miRNA是小的非编码RNAs，通过选择性的与互补的mRNA序列结合控制着转录水平的基因表达。近30%哺乳动物基因受小RNA分子的调控，从而调节各种生物功能，包括发育、细胞分化、增殖、凋亡、维持stemness和impriting。Northern blot是分析各种miRNAs常用的方法，尽管最近出现了一些新的方法，如实时定量PCR和定量测定miRNAs的侵入者探针法，但Northern blot分析的灵敏度低、通量差仍是其主要不足，实时定量PCR和侵入者探针法需要cDNA转换。美国Signosis基于其自有的专利技术-miRNA微孔板检测无需将miRNA分子转换成cDNAs，检测步骤主要是孵育和洗涤，非常简单。 　　miR-133和miR-1在心脏和骨骼肌中优势表达。在心脏细胞的分化、增殖和凋亡中发挥重要作用。二者聚集在相同的染色体位点，在发育过程中，以一种组织特异的方式共同转录，但在肌肉增殖、分化和凋亡中有不同的功能。许多重要的靶已得以认识和明确，如成肌纤维母细胞增殖中miR-133的靶是血清反应因子(SRF)，mygenesis中miR-1的靶是histone deacetylase (HDAC4)，miR-133的靶是caspase-9，心肌细胞凋亡中miR-1的靶HSP60和HSP70，细胞外基质蛋白增加(纤维变性)中miR-133和miR-1的靶是结缔组织生长因子(CTGF)，更为重要的是miRNA表达的异常调节与病人患病的心脏相关联，因此具有做为心血管病诊断标记物和治疗靶点的巨大潜力。下图2所示miR-133和miR-1是Signosis的miRNA微孔板检测试剂分析检测结果。 　　A.优点： 　　美国Signosis基于其自有专利技术的miRNA微孔板检测试剂具有下列优点： 　　·操作简单---做miRNA试验象做ELISA试验，无需用酶转换miRNA成cDNA，检测步骤只是孵育和洗涤。 　　·灵敏度高---较miRNA Northern blotting分析敏感100倍。 　　·分辨力强---在分辨同源miRNA 时，较Northern blot有更高的分辨力。 　　·差别定量---二个或二个以上特定miRNA表达的差异可定量分析。 　　B.原理： 　　基于自有专利miRNA微孔板检测中，一个miRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接，一个连接oligo与捕获oligo和待测的miRNA部分杂交，另一个连接oligo与检测oligo和待测的miRNA另一部分杂交，杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固者在微孔板上，再由辣根酶标记链酶亲和素和发光底物检测，这种杂交体结构对miRNA分子序列非常敏感，一个核苷酸的差异即会阻止杂交体的形成，从而可分辨同源miRNA，而Northern blot则很难鉴别同源miRNA，此外该方法的敏感性较Northern blot高。

　　Oligo-dT 96 mRNA捕获试剂 　　Oligo-dT 96 mRNA捕获试剂采用寡核苷酸包埋技术，从悬浮和贴壁细胞中纯化mRNA，是一种简单、低成本、快速的方法。该试剂盒纯化的mRNA可用于cDNA合成、PCR(CL-0002)和实时PCR(CL-0003)。 　　A. 优点: 　　Signosis的Oligo-dT 96 mRNA捕获试剂具有以下优点: 　　· 快速简单 – 试剂盒包含所有组分，mRNA可以用96孔板直接从细胞中捕获纯化。 　　· 成本低廉 – 一盒成本低廉的试剂可获得96种mRNA。 　　B. 原理： 　　Oligo-dT 96 mRNA捕获试剂可从各种类型细胞中快速纯化mRNA。该项技术是在预包被Oligo-dT的 96孔中，简单的加入细胞裂解液，mRNA与每孔中的Oligo-dT杂交，洗去未结合的，分离和纯化的mRNA再进一步被洗脱，用于cDNA合成和PCR。

　　哺乳动物miRNAs在组织中的丰度变化很大，例如，miR-133在骨骼肌中表达很高，在心脏中等 ，其它组织未检测到。要检测低表达的miRNA需要高灵敏的方法。美国Signosis高敏miRNA Northern Blot 试剂较常规基于生物素的化学发光检测的敏感10-100倍。 　　A.优点： 　　高敏miRNA Northern Blot 试剂具有下列优点： 　　·灵敏度高---较常规基于单生物素检测灵敏10-100倍。 　　·步骤简单---用总RNA点样杂交，HRP检测。 　　·无同位素---基于化学发光检测。 　　·探针预制---用生物素预标记和多生物素放大探针。 　　B.原理： 　　RNA样品经过凝胶电泳分离、转移至膜上。特定的miRNA的表达通过生物素标记探针---与miRNA互补的序列和标示序列进行检测，标示序列通过多生物素放大试剂检测。

　　NF-kB在调控免疫、炎症、发育、细胞生长和凋亡的生物学过程中发挥重要作用。针对刺激如压力、细胞因子、自由基、紫外线、细菌和病毒抗原的应答中，NF-kB激活后，从细胞质转至细胞核，在此与启动子区的相应因子结合，调节广泛的基因表达谱。不正常的NF-kB活性与癌症、炎症和自身免疫和病毒感染相关联。监测NF-kB活性对揭示这些疾病的机理和药物发现至关重要。美国Signosis 建立的NFKB荧光素酶报告载体Hela稳定细胞系，其荧光素酶活性与NFKB活性特异性的关联。因此，细胞系可用作报告系统，以监测不同应用中NFKB的活性，如药物发现。 　　A. 优点： 　　·NFkB荧光素酶报告载体Hela稳定细胞系具有下列优势： 　　· 高敏感性和反应性——细胞系对TNF刺激反应诱导信号高，动力学反应宽。 　　·一致性——用NFKB反应因子构建的NFKB报告载体在细胞系中稳定表达，避免了实验变异。 　　·节省时间——细胞系即用于研究NFKB信号传导。 　　B. 原理： 　　NFKB荧光酶报告载体转染建立的细胞系，带有可进行潮霉素筛选的潮霉素表达载体，TNF-α诱导的荧光素酶活性筛选出潮霉素抗性克隆。筛选出的高诱导倍数(100倍)的克隆，再扩大产生稳定的细胞系。

　　microRNAs (miRNAs)在基因表达的调控方面具有重要性。哺乳动物30%的基因由miRNAs调控。 到目前为止，人的染色体上确定有500多种 miRNAs，其中许多miRNA只相差一个或者几个核苷酸。 成熟miRNAs的表达是组织特异的。miRNAs丰度可相差几个数量级。 更重要的是miRNA表达的错误调控涉及到人的不可治愈症。 系统检测miRNA表达显示一些不可治愈症存在独有的特征。 　　A. 优点: 　　美国Signosis公司基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点 　　· 分辨力强---能分辨所有同源的miRNA ，所有同源的let7可清楚分辨 　　· 线性扩增---捕获的miRNAs被T7转录扩增，没有PCR扩增引入的偏差 　　· 勿需预纯化---总RNA可以直接进行分析， 勿需预分离 　　· 操作简单---步骤简单、流畅 　　B. 原理 　　miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同： (1) miRNAs是相当小的分子，丰度差异较大 (2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存，只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一个或几个核苷酸不同。所以，常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。一些miRNA芯片产品市面上也可买到，但这些产品或者繁琐需预分离microRNA，或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异，或者对低丰度的miRNAs不够敏感。 　　对每一个miRNA分子，有二条引物(oligo)来识别，每条引物只识别miRNA一半的序列。其中的一条引物中含有标示序列(Tag)，另外一条引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候，两个引物才能和miRNA杂交，形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者随后连接的失败。这也是T7-OLA技术的产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性，该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin，B)的短序列通过互补结合到其中的一条引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后，两引物在T4连接酶的作用下，被连接成一条DNA片断。随后经过线性扩增(转录)，含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜，进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应，加入发光底物测定。 　　美国Signosis公司miRNA芯片II试剂测定72个最有影响的miRNAs及其同源的表达。 步骤简单、流畅，包括三步： (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合，形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体，除去游离的寡核苷酸，在miRNA引导下两引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录，扩增连接的DNA片断。

　　人或组织的miRNA的表达具有差异性。miRNA芯片可用来了解众多miRNA差异表达的水平。MiRNA表达、组织分布和芯片检定方法常常要用Northern Blot，以便直接观察miRNA表达的差异及成熟miRNA大小(以内参照RNU48 RNA做比较)。美国Signosis公司 miRNA Northern 印迹检测试剂是一种非放射性的、简单的、高灵敏的分析工具，试剂盒提供了Northern 印迹分析所需要的所有组分。更重要的是，该方法不需要放射性标记探针，可提供生物素预标记的多种不同探针。 　　A. 优点 　　和市场上同类产品相比， 该产品具有以下优点： 　　· 无同位素----基于化学发光检测 　　· 勿需制备探针---- 提供生物素预标记探针 　　· 试剂盒提供试验全部所需---提供凝胶，膜，RNA转移液，杂交液，检测液 　　· 实验步骤简单 ---操作简单流畅 　　B. 原理 　　RNA样品通过胶凝胶电泳分离并转移到膜上。 特定miRNA表达用生物素标记的探针检测。

　　肌钙蛋白是三种蛋白——肌钙蛋白T、I和C的复合体，其结合到横纹肌的细丝(肌动蛋白)上，通过钙结合量调控肌肉收缩。肌细胞(心脏或骨骼肌)受损时，游离肌钙蛋白亚单位与肌钙蛋白复合体一起释放入血液。肌钙蛋白亚单位I有三种同型异构体; 二种在骨骼肌，一种在心肌。 由于组织特异性，心脏肌钙蛋白I(cTnI) 对急诊室(ED)就诊的胸口痛患者的鉴别诊断具有实用价值，是诊断急性心肌梗塞(AMI)首选的生物标志物。心脏TnI与CK-MB一样有类似的释放方式(疼痛发作后4-6个小时，梗塞后大约12个到24个小时达到高峰)。然而cTnI在相当长的时期(6-10天) 依然维持高水平，因而对心脏损害的诊断提供一个较长的窗口期。武汉中帜生物科技有限公司cTnI酶免法可快速，敏感和可靠的定量检测心脏特异肌钙蛋白。试剂的灵敏度为1.0 ng/ml，不与人心脏肌钙蛋白T或骨骼肌钙蛋白T或I交叉。 　　A. 优点： 　　· 性价比高——高质量，低价格 　　· 高效灵活——多个样品可同时分析，灵活确定分析试样的数量 　　· 特异性强——优选高度特异的针对cTnI的配对抗体 　　· 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 　　B.技术原理 　　肌钙蛋白I 试剂为固相酶免法。方法采用针对cTnI不同抗原决定簇的三种鼠单克隆抗体做为微孔板的固相捕获抗体，辣根过氧化物酶(HRP)标记的鼠抗cTnI单克抗体做检测抗体，待测样品中的cTnI可同时与捕获抗体和标记抗体反应。孵育后，洗去未结合的标记抗体。加入HRP底物TMB产生蓝色反应，加入终止液后转成黄色。cTnI的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比，450nm处测定吸光值进行定量。 　　A. 优点： 　　· 性价比高——高质量，低价格 　　· 高效灵活——多个样品可同时分析，灵活确定分析试样的数量 　　· 特异性强——优选高度特异的针对cTnI的配对抗体 　　· 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 　　B.技术原理 　　肌钙蛋白I 试剂为固相酶免法。方法采用针对cTnI不同抗原决定簇的三种鼠单克隆抗体做为微孔板的固相捕获抗体，辣根过氧化物酶(HRP)标记的鼠抗cTnI单克抗体做检测抗体，待测样品中的cTnI可同时与捕获抗体和标记抗体反应。孵育后，洗去未结合的标记抗体。加入HRP底物TMB产生蓝色反应，加入终止液后转成黄色。cTnI的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比，450nm处测定吸光值进行定量。

　　脂肪细胞因子是由脂肪细胞产生的一组不同的效应分子。脂肪因子异常表达如抵抗素同胰岛素抵抗和人类其它代谢的和心血管的疾病发展有关。鼠抵抗素被描述为一种新的肥胖症介导的脂肪因子，在禁食期间，抵抗素通过影响脂肪组织内胰岛素刺激的葡萄糖摄取和肝脏葡萄糖的产生削弱葡萄糖的体内平衡。然而，在人抵抗素最初有二种相反的观点。一些研究表明抵抗素和肥胖症相关。血清抵抗素水平随着肥胖增加而增加，随着药物治疗减少的肥胖而降低。然而其它研究提出了矛盾的结果，抵抗素血清含量随着肥胖增加而显著减少。抵抗素也显示增加促炎细胞因子包括IL-1、IL-6、IL-12和经由 NF-rB的TNF-a的表达. 　　A. 优点： 　　· 性价比高——高质量，低价格 　　· 高效灵活——多个样品可同时分析，灵活确定分析试样的数量 　　· 特异性强——优选高度特异的针对人抵抗素的配对抗体 　　· 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 　　B. 原理： 　　人抵抗素试剂为固相酶免法。方法采用鼠抗人抵抗素抗体做为微孔板的固相捕获抗体，生物素标记的鼠抗人抵抗素检测抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测，待测样品抵抗素夹在捕获抗体和检测抗体之间与二者反应，随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后，洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物，产生蓝色反应，加入终止液后转成黄色。抵抗素的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比，450nm处测定吸光值进行定量。 　　A. 优点： 　　· 性价比高——高质量，低价格 　　· 高效灵活——多个样品可同时分析，灵活确定分析试样的数量 　　· 特异性强——优选高度特异的针对人抵抗素的配对抗体 　　· 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 　　B. 原理： 　　人抵抗素试剂为固相酶免法。方法采用鼠抗人抵抗素抗体做为微孔板的固相捕获抗体，生物素标记的鼠抗人抵抗素检测抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测，待测样品抵抗素夹在捕获抗体和检测抗体之间与二者反应，随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后，洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物，产生蓝色反应，加入终止液后转成黄色。抵抗素的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比，450nm处测定吸光值进行定量。

　　核受体是细胞转录因子，影响各种功能，包括脂肪酸代谢、发育和生理平衡，直接调控基因表达，或通过与靶基因启动子区域特异的序列因子结合，或通过与其它蛋白相互作用，如其它的转录因子，以对脂质分子应答。美国Signosis公司提供24种特定的带有Myc标记的核受体CMV表达载体，与高特异性的抗Myc标记抗体一起，可应用于蛋白质相互作用的免疫共沉淀。 　　A. 优点: 　　核受体 Myc 标记的表达载体具有以下优点: 　　· 功能性分析 – 载体可用于基于细胞的方法监测核受体的功能。 　　· 共沉淀 – Myc标记蛋白可与高特异性的Myc标记抗体共沉淀。 　　· 构建稳定细胞系 –载体可用于构建稳定的细胞系. 　　B. 原理： 　　载体可转染到相应细胞，用于研究特异的核受体功能，如蛋白之间的相互作用，载体转染入细胞时，核受体表达为c-Myc抗原表位标记。抗c-Myc单抗与相互作用的蛋白一起免疫沉淀核受体蛋白。

　　一种多顺反子miRNA族miR-17-92在细胞增殖和血管生成的控制中起着重要作用，该族由7个miRNAs组成：miR-17-5p，miR-17-3p，miR-18a，miR-19a，miR-19b，miR-20a，miR-92。如E2F1基因，该族由原Ca基因c-Myc转录激活，由于二个表达的miRNAs抑制E2F1的翻译，E2F1蛋白的水平受这种反馈机制的调节，因此过量的E2F1的堆积受到阻止，凋亡的细胞状态或细胞分化受到控制。此外，c-Myc 介导的miR-17-92族的诱导，导致抗血管生成的溶血栓蛋白-1和相关蛋白的负调控，如结缔组织生长因子2，从而促进血管生成。近期研究表明，该组在脂肪细胞分化的克隆扩张期明显上调。miR-17-92族与许多类型肿瘤的致Ca基因有牵连。有效监测该组miRNAs的表达有助于更好理解miRNA族的改变对Ca发展的促进作用以及阐明miRNA活动的分子机制。 　　A.优点： 　　美国Signosis基于其自有专利技术的miRNA微孔板检测试剂具有下列优点： 　　·操作简单---做miRNA试验象做ELISA试验，无需用酶转换miRNA成cDNA，检测步骤只是孵育和洗涤。 　　·灵敏度高---较miRNA Northern blotting分析敏感100倍。 　　·分辨力强---在分辨同源miRNA 时，较Northern blot有更高的分辨力。 　　·差别定量---二个或二个以上特定miRNA表达的差异可定量分析。 　　B.原理： 　　基于自有专利miRNA微孔板检测中，一个miRNA分子通过二个连接oligos与捕获ologo和生物素化的检测oligo连接，一个连接oligo与捕获oligo和待测的miRNA部分杂交，另一个连接oligo与检测oligo和待测的miRNA另一部分杂交，杂交体通过与固相化的捕获oligo杂交固者在微孔板上，再由辣根酶标记链酶亲和素和发光底物检测，这种杂交体结构对miRNA分子序列非常敏感，一个核苷酸的差异即会阻止杂交体的形成，从而可分辨同源miRNA，而Northern blot则很难鉴别同源miRNA，此外该方法的敏感性较Northern blot高。