【评价原理】

斑马鱼为鲤科短担尼鱼属的小型硬骨鱼，1998年国际经济合作与发展组织将斑马鱼胚胎发育方法列入测定单一化学品毒性的标准方法。由于斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，近年来斑马鱼被广泛应用于人类疾病模型及药物筛选、毒理学与环境检测中，使其成为新型的脊椎模式生物。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或胚胎注射的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼整体进行观察评价，观察斑马鱼心脏、脑部、耳、下颌、眼、肝脏、肠道、躯干/尾/脊索、肌肉/体节、鳍、体长、身体着色、循环系统、身体水肿和出血等毒性反应情况，统计毒性发生率。

【结果展示】

图1. 斑马鱼胚胎毒性表型图

可以看到，服用/注射供试品组的斑马鱼眼变小、心包水肿、肝脏变性、卵黄囊吸收延迟、胃肠道发育延迟。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的组织器官产生明显的毒性表型，与正常对照组存在明显的差别。

2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有胚胎毒性。

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【评价原理】

与人类相似，中性粒细胞在斑马鱼体内发挥固有免疫作用，且是体内数量最多的白细胞在炎症反应起始阶段有一系列事件发生，如血管舒张、毛细血管网的通透性增强、炎性介导释放等。化妆品对皮肤的刺激表型主要表现为皮肤炎症，炎症早期主要表现为毛细血管扩张、通透性亢进和水肿。刺激物进入斑马鱼体内，诱导炎症反应，中性粒细胞发生免疫应答，向皮肤表皮迁移并聚集。

采用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼，可在荧光显微镜在观察到皮肤受刺激的斑马鱼皮肤上的中性粒细胞明显增多。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。

皮肤吸收供试品一段时间后，我们在显微镜下观察斑马鱼皮肤上中性粒细胞数量（头部、心脏和血管中的中性粒细胞除外）。

【结果展示】

图1. 斑马鱼皮肤刺激性表型图

绿色光点为中性粒细胞，绿色荧光越多，中性粒细胞越多，皮肤刺激性越强

可以看到，供试品组斑马鱼皮肤上中性粒细胞数量明显增加。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，摄入供试品组的斑马鱼皮肤上中性粒细胞明显增多，与正常对照组存在明显的差别。

2.本实验证实了该十二烷基磺酸钠（SLS）和甲基异噻唑啉酮对斑马鱼有皮肤刺激性。

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【评价原理】

光毒物质在特定的波长光线刺激下，形成单线态和三线态后，可迅速与细胞小分子物质结合形成特异的光激活物质。这种物质在体内会降解为普通毒物或再次成为光毒物质，对机体造成伤害。在急性光毒性反应中，皮肤在照射紫外线后数分钟至数小时内出现红斑、水疱等。在慢性光毒性中可引起照射处皮肤色素的沉着过多以及皮肤增厚。斑马鱼皮肤包括表皮、真皮和真皮下组织，结构与人高度相似。因此，斑马鱼适合评价化妆品的光毒性。

我们评价斑马鱼光毒性有2个指标：1.毒性表型；2.LC50。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成12个组，分别是避光正常对照组，5个避光供试品组，光照正常对照组，5个光照供试品组。供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内。

皮肤吸收一段时间供试品后，我们记录斑马鱼各组斑马鱼死亡率，以软件计算供试品LC50；并记录拍照记录明显毒性表型。

【结果展示】

图1：光毒性表型图

可以看到，正常对照组和光照处理正常对照组未诱发任何毒性表型。供试品组诱发卵黄囊吸收延迟，光照处理的供试品组诱发心血管毒性和肾毒性等。

图2. 供试品LC50

可以看到，未光照的供试品与光照过的供试品LC50有明显差异。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，光照过的供试品诱发毒性表型较未光照的供试品严重，且与正常对照组存在明显的差别；未光照的供试品与光照过的供试品LC50有明显差异。

2.本实验证实了供试品具有光毒性。

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【评价原理】

过敏原/致敏因子诱导组织学上肥大细胞脱颗粒，释放活性介质如组胺、5-HT，前列腺素D、白三烯、血小板活化因子等，表现为平滑肌收缩，毛细血管扩大和通透性增强，腺体分泌物增多等，诱发多种过敏症状。 类胰蛋白酶是肥大细胞内预先合成的中性蛋白酶，是临床上检验人体是否过敏的重要指标。斑马鱼产生过敏反应时，亦诱导肥大细胞分泌类胰蛋白酶。C48/80作为肥大细胞活化剂，可以诱导组织学上肥大细胞脱颗粒，释放类胰蛋白酶。

我们检测过敏有两种方法。1. 类胰蛋白酶的含量：用酶标仪检测类胰蛋白酶的含量。2. 肥大细胞数量：制作病理切片，经过过碘酸雪夫染色，肥大细胞呈蓝色，肥大细胞释放的组胺和白三烯等物质呈红色。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成四组，分别是正常对照组和滴注致敏剂低、中、高剂量组。其中正常对照组未滴注C48/80，滴注致敏剂组均滴注C48/80低、中、高剂量（C48/80通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。

滴注C48/80一段时间后，利用酶标仪检测类胰蛋白酶含量（吸光度值），同时制作病理切片进行过碘酸雪夫染色。

【结果展示】

图1. 斑马鱼类胰蛋白酶含量（吸光度值）

与正常对照组比较，*p < 0.05，***p < 0.001

可以看到，滴注中、高浓度致敏剂组类胰蛋白酶含量与正常对照组比较明显升高。

图2. 斑马鱼体内肥大细胞染色典型图

箭头指示为肥大细胞

从病理切片中也能看出来，滴注致敏剂组斑马鱼的肥大细胞与正常对照组相比数量明显上升。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，滴注致敏剂组斑马鱼类胰蛋白酶含量和肥大细胞数量与正常对照组相比数量明显上升。

2.本实验证实了C48/80具有明显的致敏作用。

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【评价原理】

 皮肤弹性作为皮肤组织的重要生物力学特性，对生理病理状态的分析、诊断、治疗有着极其重要的参考价值和指导作用，是评价皮肤功能的重要指标。皮肤的液体含量(血液、淋巴液)、弹力纤维和肌纤维的特性及神经组织的紧张度是决定皮肤弹性高低的重要因素。皮肤的弹性和胶原蛋白有关，人体内的胶原蛋白不足时，便会出现皮肤的弹性下降。

I型是在大多数结缔组织中发现的原纤维形成胶原，在骨骼，角膜，真皮和肌腱中含量丰富。在人体内，I型胶原是一种三聚体，主要由两条α1链和一条α2链组成，分别由col1a1和col1a2基因编码。相反，在斑马鱼中，存在三种I型胶原基因，分别编码α1（I），α3（I）和α2（I）链的col1a1a，col1a1b和col1a2。在胚胎和幼虫发育过程中，三种I型胶原基因显示出相似的时空表达模式，表明它们在这些阶段的共同调控和相互依赖性。通过检测皮肤弹性相关基因（皮肤胶原蛋白col1a2基因、col1a1a和col1a1b基因）相对表达量来表明产品的增加皮肤弹性功效。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和皮肤弹性产品组（皮肤弹性产品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。

皮肤吸收皮肤弹性产品一段时间后，我们通过qPCR检测皮肤胶原蛋白col1a2基因（推荐）、col1a1a和col1a1b基因的转录水平，并计算其相对表达量。

【结果展示】

以col1a2基因为例，提供柱状图

图1. 斑马鱼体内col1a2相对表达量

与正常对照组比较，*** p< 0.001

可以看到，摄入皮肤弹性产品组的斑马鱼col1a2基因相对表达量较正常对照组明显增加。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用皮肤弹性产品组的col1a2基因、col1a1a和col1a1b基因相对表达量较正常对照组明显增加。

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环特生物，利用斑马鱼模型实验，为药品企业提供药效评价、药物功效与安全性评价、毒性毒理实验、临床前研究、药物筛选、活性成分筛选等生物检测服务，周期短、费用低、高效专业。助力药品企业做好研发、品控和宣传推广。

药物评价-药物筛选-毒性实验检测项目

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环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²生物评价实验室。

环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。

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环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。

斑马鱼实验模型定制服务流程：

1、接受咨询，了解基本信息；

2、客户填写样品信息表；

3、提供报价单和项目建议书；

4、共同协商并签署合同；

5、寄送样品并支付首付款；

6、开展实验及时沟通；

7、完成实验提供电子版报告；

8、支付尾款；

9、寄送发票和纸质报告；

10、根据客户需要处理样品。

　　环特生物：斑马鱼生物科技，赋能大健康产业! 环特生物是全球的以“水中小白鼠”斑马鱼生物科技为核心的产品功效及安全性解决方案提供商，致力于通过活性成分筛选、功效及安全性评价，面向全球化妆品、保健食品、药品和食品企业提供产品和质控解决方案，持续创新斑马鱼技术，服务好大健康产业。

　　目前，环特生物已通过国家CNAS、CMA实验室认证及AAALAC国际认证，先后荣获德国纽伦堡国际发明金奖、国家高新技术企业、浙江省省级高新技术企业研究中心等荣誉，并与中国农科院质标所联合成立了“农业农村部农产品治疗标准研究中心生物评价实验室”。

　　公司技术研发团队由麻省理工学院博士后、国家万人计划李春启博士牵头作为全职首席科学家，多名海归、中科院、浙大、中国药科大学等国内高等院校毕业的博士和硕士生组成，技术顾问团队由中国中医科学院首席研究员、浙江大学教授等多位享受国务院特殊津贴和食品与大健康产业专家组成。

　　成立至今，公司累计完成项目超过5000个，建立长期合作的国内外企业、研发机构和高等院校超过200家。

【评价原理】

斑马鱼肾脏的肾小球具有与高等脊椎动物肾脏同样的细胞组成，同样的血液滤过、肾小管重吸收功能，一旦肾功能损伤或缺失，斑马鱼就会因无法调节渗透压而产生严重的水肿，同时可能导致肾小球滤过功能下降。

因此，我们可以用两种方法评价肾脏毒性：1. 肾性水肿发生率。由于斑马鱼通体透明，肾性水肿可以明显的被观察到。2. 肾小球滤过率。我们可以对斑马鱼注射一种荧光标记物，一段时间后，正常斑马鱼可将荧光标记物排出体外，而肾小球滤过功能损伤的斑马鱼则不能，通过荧光标记物排泄的情况可以反应斑马鱼肾脏的功能。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼表型进行观察评价，统计肾性水肿发生情况

【结果展示】

图1. 斑马鱼肾脏毒性表型图

可以看到，服用/注射供试品组的斑马鱼出现了明显的肾性水肿的表型。

图2. 斑马鱼肾小球滤过率典型图

可以看到，服用/注射供试品组的斑马鱼荧光强度明显强于正常对照组，标记物排泄明显减少，肾小球滤过率下降，肾脏功能受损。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼有明显的肾性水肿和肾小球滤过率明显下降，与正常对照组存在明显的差别。

2.本实验说明该供试品对斑马鱼有肾脏毒性。

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【评价原理】

正常人的皮肤颜色主要由黑色素决定，通常我们说的色斑、色沉也与黑色素有关。目前认可的黑色素形成途径主要为酪氨酸在酶催化下经过多巴氧化等过程，最终形成黑色素。由于斑马鱼拥有与人类相似的皮肤结构，黑色素的形成机理也与人类高度相似。而且斑马鱼的幼鱼身体透明，表皮的黑色素易于观察，因此可以用来观察产品的美白淡斑效果。

由于斑马鱼通体透明，斑马鱼的黑色素可以被明显地观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和美白淡斑产品组（美白淡斑产品熊果苷、曲酸等通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用一段时间美白淡斑产品后，我们对斑马鱼头部进行拍照，观察斑马鱼头部色素的变化情况。

【结果展示】

图1. 斑马鱼美白淡斑表型图

红色虚线区域为头部分析区域，区域内黑色部分为黑色素

可以看到，美白淡斑产品组的黑色素相比正常对照组明显减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用美白淡斑产品组的色素相比正常对照组明显减少。

2.本实验证实了熊果苷、曲酸美白产品具有美白淡斑功效。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）