【评价原理】

蛋黄粉中60%为脂类，用蛋黄粉喂食斑马鱼，可以使斑马鱼血液中的脂肪含量快速升高，从而建立斑马鱼高血脂症模型。

经过油红O特异性脂肪染色（与组织内甘油三酯等脂肪滴结合呈橘红色），高血脂斑马鱼血管内肉眼可见明显的脂质聚积。

【实验方案】

我们先将测试斑马鱼喂食蛋黄粉（蛋黄粉通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内），建立高血脂模型后，再将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组（不喂食蛋黄粉），模型对照组和服用降脂剂组，服用降脂组摄入阿托伐他汀钙之类的降脂剂。

服用一段时间降脂剂后，我们对斑马鱼整体做脂肪特异性染色，观察体内脂质聚积的变化。同时利用甘油三酯试剂盒检测斑马鱼体内甘油三酯含量的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼血脂表型图

橘红色脂滴为血脂

可以看到，服用降脂剂组的血脂聚积情况与模型对照组比较明显减少。

图2. 斑马鱼甘油三酯含量（mmol/gprot）

与模型对照组比较，*** p < 0.001

从生化指标可以看出，服用降脂剂组的斑马鱼整体甘油三酯含量与模型对照组比较明显降低。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用降脂产品组的血脂聚积情况和整体甘油三酯含量与模型对照组比较明显减少。

2.本实验证实了降脂产品具有显著的降脂作用。

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【评价原理】

斑马鱼胚胎视力发育迅速，受精后发育4天的幼鱼就已经依赖视觉线索进行捕食和躲避行为。斑马鱼不仅在角膜、晶状体、脉络膜、视网膜以及血管化和神经支配等结构上和人类的眼睛有明显的相似性，而且还有保守的基因表达、细胞构成和组织结构，因此为研究食品及保健品的眼部毒性提供了一个极好的模型。

我们评价斑马鱼眼毒性有4个指标：1.眼睛大小；2.眼部细胞凋亡；3.眼部血管面积；4.眼部病理切片。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和供试品组，供试品组（保健食品通过溶解到养鱼用水中或灌胃的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用一段时间眼保护剂后，我们在解剖显微镜下观察眼睛大小；整体做凋亡细胞特异性染色，观察眼部细胞凋亡；通过荧光显微镜观察眼部血管面积，同时制作成病理切片观察眼部的病理结构变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼眼睛表型图

箭头指示区域为眼

可以看到，保健食品组眼睛相较于正常对照组明显减小。

图2. 斑马鱼眼细胞凋亡表型图

黄色虚线区域为眼，绿色小点为凋亡细胞

可以看到，保健食品组的凋亡细胞较正常对照组明显增多。

图3. 斑马鱼眼部血管面积

黄色虚线标记血管面积

可以看到，保健食品组眼睛血管面积相较于正常对照组明显增加。

图4. 眼部凋亡细胞病理切片

可以看到，保健食品组出现较多的凋亡细胞，表现为细胞固缩、染色质边集，视网膜结构异于正常对照组。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，保健食品组斑马鱼眼睛明显变小，凋亡细胞明显增多，眼部血管面积明显增多，在病理切片中出现较多的凋亡细胞，表现为细胞固缩、染色质边集，视网膜结构异常。

2.本实验证实了保健食品的眼毒性。

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【评价原理】

随着电子产品的广泛使用，用眼的时间和强度已远超过去，用眼过度引起一系列视力问题。研究表明，高度近视、视网膜疾病、白内障、眼干燥关节综合征均与眼细胞凋亡相关。斑马鱼的眼部血管结构跟人非常相似，斑马鱼视网膜结构也跟人高度相似。用霉酚酸吗啉乙酯可以诱发斑马鱼眼细胞凋亡，模拟人的眼部疾病。

用特异性荧光染色（呈绿色），患有眼疾的斑马鱼眼细胞凋亡较正常斑马鱼明显增多，在荧光显微镜下可以观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和药物组。其中正常对照组未摄入霉酚酸吗啉乙酯，模型对照组与服用眼保护剂组都摄入了等量的霉酚酸吗啉乙酯（霉酚酸吗啉乙酯通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。眼保护剂组在摄入霉酚酸吗啉乙酯的同时摄入蓝莓叶黄素酯之类的眼保护剂。

服用一段时间眼保护剂后，我们对斑马鱼整体做凋亡细胞特异性染色，观察细胞凋亡，同时制作成病理切片观察眼部的病理结构变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼眼细胞凋亡表型图

黄色虚线区域为眼，绿色小点为凋亡细胞

可以看到，模型对照组的凋亡细胞较正常对照组明显增多，而眼保护剂组凋亡细胞与正常细胞相似。

图2. 眼部凋亡细胞病理切片

红色箭头指向凋亡细胞

从病理切片中也能看出来，模型对照组出现较多的凋亡细胞，表现为细胞固缩、染色质边集，而眼保护剂组细胞和正常斑马鱼中形态相似。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，眼保护剂组斑马鱼眼细胞与正常对照组相似，并未出现模型对照组的大面积细胞凋亡情况。

2.本实验证实了蓝莓叶黄素酯具有保护视力功效。

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【评价原理】

炎症是免疫系统对组织损伤和感染的一种反应，主要特点就是白细胞（粒细胞、巨噬细胞）会聚集在感染组织周围。斑马鱼的免疫系统非常类似于哺乳动物。创伤发生时，中性粒细胞、巨噬细胞对创伤性炎症几乎同时作出应答，中性粒细胞迁移速度快，先募集到损伤部位，随后巨噬细胞才到达。数小时后，炎症开始消退，巨噬细胞和中性粒细胞离开损伤部位。用手术刀截断斑马鱼尾鳍，诱发急性损伤，促使斑马鱼中性粒细胞发生免疫应答。

采用转基因中性粒细胞荧光鱼（呈绿色），可在荧光显微镜在观察到尾鳍截断的斑马鱼创面中性粒细胞数量比正常斑马鱼明显增加。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用抗炎药组。其中正常对照组未截断尾鳍，模型对照组和服用抗炎药组均截断尾鳍。服用抗炎药组在切断尾鳍后摄入吲哚美辛、阿司匹林、布洛芬、双氯芬酸之类的抗炎药。

服用一段时间抗炎药后，我们观察斑马鱼尾鳍中性粒细胞数量，并通过Q-PCR检测TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎症相关因子的表达。

【结果展示】

图1. 斑马鱼尾鳍炎症中性粒细胞表型图

黄色虚线区域为尾鳍，绿色颗粒为中性粒细胞

可以看到，服用/注射抗炎药组尾鳍中性粒细胞与正常对照组相似，未出现创面中性粒细胞募集情况。

以TNF-α、COX-2基因为例，提供柱状图。

图2. 斑马鱼TNF-α基因相对表达量

与模型对照组比较，**p < 0.01

可以看到，服用/注射抗炎药组斑马鱼与模型对照组比较，TNF-α基因表达明显下调。

图3. 斑马鱼COX-2基因相对表达量

与模型对照组比较，***p < 0.001

可以看到，服用/注射抗炎药组斑马鱼与模型对照组比较，COX-2基因表达明显下调。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射抗炎药组尾鳍中性粒细胞数量与正常对照组相似，未出现创面中性粒细胞募集情况，且TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎症因子明显下调。

2.本实验证实了吲哚美辛、阿司匹林、布洛芬、双氯芬酸具有显著的抗炎作用，且抑制TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎症相关因子的表达。

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【评价原理】

肠道消化是食物在消化道中分解的过程，包括机械性消化（通过消化道肌肉搜索将食物与消化液混合并向消化道远端推送）和化学性消化（通过消化腺分泌的消化酶将大分子分解为小分子物质的过程）。肠道内的消化液包括胰脂肪酶、胰蛋白酶、胰淀粉酶等。在受精后的26-126 h，斑马鱼肠道的管腔形成，内胚层分化出连续的有功能的肠道上皮。斑马鱼肠道肌肉发达，可分为两层平滑肌，有利于食物的蠕动消化。

通过特异性的检测试剂盒检测OD值，可以量化斑马鱼体内胰脂肪酶和胰蛋白酶含量。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成二组，分别是正常对照和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内），加入相应的胰脂肪酶和胰蛋白酶特异性检测试剂。

服用供试品后，我们使用酶标仪对斑马鱼进行OD值的检测。

【结果展示】

图1. 斑马鱼胰脂肪酶和胰蛋白酶OD值

可以看到，服用供试品组的胰脂肪酶和胰蛋白酶的OD值与正常对照组比较，有显著性提高。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用供试品组与正常对照组比较胰脂肪酶和胰蛋白酶含量均有明显的升高。

2.本实验证实了供试品具有促进肠道消化功能的作用，主要表现为增加胰脂肪酶和胰蛋白酶的含量。

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肾癌类器官培养试剂盒，Renal Cancer Organoid Culture Kit，货号HTC-RC01-100，规格100 mL，价格5880元。

【评价原理】

贫血是外周血红细胞减少。斑马鱼在受精后24 h出现血液循环，可以直接在显微镜下观察到血细胞。造血过程在脊椎动物的进化过程中保守。苯肼作用于红细胞膜，加速膜表面亮氨酸、赖氨酸、组氨酸的水解，同时降低红细胞变形能力，增强红细胞黏附到细胞外基质的能力从而破坏循环血中的成熟红细胞。

经过红细胞特异性染色（呈红色），患有贫血的斑马鱼心脏的血红细胞比正常斑马鱼心脏的血红细胞模型减少，由于斑马鱼通体透明的特点，可以明显被观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和补血剂组。其中正常对照组未摄入苯肼，模型对照组与补血剂组都加入了等量的苯肼（苯肼通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用补血剂组在加入苯肼的同时摄入氯生血宁片之类的补血剂。

服用一段时间补血剂后，我们对斑马鱼整体做红细胞特异性染色，观察心脏血红细胞变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼心脏红细胞表型图

绿色虚线区域为心脏红细胞

可以看到，服用预防血栓药物组的心脏情况与未加入苯肼的正常对照组比较相似，没有明显的红细胞减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用补血剂组的心脏红细胞情况与未摄入苯肼的正常对照组比较相似，没有明显的红细胞减少。

2.本实验证实了生血宁片具有补血功效。

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【评价原理】

斑马鱼与人类的基因相似率高达87%, 与哺乳类动物相比, 斑马鱼的信号传导以及生理结构和功能方面都非常相似。斑马鱼能够对药物在体内的分布情况、吸收情况、代谢以及排泄等生理动态方面提供准确的信息, 尤其对小分子所引起的内分泌紊乱、再生毒性、行为缺陷、致畸、心血管毒性、肝毒性等毒性反应与人具有高度相似性。因此，使用斑马鱼作为药物早期的安全性评价是非常可靠的。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内）。通过环特生物剂量换算公式，将人每日推荐服用剂量换算为斑马鱼使用浓度进行安全性评价,梯度设置浓度进行安全性评价。

服用一段时间供试品后，我们观察斑马鱼各组织脏器的表型。

【结果展示】

图1. 斑马鱼毒性表型图

J：下颌；E:眼；H：心脏；L：肝脏；In：胃肠道；Y：卵黄囊

可以看到，服用2倍及以下人每日推荐服用剂量的供试品组未见明显异常，服用3倍人每日推荐服用剂量的供试品组诱发斑马鱼肝脏变性和卵黄囊吸收延迟。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用2倍及以下人每日推荐服用剂量的供试品未诱发斑马鱼明显毒性表型，与正常对照组斑马鱼类似；服用3倍人每日推荐服用剂量的供试品诱发斑马鱼明显的肝脏毒性表型。

2.本实验证实了在短期服用中，该供试品应限量使用，否则会出现安全性风险。

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化妆品中刺激性物质作用于机体后可能引发机体产生刺激、过敏等一系列的反应，其中主要的是刺激反应，可导致水肿、红斑、瘙痒、疼痛等症状。

化妆品对皮肤的刺激表型主要表现为皮肤炎症，炎症早期主要表现为毛细血管扩张、通透性亢进和水肿。

【评价原理】

刺激物进入斑马鱼体内，诱导炎症反应，中性粒细胞发生免疫应答，向皮肤表皮迁移并聚集。通过在荧光显微镜下对斑马鱼皮肤表面的中性粒细胞进行计数，从而反映受试物刺激性强度。

【实验方案】

将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和化妆品组（供试品通过溶解到标准稀释水中的方式摄入到斑马鱼体内）。

使用化妆品一段时间后，将斑马鱼整体放到荧光显微镜下拍照，以皮肤表面中性粒细胞数量评价化妆品的刺激性。

【结果展示】

图1. 斑马鱼皮肤中性粒细胞表型图

黄色虚线区域为计算区域

可以看到，化妆品组斑马鱼皮肤表面中性粒细胞数量显著上升。

【评价结论】

1、经过各组斑马鱼的对比实验，化妆品组的斑马鱼皮肤表面中性粒细胞数量明显增多，与正常对照组存在明显的差别。

2、本实验证实了该化妆品对斑马鱼有刺激性。

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【评价原理】

斑马鱼的鳔从器官进化、组织结构以及生物学等多个层面都类似于哺乳动物的肺泡。

病毒性肺炎：注射给予聚肌胞——poly（i:c）建立斑马鱼病毒性肺炎模型。poly（i:c）的双链RNA结构非常类似于病毒或病毒复制过程中形成的双链RNA，所以poly（i:c）类似某些病毒，具有很强的干扰素诱生作用。

通过使用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼和转基因巨噬细胞绿色荧光斑马鱼，在荧光显微镜下可以直接观察斑马鱼中性粒细胞和巨噬细胞，并分时间点视频记录巨噬细胞和中性粒细胞溢出血管情况，使用实时荧光定量PCR仪可获得基因表达水平，通过制作组织病理切片观察斑马鱼鱼鳔部位的病理结构变化。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用抗炎药组。其中，模型对照组与抗炎药组都注射了等量的聚肌胞——poly（i:c）建立病毒性肺炎模型。抗炎药组在注射了poly（i:c）的同时摄入吲哚美辛之类的抗炎药。

服用一段时间抗炎药后，我们在荧光显微镜下拍摄斑马鱼中性粒细胞和巨噬细胞的数量，并分时间点视频记录巨噬细胞和中性粒细胞溢出血管情况，用实时荧光定量PCR仪检测TNF-α、IL-1β值，同时制作成病理切片观察鱼鳔部位的病理结构变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼中性粒表型图

黄色虚线区域为鱼鳔，绿色荧光颗粒为中性粒细胞

可以看到，抗炎药组斑马鱼鱼鳔位置处的中性粒细胞聚集情况明显改善。

图2. 斑马鱼巨噬细胞表型图

黄色虚线区域为鱼鳔，绿色荧光为巨噬细胞

可以看到，抗炎药组斑马鱼鱼鳔位置处的巨噬细胞聚集情况明显改善。

图3. TNF-α基因表达水平

与模型对照组比较，**p < 0.01

可以看到，抗炎药组能显著抑制斑马鱼的炎症基因TNF-α表达水平。

图4. IL-1β基因表达水平

与模型对照组比较，**p < 0.01

可以看到，抗炎药组能显著抑制斑马鱼的炎症基因IL-1β表达水平。

图5. 鱼鳔部位病理切片

从病理切片中能看出来，抗炎药组斑马鱼鱼鳔病理结构与正常对照组相似，未出现模型对照组渗入的炎性细胞明显增多的情况。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，抗炎药组与模型对照组比较，能显著抑制中性粒细胞和巨噬细胞的聚集，能显著抑制炎症基因表达水平，能改善炎性浸润情况。

2.本实验证实了吲哚美辛具有显著的病毒性肺炎防治作用。

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