包括刺激激活的B细胞和T细胞增殖以及CD4+ T细胞分化为Th2细胞，是体液免疫和适应性免疫的一个重要调控者。 IL-4与细胞表面受体复合物结合，该复合物由IL-4结合蛋白 (IL-4R a)和IL-2受体复合物的r链(r c)组成。 　　A. 优点： 　　· 性价比高---高质量，低价格。 　　· 高效灵活---多个样品可同时分析，灵活确定分析试样的数量。 　　· 特异性强---优选高度特异的针对人IL-4的配对抗体。 　　· 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统. 　　B. 原理： 　　IL-4试剂为固相酶免法。 方法采用兔抗人IL-4抗体做为微孔板的固相捕获抗体，生物素标记的兔抗人IL-4抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测， 待测样品IL-4夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应，随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后，洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物，产生蓝色反应， 加入终止液后转成黄色。IL-4的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比，450 nm处测定吸光值进行定量。

　　细胞因子参与许多生物活动，如病毒感染、炎症、免疫和造血。细胞因子是许多类型细胞对不同刺激反应的产物。细胞因子基因的表达由复杂的机制调控。一种细胞因子基因的表达可由多种细胞因子调控。细胞因子基因表达调控的异常可由染色体改变或导致表达机制激活或失活的病毒感染引起。因此，检测细胞因子基因表达为揭示调控的潜在机制提供了一种实用的方法。美国Signosis公司研发的细胞因子cDNA微孔板阵列检测试剂可检测20多种细胞因子基因表达。 　　A. 优点： 　　美国Signosis公司基于其自有的cDNA微孔板阵列专利技术研发的人细胞因子cDNA微孔板阵列检测试剂具有以下优点： 　　·操作简单---做基因表达试验像做ELISA酶免试验一样简单。 　　·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 　　·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 　　B. 原理： 　　美国Signosis 公司自有的cDNA微孔板阵列专利检测技术是基于微孔板杂交的检测方法，该方法是将mRNA反转录成cDNA来检测多种基因的表达。与芯片分析方法相似，加入生物素-dUTP后，总RNA先转录成生物素标记的cDNA。通过预包被在微孔板上的特异的寡核酸，将靶基因捕获到微孔板上(而不是膜上)。捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物，cDNA的浓度与待测标本的发光强度成正比。

　　SATB1是在乳腺癌转移中起重要作用的核蛋白，通过改变数百基因的表达包括表皮生长因子基因Her2、影响细胞粘附、细胞信号传递、细胞周期调控和其它功能，促进肿瘤生长和转移。 SATB1不是所有细胞都表达，仅转移的细胞表达SATB1，浸润性最强的乳腺癌细胞有最高水平的SATB1。 当SATB1在乳房肿瘤中查出，癌症很可能会进展或复发。对人原发性乳腺癌组织样品的临床随访研究表明，存活时间最短的患者样品SATB1水平最高; 肿瘤样品没有SATB1表达的患者通常有更长的存活期。 另外， SATB1 调控基因表达的能力对T细胞发育至关重要。 研究表明SATB1与HDAC1或PCAF相互作用，受磷酸化调控并由天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 6切割，在Jurkat细胞表达较高，在HeLa细胞表达较低。 　　A. 优点： 　　· 性价比高---质量高，价格低。 　　· 高效灵活---多个样品可同时分析，灵活确定分析试样的数量。 　　· 特异性强---优选高度特异的针对SATB1的抗体。 　　· 操作简单---预包被96孔板的完整试剂系统。 　　B. 原理 　　SATB1 酶免试剂为固相酶免法。方法采用生物素标记的SATB1 DNA 结合序列与预包被板上的链酶亲和素结合，形成SATB1/DNA 复合物, 加入抗-SATB1抗体和抗-鼠IgG辣根过氧化物酶结合物孵育后，洗去未结合的标记抗体。 加入HRP底物TMB，产生蓝色反应， 加入终止液后转成黄色。 SATB1的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比，测定450 nm 处的吸光值进行定量。

　　转录因子(TFs)是一组细胞蛋白，在调控基因表达中起着重要作用，其做为传感器，监测细胞的变化，把信号转变成基因表达。一种特定的细胞信号通道通常可以同时激活多种转录因子，一种特定基因的表达在多种转录因子的控制之下，因此同时检测多种转录因子的活性对理解潜在于细胞信号传导和基因表达之中的细胞调控的分子机制至关重要。美国Signosis 公司TF活性检测微孔板阵列试剂I 用于检测48种不同TFs的活性，包括NFkB、AP1、HIF1和p53。 　　A. 优点: 　　美国Signosis 公司基于自有知识产权技术研发的TF活性检测微孔板阵列试剂，具有下列优势： 　　· 多重复合---单一一次试验可测定48种TFs的活性 　　· 定量比较---二个样本的差异可以定量分析和比较 　　· 步骤简单---探针孵育、柱离心、板杂交和HRP检测 　　· 无需特殊仪器---无需贵重仪器如Luminex 　　B. 原理 　　TF活性检测微孔板阵列试剂用于同时检测多种转录因子的活性。本技术中，基于TF-DNA结合位点的一致性序列，制备一系列生物素标记的探针，探针混合物与核抽提物混合，通过柱离心纯化，各探针指向其相应的TF，形成TF/探针复合物，通过柱离心纯化，可以方便的与游离探针区分开来。通过板杂交，结合的探针从混合物中分离并分析，每一板孔特定的预包被上相应的探针序列。

　　生物学功能是由启动表达和关闭表达的基因控制的。基因表达的改变与人类的许多疾病相关。基因芯片等分子检测技术为同时检测数千种基因表达提供了高通量的方法。这些方法已经应用于各种生物样本和各种疾病的样本，通过比较基因表达鉴别出差异表达的基因，将这些差异表达的基因抽提出来，用做检测生物过程和疾病状态的基因组。NFkB 是一种广泛存在的转录因子，在细胞对各种刺激的反应中起着重要作用，这些刺激包括：压力、细胞因子、自由基、紫外线照射、氧化的LDL、细菌和病毒的抗原。NFkB的异常调节与癌症、炎症、自身免疫性疾病、脓毒性休克、病毒感染和不适当的免疫进展相关联。NFkB激活时，与其抑制剂IkB解离，从细胞质移到细胞核，在此与靶DNA 结合，正调节基因的转录，参与免疫和炎症反应、细胞调节以及凋亡。美国Signosis公司研发的cDNA微孔板阵列检测试剂可检测20多种NFkB调节基因表达。 　　A. 优点： 　　美国Signosis公司基于其自有的cDNA微孔板阵列专利技术研发的NFkB调控的cDNA微孔板阵列检测试剂具有以下优点： 　　·操作简单---做基因表达试验像做ELISA酶免试验一样简单。 　　·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 　　·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 　　B. 原理： 　　美国Signosis 公司自有的cDNA微孔板阵列专利检测技术是基于微孔板杂交的检测方法，该方法是将mRNA反转录成cDNA来检测多种基因的表达。与芯片分析方法相似，加入生物素-dUTP后，总RNA先转录成生物素标记的cDNA。通过预包被在微孔板上的特异的寡核酸，将靶基因捕获到微孔板上(而不是膜上)。捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物，cDNA的浓度与待测标本的发光强度成正比。

　　肿瘤坏死因子-a (TNFa)，是在急性炎症时由巨噬细胞或单核细胞产生的炎症细胞因子，负责细胞内的多种信号事件，引起坏死或凋亡。 TNFa对实体瘤生长、进展和转移的关键性血管形成也很重要。 此外， TNFa同肥胖症联系在一起，在肥胖啮齿类动物和人脂肪组织慢性升高，也许代表了肥胖和胰岛素抵抗之间的一个重要联系。 在肥胖鼠和人 脂肪组织中TNFa过渡表达。 TNFa抑制胰岛素信号，至少部分是通过阻断胰岛素受体酪氨酸激酶活性和导致胰岛素受体基体1 (IRS-1)的丝氨酸磷酸化。然而还不清楚的是肥胖症期间由脂肪细胞产生的TNF-a的生理刺激物是什么，IRS-1在细胞TNF-a处理后如何抑止胰岛素受体酪氨酸激酶的活性。 更好理解TNF-a和胰岛素信号通路之间的联系对发现肥胖症期间胰岛素抵抗状态的治疗是非常重要的。 　　A. 优点： 　　· 性价比高---高质量，低价格。 　　· 高效灵活---多个样品可同时分析，灵活确定分析试样的数量。 　　· 特异性强---优选高度特异的针对鼠TNFa的配对抗体。 　　· 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统 　　B. 原理： 　　鼠TNFa试剂为固相酶免法。 方法采用羊抗鼠TNF-a抗体做为微孔板的固相捕获抗体，生物素标记的羊抗鼠TNFa抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测， 待测样品鼠TNFa夹在捕获抗体和标记抗体之间，与二者反应，随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后，洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物，产生蓝色反应， 加入终止液后转成黄色。鼠TNFa的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比，450 nm处测定吸光值进行定量。