【评价原理】半数致死浓度（LC50）是指在动物急性毒性实验中，使受试动物半数死亡的毒性浓度。在比较各种污染物的毒性，不同种或不同发育阶段的动物对污染物的敏感性以及环境因素对毒性影响等方面的研究中，都以LC50为依据。常规急性毒性实验常采用啮齿类和非啮齿类动物进行，能较准确地反映药物的安全性，但实验周期一般较长，药物用量较大。用斑马鱼胚胎检验药物急性毒性，具有体积小，成本低，易于饲养，重复性好，便于观察，繁殖周期短，繁殖频率高，给药方式简单等诸多优点，因此它是一种理想的试验模型，用以确定药物暴露在胚胎中的毒性效应，评价药物半数致死浓度。根据实验终点斑马鱼的死亡率，通过使用OriginPro 8.0统计学软件，拟合半数致死浓度。【实验方案】我们将供试品设置一系列浓度，并设置一个正常对照组。同时设置3个生物学重复。药物通过溶解到养鱼用水中或灌胃的方式摄入到斑马鱼体内进行3天的暴露实验。每天观察记录斑马鱼死亡情况，药物处理结束后，统计各实验组的斑马鱼致死率，使用OriginPro 8.0统计学软件绘制最佳的剂量效应曲线，并计算LC50。【结果展示】图1. 斑马鱼“浓度-死亡率”效应曲线可以看到，利用OriginPro 8.0软件模拟得出药物LC50=8.0 μg/mL。【评价结论】1.根据药物“浓度-死亡率”的统计数据，利用OriginPro 8.0软件模拟得出药物的LC50=8.0 μg/mL。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼为鲤科短担尼鱼属的小型硬骨鱼，1998年国际经济合作与发展组织将斑马鱼胚胎发育方法列入测定单一化学品毒性的标准方法。由于斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，近年来斑马鱼被广泛应用于人类疾病模型及药物筛选、毒理学与环境检测中，使其成为新型的脊椎模式生物。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或胚胎注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼整体进行观察评价，观察斑马鱼心脏、脑部、耳、下颌、眼、肝脏、肠道、躯干/尾/脊索、肌肉/体节、鳍、体长、身体着色、循环系统、身体水肿和出血等毒性反应情况，统计毒性发生率。【结果展示】图1. 斑马鱼胚胎毒性表型图可以看到，服用/注射供试品组的斑马鱼眼变小、心包水肿、肝脏变性、卵黄囊吸收延迟、胃肠道发育延迟。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的组织器官产生明显的毒性表型，与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有胚胎毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】神经毒性通常指某些药物影响机体的神经传导，导致神经传导中断或减弱，从而影响机体的正常功能。斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，神经系统形成过程和发育机制与人类高度相似，在6 hpf（受精后6小时）神经系统开始发育，受精6天后所有神经系统发育完成。斑马鱼在短时间内形成整个神经系统，为神经毒性的评价带来了有利的条件。而且斑马鱼对药物神经毒性的预测准确性高，同时兼具快速、高效、经济的优点。我们评价斑马鱼神经毒性有3个指标：1.行为学；2.中枢神经凋亡细胞荧光信号强度；3. 外周运动神经长度。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用/注射药物一段时间后，我们观察斑马鱼的运动行为，通过荧光染色观察中枢神经凋亡细胞，也可以利用转基因运动神经绿色荧光NBT品系斑马鱼观察外周运动神经长度。【结果展示】图1. 斑马鱼神经毒性运动轨迹图可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼运动明显减少。图2. 斑马鱼光暗刺激下每分钟运动速度表型图可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼对光暗刺激不敏感。图3. 斑马鱼中枢神经凋亡细胞表型图黄色虚线框内为中枢神经分析区域，绿色荧光小点为凋亡细胞可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼中枢神经细胞凋亡明显增加。图4. 斑马鱼外周运动神经表型图可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼外周运动神经明显缩短。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼运动明显减少且对光暗刺激不敏感，中枢神经细胞凋亡增加且外周运动神经缩短，与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有神经毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼的听觉外侧系统由内耳和侧线两个关键的感觉结构组成，斑马鱼具有典型的内耳结构，内耳的毛细胞和侧线的毛细胞在结构功能及分子水平上与哺乳动物的内耳毛细胞非常相似，包括对耳毒性药物的相似反应。经过特异性荧光染色（呈绿色），听力损伤的斑马鱼比正常斑马鱼毛细胞明显减少或缺失（荧光减弱或者消失）。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼整体做毛细胞特异性染色，观察毛细胞的变化。【结果展示】图1. 斑马鱼毛细胞表型图绿色荧光颗粒为毛细胞可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼毛细胞减少。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼毛细胞明显减少，与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有听毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】细胞都有一个固定死亡的程序，细胞凋亡通过去除潜在的损伤细胞和分化后多余的细胞来保护机体，在脊椎动物中尤为重要。在斑马鱼DNA数据库中已鉴定出许多与哺乳动物同一家族的凋亡相关基因。这暗示了大部分凋亡通路在斑马鱼与高等脊椎动物的进化上有很高的保守性，因此，在凋亡的研究领域上，斑马鱼被认为是一种有效的实验动物模型。吖啶橙(AO)能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，使之发出明亮的绿色荧光。凋亡的细胞呈现为染色增强，荧光更为明亮，均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶的催化下加上荧光素 (FITC) 标记的dUTP (fluorescein-dUTP) ，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测。用两种不同的特异性荧光染色，均可以在荧光显微镜下观察到凋亡细胞。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和供试品组。供试品通过服用的方式摄入到斑马鱼体内（供试品通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用一段时间供试品后，我们分别对斑马鱼整体做两种凋亡细胞特异性染色，用荧光显微镜观察细胞凋亡。【结果展示】可以看到，供试品组的凋亡细胞荧光强度与正常对照组比较明显增强。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，供试品组斑马鱼出现凋亡细胞荧光强度比正常对照组明显增强。2.本实验证实了供试品诱发斑马鱼细胞凋亡。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】行为是动物毒性应激反应重要而敏感的指标，神经毒性往往会导致机体行为表现异常。斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，神经系统形成过程和发育机制与人类高度相似，且对于药物的反应也有着高度相似性。斑马鱼对药物行为毒性的预测准确性高，同时兼具快速、高效、经济的优点。我们评价斑马鱼行为毒性有4个指标：1.行为学；2.中枢神经凋亡细胞荧光信号强度；3. 外周运动神经长度；4. 脑变性发生率。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用/注射药物一段时间后，我们观察斑马鱼的运动行为，通过荧光染色观察中枢神经凋亡细胞，也可以利用转基因运动神经绿色荧光NBT品系斑马鱼观察外周运动神经长度，同时可以观察脑变性发生率。【结果展示】图1. 斑马鱼行为毒性运动轨迹图可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼运动明显减少。图2. 斑马鱼中枢神经凋亡细胞表型图黄色虚线框内为中枢神经分析区域，绿色荧光小点为凋亡细胞可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼中枢神经细胞凋亡明显增加。图3. 斑马鱼外周运动神经表型图可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼外周运动神经明显缩短。图4. 斑马鱼脑变性表型图可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼脑部变性呈黑色。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼运动明显减少，中枢神经细胞凋亡增加，外周运动神经缩短且脑变性发生率增加，与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有行为毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）