人TNF-a mRNA微孔板定量检测试剂

　　人肿瘤坏死因子(TNF-a)是一种炎症细胞因子。TNF-a有多种功能，尽管许多功能还没有得到完全认识。TNF-a由不同类型的细胞产生，特别是由巨噬细胞产生。包括TNF-a在内的炎症细胞因子，其表达的改变与各种疾病相关，例如炎症性肠病。因此监测这些细胞因子的表达是分析这些疾病潜在分子机制的常用方法。此外分子医学的出现需要定量分析这些分子。美国Signosis研发了一种多生物素信号放大技术(MBSA)，该技术比基于单生物素检测的方法敏感1000倍。应用MBSA，美国Signosis研发了人TNF-a mRNA微孔板定量检测试剂，该试剂可定量测定低至fg量的TNF-a mRNA。 　　A.优点： 　　美国Signosis mRNA微孔板定量检测试剂具有下列优势： 　　· 准确定量---TNF-a mRNA应用体外RNA中的TNF做参比。 　　· 敏感性高---可测定低至500个分子，并具有较宽的线性范围。 　　· 操作简单---总RNA直接用于板杂交，勿需酶转换mRNA成cDNA，方法步骤是“孵育和洗涤”。 　　B. 原理： 　　在MBSA中，多生物素加到一个聚合物上，其序列有标示互补序列可与连接序列杂交，连接序列含有靶序列和标示序列。各连接序列的标示序列相同，但会有不同靶序列与靶基因不同区杂交，因此是在二个层级上放大---多个区和多个生物素。mRNA微孔板定量检测试剂应用了MBSA技术，靶mRNA通过捕获oligo捕获到微孔板上，捕获的mRNA分子与许多连接序列杂交，从而靶定mRNA的不同区，多生物素随后与连接序列杂交，捕获的生物素分子用链酶亲和素辣根酶结合物与发光底物检测。