雌激素是一类固醇激素，目前已成为一种新兴的污染物。一些无良商家为片面追求功效而在护肤产品中违规添加，导致很多女性因使用了此类护肤品而出现“激素脸”，表现为面部翻红、发痒、干燥脱皮，甚至烂脸流脓。

环特生物应用诺贝尔奖技术——荧光蛋白基因转移技术，可实现对化妆品中雌激素类化学物质的直观、精确和高效的检测评价。

【评价原理】

通过转基因标记表达的绿色荧光蛋白含量来反映雌激素含量，绿色荧光蛋白特异性地在肝脏进行表达，一旦供试品中含有雌激素类化学物质，转基因斑马鱼暴露后肝脏部位会出现特异性绿色荧光，可用绿色荧光量化供试品中的雌激素含量，从而达到评价效果。

【实验方案】

我们将受试的斑马鱼分为两组，分别为正常对照组和供试品组。在相同的温、湿度条件下培育一段时间后，在显微镜下对肝脏部位的绿色荧光进行量化分析。

【结果展示】

 图1. 雌激素处理后斑马鱼荧光表型图

可以看到，用供试品处理后的斑马鱼在肝脏部位显示明显的绿色荧光。

【评价结论】

1、经过各组斑马鱼的对比实验，雌激素处理组斑马鱼的肝脏部位出现明显的绿色荧光，与正常对照组存在明显的差别；

2、本实验说明供试品中存在雌激素类有害物质。

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【评价原理】

脑出血是指非外伤性脑实质内部血管破裂引发的脑内出血病症，占全部脑卒中的20%～30%，急性期病死率为30%～40%。羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶 ( HMGCR) 是他汀类药物发挥抑制作用的直接作用点, HMGCR功能被抑制会影响血管的完整性和稳定性，诱发脑出血。由于斑马鱼大脑具有典型脊椎动物脑部形态学特征，血管与神经系统在分子信号通路上与人和哺乳动物的同源性达到85%以上。在大量摄入辛伐他汀后，斑马鱼脑部也会出现脑出血的情况，患有脑出血的斑马鱼的脑部会出现明显的片状出血，而正常斑马鱼没有；由于脑出血斑马鱼的心搏输出量和血流速度也会降低，利用血流分析仪可明显观察到。脑出血可直接造成反应迟钝、运动功能障碍，可通过行为分析软件观察斑马鱼的行为轨迹。

我们评价斑马鱼脑出血有4个指标：1.脑出血发生率；2.心搏输出量；3. 血流速度；4. 行为学（运动改善）。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用脑血管保护剂组。其中正常对照组未摄入辛伐他汀，模型对照组与服用脑血管保护剂组都摄入了等量的辛伐他汀（辛伐他汀通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用脑血管保护剂组在摄入辛伐他汀的同时摄入淫羊藿苷之类的脑血管保护剂。

服用脑血管保护剂一段时间后，我们对斑马鱼脑部出血、心搏输出、血流速度和行为学（运动改善）情况进行观察。

【结果展示】

图1. 斑马鱼脑出血表型图

黄色虚线区域为脑出血区域

可以看到，服用脑血管保护剂组的斑马鱼头部情况与正常对照组比较相似，没有明显的脑出血现象。

图2. 斑马鱼心搏输出量

与模型对照组比较，*** p< 0.001

可以看到，服用脑血管保护剂组的斑马鱼心搏输出量与模型对照组比较明显增加。

图3. 斑马鱼血流速度

与模型对照组比较，*** p< 0.001

可以看到，服用脑血管保护剂组的斑马鱼血流速度与模型对照组比较明显增加。

图4 .斑马鱼运动轨迹图

（黑线：斑马鱼慢速运动轨迹；绿线：中速运动；红线：快速运动）

可以看到，模型对照组斑马鱼总运动距离较正常对照组明显减少，而服用脑血管保护剂组斑马鱼运动功能得到明显改善。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用脑血管保护剂组的斑马鱼脑部情况与未摄入辛伐他汀的正常对照组相似，并未出现模型对照组明显的脑出血的情况；服用脑血管保护剂组的与模型对照组比较，心搏输出量明显增多、血流速度明显加快、运动功能得到明显改善。

2.本实验证实了淫羊藿苷具有显著的防治脑出血作用。

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紫外线是导致皮肤损伤或病变的重要因素，未进行防晒的皮肤暴露在紫外线下可能出现皮炎、红斑、黑色素增多等现象，类似的，斑马鱼的尾鳍受紫外线照射后将出现尾鳍褶皱，面积缩小等现象，使用化妆品后，通过定量评价斑马鱼尾鳍面积的复苏情况评价其抗光老化功效。

【评价原理】

通过紫外光照射使斑马鱼尾鳍形成损伤，添加化妆品后，采用拍照方式对斑马鱼尾鳍进行图像采集，分析斑马鱼尾鳍损伤程度并判定抗光老化功效。

【实验方案】

我们将斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组、化妆品组。正常对照组不做处理，模型对照组和化妆品组分别进行紫外光多次照射，随后化妆品组中定量加入受试化妆品，孵育一段时间后，三组斑马鱼分别进行尾鳍拍照处理，分析斑马鱼尾鳍面积，从而评价抗光老化功效。

【结果展示】

图1. 斑马鱼尾鳍损伤面积表型图（红色为分析区域）

【评价结论】

1.经过各组斑马鱼对比实验，与模型对照组尾鳍面积相比，化妆品组具有明显

改善作用。

2.本实验证实了该化妆品具有抗光老化的作用。

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类器官冻存液可应用于多种哺乳动物（如人、鼠、猪、蝙蝠、牛等）来源的类器官和细胞系的低温长期保存，该冻存液不含血清，不含任何动物来源成分，含有 10% DMSO。

过敏反应通常会引起许多皮肤症状，比如皮肤发红、发痒，严重的患者还会出现刺痛或者面部出现红斑、风团、丘疹或丘疱疹等症状。敏感性肌肤的人群选用化妆品时，需要特别关注化妆品的致敏性。通过斑马鱼技术可以有效评价化妆品及其原料的致敏性。

【评价原理】

过敏反应的主要原因是过敏原/致敏因子诱导组织学上肥大细胞脱颗粒，释放多种活性介质进而诱发各种过敏症状。其中类胰蛋白酶是肥大细胞内预先合成的中性蛋白酶，是临床上检验人体是否过敏的重要指标。斑马鱼产生过敏反应时，同样会诱导肥大细胞分泌类胰蛋白酶。因此，通过检测斑马鱼整体类胰蛋白酶水平可以判断化妆品及其原料的致敏性。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成若干组组，包含正常对照组和化妆品组。其中正常对照组未加入化妆品，化妆品组分别加入不同剂量（化妆品通过溶解到标准稀释水中的方式添加到实验体系中）的样品。

处理24 h后，利用酶标仪检测各组吸光度值（OD值），以类胰蛋白酶的表达水平评价化妆品致敏作用。

此外，可以通过斑马鱼病理切片，用PAS染色后观察肠道壁上肥大细胞的状况反映化妆品的致敏性。

【结果展示】（展示图片仅供参考，实际实验组别依据合同而定）

图1. 斑马鱼类胰蛋白酶含量（吸光度值）

与正常对照组比较，*p < 0.05，***p < 0.001

可以看到，化妆品中剂量和高剂量组类胰蛋白酶含量与正常对照组比较明显升高，具有致敏性，低剂量组无致敏性。

图2. 斑马鱼体内肥大细胞染色典型图（箭头指示为肥大细胞）

从经过PAS染色的病理切片中也能看出来，化妆品组斑马鱼的肠道壁上的肥大细胞与正常对照组相比数量明显增加。

【评价结论】

1.经过各组斑马鱼的对比实验，化妆品中、高剂量组斑马鱼类胰蛋白酶含量和肠道壁上的肥大细胞数量与正常对照组相比数量明显增加。

2.本实验证实了该化妆品具有明显的致敏作用。

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【评价原理】

斑马鱼胚胎在母体外发育，从合子期到孵化期仅72小时，且发育的完整过程均是透明的，利于实时观察和检测。斑马鱼幼鱼长3~4毫米，拥有6-384孔板的高通量检测体系，可实现低费-高效筛选。斑马鱼与人类基因同源性达到87%，用于药物的体内快速评价实验结果可比性强。故可以利用斑马鱼早期各个阶段的发育形态，准确高效的确定药物暴露在胚胎中的毒性，广泛应用于药物的发育毒性与致畸性研究。

实验结束后，以各浓度组织器官反应及死亡情况的统计学分析结果评价药物对斑马鱼的毒性，并对典型毒性器官进行拍照。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和药物组。其中正常对照组未摄入待测药物，药物组按照既定浓度摄入了不同浓度的待测药物（待测药物通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。

在药物暴露过程中，每天观察记录各个浓度组斑马鱼的死亡情况，并及时挑走死鱼。实验结束后，统计斑马鱼死亡情况并使用OriginPro 8软件拟合数据曲线，获得药物的最大非致死浓度（MNLC）和LC10。

在药物暴露一段时间后，我们在显微镜下观察记录斑马鱼身体各个指标的情况并对典型毒性器官进行拍照。

【结果展示】

图1. 斑马鱼发最大非致死浓度（MNLC）和LC10摸索数据拟合图

可以看到，该药物的MNLC为313 μg/mL，LC10为350 μg/mL。

图2. 斑马鱼发育毒性与致畸性表型图

H=Heart;J=Jaw;In=Intestinal tract;L=Liver;Y=Yolk sac;E=Eye

可以看到，药物组较正常对照组出现卵黄囊吸收延迟、心包水肿、体长变短、眼变小和肝变形。

【评价结论】

1.该药物的MNLC为313 μg/mL，LC10为350 μg/mL，诱发斑马鱼卵黄囊吸收延迟、心包水肿、体长变短、眼变小和肝变形。

2.本实验证实了该药物对斑马鱼有发育毒性与致畸性风险。

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产品介绍：

斑马鱼强迫游泳仪，是利用斑马鱼逆流而上的特点，对斑马鱼进行体能训练，适用于斑马鱼抗疲劳或耐力测试相关实验。

产品优势：

产品参数（示例）：

【评价原理】

肠道消化是食物在消化道中分解的过程，包括机械性消化（通过消化道肌肉搜索将食物与消化液混合并向消化道远端推送）和化学性消化（通过消化腺分泌的消化酶将大分子分解为小分子物质的过程）。肠道内的消化液包括胰脂肪酶、胰蛋白酶、胰淀粉酶等。在受精后的26-126 h，斑马鱼肠道的管腔形成，内胚层分化出连续的有功能的肠道上皮。斑马鱼肠道肌肉发达，可分为两层平滑肌，有利于食物的蠕动消化。

通过特异性的检测试剂盒检测OD值，可以量化斑马鱼体内胰脂肪酶和胰蛋白酶含量。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成二组，分别是正常对照和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内），加入相应的胰脂肪酶和胰蛋白酶特异性检测试剂。

服用供试品后，我们使用酶标仪对斑马鱼进行OD值的检测。

【结果展示】

图1. 斑马鱼胰脂肪酶和胰蛋白酶OD值

可以看到，服用供试品组的胰脂肪酶和胰蛋白酶的OD值与正常对照组比较，有显著性提高。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用供试品组与正常对照组比较胰脂肪酶和胰蛋白酶含量均有明显的升高。

2.本实验证实了供试品具有促进肠道消化功能的作用，主要表现为增加胰脂肪酶和胰蛋白酶的含量。

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【评价原理】

药物骨毒性的安全性研究与肝、肾、心脏毒性等一般毒性相比较为薄弱，尤其是儿科人群用药的骨毒性安全问题，骨毒性非临床安全性评价愈加受到重视。斑马鱼是一种与人类同源性较高的脊椎动物，和哺乳动物一样，斑马鱼的骨骼是从3种胚胎干细胞系即神经嵴、体节中胚层和侧板发育而来的。

斑马鱼骨骼经过特异性的荧光染色后，经荧光显微镜采集到荧光强度能反映出骨密度和脊椎骨的数量，从而评价供试品骨毒性。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用/注射供试品一段时间后，我们对斑马鱼整体做骨钙染色，以脊椎骨荧光强度和脊椎骨数量评价供试品的骨毒性。

【结果展示】

图1. 斑马鱼骨密度表型图

黄色虚线区域为计算用脊椎骨

可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼脊椎骨荧光强度明显减弱。

图2. 斑马鱼脊椎骨数量表型图

可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼脊椎骨数量明显减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼脊椎骨荧光强度明显减弱、数量明显减少，与正常对照组存在明显的差别。

2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有骨毒性。

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类器官作为新兴的生物学模型，其具有细胞系和动物模型所不具有的独特优势，其细胞组成和结构更加类似人体组织，可提供一个高度生理相关的系统，是基础研究的绝佳模型。通过基于肿瘤类器官药敏的筛查，鉴别出有临床反应的患者具有极高的敏感性和特异性，综合结果表明肿瘤类器官药敏在预测肿瘤治疗效果方面，具有较高的应用价值。

斑马鱼PDX模型可为病人能提供即时的、精准化的治疗方案指导，为肿瘤的个性化治疗提供了一个非常理想的体内测试和诊断模型。将斑马鱼PDX模型广泛服务于肿瘤患者并提供个体化用药指导，会显著提高患者肿瘤化疗精准性，提高患者的生活质量，使患者获益。

依托类器官和斑马鱼两大技术平台， 环特生物构建起一套具备鲜明特色的“体外（类器官模型）+体内（斑马鱼PDX模型）” 模式的肿瘤精准医疗整体解决方案。

类器官 + 斑马鱼PDX，喜迎双“旦”  放肆打“价”！

活动对象：医院肿瘤科医生

活动时间：2022年12月24日-1月13日

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项目服务详情，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）。