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  肿瘤抑制蛋白P53是一种多功能分子,可调控细胞周期,DNA修复和凋亡,这种调控作用的发挥是通过与许多其它分子的相互作用来进行,这些分子包括TFIID、TFIIH、casein kinase 2、HIPK2、JNK1、HIF-1a、Ref-1、HDAC1、p300/CBP、MDM2、p63、p73 等等。这种相互作用通过转录激活活性和蛋白稳定性调控P53。美国Signosis 提供一种有效的P53免疫共沉淀试剂盒以系统研究P53相互作用。试剂盒包括Myc标签的P53表达载体,抗-Myc抗体结合的磁珠,以及免疫共沉淀P53和P53相关蛋白的全部试剂。   A. 优点:   · P53免疫共沉淀试剂盒具有下列优势:   · 快速---高亲和性的抗·C-Myc抗体交联的磁珠免疫沉淀带·C-Myc标签的蛋白或免疫共沉淀相互作用物,无需前分离步骤,缩短孵育时间。   · 噪音低--- 用于WB检测时,非特异信号低。   ·结果一致性高---磁珠易于通过磁架分离,少而快的洗涤无样品丢失。   ·简便---试剂盒包含全部试剂组份。   B. 原理:   Myc标签的P53表达载体用于转染靶细胞。转染后,P53表达Myc抗原决定部位标签,与反应蛋白结合。复合物与P53可以快速高效的与包埋在磁珠上的抗Myc抗体免疫共沉淀,共沉淀复合物通过磁力架进一步与未结合的蛋白分开,洗涤后,复合物高效彻底的从磁珠上洗脱下来,用SDS-PAGE分离以进一步WB分析。磁珠上固相的Myc抗体在低PH洗脱条件下通过阻止轻链和重链的解离提供更好的WB检测。

  IL1a和IL-1ß 是介导炎症和免疫调节作用的强激动剂。 二者由巨噬细胞、单核细胞和树状突细胞产生,是针对感染后炎症反应的重要部分。 它们增加内皮细胞黏附因子的表达,转运白细胞到感染部位。 IL1a是参与各种免疫反应、炎症过程和造血作用的多功能细胞因子,由许多类型细胞产生,但是仅由单核细胞和巨噬细胞分泌。   (详见:http://www.zhongzhibio.com/kysj/552.htm)   A. 优点:   · 性价比高---高质量,低价格。   · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。   · 特异性强---优选高度特异的针对鼠IL1a的配对抗体。   · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统   B. 原理:   鼠IL1a试剂为固相酶免法。 方法采用兔抗鼠IL1a抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗鼠IL1a抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测, 待测样品鼠IL1a夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。鼠IL1a的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。

  巨噬细胞炎症蛋白-1 (MIP-1)是体外有促炎活性包括白细胞趋化性的细胞因子C-C子族的成员,它是细菌内毒素刺激后巨噬细胞产生的的一个主要因子。MIP-1可激活粒细胞(嗜中性、嗜酸性和嗜碱性细胞) 导致急性中性白细胞炎症,它还可诱导其它促炎细胞因子合成和释放例如来自成纤维细胞和巨噬细胞的IL-1、IL-6和TNFa。除促炎活性外,MIP-1在体内和体外抑制造血干细胞的增殖。   A. 优点:   · 性价比高——高质量,低价格   · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量   · 特异性强——优选高度特异的针对鼠MIP-1a的配对抗体   · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统   B. 原理:   鼠MIP-1试剂为固相酶免法。方法采用兔抗鼠MIP-1a抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗鼠MIP-1抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测,待测样品鼠MIP-1夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。鼠MIP-1的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。   A. 优点:   · 性价比高——高质量,低价格   · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量   · 特异性强——优选高度特异的针对鼠MIP-1a的配对抗体   · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统   B. 原理:   鼠MIP-1试剂为固相酶免法。方法采用兔抗鼠MIP-1a抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗鼠MIP-1抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测,待测样品鼠MIP-1夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。鼠MIP-1的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。

  CEA是细胞表面200-kd的糖蛋白。CEA通常是在在胎儿发育期间产生。CEA的产生在出生前停止,通常健康成人血液中不存在。CEA存在于某些种类的不可治愈症中,特别是大肠(结肠和直肠),也存在于胰腺、乳腺、卵巢的病人。CEA水平在手术或其它治疗之前时异常升高,在成功切除所有癌的手术之后,预计下降到正常水平。中帜生物CEA酶免试剂为CEA水平的定量测定提供一个快速,敏感和可靠的分析方法,该试剂的灵敏度为1.0 ng/ml。   A. 优点:   · 性价比高——高质量,低价格   · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量   · 特异性强——优选高度特异的针对CEA的配对抗体   · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统   B. 原理:   CEA酶免试剂为固相酶免法。方法采用针对CEA不同抗原决定簇的鼠单克隆抗体做为微孔板的固相捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗CEA鼠单克隆抗体做检测抗体,待测样品同时与捕获抗体和标记抗体反应后,CEA夹在二者之间。孵育后,洗去未结合的标记抗体。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。CEA的浓度与待测样品的颜色呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。   A. 优点:   · 性价比高——高质量,低价格   · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量   · 特异性强——优选高度特异的针对CEA的配对抗体   · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统   B. 原理:   CEA酶免试剂为固相酶免法。方法采用针对CEA不同抗原决定簇的鼠单克隆抗体做为微孔板的固相捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗CEA鼠单克隆抗体做检测抗体,待测样品同时与捕获抗体和标记抗体反应后,CEA夹在二者之间。孵育后,洗去未结合的标记抗体。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。CEA的浓度与待测样品的颜色呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。

  研究基因表达常常需要RNA制备后再进行cDNA合成和PCR。不过要获得用于RNA制备的大量细胞之困难成为一些研究工作的瓶颈,如激光切割的样本,FACS分拣的细胞和在96孔板中培养的细胞。细胞数量有限(

  粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是巨噬细胞、T细胞、肥大细胞、内皮细胞和成纤维细胞分泌的细胞因子。其功能为白细胞生长因子。 GM-CSF刺激干细胞产生粒细胞(嗜中性、嗜酸性细胞和嗜碱性细胞)和单核细胞。 单核细胞退出循环并移入组织,成熟成为巨噬细胞。 近期表明GM-CSF在炎症和自身免疫性疾病起着重要作用。   A. 优点:   · 性价比高——高质量,低价格   · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量   · 特异性强——优选高度特异的针对小鼠GM-CSF的配对抗体   · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统   B. 原理:   小鼠GM-CSF试剂为固相酶免法。方法采用兔抗鼠GM-CSF抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗鼠GM-CSF抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测,待测样品小鼠GM-CSF夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。小鼠GM-CSF的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。

  NFkB 是一种广泛存在的转录因子,在细胞对各种刺激的反应中起着重要作用,这些刺激包括:压力、细胞因子、自由基、紫外线照射、氧化的LDL、细菌和病毒的抗原。NFkB的异常调节与炎症、自身免疫性疾病、脓毒性休克、病毒感染和不适当的免疫进展相关联。激活时NFkB参与免疫和炎症反应、细胞调节以及凋亡的相关基因的表达。为了方便在少量细胞中监测与细胞生物功能相关基因的表达, 美国Signosis公司研发了一种直接在细胞裂解物中或总RNA中分析8种NFkB调节基因实时PCR方法。   A. 优点:   Signosis公司NFkB调控基因的实时PCR检测试剂具有以下优点:   ·便利---从细胞裂解、反转录直到PCR,试剂盒包含了所有试剂。   ·无需RNA制备---细胞裂解液可直接用于反转录。   ·实时---分析可以实时监测   B. 原理:   Signosis公司实时PCR检测试剂通过mRNA反转录成cDNA以及实时PCR监测8种因子的表达,纯化的总RNA或细胞裂解物先反转录成cDNA,靶基因再通过实时PCR分析。

  凋亡涉及一系列生化活动,这些活动导致特征性的细胞形态和死亡,包括细胞膜的变化、细胞收缩、核碎裂、染色质浓缩、染色体DNA断裂。在发育期和肌体平衡期,把不要的细胞除去是非常重要的。过渡凋亡引起营养不足,如脑缺血损伤;不充分的凋亡导致细胞增殖失控。MicroRNAs (miRNAs)是非编码的小RNA分子,调控30%哺乳动物基因的表达。许多miRNAs对凋亡细胞信号调控有影响,如miR-145、miR-216、miR-182、miR-96 miRNAs的过渡表达导致天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3的活性下降。中帜生物公司开发的miRNA阵列试剂检测凋亡相关的47种miRNAs。检测这些miRNAs的表达有助于揭示凋亡的miRNAs调控机制。   A.优点:   中帜生物凋亡相关的miRNA微孔板阵列试剂是一种直接杂交总RNA的一种方法,具有下列优点:   ·操作简单——检测48种miRNA的表达如ELISA试验一样简单,无需用酶转换miRNA成cDNA,检测步骤只是孵育和洗涤   ·灵敏度高——较miRNA Northern blotting分析敏感100倍   ·分辨力强——在分辨同源miRNA 时,较Northern blot有更高的分辨力   ·差别定量——二个或更多标本miRNA表达的差异可定量分析   B.原理:   中帜生物的miRNA直接杂微孔板交阵列方法是简单的二步法。板杂交和链霉亲和素-辣根酶检测。微孔板包被上oligo mix,其包括一对oligo—与特定靶miRNA并列杂交的相应oligo、通用捕获oligo和生物素标记oligo。该方法中,总RNA直接用于杂交。当RNA中存在靶miRNA时,其做为桥将生物素标记的oligo与捕获oligo连接起来,这样可以通过链霉亲和素辣根酶结合物以及化学发光底物检测。如果不存在靶miRNA时,生物素标记的探针就被冲洗掉,因此无检测信号。在微孔板阵列中,48个孔包被上不同的oligo mix来检测不同的miRNA,96孔板可定量测定和比较二个样品中48种miRNA,U6用于标化。

  要明确与特定启动子结合的转录因子(TFs),或明确是通过上游的启动子调控特定基因表达的转录因子,常用二种方法。一种,启动子内电识别的转录因子DNA结合位点进行凝胶迁移试验。第二种,除去或移除某个转录因子的结合位点,以测定与启动子连接的报告体的表达是增加还是减少,通常,要构建一系列启动子缺失或突变的报告体,因为一个或一些转录因子在启动子上有多个结合位点。美国Signosis 公司开发了一种快速方法,通过一种变换的TF检测微孔板阵列方法便于启动子的定性,这种方法将检测48种TF是否与启动子结合。   A. 优点:   美国Signosis 公司基于自有知识产权技术研发的结合启动子的TF微孔板阵列检测试剂,具有下列优势:   · 多重复合---单一一次试验可明确48种TF与特定启动子的结合   · 步骤简单---探针孵育、柱离心、板杂交和HRP检测   B. 原理   启动子的TF微孔板阵列检测试剂是Signosis转录因子活性检测微孔板阵列试剂I的竞争法。在转录因子活性检测微孔板阵列试剂I,如果48种靶转录因子存在于待测样品中,就会形成48种类型的复合物,每种转录因子带有相应的生物素标记的oligo(与凝胶迁移试验中的复合物一样),用柱离心从复合物中分离未结合的游离的生物素标记的oligo,柱洗脱转录因子结合的oligo,用于板杂交,杂交上的DNA有生物素标记oligo,捕获的oligo用链酶亲和素和化学发光底物检测。如果不存在转录因子,就不能形成复合物,在随后的生物素标记的oligo中检测不到TF。在结合启动子的TF微孔板阵列检测试剂中,含有感兴趣的启动子PCR片段,与一套48种生物素标记的oligo混合,48种oligo与待测标本中的48种TF对应。如果DNA片段含有TF结合序列,就与生物素标记的oligo竞争与样本中的TF结合,不形成或少形成复合物,也就检测不到或少检测到TF,通过竞争质粒或DNA片段的存在与否,启动子结合的TF可被识别。

  干细胞因子(SCF)是多种类型细胞的生长因子,在神经胶质细胞内和各种脑损伤时表达。 导致的脑损伤以及脑细胞介导的SCF表达,通过营造支持血管形成的环境,造成肿生长。   A. 优点:   · 性价比高---高质量,低价格。   · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。   · 特异性强---优选高度特异的针对人SCF的配对抗体。   · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统.   B. 原理:   SCF试剂为固相酶免法。 方法采用兔抗人SCF抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗人SCF抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测, 待测样品SCF夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。SCF的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。