pMiR-LucTM是一系列基于荧光素酶的报告载体，用于定量测定细胞中的miRNA表达。每种载体含有CMV启动子、荧光素酶基因、独特的3 ' UTR miRNA靶位点和SV40终止子序列。 靶位点是与特定miRNA完全互补的序列。 当miRNA表达时，miRNA与该序列结合，导致荧光素酶基因表达的抑制。 因此，荧光素酶的活性代表miRNA的表达的活性。 当pMiR-Luc报告载体转染哺乳动物细胞时，可用于检测内源性的miRNA表达和活性或者用于监测miRNAs的上调或下调。 　　A. 优点: 　　MiRNA 荧光素酶报告载体具有以下优点: 　　· 功能性检测 –是一种功能性的分析方法，用于监测细胞内的miRNA表达. 　　· 可定量分析 - miRNAs表达和活性通过荧光素酶基因表达的抑制进行监测. 　　· 可构建稳定细胞系 –载体可用于构建表达报告基因的稳定细胞系 　　B. 原理： 　　MiRNA在荧光素酶RNA下游的3' UTR与靶位点结合，抑制荧光素酶表达，使酶活性下降。 通过比较二个样品中的酶的活性， miRNA是上调还是下调可以定量测定。MiRNA报告载体见下表(如需要表中未列出的，可订制)。

　　microRNAs (miRNAs)是非编码的小分子， 30%哺乳动物的基因由miRNAs调控。 到目前为止，小鼠的染色体上已确定有数百种 miRNAs，其中许多miRNA只相差一个或者几个核苷酸。 成熟miRNAs的表达是组织特异的。miRNAs丰度可相差几个数量级。美国Signosis公司小鼠芯片可检测119种小鼠的miRNAs。 　　A. 优点: 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7转录扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单–--步骤简单、流畅 　　B. 原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同：(1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大 (2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每个引物只识别miRNA一半的序列。其中的一个引物中含有标示序列(Tag)，另外一个引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两个引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者连接失败。这也是T7-OLA技术的产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一个引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两个引物在T4连接酶的作用下，被连接成一个DNA片断。随后经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司小鼠miRNA芯片试剂测定119个鼠miRNAs及其同源的表达。步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA引导下两个引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断。

　　基因表达进行反转录时常常需要RNA制备。美国Signosis公司CLTM细胞裂解液无需RNA制备可直接用细胞裂解液进行反转录，因此少量的细胞可进行RT-PCR分析。Signosis公司提供的优化RT-PCR试剂，用于CLTM细胞裂解液进行细胞裂解后的RT-PCR，其包括CLTM细胞裂解液和所有cDNA合成和PCR扩增的试剂。 　　A. 优点： 　　美国Signosis公司直接用细胞裂解液的RT-PCR试剂具有以下优点： 　　·便利---从细胞裂解、反转录直到PCR，试剂盒包含了所有试剂。 　　·无需RNA制备---细胞裂解液可直接用于反转录。 　　·功能强大---该试剂可获得全长的cDNA 　　B. 原理： 　　缓冲液已优化适于进行细胞裂解物制备和RT-PCR。

　　microRNAs (miRNAs)在基因表达的调控方面具有重要性。哺乳动物30%的基因由miRNAs调控。 到目前为止，人的染色体上确定有500多种 miRNAs，其中许多miRNA只相差一个或者几个核苷酸。 成熟miRNAs的表达是组织特异的。miRNAs丰度可相差几个数量级。 更重要的是miRNA表达的错误调控涉及到人的不可治愈症。 系统检测miRNA表达显示一些不可治愈症存在独有的特征。人miRNA芯片检测试剂IV可检测100种miRNA。 　　A. 优点: 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7转录扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单---步骤简单、流畅 　　B. 原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同： (1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大 (2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每条引物只识别miRNA一半的序列。其中的一条引物中含有标示序列(Tag)，另外一条引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两个引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者随后连接的失败。这也是T7-OLA技术的产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一条引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两引物在T4连接酶的作用下，被连接成一条DNA片断。随后经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司miRNA芯片II试剂测定72个最有影响的miRNAs及其同源的表达。 步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA引导下两引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断

　　凋亡涉及一系列生化活动，这些活动导致特征性的细胞形态和死亡，包括细胞膜的变化，细胞收缩，核碎裂，染色质浓缩，染色体DNA断裂。在发育期和机体均衡期，把不要的细胞除去是非常重要的。过渡凋亡引起营养不足，如脑缺血损伤;而不充分的凋亡导致细胞增殖失控。MicroRNAs (miRNAs)是非编码的小RNA分子，调控30%哺乳动物基因的表达。许多miRNAs对凋亡细胞信号调控有影响，如miR-145，miR-216，miR-182，miR-96 miRNAs的过渡表达导致天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3的活性下降。美国Signosis公司开发的miRNA芯片检测凋亡相关的52种miRNAs。检测这些miRNAs的表达有助于揭示凋亡的miRNAs调控机制。 　　A. 优点: 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7启动子扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单---步骤简单、流畅 　　B. 原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同：(1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大(2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但是这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每个引物只识别miRNA一半的序列。其中的一个引物中含有标示序列(Tag)，另外一个引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两个引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者随后连接的失败。这也是T7-OLA技术的产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一个引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两个引物在T4连接酶的作用下，被连接成一个DNA片断。随后，经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司miRNA芯片试剂测定52个凋亡相关的miRNAs及其同源的表达。 步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA下两个引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断。

　　在胚胎发育的过程中，干细胞可以分化形成所有的胚胎组织。在成人有机体，干细胞和祖细胞作为身体的修复系统，重新补充专业细胞，以维持再生器官正常转交，例如血液、皮肤或者小肠组织。 最近研究提出干细胞的维护和分化是由microRNAs (miRNA)调控的。miRNA是一段小的非编码RNA分子(大约20个核苷酸长)，对基因的表达调控和细胞分化起着重要的作用。研究发现干细胞的正常维持和分化是受到miRNA严格调控的。在干细胞中，miRNA的表达水平也不一样。例如，在神经线性分化的过程中，脑组织特异性的miR-124a和miR-9的表达差别很大。据报导miRNA也调控癌症干细胞。干细胞miRNA芯片是专门检测干细胞维持和分化相关的69种miRNA表达水平，可以用于人源，小鼠，以及大鼠的样品。对干细胞miRNA表达的研究可以帮助了解干细胞的调控机制。 　　A. 优点: 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7转录扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单---步骤简单、流畅 　　B.原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同(1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大 (2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。 所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。 一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每个引物只识别miRNA一半的序列。其中的一个引物中含有标示序列(Tag)，另外一个引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两个引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者随后连接的失败。这也是T7-OLA技术的产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一个引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两个引物在T4连接酶的作用下，被连接成一个DNA片断。随后经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司miRNA芯片试剂测定69种干细胞相关的miRNAs及其同源的表达。 步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA引导下两个引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断。

　　细胞因子是不同细胞类型产生的细胞外信号蛋白，其作用于靶细胞，调节靶细胞多种多样的细胞功能，如吸引特定类型的细胞到炎症部位，增加免疫细胞活性和生存期，抑制细胞反应。 炎症是对组织损伤的反应。 在急性和慢性炎症过程中，多种可溶性因子参与细胞浸润，细胞激活和炎症的全身反应。 细胞因子是炎症反应的主要方式。 多数细胞因子是以自分泌或旁分泌的方式作用于局部或全身的多功能分子。 细胞因子介入的广泛网络，具有协同性和对抗性相互作用，对各种靶细胞发挥着负性的和正性的调节作用。 所以，描述细胞因子的表达方式为洞察潜在的免疫机制提供可贵的视角。美国Signosis 鼠炎症细胞因子复合酶免法平行检测试剂可定量测定和描述8种细胞因子：TNFa, IFNr, G-CSF, GM-CSF, IL-1a, IL-8, IP-10, and Rantes 　　A. 优点: 　　· 多种复合---单一ELISA板条可同时测定8种炎症生物标记物 　　· 灵活弹性---单一板块可比较2个样品到12个样品 　　· 差别定量---不同于膜芯片方法，样品中各个蛋白的区别可以定量比较。另外， EA- 1052为做标准曲线提供标准品。 　　· 勿需贵重仪器---不同于珠式的检测方法，勿需贵重仪器 　　· 操作简单---12x 8孔预包被板的完整试剂系统 　　B. 原理 　　板条每个孔包被有针对炎症生物标记蛋白的特异抗体，8个孔包被有8不同抗体，一个板条8个孔可测定8不同蛋白质。待测样品可同时与二个抗体组成的抗体对反应，炎症细胞因子夹在固相抗体和酶标记抗体中间。 孵育后，洗涤板孔除去未结合的标记抗体。 加入HRP底物TMB，产生蓝色反应，加入终止液后转成黄色。 炎症细胞因子的浓度与待测样品颜色深浅成正比。待测样品 450 nm处测定吸光值进行定量。

　　研究基因表达常常需要RNA制备后再进行cDNA合成和PCR。不过要获得用于RNA制备的大量细胞之困难成为一些研究工作的瓶颈，如激光切割的样本，FACS分拣的细胞和在96孔板中培养的细胞。细胞数量有限(

　　miRNA是小的非编码RNAs，通过选择性的与互补的mRNA序列结合控制着转录水平的基因表达。近30%哺乳动物基因受小RNA分子的调控，从而调节各种生物功能，包括发育、细胞分化、增殖、凋亡、维持stemness和impriting。Northern blot是分析各种miRNAs常用的方法，尽管最近出现了一些新的方法，如实时定量PCR和定量测定miRNAs的侵入者探针法，但Northern blot分析的灵敏度低、通量差仍是其主要不足，实时定量PCR和侵入者探针法需要cDNA转换。美国Signosis基于其自有的专利技术-miRNA微孔板检测无需将miRNA分子转换成cDNAs，检测步骤主要是孵育和洗涤，非常简单。 　　miR-133和miR-1在心脏和骨骼肌中优势表达。在心脏细胞的分化、增殖和凋亡中发挥重要作用。二者聚集在相同的染色体位点，在发育过程中，以一种组织特异的方式共同转录，但在肌肉增殖、分化和凋亡中有不同的功能。许多重要的靶已得以认识和明确，如成肌纤维母细胞增殖中miR-133的靶是血清反应因子(SRF)，mygenesis中miR-1的靶是histone deacetylase (HDAC4)，miR-133的靶是caspase-9，心肌细胞凋亡中miR-1的靶HSP60和HSP70，细胞外基质蛋白增加(纤维变性)中miR-133和miR-1的靶是结缔组织生长因子(CTGF)，更为重要的是miRNA表达的异常调节与病人患病的心脏相关联，因此具有做为心血管病诊断标记物和治疗靶点的巨大潜力。下图2所示miR-133和miR-1是Signosis的miRNA微孔板检测试剂分析检测结果。 　　A.优点： 　　美国Signosis基于其自有专利技术的miRNA微孔板检测试剂具有下列优点： 　　·操作简单---做miRNA试验象做ELISA试验，无需用酶转换miRNA成cDNA，检测步骤只是孵育和洗涤。 　　·灵敏度高---较miRNA Northern blotting分析敏感100倍。 　　·分辨力强---在分辨同源miRNA 时，较Northern blot有更高的分辨力。 　　·差别定量---二个或二个以上特定miRNA表达的差异可定量分析。 　　B.原理： 　　基于自有专利miRNA微孔板检测中，一个miRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接，一个连接oligo与捕获oligo和待测的miRNA部分杂交，另一个连接oligo与检测oligo和待测的miRNA另一部分杂交，杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固者在微孔板上，再由辣根酶标记链酶亲和素和发光底物检测，这种杂交体结构对miRNA分子序列非常敏感，一个核苷酸的差异即会阻止杂交体的形成，从而可分辨同源miRNA，而Northern blot则很难鉴别同源miRNA，此外该方法的敏感性较Northern blot高。

　　Wnt信号通路对胚胎发育生成非常重要。β-Catenin，通路的中心部分，做为转录因子TCF/LEF家族的辅因子进行活动，通过与下游靶基因启动子结合激活Wnt靶基因的转录参与细胞增殖、生存和转移。许多蛋白包括APC和Axin参与Wnt信号通路的调控。美国Signosis公司Wnt/b-Catenin信号通路cDNA微孔板阵列试剂可同时测定20多个参与此通路的相关基因表达。不同样本这些基因表达差异可应用该试剂盒进行测定。 　　A. 优点： 　　美国Signosis公司基于其自有的cDNA微孔板阵列专利技术研发的小鼠Wnt/b-Catenin调控的cDNA微孔板阵列检测试剂具有以下优点： 　　·操作简单---做基因表达试验像做ELISA酶免试验一样简单。 　　·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 　　·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 　　B. 原理： 　　美国Signosis 公司自有的cDNA微孔板阵列专利检测技术是基于微孔板杂交的检测方法，该方法是将mRNA反转录成cDNA来检测多种基因的表达。与芯片分析方法相似，加入生物素-dUTP后，总RNA先转录成生物素标记的cDNA。通过预包被在微孔板上的特异的寡核酸，将靶基因捕获到微孔板上(而不是膜上)。捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物，cDNA的浓度与待测标本的发光强度成正比。