【评价原理】

斑马鱼拥有与人类相似的神经组织器官，下丘脑、丘脑、基底神经节、边缘系统等都是与焦虑相关的脑区。1-（3-氯苯基）哌嗪盐酸盐(mCPP)是一种非特异性5 -羟色胺（5-HT）能激动剂，5-HT广泛存在于上述脑区。研究表明mCPP可通过影响5-HT通路而诱导焦虑。氨基丁酸（GABA）是哺乳动物中枢神经系统中广泛分布的一种抑制性神经递质，脑中GABA水平的下降会产生抑郁、紧张、焦虑、失眠等情绪问题。谷氨酸脱羧酶(GAD)是谷氨酸向GABA转化的限速酶。单胺氧化酶（MAO）是一种具有多个结合部位的单一分子酶，对底物的特异性不高，可使多种胺类氧化脱氨，从而影响多种神经递质的代谢，斑马鱼体内只有一种Mao序列，具有人MAO-A和人MAO-B的性质，且与人MAO-A更相似。在大多数物种中，MAO-A降解5-HT。研究表明斑马鱼的运动活动和趋向性是反映焦虑的两个重要指标。GAD2基因与焦虑和情感障碍关系密切。5-HT通过5-羟色胺受体2A（htr2aa）增加焦虑样行为。GABA-A受体在焦虑发生中起重要作用。研究表明MAO-A/B双敲除小鼠的5-HT分解降低，焦虑增加。

因此，我们可以通过检测斑马鱼的行为来判断斑马鱼是否产生焦虑。同时还可以通过检测焦虑相关基因（如gabra1、gad2、htr2aa基因）相对表达量以及MAO含量来评价斑马鱼是否产生焦虑。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用焦虑改善剂组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组与服用焦虑改善剂组都摄入了等量的mCPP（mCPP通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用焦虑改善剂组在摄入mCPP的同时摄入司来吉兰之类的焦虑改善剂。

服用一段时间焦虑改善剂后，我们（1）分析斑马鱼的总运动距离；（2）用q-PCR检测焦虑相关基因表达；（3）用试剂盒检测单胺氧化酶（MAO）活性。

【结果展示】

（1）行为学：

可以看到，服用焦虑改善剂组斑马鱼gabra1基因相对表达量与正常对照组比较相似，较模型对照组明显增加。

可以看到，服用焦虑改善剂组斑马鱼htr2aa基因相对表达量与正常对照组比较相似，较模型对照组明显降低。

（3）单胺氧化酶（MAO）活性：

图5. 斑马鱼单胺氧化酶活性量

与模型对照组比较，*p < 0.05

可以看到，服用焦虑改善剂组斑马鱼单胺氧化酶活性与正常对照组比较相似，较模型对照组明显降低。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用焦虑改善剂组斑马鱼总运动距离、gabra1、gad2和htr2aa基因相对表达量及MAO活性与正常对照组相似。

2.本实验证实了司来吉兰有明显抗焦虑功效。

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产品介绍：

斑马鱼胚胎分装系统，适用于替代人工进行斑马鱼的分装工作，可以快速将斑马鱼自动准确快速的分装到制定培养容器内。

产品优势：

产品参数（示例）：

【评价原理】

斑马鱼肾脏的肾小球具有与高等脊椎动物肾脏同样的细胞组成，同样的血液滤过、肾小管重吸收功能，一旦肾功能损伤或缺失，斑马鱼就会因无法调节渗透压而产生严重的水肿，同时可能导致肾小球滤过功能下降。

因此，我们可以用两种方法评价肾脏毒性：1. 肾性水肿发生率。由于斑马鱼通体透明，肾性水肿可以明显的被观察到。2. 肾小球滤过率。我们可以对斑马鱼注射一种荧光标记物，一段时间后，正常斑马鱼可将荧光标记物排出体外，而肾小球滤过功能损伤的斑马鱼则不能，通过荧光标记物排泄的情况可以反应斑马鱼肾脏的功能。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼表型进行观察评价，统计肾性水肿发生情况

【结果展示】

图1. 斑马鱼肾脏毒性表型图

可以看到，服用/注射供试品组的斑马鱼出现了明显的肾性水肿的表型。

图2. 斑马鱼肾小球滤过率典型图

可以看到，服用/注射供试品组的斑马鱼荧光强度明显强于正常对照组，标记物排泄明显减少，肾小球滤过率下降，肾脏功能受损。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼有明显的肾性水肿和肾小球滤过率明显下降，与正常对照组存在明显的差别。

2.本实验说明该供试品对斑马鱼有肾脏毒性。

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【评价原理】

正常人的皮肤颜色主要由黑色素决定，通常我们说的色斑、色沉也与黑色素有关。目前认可的黑色素形成途径主要为酪氨酸在酶催化下经过多巴氧化等过程，最终形成黑色素。由于斑马鱼拥有与人类相似的皮肤结构，黑色素的形成机理也与人类高度相似。而且斑马鱼的幼鱼身体透明，表皮的黑色素易于观察，因此可以用来观察产品的美白淡斑效果。

由于斑马鱼通体透明，斑马鱼的黑色素可以被明显地观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和美白淡斑产品组（美白淡斑产品熊果苷、曲酸等通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用一段时间美白淡斑产品后，我们对斑马鱼头部进行拍照，观察斑马鱼头部色素的变化情况。

【结果展示】

图1. 斑马鱼美白淡斑表型图

红色虚线区域为头部分析区域，区域内黑色部分为黑色素

可以看到，美白淡斑产品组的黑色素相比正常对照组明显减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用美白淡斑产品组的色素相比正常对照组明显减少。

2.本实验证实了熊果苷、曲酸美白产品具有美白淡斑功效。

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人源移植性肿瘤动物模型(PDX)已被广泛运用于肿瘤生长和转移机制研究，抗肿瘤药物筛选和新药评估等领域。近亲繁殖的同系小鼠和免疫缺陷型小鼠都是成熟的移植性肿瘤动物模型。 但小鼠PDX模型也存在不足，例如饲养成本高，组内样本数量少，实验周期长，肿瘤组织或肿瘤细胞用量大等；并且小鼠的皮毛阻碍了在体肿瘤细胞的成像与观察。

模式动物斑马鱼的优势：斑马鱼与人类基因同源性高达87%，其信号传导通路与人类基本近似；生殖能力强，生殖方式为体外受精，方便大量筛选；饲养成本低；个体小，幼鱼体长为1-2mm；透明，易于观察；遗传操作系统成熟，敲降，敲除，转基因技术都可实现。

斑马鱼在早期没有自体免疫，肿瘤异种移植的成功率高，且实验周期短，观察手段丰富，组内样本数量大。目前，斑马鱼肿瘤异种移植模型已经越来越多的被用于肿瘤发生、发展的机制研究以及抗肿瘤药物的筛选和评价。

案例一：Z-Avatar 胃癌斑马鱼PDX药敏检测案例

案例二：结肠癌细胞在zPDX模型中的增殖和转移能力变化

环特生物，利用斑马鱼模型实验，为药品企业提供药效评价、药物功效与安全性评价、毒性毒理实验、临床前研究、药物筛选、活性成分筛选等生物检测服务，周期短、费用低、高效专业。助力药品企业做好研发、品控和宣传推广。

药效评价-药物功效评价模型

药物安全性评价-毒性评价模型

药物评价-药物筛选-毒性实验检测项目

更多药物评价筛选等项目及内容，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293

环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²生物评价实验室。

环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。

环特生物是中国首家斑马鱼生物技术研究开发企业，专注于药物与大健康产品研发及毒理学评价等领域的技术外包服务，是中国首家通过AAALAC国际认证的斑马鱼研发机构，也是国家高新技术企业和国家火炬计划企业，并通过了中国合格评定国家认可委员会（CNAS，China National Accreditation Service for Conformity Assessment）和中国计量认证/认可（CMA，China Metrology Accredidation）的认证，检验检测项目表如下。

CNAS是由国家认证认可监督管理委员会批准设立并授权的国家认可机构，主要负责认证机构、实验室和检查机构等相关机构的认可工作。中国合格评定国家认可委员会是国际认可论坛（IAF）、国际实验室认可合作组织（IL-AC）、亚太实验室认可合作组织（APLAC）和太平洋认可合作组织（PAC）的正式成员，获得CNAS认证的实验室，也得到上述国际组织认可。

CMA是对检测机构的检测能力及可靠性进行全面的认证及评价。认证对象为所有对社会出具公正数据的产品质量监督检验机构及其他各类实验室如各种产品质量监督检验站、环境检测站、疾病预防控制中心等等。

下图为CNAS检测项目表：

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环特斑马鱼技术，完美契合《化妆品功效宣称评价指导原则》新规要求——是您开展功效宣称备案检测的理想之选！

环特生物，利用斑马鱼模型实验，为化妆品企业提供化妆品功效宣称评价、人体功效评价、功效备案检测、毒理安全性评价、原料筛选验证、微生物检测等服务，周期短、费用低、直观高效。助力化妆品企业做好研发、品控和宣传推广。

化妆品功效评价（人体功效/斑马鱼评价）- 备案检测

化妆品安全性评价-毒理评价

化妆品及原料评价检测项目

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环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²化妆品功效实验室。

环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。

一、概述

依托领先业界的斑马鱼实验能力和创新平台资源，环特生物可为科研单位或个人提供基于斑马鱼技术的课题设计、中期审核、结题报告、实验场地、仪器设备、科研咨询、文献检索、样品安全与功效检测、文章发表、专利申请等科研课题整体解决方案。

斑马鱼，作为一种新的科研工具，其特色优势显著：可靠、快速、高效、高通量、高性价比，且创新性强，易于从众多课题项目中脱颖而出，能针对性地提供快速、准确、可靠的科研数据，协助科研人员发表论文专著、申报专利，实现项目顺利结题。

在科研合作前期，会针对性地对每个项目进行全方位的可行性评估，后期对该项目提供实验执行和技术支持等全面的科研服务，实现双方的学术共赢。借助本单位的资源优势，环特生物可助您：快速清除毕业、职称晋升阶段的技术障碍。即使面临繁忙工作的困扰，也一样能获得快速成长，高效实现科研目标。

二、服务内容

（1）基金写作与申请指导

科研思路把握；立题及开题设计；资料格式优化；标书内容编撰优化；预算评估；分配方案设计

（2）课题设计

文献搜索查询；实验思路可行性分析；实验方法技术指标分析；整体设计协助

（3）结题报告

数据整理与统计；结题报告撰写；结题资料整理改进；专家审评；资料校稿、排版与装订；组织专家组考核

（4）中期审核

实验数据整理；报告整改；预算审计与评估；专家审核；课题进度优化

（5）论文发表

期刊文章撰写；文章内容查重；投稿；投稿答复；实验补充

（6）专利申请

专利查新；专利设计；专利撰写；审核意见答复

三、公司介绍

杭州环特生物科技股份有限公司，是亚洲第一家斑马鱼技术公司，是专注服务于大健康和美妆产业的一站式功效与安全研发检测解决方案提供商。凭借在斑马鱼技术领域逾20年的深厚积累，环特生物将原本用于基础研究的斑马鱼生物技术，开创性地运用到药物、保健食品、化妆品和食品及农产品的研究与评价中。

公司研发团队由经验丰富的毒理学、药理学、食品化学、生物化学、生物信息学等各领域专业技术人员组成。技术团队成员中，具有硕博以上学历或高级以上职称占比70%以上。实验室场地面积超过1500平方米，拥有荧光显微镜、斑马鱼行为分析系统、斑马鱼心跳血液分析系统、GC-MS/MS等专业分析测试设备。拥有国际一流的斑马鱼养殖设施，养殖中心现有40,000尾成年斑马鱼，周产胚胎斑马鱼100,000条以上供实验研究用，领先、完善的设施设备，从硬件层面有效保障了项目顺利开展。

知识产权成果方面，环特生物在斑马鱼应用领域已牵头起草、发布团体标准3项，申请国家发明专利57项、授权27项（截止2021年5月）。公司自主开发斑马鱼技术模型150多种，发表SCI及核心期刊论文99篇（IF=12）、英文专著1部。有7个新药项目，成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报。两项成果分获浙江省科学技术进步奖三等奖和神农中华农业科技奖一等奖，并作为核心技术方承担2022年杭州“亚运果蔬类食品农药残留非靶向快筛斑马鱼模型构建研究”的项目。两项斑马鱼产业化项目成果鉴定，经张伯礼院士和孙宝国院士技术专家审核评定，分获“国内领先水平”和“先进水平”。

截止目前，环特生物已通过国家CNAS实验室认可、CMA资质认定及 AAALAC国际实验动物认证。多项技术成果先后荣获德国纽伦堡国际发明金奖、英国国际发明展金奖及杰出创新奖、俄罗斯“新时代”第十六届国际发明与新技术展金奖、第48届日内瓦国际发明展银奖等国际权威大奖。近年来，环特生物承担省级（含）以上科研项目8项，相继被评为国家高新技术企业、浙江省科技型中小企业，且设有院士专家工作站、省级高新技术企业研发中心、浙江省博士后工作站等科研平台，并与中国农科院质标所成立了“农业农村部农产品质量标准研究中心生物评价实验室”的联合创新平台。

【评价原理】

静脉注射给予长春瑞滨造模斑马鱼免疫力低下模型。大剂量长春瑞滨骨髓抑制明显，导致血小板、红细胞及白细胞数目（中性粒细胞、巨噬细胞、T细胞等）减少和贫血，最终导致免疫力低下人类与斑马鱼在免疫系统的细胞组成上极为相似，而且斑马鱼是目前所有同时具有特异性免疫和非特异性免疫动物个体中体积最小的，适合高通量评价调节免疫功效。斑马鱼静脉注射大剂量长春瑞滨后可造成免疫低下。

采用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼，可在荧光显微镜在观察到免疫力低下的斑马鱼体内的中性粒细胞荧光强度明显减弱。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用免疫调节剂组。其中正常对照组未注射长春瑞滨，模型对照组与服用免疫调节剂组都注射了等量的长春瑞滨（长春瑞滨通过静脉注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用免疫调节剂组在注射长春瑞滨后摄入盐酸小檗胺等免疫调节剂。

服用一段时间免疫调节剂后，我们观察中性粒细胞荧光强度变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼中性粒细胞表型图

绿色荧光颗粒代表中性粒细胞

可以看到，免疫调节剂组中性粒细胞荧光强度与正常对照组相似，没有出现中性粒细胞荧光强度明显减弱的情况。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，免疫调节剂组中性粒细胞数量与正常对照组相似，并未出现模型对照组免疫力低下的情况。

2.本实验证实了盐酸小檗胺具有增强免疫力的功效。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）