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杭州环特生物科技股份有限公司

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【评价原理】神经毒性通常指某些药物影响机体的神经传导,导致神经传导中断或减弱,从而影响机体的正常功能。斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87%,神经系统形成过程和发育机制与人类高度相似,在6 hpf(受精后6小时)神经系统开始发育,受精6天后所有神经系统发育完成。斑马鱼在短时间内形成整个神经系统,为神经毒性的评价带来了有利的条件。而且斑马鱼对药物神经毒性的预测准确性高,同时兼具快速、高效、经济的优点。我们评价斑马鱼神经毒性有3个指标:1.行为学;2.中枢神经凋亡细胞荧光信号强度;3. 外周运动神经长度。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组,分别是正常对照和服用/注射供试品组(供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内)。服用/注射药物一段时间后,我们观察斑马鱼的运动行为,通过荧光染色观察中枢神经凋亡细胞,也可以利用转基因运动神经绿色荧光NBT品系斑马鱼观察外周运动神经长度。【结果展示】图1. 斑马鱼神经毒性运动轨迹图可以看到,服用/注射供试品组斑马鱼运动明显减少。图2. 斑马鱼光暗刺激下每分钟运动速度表型图可以看到,服用/注射供试品组斑马鱼对光暗刺激不敏感。图3. 斑马鱼中枢神经凋亡细胞表型图黄色虚线框内为中枢神经分析区域,绿色荧光小点为凋亡细胞可以看到,服用/注射供试品组斑马鱼中枢神经细胞凋亡明显增加。图4. 斑马鱼外周运动神经表型图可以看到,服用/注射供试品组斑马鱼外周运动神经明显缩短。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用/注射供试品组的斑马鱼运动明显减少且对光暗刺激不敏感,中枢神经细胞凋亡增加且外周运动神经缩短,与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有神经毒性。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】糖尿病是一种由遗传基因决定的与感染、肥胖等环境因素促发有关的疾病,其基本病理生理为绝对或相对性胰岛素分泌不足引起的代谢紊乱。高血脂患者由于血液中胆固醇、油脂含量过多,就会使过多油脂沉积于血管壁上,容易使动脉管壁增厚、变硬、失去弹性,导致动脉硬化。斑马鱼食欲调节(如血清素)和胰岛素调节功能与人类相似,斑马鱼其他涉及葡萄糖体内平衡的器官系统(包括脑、肝、脂肪细胞组织和骨骼肌)的发育和功能也与哺乳动物类似。斑马鱼在糖脂负荷状态下表现出持续高血糖、高血脂现象,用高糖高脂饲料可以诱发斑马鱼高血糖,模拟人的二型糖尿病。用转基因绿色血管荧光斑马鱼(呈绿色),患有高糖高脂的斑马鱼眼部血管壁厚度较正常斑马鱼明显增厚,在共聚焦显微镜下可以观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和降糖降脂产品组。其中正常对照组未摄入高糖高脂饲料,模型对照组与服用降糖降脂产品组都摄入了等量的高糖高脂饲料(高糖高脂饲料通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。降糖降脂产品组在摄入高糖高脂饲料的同时摄入松花蛹虫草之类的降糖降脂产品。服用一段时间降糖降脂产品后,我们用共聚焦显微镜下观察斑马鱼眼部血管壁厚度。【结果展示】图1. 斑马鱼眼部血管壁厚度白色箭头所指为血管壁可以看到,模型对照组的眼部血管壁厚度较正常对照组明显增厚,而降糖降脂产品组斑马鱼眼部血管壁厚度与正常对照组相近。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,降糖降脂产品组斑马鱼眼部血管壁厚度与正常对照组相近,并未出现模型对照组眼部血管壁增厚的情况。2.本实验证实了松花蛹虫草具有眼部血管壁厚度增厚改善功效。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】斑马鱼胃肠道粘膜屏障系统由较完整的机械屏障、化学屏障和免疫屏障构成,与哺乳动物高度相似,可作为胃肠道粘膜屏障研究的动物模型。三硝基苯磺酸(TNBS)可破坏肠道粘膜屏障,与肠组织蛋白结合形成抗原,发生变态反应,诱发结肠炎。杯状细胞主要分泌黏蛋白,形成黏膜屏障以保护上皮细胞,肠黏膜损伤时杯状细胞数量减少。我们可以应用特异性的染料(呈蓝色),观察肠道杯状细胞数目,评价肠道粘液分泌功能。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用肠道粘膜辅助保护剂组。其中正常对照组未经任何处理,模型对照组与服用肠道粘膜辅助保护剂组都摄入了等量的TNBS(TNBS通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用肠道粘膜辅助保护剂组在TNBS诱导肠道粘膜损伤之后摄入常欣卫口服液之类的肠道粘膜辅助保护剂。服用一段时间肠道粘膜辅助保护剂后,我们观察和分析肠道杯状细胞数目。【结果展示】图1. 斑马鱼肠道杯状细胞表型图可以看到,服用肠道粘膜辅助保护剂组的肠道杯状细胞数量与正常对照组比较相似,没有明显的减少。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用肠道粘膜辅助保护剂组的肠道杯状细胞量与正常对照组比较相似,没有明显的减少。2.本实验证实了常欣卫口服液具有明显的促肠道粘液分泌功能。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】益生菌的使用可以维持包括鱼类在内的动物及人体肠道微生态平衡,调节免疫力,增强斑马鱼的繁殖能力。益生菌通过特异性染色(呈红色),肠道内益生菌增殖的斑马鱼肠道会明显变红,由于斑马鱼通体透明的特点,可以明显被观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组,分别是模型对照组和服用调节肠道菌群产品组。其中模型对照组与服用调节肠道菌群产品组都饲喂等量的益生菌(益生菌通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用调节肠道菌群产品组在饲喂益生菌同时摄入膳乐星益生菌固体饮料。服用一段时间调节肠道菌群产品后,我们观察斑马鱼肠道内益生菌数量的变化。【结果展示】图1. 肠道益生菌表型图红色荧光颗粒为肠腔内的益生菌可以看到,经过调节肠道菌群产品处理的斑马鱼肠道益生菌比模型对照组明显增多。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用调节肠道菌群产品组的肠道益生菌数量与模型对照组的相比明显增多。2.本实验证实了膳乐星益生菌固体饮料具有肠道菌群调节功效。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】斑马鱼与人类生理结构和功能高度相似。斑马鱼消化道的解剖结构和细胞结构与人类消化道相似,具有同心圆层的内上皮、结缔组织、环状肌肉和外纵肌层。因此,可利用斑马鱼模型评价调节胃肠功效。饲喂特异性的荧光染料(呈红色),在斑马鱼体内荧光染料不被其他组织干扰,且不会被吸收,荧光染料的残留量取决于胃肠道蠕动功能。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组,分别是模型对照组和服用胃肠调节剂组。模型对照组与服用胃肠调节剂组都摄入了等量的荧光染料(荧光染料通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用胃肠调剂组在摄入荧光染料的之后摄入多潘立酮(吗丁啉)之类的胃肠调节剂。服用一段时间胃肠调节剂后,我们在荧光显微镜下观察斑马鱼胃肠道荧光强度。【结果展示】图1. 斑马鱼胃肠道表型图可以看到,胃肠调节剂组肠道荧光强度明显比模型对照组弱,说明胃肠调节剂通过促进胃肠道蠕动将荧光染料排出体外。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用胃肠调节剂组的胃肠道荧光情况比模型对照组明显减弱。2.本实验证实了多潘立酮(吗丁啉)具有明显的胃肠调节功效。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】近年来,各种各样的美食迫使人们越来越关注胃肠道健康问题。斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87%,并拥有与人类结构和功能相似的胃肠道组织。斑马鱼胃肠道粘膜屏障系统由较完整的机械屏障、化学屏障和免疫屏障构成,与哺乳动物高度相似,可作为胃肠道粘膜屏障研究的动物模型。三硝基苯磺酸(TNBS)可破坏胃肠粘膜屏障,与肠组织蛋白结合形成抗原,发生变态反应,诱发溃疡性胃肠道损伤。胃肠道病变累及肌层和神经,导致胃肠壁张力减退,胃肠腔扩大。胃肠道病变时出现炎症反应,中性粒细胞募集到损伤部位。杯状细胞主要分泌黏蛋白,形成黏膜屏障以保护上皮细胞,胃肠黏膜损伤时杯状细胞数量减少。通过病理切片可观察胃肠道组织学改变(如溃疡形成等)的情况。我们评价斑马鱼胃肠道粘膜损伤辅助保护功效有4个指标:1. 观察胃肠腔面积;2. 应用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼,观察胃肠道中性粒细胞数量;3. 应用特异性的染料(呈蓝色),观察肠道杯状细胞数目;4. 胃肠道病理切片。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用胃肠道粘膜辅助保护剂组。其中正常对照组未经任何处理,模型对照组与服用胃肠道粘膜辅助保护剂组都摄入了等量的TNBS(TNBS通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用胃肠道粘膜辅助保护剂组在TNBS诱导胃肠道粘膜损伤之后摄入常欣卫口服液之类的胃肠道粘膜辅助保护剂。服用一段时间胃肠道粘膜辅助保护剂后,我们观察斑马鱼胃肠道表型,分析胃肠腔面积,胃肠道中性粒细胞数目和杯状细胞数目,同时制作成病理切片观察胃肠道的病理结构变化。【结果展示】图1. 斑马鱼胃肠道表型图(蓝色虚线区域为胃肠腔)可以看到,服用胃肠道粘膜辅助保护组的胃肠腔面积与正常对照组比较相似,没有明显的胃肠腔扩张。图2. 斑马鱼胃肠道中性粒细胞表型图(黄色虚线区域为肠腔)可以看到,服用胃肠道粘膜辅助保护剂组的肠道中性粒细胞数量与正常对照组比较相似,没有明显的增多。图3. 斑马鱼胃肠道杯状细胞表型图可以看到,服用胃肠道粘膜辅助保护剂组的肠道杯状细胞数量与正常对照组比较相似,没有明显的减少。图4. 斑马鱼胃肠道病理切片可以看到,服用胃肠道粘膜辅助保护剂组的胃肠粘膜形态与正常对照组比较相似,没有明显的胃肠腔扩张、粘膜糜烂溃疡等症状。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用胃肠道粘膜辅助保护剂组的胃肠腔情况与正常对照组相似,并未出现模型对照组胃肠腔扩张、中性粒细胞数量增加、肠道杯状细胞数目减少、粘膜糜烂溃疡等情况。2.本实验证实了常欣卫口服液具有明显胃肠道粘膜辅助保护功效。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】甲萘醌是一种氧化剂,通过细胞内还原酶系统(微粒体的P450还原酶和线粒体的呼吸链还原酶),产生不稳定的半醌,进入氧化还原循环,产生活性氧族。用甲萘醌可诱导斑马鱼建立氧化应激模型。经过特异性荧光染色(呈绿色,主要定位于细胞核和线粒体),发生氧化应激反应斑马鱼全身明显比正常斑马鱼绿很多,可以用荧光显微镜下观察到斑马鱼体内的活性氧含量。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和抗氧化剂组。其中正常对照组未摄入甲萘醌,模型对照组与抗氧化剂组都摄入了等量的甲萘醌(甲萘醌通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。抗氧化剂组在摄入甲萘醌之后摄入还原型谷胱甘肽之类的抗氧化剂。服用一定时间抗氧化剂后,我们对斑马鱼整体做活性氧染色,观察整体绿色荧光强度的变化。【结果展示】图1. 斑马鱼活性氧表型图绿色荧光为活性氧可以看到,抗氧化剂组的荧光强度较正常对照组强,但较模型对照组明显减弱。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,抗氧化剂组的荧光强度比模型对照组弱。2.本实验证实了还原型谷胱甘肽具有明显抗氧化功效。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】糖尿病是一种由遗传基因决定的与感染、肥胖等环境因素促发有关的疾病,其基本病理生理为绝对或相对性胰岛素分泌不足引起的代谢紊乱。持续的高血糖水平导致糖尿病并发症发生,高血糖累及中枢和周围神经病变,出现神经炎症。感觉神经受损较为多见,出现麻木、触电、发热、蚁行感,运动神经受损则出现肌力下降。斑马鱼胰腺的形态发生和基本细胞结构、排列方式类似于哺乳动物,斑马鱼食欲调节(如血清素)和胰岛素调节功能与人类相似,斑马鱼其他涉及葡萄糖体内平衡的器官系统(包括脑、肝、脂肪细胞组织和骨骼肌)的发育和功能也与哺乳动物类似。斑马鱼在糖负荷状态下表现出持续高血糖现象,用高糖高脂饲料可以诱发斑马鱼高血糖,模拟人的二型糖尿病的神经并发症。用中性粒细胞荧光与运动神经荧光杂交品系斑马鱼(呈绿色),患有高血糖的斑马鱼周围运动神经中性粒细胞数目增多,在荧光显微镜下可以观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和降糖产品组。其中正常对照组未摄入高糖高脂饲料,模型对照组与服用降糖产品组都摄入了等量的高糖高脂饲料(高糖高脂饲料通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。降糖产品组在摄入高糖高脂饲料的同时摄入松花蛹虫草之类的降糖产品。服用一段时间降糖产品后,我们用荧光显微镜观察斑马鱼周围运动神经中性粒细胞数目。【结果展示】图1. 斑马鱼周围运动神经中性粒细胞数目黄色框线内绿色荧光点代表中性粒细胞可以看到,模型对照组的周围运动神经中性粒细胞数目较正常对照组明显增多,而降糖产品组斑马鱼明显减少。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,降糖产品组斑马鱼周围运动神经中性粒细胞数目与模型对照组比较明显减少。2.本实验证实了松花蛹虫草之类的降糖产品具有神经炎症消退功效。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】对乙酰氨基酚是临床上常用于解热镇痛,但对肝脏有严重的副作用,其中间代谢产物激发细胞内氧化应激反应,加快了细胞脂质过氧化水平,引起线粒体膜电位消失和膜流动性降低,腺嘌呤核苷三磷酸合成障碍,最终导致肝细胞坏死。斑马鱼的肝脏组织、细胞组成和功能几乎与哺乳动物相同。疾病表征如胆汁淤积、脂肪肝(脂肪变性)和肿瘤的组织病理学也与哺乳动物具有可比性。斑马鱼对外来生物化学物质如酶诱导和氧化应激的一般防御机制与哺乳动物相同,斑马鱼药物代谢相关的细胞色素P450也与哺乳动物具有相似性。因此,斑马鱼适合用于评价产品对对乙酰氨基酚等药物引起肝损伤的保肝功效。患有肝损伤的斑马鱼的肝脏较正常斑马鱼明显缩小,肝脏变性发黑,卵黄囊吸收延迟(卵黄囊是脂肪,吸收与肝脏功能相关)。由于斑马鱼通体透明的特点,可以明显被观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用肝保护剂组。其中正常对照组未对乙酰氨基酚,模型对照组与服用肝保护剂组都摄入了等量的对乙酰氨基酚(对乙酰氨基酚通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用肝保护剂组在摄入对乙酰氨基酚的同时摄入N-乙酰半胱氨酸之类的肝保护剂。服用一段时间肝保护剂后,我们观察肝脏的变化。【结果展示】图1. 斑马鱼酒精性脂肪肝表型图黄色虚线区域为肝脏,红色虚线区域为卵黄囊可以看到,服用肝保护组的肝脏情况与未摄入对乙酰氨基酚的正常对照组比较相似,相比模型对照组的肝缩小和肝变性发黑都有明显改善。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用肝保护剂组的肝脏情况与未摄入肝保护的正常对照组相似,相比模型对照组的肝损伤明显改善。2.本实验证实了N-乙酰半胱氨酸具有保护肝脏功效。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】斑马鱼的鳔从器官进化、组织结构以及生物学等多个层面都类似于哺乳动物的肺泡。细菌性肺炎:注射给予LPS建立斑马鱼细菌性肺炎模型。LPS是脂质和多糖的复合物,来源于革兰氏阴性菌细胞壁的外膜,是内毒素的主要成分。接触一定量的LPS会引起机体支气管炎、肺炎、肝炎及脂多糖血症。通过使用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼和转基因巨噬细胞绿色荧光斑马鱼,在荧光显微镜下可以直接观察斑马鱼中性粒细胞和巨噬细胞,并分时间点视频记录巨噬细胞和中性粒细胞溢出血管情况,使用实时荧光定量PCR仪可获得基因表达水平,通过制作组织病理切片观察斑马鱼鱼鳔部位的病理结构变化。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用抗炎药组。其中,模型对照组与抗炎药组都注射了等量的LPS建立细菌性肺炎模型。抗炎药组在注射了LPS的同时摄入吲哚美辛之类的抗肺炎抗炎药。服用一段时间抗肺炎抗炎药后,我们在荧光显微镜下拍摄斑马鱼中性粒细胞和巨噬细胞的数量,并分时间点视频记录巨噬细胞和中性粒细胞溢出血管情况,用实时荧光定量PCR仪检测TNF-α、IL-1β值,同时制作成病理切片观察鱼鳔部位的病理结构变化。【结果展示】图1. 斑马鱼中性粒表型图黄色虚线区域为鱼鳔,绿色荧光颗粒为中性粒细胞可以看到,抗炎药组斑马鱼鱼鳔位置处的中性粒细胞聚集情况明显改善。图2. 斑马鱼巨噬细胞表型图黄色虚线区域为鱼鳔,绿色荧光为巨噬细胞可以看到,抗炎药组斑马鱼鱼鳔位置处的巨噬细胞聚集情况明显改善。图3. TNF-α基因表达水平与模型对照组比较,*p < 0.05可以看到,抗炎药组能显著抑制斑马鱼的炎症基因TNF-α表达水平。图4. IL-1β基因表达水平与模型对照组比较,**p < 0.01可以看到,抗炎药组能显著抑制斑马鱼的炎症基因IL-1β表达水平。图4. 鱼鳔部位病理切片从病理切片中能看出来,抗炎药组斑马鱼鱼鳔病理结构与正常对照组相似,未出现模型对照组渗入的炎性细胞明显增多的情况。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,抗炎药组能显著抑制中性粒细胞和巨噬细胞的聚集,能显著抑制炎症基因表达水平,能改善炎性浸润情况。2.本实验证实了吲哚美辛具有显著的细菌性肺炎防治作用。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】斑马鱼的鳔从器官进化、组织结构以及生物学等多个层面都类似于哺乳动物的肺泡。病毒性肺炎:注射给予聚肌胞——poly(i:c)建立斑马鱼病毒性肺炎模型。poly(i:c)的双链RNA结构非常类似于病毒或病毒复制过程中形成的双链RNA,所以poly(i:c)类似某些病毒,具有很强的干扰素诱生作用。通过使用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼和转基因巨噬细胞绿色荧光斑马鱼,在荧光显微镜下可以直接观察斑马鱼中性粒细胞和巨噬细胞,并分时间点视频记录巨噬细胞和中性粒细胞溢出血管情况,使用实时荧光定量PCR仪可获得基因表达水平,通过制作组织病理切片观察斑马鱼鱼鳔部位的病理结构变化。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用抗炎药组。其中,模型对照组与抗炎药组都注射了等量的聚肌胞——poly(i:c)建立病毒性肺炎模型。抗炎药组在注射了poly(i:c)的同时摄入吲哚美辛之类的抗炎药。服用一段时间抗炎药后,我们在荧光显微镜下拍摄斑马鱼中性粒细胞和巨噬细胞的数量,并分时间点视频记录巨噬细胞和中性粒细胞溢出血管情况,用实时荧光定量PCR仪检测TNF-α、IL-1β值,同时制作成病理切片观察鱼鳔部位的病理结构变化。【结果展示】图1. 斑马鱼中性粒表型图黄色虚线区域为鱼鳔,绿色荧光颗粒为中性粒细胞可以看到,抗炎药组斑马鱼鱼鳔位置处的中性粒细胞聚集情况明显改善。图2. 斑马鱼巨噬细胞表型图黄色虚线区域为鱼鳔,绿色荧光为巨噬细胞可以看到,抗炎药组斑马鱼鱼鳔位置处的巨噬细胞聚集情况明显改善。图3. TNF-α基因表达水平与模型对照组比较,**p < 0.01可以看到,抗炎药组能显著抑制斑马鱼的炎症基因TNF-α表达水平。图4. IL-1β基因表达水平与模型对照组比较,**p < 0.01可以看到,抗炎药组能显著抑制斑马鱼的炎症基因IL-1β表达水平。图5. 鱼鳔部位病理切片从病理切片中能看出来,抗炎药组斑马鱼鱼鳔病理结构与正常对照组相似,未出现模型对照组渗入的炎性细胞明显增多的情况。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,抗炎药组与模型对照组比较,能显著抑制中性粒细胞和巨噬细胞的聚集,能显著抑制炎症基因表达水平,能改善炎性浸润情况。2.本实验证实了吲哚美辛具有显著的病毒性肺炎防治作用。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】斑马鱼与人类具有高度的形态、生理和遗传同源性,神经系统与哺乳动物相似。氯化铝超过正常摄入量可导致动物行为异常,同时破坏胆碱能神经功能,还可增加淀粉样蛋白的产量,最终导致记忆力减退、学习能力降低。我们用两种方法去评价斑马鱼的记忆力。1. 通过行为分析仪检测斑马鱼的对外界刺激的反应能力,经氯化铝诱发的记忆减退斑马鱼反应能力比正常斑马鱼差;2. 通过酶标仪检测斑马鱼的乙酰胆碱酯酶,经氯化铝诱发的记忆减退斑马鱼乙酰胆碱酯酶活性高于正常斑马鱼。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和改善记忆产品组。其中正常对照组未给予氯化铝造模,模型对照组与服用改善记忆产品组都给予等量的氯化铝(氯化铝通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。改善记忆产品组在给予氯化铝的同时摄入参枝苓口服液之类的改善记忆产品。服用一段时间改善记忆产品后,我们对斑马鱼进行行为学检测,观察斑马鱼的外界光暗刺激的反应能力(反应速度);同时酶标仪检测斑马鱼体内乙酰胆碱酯酶活性。【结果展示】图1. 反应能力轨迹图可以看到,模型对照组反应能力比正常对照组显著降低,经过改善记忆产品处理的斑马鱼的反应能力比模型对照组明显改善。图2. 乙酰胆碱酯酶检测可以看到,模型对照组斑马鱼乙酰胆碱酯酶活性显著上升,而改善记忆产品组的乙酰胆碱酯酶活性显著降低与正常对照组相似。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用改善记忆产品的斑马鱼反应能力较模型对照组有明显的改善,且对氯化铝诱导的记忆减退斑马鱼的乙酰胆碱酯酶活性也有显著降低的作用。2.本实验证实了参枝苓口服液有明显的改善记忆功效。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】斑马鱼与哺乳动物有相似的神经系统。在哺乳动物体内起到睡眠调节作用的分子和细胞群(单胺能、胆碱能、下丘脑素能)的斑马鱼体内大部分是守恒的。各种催眠药物如H1组胺能拮抗剂、褪黑激素激动剂、-2肾上腺素能激动剂和γ-氨基丁酸(GABA)能调节剂在斑马鱼体内的反应也很保守。GABA是一种天然存在的非蛋白质氨基酸,是哺乳动物中枢神经系统中重要的抑制性神经传达物质。戊四唑(PTZ)是GABA抑制剂,小剂量PTZ可诱导既有躁狂症又有抑郁症的双相精神障碍,从而造成失眠。患有失眠症的斑马鱼会表现出行为异常,表现为总运动距离明显增加,可以用行为分析仪观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和安神助眠剂组。其中正常对照组未摄入PTZ,模型对照组与安神助眠剂组都摄入了等量的PTZ(PTZ通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。安神助眠剂组在摄入PTZ前服用睡安片之类的安神助眠剂。服用一段时间安神助眠剂后,我们通过行为分析仪检测斑马鱼的总运动距离。【结果展示】图1. 斑马鱼的运动轨迹图红色线条表示快速运动轨迹,绿色线条表示中速运动轨迹,黑色线条表示慢速运动轨迹可以看到,服用安神助眠剂组的运动明显比加了模型对照组减少。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用安神助眠剂组的总运动距离相对于模型对照组明显减少,能缓解斑马鱼的躁狂症。2.本实验证实了睡安片具有安神助眠功效。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】体力疲劳常表现为肌肉出现僵硬、肿胀和疼痛,动作慢、不协调;反应迟钝,判断错误,注意力不集中等。斑马鱼大部分器官的作用机理与人类高度相似,而且斑马鱼生长发育周期短,器官发育较快,有利于开展缓解体力疲劳功效的研究。亚硫酸钠通过化学反应消耗水中的氧气,造成水中斑马鱼缺氧,经过一段时间诱发缺氧性疲劳。斑马鱼在氧气不足的情况下,机体自发活动将会减弱,同时,肌肉贮备糖原无氧酵解生成乳酸,乳酸堆积可使局部H+浓度升高,过量H+直接作用于肌原纤维,抑制肌动蛋白和肌球蛋白的结合,导致肌肉收缩能力下降,机体运动能力减弱。疲劳斑马鱼运动距离下降、乳酸堆积、氧自由基(ROS)上升、ATP酶含量降低。我们评价疲劳有4个指标:(1)行为分析仪检测斑马鱼总运动距离;(2)酶标仪检测乳酸含量;(3)酶标仪检测ROS水平;(4)酶标仪检测ATP含量。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用抗疲劳剂组。其中正常对照组未经任何处理,模型对照组和服用抗疲劳剂摄入等量的亚硫酸钠以诱发斑马鱼疲劳模型(亚硫酸钠通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用抗疲劳剂组摄入亚硫酸钠的同时摄入中华跌打丸、红牛和脉动饮料之类的抗疲劳剂。服用一段时间抗疲劳剂后,我们检测斑马鱼的总运动距离、乳酸含量、ROS水平和ATP含量。【结果展示】图1. 斑马鱼运动轨迹图黑线:斑马鱼静止运动轨迹;绿线:中速运动;红线:快速运动可以看到,服用抗疲劳剂组的斑马鱼运动情况与正常对照组比较相似,没有明显的总运动距离减少。图2. 斑马鱼乳酸含量与模型对照组比较,*p<0.05可以看到,服用抗疲劳剂组的斑马鱼乳酸含量比模型对照组明显降低。图3. 斑马鱼ROS水平与模型对照组比较,***p<0.001可以看到,服用抗疲劳剂组的斑马鱼ROS水平比模型对照组明显降低。图4. 斑马鱼ATP含量与模型对照组比较,***p<0.001可以看到,服用抗疲劳剂组的斑马鱼ATP含量比模型对照组明显升高。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用抗疲劳剂组与模型对照组比较,总运动距离明显增加、乳酸明显减少、ROS水平明显降低、ATP含量明显升高。2.本实验证实了中华跌打丸、红牛和脉动饮料等具有明显缓解体力疲劳功效。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】由于硬骨鱼和人类在骨骼发育过程中的基因、信号通路有高度同源性,而且与其他的动物模型相比,斑马鱼具有个体小适合高通量化学筛选、幼鱼身体透明易于观察骨骼发育的特点,所以近年来以斑马鱼为模型的骨骼研究逐渐成为这一领域的热点。斑马鱼从前向后的脊椎发育过程是非连续的,而是分成两个不同的区域:前域(包括前3块椎骨)和后域(包括第4-31块椎骨)。将斑马鱼脊椎骨钙化过程分成两个不同区域是基于第2和第3椎骨的出现晚于第4椎骨。我们利用斑马鱼骨骼发育的规律,摄入生长发育促进剂的斑马鱼脊椎骨发育会加快。脊椎骨染色应用与钙特异性结合的荧光染料(呈绿色),经荧光显微镜观察脊椎骨的数量。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组,分别是正常对照组和服用生长发育促进剂组(维生素D3、碳酸钙之类的生长发育促进剂通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用一段时间生长发育促进剂后,我们对斑马鱼做骨骼特异性荧光染色,观察斑马鱼脊椎骨的发育情况。【结果展示】图1. 斑马鱼脊椎骨荧光图黄色虚线区域为定量的脊椎骨可以看到,服用生长发育促进剂的脊椎骨数量明显比正常对照组增多。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用生长发育促进剂的斑马鱼脊椎骨数量比正常对照组增多。2.本实验证实了维生素D3、碳酸钙具有明显促进生长发育功效。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】铅中毒的器官主要是造血系统、心脏和神经系统。对于儿童的神经系统损伤导致智商降低,注意力缺陷多动障碍以及阅读和学习能力下降,其毒性机制与神经元生长和轴索束变化相关。通过斑马鱼体内铅含量、轴索荧光强度和运动神经长度检测,铅中毒的斑马鱼体内铅含量明显比正常斑马鱼的高很多,而轴索荧光强度和运动神经长度铅中毒斑马鱼均明显少于正常斑马鱼。由于斑马鱼可被整体免疫荧光染色以及转基因荧光鱼运动神经发荧光的特性,我们可以通过荧光强度观察到明显的轴索细胞和运动神经的变化。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成五组,分别是正常对照组、模型对照组和服用促排铅剂组。其中正常对照组未摄入铅,模型对照组与服用促排铅剂组都摄入了等量的铅(铅通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用促排铅剂组在摄入铅的同时摄入绿豆肽复方之类的促排铅剂。服用一段时间促排铅剂后,我们(1)检测体内铅含量;(2)用荧光显微镜采集轴索荧光强度;(3)用荧光显微镜采集运动神经长度。【结果展示】(1)体内铅含量:图1. 斑马鱼体内铅含量与模型对照组比较,*p < 0.05可以看到,服用排铅剂组的铅含量与摄入相同铅的模型对照组比较相似明显减少。(2)轴索荧光强度:可以看到,服用排铅剂组脑部轴索荧光强度与摄入相同铅的模型对照组比较明显增加。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用促排铅剂组的铅含量、轴索荧光强度和运动神经长度与未摄入铅的正常对照组相似,并未出现模型对照组的铅含量升高,轴索荧光强度和运动神经长度减少的情况。2.本实验证实了绿豆多肽复方具有明显的促排铅功效。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】斑马鱼拥有与人类相似的神经组织器官,下丘脑、丘脑、基底神经节、边缘系统等都是与焦虑相关的脑区。1-(3-氯苯基)哌嗪盐酸盐(mCPP)是一种非特异性5 -羟色胺(5-HT)能激动剂,5-HT广泛存在于上述脑区。研究表明mCPP可通过影响5-HT通路而诱导焦虑。氨基丁酸(GABA)是哺乳动物中枢神经系统中广泛分布的一种抑制性神经递质,脑中GABA水平的下降会产生抑郁、紧张、焦虑、失眠等情绪问题。谷氨酸脱羧酶(GAD)是谷氨酸向GABA转化的限速酶。单胺氧化酶(MAO)是一种具有多个结合部位的单一分子酶,对底物的特异性不高,可使多种胺类氧化脱氨,从而影响多种神经递质的代谢,斑马鱼体内只有一种Mao序列,具有人MAO-A和人MAO-B的性质,且与人MAO-A更相似。在大多数物种中,MAO-A降解5-HT。研究表明斑马鱼的运动活动和趋向性是反映焦虑的两个重要指标。GAD2基因与焦虑和情感障碍关系密切。5-HT通过5-羟色胺受体2A(htr2aa)增加焦虑样行为。GABA-A受体在焦虑发生中起重要作用。研究表明MAO-A/B双敲除小鼠的5-HT分解降低,焦虑增加。因此,我们可以通过检测斑马鱼的行为来判断斑马鱼是否产生焦虑。同时还可以通过检测焦虑相关基因(如gabra1、gad2、htr2aa基因)相对表达量以及MAO含量来评价斑马鱼是否产生焦虑。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用焦虑改善剂组。其中正常对照组未经任何处理,模型对照组与服用焦虑改善剂组都摄入了等量的mCPP(mCPP通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用焦虑改善剂组在摄入mCPP的同时摄入司来吉兰之类的焦虑改善剂。服用一段时间焦虑改善剂后,我们(1)分析斑马鱼的总运动距离;(2)用q-PCR检测焦虑相关基因表达;(3)用试剂盒检测单胺氧化酶(MAO)活性。【结果展示】(1)行为学:可以看到,服用焦虑改善剂组斑马鱼gabra1基因相对表达量与正常对照组比较相似,较模型对照组明显增加。可以看到,服用焦虑改善剂组斑马鱼htr2aa基因相对表达量与正常对照组比较相似,较模型对照组明显降低。(3)单胺氧化酶(MAO)活性:图5. 斑马鱼单胺氧化酶活性量与模型对照组比较,*p < 0.05可以看到,服用焦虑改善剂组斑马鱼单胺氧化酶活性与正常对照组比较相似,较模型对照组明显降低。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用焦虑改善剂组斑马鱼总运动距离、gabra1、gad2和htr2aa基因相对表达量及MAO活性与正常对照组相似。2.本实验证实了司来吉兰有明显抗焦虑功效。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】酒精进入人体后90%进入肝脏进行代谢,长期过量饮酒诱发酒精性脂肪肝,临床表现为肝脏受脂肪浸润。由于斑马鱼拥有与人类相似的消化系统,如肝脏、肠道等,消化和营养的吸收及运输与人类高度相似,在大量摄入酒精后,肝脏也会出现脂肪变性(酒精性脂肪肝)的情况。经过脂肪特异性染色(呈红色),患有酒精性脂肪肝的斑马鱼的肝脏会明显比正常斑马鱼的肝脏要红很多,由于斑马鱼通体透明的特点,可以明显被观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用解酒剂组。其中正常对照组未摄入酒精,模型对照组与服用解酒剂组都摄入了等量的酒精(酒精通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用解酒剂组在摄入酒精的同时摄入RU21、海王金樽之类的解酒剂。服用一定时间解酒剂后,我们对斑马鱼整体做脂肪特异性染色,观察肝脏的脂肪变化,同时制作成病理切片观察肝脏的病理结构变化。【结果展示】图1. 斑马鱼酒精性脂肪肝表型图黄色虚线区域为肝脏,肝脏内红色代表脂肪可以看到,服用解酒剂组的肝脏情况与未摄入酒精的正常对照组比较相似,没有明显的脂肪沉积。图2. 肝脏病理切片黄色箭头指向脂肪颗粒从病理切片中也能看出来,酒精性脂肪肝斑马鱼的肝脏有很多脂肪颗粒,而服用解酒剂组的肝脏情况与未摄入酒精的正常对照组都没有出现类似的脂肪颗粒。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用解酒剂组的肝脏情况与未摄入酒精的正常对照组相似,并未出现模型对照组的出现大量脂肪颗粒(酒精性脂肪肝)的情况。2.本实验证实了RU21、海王金樽解酒剂具有疏肝解酒(酒精性脂肪肝防治)功效。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】醉酒实为急性乙醇中毒,使人大脑兴奋,引起行为异常。乙醇进入人体后90%进入肝脏进行代谢,乙醇脱氢酶(ADH)可以将其氧化为乙醛,在乙醛脱氧酶(ALDH)催化下,乙醛转化为乙酸,最后转化为二氧化碳和水。在ADH和ALDH两种酶的作用下,乙醇能够被机体代谢而避免引起机体损伤。由于斑马鱼拥有与人类相似的消化系统,如肝脏、肠道等,消化和营养的吸收及运输与人类高度相似,当乙醇被过量摄入后,经过代谢产生大量乙醛,致使乙醛在体内积累,出现醉酒现象。解酒有两种评价方法:1. 总运动距离,应用行为分析仪分析斑马鱼的运动轨迹,醉酒斑马鱼的总运动距离比正常斑马鱼明显增多。2. ADH和ALDH两种酶的含量,通过检测斑马鱼体内ADH和ALDH两种酶的含量,分析两种酶的调节作用。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用解酒剂组。其中正常对照组未摄入酒精,模型对照组和服用解酒剂组都摄入了等量的酒精(酒精通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用解酒剂组在摄入酒精之前摄入RU21、海王金樽之类的解酒剂。服用一段时间解酒剂后,应用行为分析仪分析摄入酒精后的斑马鱼总运动距离;同时用ALDH和ADH试剂盒检测两种酶的含量。【结果展示】图1. 斑马鱼运动轨迹图黑线:慢速运动轨迹;绿线:中速运动;红线:快速运动,红线代表醉酒行为状态可以看到,服用解酒剂组的运动轨迹与模型对照组比较,快速运动明显减少,醉酒行为有所改善。从柱状图中可以出来,服用解酒剂组的ADH和ALDH两种酶含量与模型对照组比较明显增高。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用解酒剂组的总运动距离与模型对照组比较明显降低,并ADH和ALDH两种酶含量明显增高。2.本实验证实了RU21、海王金樽具有明显的解酒功效。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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【评价原理】缺氧可能导致心血管系统、呼吸系统、神经系统、消化系统等等一系列危害身体的疾病。斑马鱼心血管系统在分子信号通路上与人和哺乳动物的同源性达到85%以上,近年来斑马鱼广泛地被用于心血管疾病研究领域。因此,斑马鱼适用于评价耐缺氧功效。亚硝酸钠中毒是临床常见的一种化学性中毒,将正常的血红蛋白氧化成为高铁血红蛋白而失去携氧能力,造成组织细胞缺氧。统计斑马鱼的死亡情况。经过解剖显微镜观察,通过斑马鱼死亡率的差别判断耐缺氧功效。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用耐缺氧剂组。其中正常对照组未服用亚硝酸钠,模型对照组与服用耐缺氧剂组都摄入了等量的亚硝酸钠(亚硝酸钠通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用耐缺氧剂组在摄入亚硝酸钠之前摄入红景天苷之类的耐缺氧剂。服用耐缺氧剂一段时间后,我们统计斑马鱼死亡和存活情况。【结果展示】图1. 斑马鱼死亡和存活数量可以看到,服用耐缺氧剂组未出现模型对照组死亡率明显增多的情况。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用耐缺氧剂组未出现模型对照组死亡率明显增多的情况。2.本实验证实了红景天苷具有明显的耐缺氧功效。更多项目服务,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293(微信同号)

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