细胞因子是不同细胞类型产生的细胞外信号蛋白，其作用于靶细胞，调节靶细胞多种多样的细胞功能，如吸引特定类型的细胞到炎症部位，增加免疫细胞活性和生存期，抑制细胞反应。 炎症是对组织损伤的反应。 在急性和慢性炎症过程中，多种可溶性因子参与细胞浸润，细胞激活和炎症的全身反应。 细胞因子是炎症反应的主要方式。 多数细胞因子是以自分泌或旁分泌的方式作用于局部或全身的多功能分子。 细胞因子介入的广泛网络，具有协同性和对抗性相互作用，对各种靶细胞发挥着负性的和正性的调节作用。 所以，描述细胞因子的表达方式为洞察潜在的免疫机制提供可贵的视角。美国Signosis 鼠炎症细胞因子复合酶免法平行检测试剂可定量测定和描述8种细胞因子：TNFa, IFNr, G-CSF, GM-CSF, IL-1a, IL-8, IP-10, and Rantes 　　A. 优点: 　　· 多种复合---单一ELISA板条可同时测定8种炎症生物标记物 　　· 灵活弹性---单一板块可比较2个样品到12个样品 　　· 差别定量---不同于膜芯片方法，样品中各个蛋白的区别可以定量比较。另外， EA- 1052为做标准曲线提供标准品。 　　· 勿需贵重仪器---不同于珠式的检测方法，勿需贵重仪器 　　· 操作简单---12x 8孔预包被板的完整试剂系统 　　B. 原理 　　板条每个孔包被有针对炎症生物标记蛋白的特异抗体，8个孔包被有8不同抗体，一个板条8个孔可测定8不同蛋白质。待测样品可同时与二个抗体组成的抗体对反应，炎症细胞因子夹在固相抗体和酶标记抗体中间。 孵育后，洗涤板孔除去未结合的标记抗体。 加入HRP底物TMB，产生蓝色反应，加入终止液后转成黄色。 炎症细胞因子的浓度与待测样品颜色深浅成正比。待测样品 450 nm处测定吸光值进行定量。

　　核受体是细胞转录因子，影响各种功能，包括脂肪酸代谢、发育和生理平衡，直接调控基因表达，或通过与靶基因启动子区域特异的序列因子结合，或通过与其它蛋白相互作用，如其它的转录因子，以对脂质分子应答。美国Signosis公司提供24种特定的带有Myc标记的核受体CMV表达载体，与高特异性的抗Myc标记抗体一起，可应用于蛋白质相互作用的免疫共沉淀。 　　A. 优点: 　　核受体 Myc 标记的表达载体具有以下优点: 　　· 功能性分析 – 载体可用于基于细胞的方法监测核受体的功能。 　　· 共沉淀 – Myc标记蛋白可与高特异性的Myc标记抗体共沉淀。 　　· 构建稳定细胞系 –载体可用于构建稳定的细胞系. 　　B. 原理： 　　载体可转染到相应细胞，用于研究特异的核受体功能，如蛋白之间的相互作用，载体转染入细胞时，核受体表达为c-Myc抗原表位标记。抗c-Myc单抗与相互作用的蛋白一起免疫沉淀核受体蛋白。

　　哺乳动物miRNAs在组织中的丰度变化很大，例如，miR-133在骨骼肌中表达很高，在心脏中等 ，其它组织未检测到。要检测低表达的miRNA需要高灵敏的方法。美国Signosis高敏miRNA Northern Blot 试剂较常规基于生物素的化学发光检测的敏感10-100倍。 　　A.优点： 　　高敏miRNA Northern Blot 试剂具有下列优点： 　　·灵敏度高---较常规基于单生物素检测灵敏10-100倍。 　　·步骤简单---用总RNA点样杂交，HRP检测。 　　·无同位素---基于化学发光检测。 　　·探针预制---用生物素预标记和多生物素放大探针。 　　B.原理： 　　RNA样品经过凝胶电泳分离、转移至膜上。特定的miRNA的表达通过生物素标记探针---与miRNA互补的序列和标示序列进行检测，标示序列通过多生物素放大试剂检测。

　　miRNA是小的非编码RNAs，通过选择性的与互补的mRNA序列结合控制着转录水平的基因表达。近30%哺乳动物基因受小RNA分子的调控，从而调节各种生物功能，包括发育、细胞分化、增殖、凋亡、维持stemness和impriting。Northern blot是分析各种miRNAs常用的方法，尽管最近出现了一些新的方法，如实时定量PCR和定量测定miRNAs的侵入者探针法，但Northern blot分析的灵敏度低、通量差仍是其主要不足，实时定量PCR和侵入者探针法需要cDNA转换。美国Signosis基于其自有的专利技术-miRNA微孔板检测无需将miRNA分子转换成cDNAs，检测步骤主要是孵育和洗涤，非常简单。 　　miR-133和miR-1在心脏和骨骼肌中优势表达。在心脏细胞的分化、增殖和凋亡中发挥重要作用。二者聚集在相同的染色体位点，在发育过程中，以一种组织特异的方式共同转录，但在肌肉增殖、分化和凋亡中有不同的功能。许多重要的靶已得以认识和明确，如成肌纤维母细胞增殖中miR-133的靶是血清反应因子(SRF)，mygenesis中miR-1的靶是histone deacetylase (HDAC4)，miR-133的靶是caspase-9，心肌细胞凋亡中miR-1的靶HSP60和HSP70，细胞外基质蛋白增加(纤维变性)中miR-133和miR-1的靶是结缔组织生长因子(CTGF)，更为重要的是miRNA表达的异常调节与病人患病的心脏相关联，因此具有做为心血管病诊断标记物和治疗靶点的巨大潜力。下图2所示miR-133和miR-1是Signosis的miRNA微孔板检测试剂分析检测结果。 　　A.优点： 　　美国Signosis基于其自有专利技术的miRNA微孔板检测试剂具有下列优点： 　　·操作简单---做miRNA试验象做ELISA试验，无需用酶转换miRNA成cDNA，检测步骤只是孵育和洗涤。 　　·灵敏度高---较miRNA Northern blotting分析敏感100倍。 　　·分辨力强---在分辨同源miRNA 时，较Northern blot有更高的分辨力。 　　·差别定量---二个或二个以上特定miRNA表达的差异可定量分析。 　　B.原理： 　　基于自有专利miRNA微孔板检测中，一个miRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接，一个连接oligo与捕获oligo和待测的miRNA部分杂交，另一个连接oligo与检测oligo和待测的miRNA另一部分杂交，杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固者在微孔板上，再由辣根酶标记链酶亲和素和发光底物检测，这种杂交体结构对miRNA分子序列非常敏感，一个核苷酸的差异即会阻止杂交体的形成，从而可分辨同源miRNA，而Northern blot则很难鉴别同源miRNA，此外该方法的敏感性较Northern blot高。

　　NF-kB在调控免疫、炎症、发育、细胞生长和凋亡的生物学过程中发挥重要作用。针对刺激如压力、细胞因子、自由基、紫外线、细菌和病毒抗原的应答中，NF-kB激活后，从细胞质转至细胞核，在此与启动子区的相应因子结合，调节广泛的基因表达谱。不正常的NF-kB活性与癌症、炎症和自身免疫和病毒感染相关联。监测NF-kB活性对揭示这些疾病的机理和药物发现至关重要。美国Signosis 建立的NFKB荧光素酶报告载体Hela稳定细胞系，其荧光素酶活性与NFKB活性特异性的关联。因此，细胞系可用作报告系统，以监测不同应用中NFKB的活性，如药物发现。 　　A. 优点： 　　·NFkB荧光素酶报告载体Hela稳定细胞系具有下列优势： 　　· 高敏感性和反应性——细胞系对TNF刺激反应诱导信号高，动力学反应宽。 　　·一致性——用NFKB反应因子构建的NFKB报告载体在细胞系中稳定表达，避免了实验变异。 　　·节省时间——细胞系即用于研究NFKB信号传导。 　　B. 原理： 　　NFKB荧光酶报告载体转染建立的细胞系，带有可进行潮霉素筛选的潮霉素表达载体，TNF-α诱导的荧光素酶活性筛选出潮霉素抗性克隆。筛选出的高诱导倍数(100倍)的克隆，再扩大产生稳定的细胞系。

　　人或组织的miRNA的表达具有差异性。miRNA芯片可用来了解众多miRNA差异表达的水平。MiRNA表达、组织分布和芯片检定方法常常要用Northern Blot，以便直接观察miRNA表达的差异及成熟miRNA大小(以内参照RNU48 RNA做比较)。美国Signosis公司 miRNA Northern 印迹检测试剂是一种非放射性的、简单的、高灵敏的分析工具，试剂盒提供了Northern 印迹分析所需要的所有组分。更重要的是，该方法不需要放射性标记探针，可提供生物素预标记的多种不同探针。 　　A. 优点 　　和市场上同类产品相比， 该产品具有以下优点： 　　· 无同位素----基于化学发光检测 　　· 勿需制备探针---- 提供生物素预标记探针 　　· 试剂盒提供试验全部所需---提供凝胶，膜，RNA转移液，杂交液，检测液 　　· 实验步骤简单 ---操作简单流畅 　　B. 原理 　　RNA样品通过胶凝胶电泳分离并转移到膜上。 特定miRNA表达用生物素标记的探针检测。

　　microRNAs (miRNAs)在基因表达的调控方面具有重要性。哺乳动物30%的基因由miRNAs调控。 到目前为止，人的染色体上确定有500多种 miRNAs，其中许多miRNA只相差一个或者几个核苷酸。 成熟miRNAs的表达是组织特异的。miRNAs丰度可相差几个数量级。 更重要的是miRNA表达的错误调控涉及到人的不可治愈症。 系统检测miRNA表达显示一些不可治愈症存在独有的特征。 　　A. 优点: 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7转录扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单---步骤简单、流畅 　　B. 原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同： (1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大 (2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每条引物只识别miRNA一半的序列。其中的一条引物中含有标示序列(Tag)，另外一条引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两个引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者随后连接的失败。这也是T7-OLA技术的产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一条引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两引物在T4连接酶的作用下，被连接成一条DNA片断。随后经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司miRNA芯片II试剂测定72个最有影响的miRNAs及其同源的表达。 步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA引导下两引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断。

　　白介素-8 (IL-8)是巨噬细胞和其它类型细胞如上皮细胞产生的细胞因子。 IL-8作用于许多细胞如内皮细胞，巨噬细胞，肥大细胞，角化细胞，但是嗜中性粒细胞是主要的靶细胞。 IL-8通过吸引嗜中性细胞到炎症部位成为炎症反应的主要参与者。 IL-8还是一个强的血管生成因子。 　　A. 优点： 　　· 性价比高---高质量，低价格。 　　· 高效灵活---多个样品可同时分析，灵活确定分析试样的数量。 　　· 特异性强---优选高度特异的针对人IL-8的配对抗体。 　　· 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统 　　B. 原理： 　　IL-8试剂为固相酶免法。 方法采用羊抗人IL-8抗体做为微孔板的固相捕获抗体，生物素标记的羊抗人IL-8抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测， 待测样品IL-8夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应，随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后，洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物，产生蓝色反应， 加入终止液后转成黄色。IL-8的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比，450 nm处测定吸光值进行定量。

　　Wnt信号通路对胚胎发育生成非常重要。β-Catenin，通路的中心部分，做为转录因子TCF/LEF家族的辅因子进行活动，通过与下游靶基因启动子结合激活Wnt靶基因的转录参与细胞增殖、生存和转移。许多蛋白包括APC和Axin参与Wnt信号通路的调控。美国Signosis公司Wnt/b-Catenin信号通路cDNA微孔板阵列试剂可同时测定20多个参与此通路的相关基因表达。不同样本这些基因表达差异可应用该试剂盒进行测定。 　　A. 优点： 　　美国Signosis公司基于其自有的cDNA微孔板阵列专利技术研发的小鼠Wnt/b-Catenin调控的cDNA微孔板阵列检测试剂具有以下优点： 　　·操作简单---做基因表达试验像做ELISA酶免试验一样简单。 　　·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 　　·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 　　B. 原理： 　　美国Signosis 公司自有的cDNA微孔板阵列专利检测技术是基于微孔板杂交的检测方法，该方法是将mRNA反转录成cDNA来检测多种基因的表达。与芯片分析方法相似，加入生物素-dUTP后，总RNA先转录成生物素标记的cDNA。通过预包被在微孔板上的特异的寡核酸，将靶基因捕获到微孔板上(而不是膜上)。捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物，cDNA的浓度与待测标本的发光强度成正比。

　　肌红蛋白是一种血红素蛋白，存在于心肌和骨骼肌，携带氧气。肌肉受损时，如心脏病发作，大量的肌红蛋白释放，造成血液水平迅速上升。肌红蛋白是上升超过正常水平的第一个标志物之一。肌红蛋白水平在心脏病发作后2-4个小时内超过基线水平，9-12个小时达到高峰，24-36个小时回到基线水平。在没有骨骼肌损伤或其它非心脏病引起的循环肌红蛋白增加时，其水平可用做早期心肌梗塞的标志。 　　A. 优点： 　　· 性价比高——高质量，低价格 　　· 高效灵活——多个样品可同时分析，灵活确定分析试样的数量 　　· 特异性强——优选高度特异的针对肌红蛋白的配对抗体 　　· 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 　　B. 原理 　　肌红蛋白试剂为固相酶免法。方法采用抗肌红蛋白的鼠单克隆抗体做为微孔板的固相捕获抗体，辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗肌红蛋白抗体做检测抗体，待测样品中的肌红蛋白可同时与捕获抗体和标记抗体反应。孵育后，洗去未结合的标记抗体。加入HRP底物TMB产生蓝色反应，加入终止液后转成黄色。肌红蛋白的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比，450nm处测定吸光值进行定量。