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  IL-6最初被认为是B细胞分化因子,现在认为是多功能的细胞因子,可调控免疫反应、造血、急性相反应和炎症。IL-6由激活的T细胞、巨噬细胞、上皮细胞、成纤维细胞和成骨细胞产生。IL-6产生的失调意味着一些疾病过程的病理,如自身免疫性疾病和慢性炎症性增殖性疾病。因此监测这些细胞因子的表达是分析这些疾病潜在分子机制的常用方法。美国Signosis研发了一种多生物素信号放大技术(MBSA),该技术比基于单生物素检测的方法敏感1000倍。应用MBSA,美国Signosis研发了人IL-6 mRNA微孔板定量检测试剂,该试剂可直接定量测定细胞裂解液和总RNA中IL-6基因的表达。   A.优点:   美国Signosis mRNA微孔板定量检测试剂具有下列优势:   · 准确定量---IL-6 mRNA应用体外RNA中的IL-6做参比。   · 敏感性高---可测定低至500个分子,并具有较宽的线性范围。   · 操作简单---总RNA直接用于板杂交,勿需酶转换mRNA成cDNA,方法步骤是“孵育和洗涤”。   B. 原理:   在MBSA中,多生物素加到一个聚合物上,其序列有标示互补序列可与连接序列杂交,连接序列含有靶序列和标示序列。各连接序列的标示序列相同,但会有不同靶序列与靶基因不同区杂交,因此是在二个层级上放大---多个区和多个生物素。mRNA微孔板定量检测试剂应用了MBSA技术,靶mRNA通过捕获oligo捕获到微孔板上,捕获的mRNA分子与许多连接序列杂交,从而靶定mRNA的不同区,多生物素随后与连接序列杂交,捕获的生物素分子用链酶亲和素辣根酶结合物与发光底物检测。

  STAT3蛋白在发育、免疫系统和炎症中起着重要作用。STAT3激活时,从细胞质转运到细胞核,与STAT3反应因子结合,调控基因表达,包括细胞生长、分化、转化和凋亡。STAT3功能失调与许多疾病相关。STAT3持续激活的形式在许多细胞系中可以检测到。美国Signosis 公司研发的STAT3滤板法检测试剂用于检测STAT3的DNA结合活性,可同时分析多个标本。   A. 优点:   美国Signosis 公司基于自有知识产权技术研发的STAT3滤板法检测试剂,具有下列优势:   · 简单快速---比凝胶迁移试验简单、快速   · 高通量筛选---多个样品可在一个试验中得到分析   · 费用低廉---与基于ELISA的检测方法相比花费更少   · 定量比较---二个或以上样本可同时定量分析   B. 原理   美国Signosis 公司研发的STAT3滤板法检测试剂,是基于微孔板检测STAT3活性的分析方法,预标记STAT3的DNA结合序列与核抽体物混合,形成STAT3-DNA复合物。过滤板用于保留结合的STAT3探针,除去游离的DNA探针。结合的预标记的STAT3探针随后从过滤板上洗脱、收集,与相应孔的杂交板杂交。捕获的STAT3探针进一步用辣根酶标记的链霉亲和素检测,在微孔板发光检测仪上读取发光度值(RLUs)。

心脏病发作(或心肌梗塞)时,损伤的心脏组织释放心脏的酶如肌酸激酶(CK) 。 CK存在于心脏和骨骼肌以及肝脏和脑子。 CK-MB是仅存在心肌的CK亚型。 血液通常有低水平的CK-MB。 心肌受损时(如心脏病发作),CK-MB从受损的细胞漏出,引起血液水平的上升。 因而测定CK-MB增加时,可以诊断或证实近期心脏病的发作。急性心肌梗塞(AMI)后释放的CK-MB可早在症状起始的3-4个小时的血液中检测到,并且梗塞后大约65个小时维持高水平。据报道CK-MB水平在3小时后可诊断50%AMI,6小时后可诊断90%以上。在症状出现后6小时而没有诊断性心电图的急诊室患者,CK-MB的准确性在确证AMI是非常有用的。CK活性的测定主要用于诊断骨骼肌疾病,心肌梗塞,脑血管病,肌肉萎缩症,甲状腺机能不足,肺梗塞,以及监测病因和治疗。 A. 优点: · 性价比高---高质量,低价格 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对CK-MB的配对抗体 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理 CK-MB试剂为固相酶免法。 方法采用抗CK-MB的鼠单克隆抗体做为微孔板的固相捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗CK-MB抗体做检测抗体, 待测样品中的CK-MB可同时与捕获抗体和标记抗体反应。孵育后,洗去未结合的标记抗体。 加入HRP底物TMB产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。CK-MB的浓度与待测样品的颜色呈深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。

  细胞因子参与许多生物活动,如病毒感染、炎症、免疫和造血。细胞因子是许多类型细胞对不同刺激反应的产物。细胞因子基因的表达由复杂的机制调控。一种细胞因子基因的表达可由多种细胞因子调控。细胞因子基因表达调控的异常可由染色体改变或导致表达机制激活或失活的病毒感染引起。因此,检测细胞因子基因表达为揭示调控的潜在机制提供了一种实用的方法。美国Signosis公司研发的细胞因子cDNA微孔板阵列检测试剂可检测20多种细胞因子基因表达。   A. 优点:   美国Signosis公司基于其自有的cDNA微孔板阵列专利技术研发的小鼠细胞因子cDNA微孔板阵列检测试剂具有以下优点:   ·操作简单---做基因表达试验像做ELISA酶免试验一样简单。   ·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。   ·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。   B. 原理:   美国Signosis 公司自有的cDNA微孔板阵列专利检测技术是基于微孔板杂交的检测方法,该方法是将mRNA反转录成cDNA来检测多种基因的表达。与芯片分析方法相似,加入生物素-dUTP后,总RNA先转录成生物素标记的cDNA。通过预包被在微孔板上的特异的寡核酸,将靶基因捕获到微孔板上(而不是膜上)。捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物,cDNA的浓度与待测标本的发光强度成正比。

  YY1在正常的生物学过程中如胚胎发育、分化、复制和细胞增殖中发挥着重要作用。YY1通过与启动子区的YY1识别位点(一致性序列)结合的过程发挥作用。YY1功能异常与细胞增殖异常、凋亡有关。美国Signosis 公司研发的YY1滤板法检测试剂用于检测YY1的DNA结合活性,可同时分析多个标本。   A. 优点:   美国Signosis 公司基于自有知识产权技术研发的YY1滤板法检测试剂,具有下列优势:   · 简单快速---比凝胶迁移试验简单、快速   · 高通量筛选---多个样品可在一个试验中得到分析   · 费用低廉---与基于ELISA的检测方法相比花费更少   · 定量比较---二个或以上样本可同时定量分析   B. 原理   美国Signosis 公司研发的YY1滤板法检测试剂,是基于微孔板检测YY1活性的分析方法,预标记YY1的DNA结合序列与核抽体物混合,形成YY1-DNA复合物。过滤板用于保留结合的YY1探针,除去游离的DNA探针。结合的预标记的YY1探针随后从过滤板上洗脱、收集,与相应孔的杂交板杂交。捕获的YY1探针进一步用辣根酶标记的链霉亲和素检测,在微孔板发光检测仪上读取发光度值(RLUs)。

  NFkB 是一种广泛存在的转录因子,在细胞对各种刺激的反应中起着重要作用,这些刺激包括:压力、细胞因子、自由基、紫外线照射、氧化的LDL、细菌和病毒的抗原。NFkB的异常调节与炎症、自身免疫性疾病、脓毒性休克、病毒感染和不适当的免疫进展相关联。NFkB激活时,与其抑制剂IkB解离,从细胞质移到细胞核,在此与靶DNA 结合,正调节基因的转录,参与免疫和炎症反应、细胞调节以及凋亡。通过结合CLTM cDNA合成试剂 (该试剂无需RNA制备,直接用细胞裂解液进行反转录), 美国Signosis公司研发了一种基于微孔板杂交阵列直接检测细胞裂解液中20多种NFkB调节基因表达。   A. 优点:   细胞裂解液中人NFkB调控的cDNA检测试剂具有以下优点:   ·操作简单---无需RNA制备,直接用细胞裂解液合成cDNA。此外试验ELISA一样简单。   ·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。   ·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。   B. 原理:   与常规的需要总RNA进行反转录不同,美国Signosis开发了一种基于CLTM cDNA合成的微孔板阵列试剂。该试剂无需RNA制备,直接用用细胞裂解液通过反转录合成cDNA,然后用合成的cDNA探针进行微孔板阵列的杂交。通过预包被在微孔板上特异的寡核苷酸,靶基因被特异的捕获,捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物,发光程度用微孔板发光检测仪表示为RLUs,基因表达水平直接与发光强度成正比。

  肿瘤坏死因子-a (TNFa),是在急性炎症时由巨噬细胞或单核细胞产生的炎症细胞因子,对细胞内的各种信号事件负责,引起坏死或凋亡。 TNFa对实体瘤生长、进展和转移关键性的血管形成也很重要。 此外, TNFa同肥胖症联系在一起。 它在肥胖啮齿类动物和人脂肪组织慢性升高,也许代表了肥胖和胰岛素抵抗之间的一个重要联系。 在肥胖鼠和人 脂肪组织中的TNFa过渡表达。 TNFa抑制胰岛素信号,至少部分是通过阻断胰岛素受体酪氨酸激酶活性和导致胰岛素受体基体1 (IRS-1)的丝氨酸磷酸化。然而还不清楚肥胖症期间由脂肪细胞产生的TNF-a的生理刺激物是什么,IRS-1在细胞TNF-a处理后如何抑止胰岛素受体酪氨酸激酶的活性。 更好理解TNF-a和胰岛素信号通路之间的联系对发现肥胖症期间胰岛素抵抗状态的治疗是非常重要的。   A. 优点:   · 性价比高---高质量,低价格。   · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。   · 特异性强---优选高度特异的针对人TNFa的配对抗体。   · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统   B. 原理:   人TNFa试剂为固相酶免法。 方法采用鼠抗人TNFa抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的羊抗人TNFa检测抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测, 待测样品TNFa夹在捕获抗体和检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。TNFa的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。

  快速生长的肿瘤会出现缺氧区,大部分细胞对缺氧的反应是(1)产生VEGF和其它缺氧诱导的血管生成因子以促进增加血管生成,从而增加组织的氧合(2)从有氧的磷酸化到缺氧的糖酵解的代谢转换。缺氧诱导因子-1(HIF-1)是在缺氧反应过程中有重要作用的一种氧调控转录激动剂。HIF-1a亚单位是氧依赖性泛素化和蛋白酶体降解。细胞因子如白介素-1和肿瘤坏死因子-a刺激HIF-1依赖的基因表达。HIF-1增加促进血流及炎症的数种基因的表达,如血管生成因子(VEGF)。通过结合CL(TM )cDNA合成试剂 (该试剂无需RNA制备,直接用细胞裂解液进行反转录), 美国Signosis公司研发了一种基于微孔板杂交阵列直接检测细胞裂解液中20多种HIF调节基因表达。   A. 优点:   细胞裂解液中人HIF调控的cDNA检测试剂具有以下优点:   ·操作简单---无需RNA制备,直接用细胞裂解液合成cDNA。此外试验ELISA一样简单。   ·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。   ·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。   B. 原理:   与常规的需要总RNA进行反转录不同,美国Signosis开发了一种基于CL(TM )cDNA合成的微孔板阵列试剂。该试剂无需RNA制备,直接用细胞裂解液通过反转录合成cDNA,然后用合成的cDNA探针进行微孔板阵列的杂交。通过预包被在微孔板上特异的寡核苷酸,靶基因被特异的捕获,捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物,发光程度用微孔板发光检测仪表示为RLUs,基因表达水平直接与发光强度成正比。

  CA 15-3多数由腺上皮表达,特别是在哺乳期的和恶性变的乳腺表达增加 。 CA 15-3水平升高也可以是非癌的情况,例如良性乳腺或卵巢疾病、子宫内膜异位、盆腔炎和肝炎。 怀孕和哺乳期也可引起CA 15-3水平上升。 美国Signosis CA 15-3酶免试剂为CA 15-3的定量测定提供一个快速,敏感和可靠的分析方法,该试剂的灵敏度为5 U/ml。   A. 优点:   · 性价比高---高质量,低价格。   · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。   · 特异性强---优选高度特异的针对CA15-3的配对抗体。   · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统   B. 原理:   CA 15-3酶免试剂为固相酶免法。 方法采用针对CA 15-3不同抗原决定簇的鼠单克隆抗体做为微孔板的固相捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗CA 15-3抗体做检测抗体, 待测样品同时与捕获抗体和标记抗体反应后,CA 15-3夹在二者之间。孵育后,洗去未结合的标记抗体。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。CA 15-3的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。

  转录因子(TF)的转录活性常常是通过报告载体测定的,载体含有TF的顺式因子(DNA结合序列)和荧光素酶样的报告基因。报告基因导入细胞,激活的TF与顺式因子结合,介导报告基因的启动。这种启动可以通过生化分析报告基因的产物进行测定。然而这是一种单项测定,一次测一个TF。由于细胞的变化会导致多种TF的激活,检测这些TF就需要多次转染和生化测定。此外,由于被导入到不同的细胞培养孔,还需要标准化规范转染。美国Signosis 公司基于自有专利开发一种多重转录因子(TF)报告基因实时PCR检测试剂以同时检测多种TF,检测试剂中所选24种TF代表了大多重要的信号转导通路。在多重转录因子报告基因实时PCR检测试剂I中,24种TF报告载体混合物是一次性转染入细胞。24种TF活性用实时PCR SYBR green同时检测,采用试剂盒内自带的CLTM细胞裂解液,直接用细胞裂解物,勿需进行RNA制备。   A. 优点:   美国Signosis 公司基于自有专利技术研发的多重转录因子报告基因实时PCR检测试剂,具有下列优势:   · 基于细胞的方法---基于细胞的方法检测TF 的活性   · 多重复合---24种TF活性可一次转染,同时检测   · 无需RNA制备---细胞裂解物可直接用于cDNA合成   · 定量比较---二个或以上样本可同时用实时PCR定量分析   B. 原理   多重转录因子报告基因实时PCR检测试剂I是一种实时方法,可同时定量检测24种TF活性。该技术中,构建一系列报告载体,每一种含有一个顺序因子和针对一种特异TF的载体标识序列。当载体做为文库加入96孔板某一孔,TF的激活将使其与相应的载体结合,介导标示序列的表达。细胞裂解物制备后,转录成cDNA,再进行实时PCR,TF的差异通过二个样本的比较进行区别。