【评价原理】
苯肼导致红细胞外翻和氧化应激产生,红细胞外翻能够引起血细胞聚集,氧化应激产生导致内皮细胞损伤,进而导致血小板聚集、纤维蛋白原形成,最终诱导血栓发生。斑马鱼的造血遗传网络在进化上和人类高度保守,适合于血栓形成机制和治疗药物的评价。
躯干出现血栓后,回心血量便会减少。经过血红细胞特异性染色(呈红色),患有血栓的斑马鱼心脏红细胞比正常斑马鱼心脏红细胞明显减少,由于斑马鱼血液系统发育过程透明的特点,可以明显被观察到。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用血管疏通剂组。其中正常对照组未摄入苯肼,模型对照组与服用血管疏通剂组都摄入了等量的苯肼(苯肼通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用血管疏通剂组在加入苯肼的同时摄入阿司匹林、氯吡格雷之类的血管疏通剂。
服用一段时间血管疏通剂后,我们对斑马鱼整体做血红细胞特异性染色,观察心脏红细胞变化。
【结果展示】
图1. 斑马鱼血栓表型图
黄色虚线区域为心脏,心脏内红色为红细胞
可以看到,服用血管疏通剂组的肝脏情况与未摄入苯肼的正常对照组比较相似,没有明显的红细胞减少。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用血管疏通剂组的心脏红细胞数量与未摄入苯肼的正常对照组相似,并未出现模型对照组的心脏红细胞数量减少的情况。
2.本实验证实了阿司匹林、氯吡格雷和养血清脑颗粒具有显著的疏通血管(抗血栓)功效。
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【评价原理】
斑马鱼和哺乳动物的心脏有相似的功能,包括血流方向、由专门的心内膜肌肉组织驱动的高压系统、由电子系统调节的心律以及与起搏活动相关的心跳。斑马鱼对典型的心脏毒素的药理学反应与人类相似。斑马鱼受精后48 h,心血管系统功能全面,呈现出例子通道和代谢过程的复杂性。因此,可以应用斑马鱼评价药物对心衰的防治作用。维拉帕米是苯烷胺类钙离子拮抗剂,其诱导心力衰竭的药理学基础有以下三方面: (1)对心脏的抑制作用,即负性频率、负性传导及负性肌力作用,且为剂量依赖性;(2)扩张血管作用,即对外周血管具有明显的扩张作用,使外周阻力降低,平均动脉压下降; (3)减少冠脉血流,降低心肌血供。我们用维拉帕米建立斑马鱼心衰模型。
患有心衰的斑马鱼与正常斑马鱼比较,出现心包水肿、静脉瘀血、心搏出量减少和血流速度减慢,由于斑马鱼通体透明的特点,可以明显被观察到。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和抗心衰药物组。其中正常对照组未摄入维拉帕米,模型对照组与抗心衰药物组都摄入了等量的维拉帕米(维拉帕米通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。抗心衰药物组在摄入维拉帕米的同时加入地高辛、美托洛尔类的抗心衰药物。
服用一段时间抗心衰药物后,观察斑马鱼心包水肿和静脉淤血的情况;用心跳血流分析系统检测心搏出量和血流速度的情况。
【结果展示】
图1. 斑马鱼心衰表型图
黄色虚线区域为心脏,绿色虚线区域为静脉淤血
可以看到,服用抗心衰药物组的心包面积和静脉瘀血面积与未摄入维拉帕米的正常对照组基本相似,没有明显的心衰情况。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用抗心衰药物组的心包面积和静脉瘀血面积与未摄入维拉帕米的正常对照组基本相似,没有出现模型对照组心包水肿、静脉瘀血的情况。
2.本实验证实了地高辛、美托洛尔具有明显的心衰防治(心脏功能改善)作用。
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【评价原理】
通常来说,炎症是机体的一种抗病反应,机体蒙受损坏后,机体的内坏境以及内境界和外坏境之间达到新的均衡的过程中会引发组装细胞的损坏,使片面组装细胞显现变性、坏死。
利用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼(MPO)作为模型,当体内炎症水平上升的时候,中性粒细胞的数量也就相对的增高,在荧光显微镜下,中性粒细胞的数量也就是表现出炎症反应程度的一个重要指标。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成两组,分别是正常对照与供试品组,通过服用/注射供试品一段时间后,我们在荧光显微镜下观察斑马鱼中性粒细胞的数量,同时检测体内炎症因子IL-6的表达情况。
【结果展示】
图1. 斑马鱼中性粒细胞数量
(白色箭头为斑马鱼侧线中性粒细胞)
从实验结果可以看到,供试品组相对正常对照组斑马鱼侧线位置中性粒细胞数显著增多。
图2:斑马鱼体内的中性粒细胞数量及体内炎症因子表达水平的变化
从实验结果可以看到,斑马鱼供试品组相对正常对照组,IL-6炎症因子相对表达量下降。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,相对于正常对照组,服用或者注射供试品组之后,中性粒细胞增多和炎症因子上升。
2.本实验证实了供试品组等具有增加中性粒细胞数量,以及促进炎性因子表达的功效。
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产品介绍:
斑马鱼胚胎分装系统,适用于替代人工进行斑马鱼的分装工作,可以快速将斑马鱼自动准确快速的分装到制定培养容器内。
产品优势:
产品参数(示例):
【评价原理】
人类在整个生命周期中,不断地更新血液成分、骨骼肌、皮肤等, 修复骨骼、 肌肉、指尖等部位较小的损伤。斑马鱼鱼鳍相当于人的手臂或腿,其修复再生能力比人类更加强大。紫外线通过破坏和蛋白质等生物大分子的结构,进而影响细胞和生物组织的正常生长和发育,引起细胞异常凋亡和发育畸形。长期暴露于紫外线辐射是导致皮肤光老化、光损伤和光致癌发生的主要环境因素,表现为皮炎、皮肤松弛增厚、变硬、皱纹增多、胶原降解和皮肤癌。被紫外线照射的斑马鱼尾鳍也会变得粗糙、皱缩并发生细胞凋亡。
在较短的时间内,斑马鱼尾鳍可完成修复,表现为在显微镜下可以被观察到尾鳍面积的恢复,同时用特异性的荧光染色(凋亡细胞呈绿色)可被观察到凋亡细胞的减少。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和使用防晒剂组。其中正常对照组未照射紫外线,模型对照组与使用防晒剂组都照射了同等强度的紫外线。防晒剂主要使用茶多酚、SOD等。
使用防晒剂一段时间后,我们将斑马鱼置于解剖显微镜下观察斑马鱼尾鳍面积变化;同时,使用特异性荧光染色,观察斑马鱼尾鳍凋亡细胞数量。
【结果展示】
图1. 斑马鱼紫外线照射尾鳍面积表型图
绿色虚线区域为斑马鱼尾鳍
可以看到,使用防晒剂组的斑马鱼尾鳍与未照射紫外线的正常对照组比较相似,没有模型的尾鳍面积缩小。
图2. 斑马鱼紫外线照射尾鳍凋亡细胞表型图
白色箭头指向尾鳍凋亡细胞
可以看到,使用防晒剂组的斑马鱼尾鳍凋亡细胞个数与未照射紫外线的正常对照组比较相似,没有明显的细胞凋亡。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,使用防晒剂组的尾鳍面积、凋亡细胞个数与未照射紫外线的正常对照组比较相似,没有模型对照组尾鳍面积缩小和细胞凋亡增多的情况。
2.本实验证实了茶多酚、SOD等具有显著的防晒(晒后修复)功效。
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【斑马鱼高通量技术】
斑马鱼高通量技术,是一种可支持同时间对数十、上百样品进行检测,并以相应的数据库支持整个实验体系高效运转的高可靠性筛选技术。
目前,环特通过实验设计和数据分析等重要节点进行深度优化,强势推出斑马鱼高通量筛选技术。该技术可将项目交付周期缩短至10-15天,并衍生出三个梯度的技术方案。
【显著优势】
高效:斑马鱼胚胎发育速度快,其1天生长相当于鼠类8~10天,实验周期大幅缩短,效率更高。
高可靠:基因相似度与人体达87%,与人体对应性强,雌鱼单次产卵超200枚,样本量大、个体差异小,结果更可靠。
高性价比:斑马鱼实验用样量仅为小鼠的1/1000~1/100,加之实验效率大幅提升后,带来极具吸引力的成本优势。
定制灵活:方案设计灵活,可定制化程度高,能满足不同样品数量和实验目的需求。
【实验方案】
【实验结果】
基于斑马鱼的高通量筛选技术,以上三个梯度方案,实现项目交付周期短至10-15天。相比其它动物高通量筛选方案,斑马鱼更高效、更可靠、性价比更高、周期更短。
【合作案例】
【服务流程】
1、提出需求及样品信息 → 2、提供解决方案 → 3、确认报价及周期 → 4、支付首付款开始实验 → 5、验收实验支付尾款。
【附】:高通量药物筛选服务项目(部分)
更多高通量筛选项目及内容,请拨电话咨询:0571-83782130,项目经理手机 17364531293。
环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证,自有2000m²生物评价实验室。
环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域,已牵头起草发布团体标准10项,申请发明专利64余项,自主开发的主要斑马鱼模型150多种,发表SCI及核心期刊论文120余篇,已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报,公司已累计完成项目超5000个,建立长期合作客户600多家。
【评价原理】
静脉注射给予长春瑞滨造模斑马鱼免疫力低下模型。大剂量长春瑞滨骨髓抑制明显,导致血小板、红细胞及白细胞数目(中性粒细胞、巨噬细胞、T细胞等)减少和贫血,最终导致免疫力低下人类与斑马鱼在免疫系统的细胞组成上极为相似,而且斑马鱼是目前所有同时具有特异性免疫和非特异性免疫动物个体中体积最小的,适合高通量评价调节免疫功效。斑马鱼静脉注射大剂量长春瑞滨后可造成免疫低下。
采用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼,可在荧光显微镜在观察到免疫力低下的斑马鱼体内的中性粒细胞荧光强度明显减弱。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用免疫调节剂组。其中正常对照组未注射长春瑞滨,模型对照组与服用免疫调节剂组都注射了等量的长春瑞滨(长春瑞滨通过静脉注射的方式摄入到斑马鱼体内)。服用免疫调节剂组在注射长春瑞滨后摄入盐酸小檗胺等免疫调节剂。
服用一段时间免疫调节剂后,我们观察中性粒细胞荧光强度变化。
【结果展示】
图1. 斑马鱼中性粒细胞表型图
绿色荧光颗粒代表中性粒细胞
可以看到,免疫调节剂组中性粒细胞荧光强度与正常对照组相似,没有出现中性粒细胞荧光强度明显减弱的情况。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,免疫调节剂组中性粒细胞数量与正常对照组相似,并未出现模型对照组免疫力低下的情况。
2.本实验证实了盐酸小檗胺具有增强免疫力的功效。
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