细胞因子是信号分子,在细胞生长、分化、基因表达、迁移、免疫和炎症的许多生物过程中发挥重要的作用。细胞因子由细胞分泌,与细胞表面受体结合,激活细胞信号传导通路,传递细胞间的讯息。细胞因子的功能异常导致许多疾病,如关节炎、急慢性肝病、肠炎、心脏相关疾病。许多细胞因子常常涉及一种生物学或疾病过程。因此全面分析多种细胞因子的表达可以有效揭示疾病的潜在机制。人细胞因子微孔板阵列试剂以高通量的方式同时监测31种人类细胞因子,该方法快速敏感的同时定量检测不同样本多种细胞因子的水平。 A. 优点: · 多重复合—— 一次试验可同时测定3份样品的31种细胞因子 · 敏感性高——只需少量样本 · 勿需贵重仪器——与珠式方法不同,不需要贵重仪器 · 操作简单——试剂盒包括预包被板等所有组分 B. 原理: 96孔白板分成3个区,每个区有4列,每个区31种特异的细胞因子捕获抗体分别包被在31个孔,1孔未包被任何抗体用作空白对照。样品如细胞培养悬液、细胞裂解液、组织匀浆、血清或血浆样品与微孔板温育,捕获的细胞因子蛋白用混合的生物素化抗体同时检测,待测样本与捕获抗体和检测抗体结合温育后,洗涤除去未接合的标记抗体,加入酶及化学发光底物,用微孔板化学发光检测仪测定发光度值,每种特异的细胞因子表达水平与发光强度成正比。
细胞因子是不同细胞类型产生的细胞外信号蛋白,其作用于靶细胞,调节靶细胞多种细胞功能,如吸引特定类型的细胞到炎症部位,增加免疫细胞活性和生存期,抑制细胞反应。 炎症是对组织损伤的反应。 在急性和慢性炎症过程中,多种可溶性因子参与细胞浸润、细胞激活和炎症的全身反应。 细胞因子是炎症反应的主要方式。 多数细胞因子是以自分泌或旁分泌的方式作用于局部或全身的多功能分子。 细胞因子进入的广泛网络,具有协同性和对抗性相互作用,对各种靶细胞发挥着负性的和正性的调节作用。 所以,描述细胞因子的表达方式为观察潜在的免疫机制提供可贵的视角。美国Signosis 炎症细胞因子复合酶免法平行检测试剂可定量测定和描述8种细胞因子:TNFa, IFNr, G-CSF, GM-CSF, IL-1a, IL-8, IP-10, and Rantes. A. 优点: · 多种复合---单一板条可同时测定8种肥胖症生物标记物 · 灵活弹性---单一板块可比较2个样品到12个样品 · 差别定量---不同于膜芯片方法,样品中各个蛋白的区别可以定量比较。另外, EA-1032为做标准曲线提供标准品。 · 勿需贵重仪器---不同于珠式的检测方法,勿需贵重仪器 · 操作简单---12x 8孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理 板条每个孔包被有针对炎症细胞因子的特异抗体,8个孔包被有8不同抗体,一个板条8个孔可测定8不同蛋白质。待测样品可同时与二个抗体组成的抗体对反应,肥胖症生物标记蛋白夹在固相抗体和酶标记抗体中间。 孵育后,洗涤板孔除去未结合的标记抗体。 加入HRP底物TMB,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。 炎症细胞因子的浓度与待测样品颜色深浅成正比。 450 nm处测定吸光值进行定量。
干扰素(IFNs)是宿主防御和体内平衡的细胞外蛋白强的介导剂。 它们是免疫系统细胞产生的细胞因子,对外源物如病毒、寄生虫的入侵进行应答。 它由各种细胞产生,以应对双链核糖核酸出现,双链核糖核酸是病毒感染的一个关键指示物。 IFNs分成二主要亚群。 I型 IFNs所有的都与I型 IFN受体结合,例如IFN-a和IFN- b。 IFN-r是单一的II 型IFN,结合不同的II型受体。几乎所有类型细胞产生I型IFNs,而II型 IFN-r由T细胞和在免疫刺激的自然杀伤细胞(NK) 产生。 IFN-r通过免疫相关基因的转录调节来协调不同的细胞程序。 IFN-r的细胞作用包括病原生物识别,抗原加工和呈递、抗病毒状态、抑制细胞增殖和作用于凋亡,活化杀微生物效应器的功能,免疫调节和白细胞运输。 A. 优点: · 性价比高---高质量,低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对人IFN-r的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统. B. 原理: IFN-r试剂为固相酶免法。 方法采用兔抗人IFN-r抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗人IFN-r抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测, 待测样品IFN-r夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。IFN-r的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
人绒毛膜促性腺激素(hCG)通常是孕期胎盘产生的糖蛋白激素。 完整的hCG分子结构上由二个非共价连接的多肽亚单位--alpha和beta链亚单位组成。 完整hCG和hCG alpha的测定在血液和尿液的结果是类似的,但是beta亚单位则不同。 在正常孕期4-6个月母体血清,完整hCG分子的水平从20,000 mIU/ml到50,000 mIU/ml (1 ng = 15 mIU)。 相反,不管是游离的a-还是游离的ß - hCG平均水平是1% hCG的一半。 hCG和游离亚单位看来作为非滋养细胞肿瘤的血清学标志物用处不大, 不过,绒毛膜癌患者ß-hCG水平的绝对增加与正常怀孕者有明显地区别。 A. 优点: · 性价比高---高质量,低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---高度优选特异的针对ß-hCG的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: 游离ß-hCG试剂为固相酶免法。 方法采用抗ß-hCG抗体做为微孔板的固相捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗ß-hCG抗体做检测抗体, 待测样品同时与捕获抗体和标记抗体反应后,ß-hCG夹在二者之间。孵育后,洗去未结合的标记抗体。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。ß-hCG的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
小干扰RNA(siRNAs)是双链RNA分子,长度在20-25个核苷酸。2001年时表明合成的siRNAs能够诱导RNAi进入哺乳动物细胞,siRNAs引起了生物医学和药物研发的极大关注,从而被广泛应用于沉默基因表达。监测siRNA的运送和表达对保证敲除成功是非常重要的。Northern blot是分析这些分子常用的方法,但该方法不够敏感,操作相对繁琐。美国Signosis开发了一种高敏的siRNA微孔板检测方法,比Northern Blot敏感100倍,此外该方法只是简单的孵育,如同ELISA,更重要的是可以同时分析大量样本。根据客户提供的特定的siRNA序列,美国Signosis会设计一套oligos,然后提供给客户相应的检测试剂。 A.优点: 美国Signosis基于其自有专利技术的siRNA微孔板检测试剂具有下列优点: ·操作简单---做siRNA检测象做ELISA,整个试验步骤只是孵育和洗涤。 ·灵敏度高---较siRNA Northern blotting分析敏感100倍。 ·定量分析---特定siRNA的表达可以定量分析。 B.原理: 基于自有专利siRNA微孔板检测中,一个siRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接,其中一个连接oligo与捕获oligo和待测的siRNA部分杂交,另一个连接oligo与检测oligo和待测的siRNA另一部分杂交,杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固着在微孔板上,再由辣根酶标记的链酶亲和素和发光底物检测。
成纤维细胞生长因子(FGF) - 2,亦称碱性FGF (FGFb),是体内血管形成的强刺激剂,还是体外许多类型细胞扩散、迁移、分化和生存的一种多效性的调节剂,包括内皮细胞、平滑肌细胞和基质细胞。 它能够诱导体内和体外血管生成反应。 碱性和酸性FGFs,是结构上相关的细胞因子,属于肝素结合家族, 广泛表达在胚胎发育和正常创伤愈合期间。 A. 优点: · 性价比高---高质量,低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对人FGFb的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统. B. 原理: FGFb试剂为固相酶免法。 方法采用鼠抗人FGFb抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的鼠抗人FGFb抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测, 待测样品FGFb夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。FGFb的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是一种集落刺激因子激素。 它是由一些不同的组织产生,刺激骨髓产生粒细胞和干细胞并刺激骨髓释放它们入血。 它也刺激前体嗜中性细胞和成熟嗜中性细胞以及单核细胞的生存、增殖、分化和活动。 G-CSF以一种抗炎方式影响单核细胞的功能。 G-CSF对单核细胞的刺激导致LPS诱导的IL-1、TNF-a、IL-12和IL-18的减少。 A. 优点: · 性价比高---高质量,低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对人G-CSF的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: G-CSF试剂为固相酶免法。 方法采用兔抗人G-CSF抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗人G-CSF抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测, 待测样品G-CSF夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。G-CSF的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
基因表达是在单个细胞水平进行调控,需要有多种方法分析单个细胞如干细胞、神经元、发育组织、激光捕获切片的基因表达方式。SYBR Green 是最广泛应用的双链DNA特异染料,是实时PCR报告染料。Signosis公司研发了一种单个细胞的SYBR Green实时RT-PCR试剂,不需要RNA制备,而是直接用细胞裂解物。该试剂盒是一种敏感、定量、价廉的方法,用以实时监测PCR反应。除了CLTM细胞裂解液试剂盒包括cDNA合成和PCR扩增的所有试剂。 A. 优点: 美国Signosis公司直接用细胞裂解液的RT-PCR试剂具有以下优点: ·便利---从细胞裂解、反转录直到PCR,试剂盒包含了所有试剂。 ·无需RNA制备---细胞裂解液可直接用于反转录。 ·功能强大---该试剂可获得全长的cDNA。 ·实时---分析可以实时监测 B. 原理: 缓冲液已优化适于进行细胞裂解物制备和RT-PCR。
美国Signosis 提供的ELISA细胞裂解液,经过优化,可快速高效的制备细胞提取物,用于ELISA测试蛋白水平。 A. 优点: 美国Signosis CL(TM)细胞裂解液具有下列优势: 步骤简单——无需RNA制备细胞裂解后直接进行反转录。 细胞用量少——几个细胞足够制备用于PCR的cDNA。 B. 原理:
细胞因子是不同细胞类型产生的细胞外信号蛋白,其作用于靶细胞,调节靶细胞多种多样的细胞功能,如吸引特定类型的细胞到炎症部位,增加免疫细胞活性和生存期,抑制细胞反应。 炎症是对组织损伤的反应。 在急性和慢性炎症过程中,多种可溶性因子参与细胞浸润,细胞激活和炎症的全身反应。 细胞因子是炎症反应的主要方式。 多数细胞因子是以自分泌或旁分泌的方式作用于局部或全身的多功能分子。 细胞因子介入的广泛网络,具有协同性和对抗性相互作用,对各种靶细胞发挥着负性的和正性的调节作用。 所以,描述细胞因子的表达方式为洞察潜在的免疫机制提供可贵的视角。美国Signosis 大鼠炎症细胞因子复合酶免法平行检测试剂可定量测定8种细胞因子:TNFa, IL-6, IFNr, IL-1a, IL-1b, MCP-1, Rantes and MIP。 A. 优点: · 多种复合---单一ELISA板条可同时测定8种炎症生物标记物 · 灵活弹性---单一板块可比较2个样品到12个样品 · 差别定量---不同于膜芯片方法,样品中各个蛋白的区别可以定量比较。另外, EA- 1202为做标准曲线提供标准品。 · 勿需贵重仪器---不同于珠式的检测方法,勿需贵重仪器 · 操作简单---12x 8孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理 板条每个孔包被有针对炎症生物标记蛋白的特异抗体,8个孔包被有8不同抗体,一个板条8个孔可测定8不同蛋白质。待测样品可同时与二个抗体组成的抗体对反应,炎症细胞因子夹在固相抗体和酶标记抗体中间。 孵育后,洗涤板孔除去未结合的标记抗体。 加入HRP底物TMB,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。 炎症细胞因子的浓度与待测样品颜色深浅成正比。待测样品 450 nm处测定吸光值进行定量。