【评价原理】

由于斑马鱼拥有与人类相似的消化系统，如肝脏、肠道等，消化和营养的吸收及运输与人类高度相似。斑马鱼的卵黄囊70%左右是中性脂肪，如果能够促进斑马鱼卵黄囊的吸收，就相当于可以促进脂肪的分解和代谢，类似于体内脂肪燃烧。

经过脂肪特异性荧光染色（呈红色），斑马鱼的卵黄囊被染红，可以明显被观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组和服用燃脂产品组。其中正常对照组未摄入其他物质，服用燃脂产品组摄入了白藜芦醇之类的燃脂产品（燃脂产品通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用一段时间燃脂产品后，我们对斑马鱼卵黄囊做脂肪特异性荧光染色，观察卵黄囊的脂肪颜色变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼卵黄囊脂肪表型图

黄色虚线区域为斑马鱼卵黄囊

可以看到，服用燃脂产品的斑马鱼卵黄囊荧光强度与正常对照组明显减弱。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用燃脂产品组卵黄囊荧光强度与正常对照组比较明显减弱。

2.本实验证实了白藜芦醇具有明显燃脂（促进脂肪代谢）功效。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】

糖尿病是一种由遗传基因决定的与感染、肥胖等环境因素促发有关的疾病，其基本病理生理为绝对或相对性胰岛素分泌不足引起的代谢紊乱。持续的高血糖水平导致糖尿病并发症发生，高血糖累及中枢和周围神经病变，出现神经炎症。感觉神经受损较为多见，出现麻木、触电、发热、蚁行感，运动神经受损则出现肌力下降。斑马鱼胰腺的形态发生和基本细胞结构、排列方式类似于哺乳动物，斑马鱼食欲调节（如血清素）和胰岛素调节功能与人类相似，斑马鱼其他涉及葡萄糖体内平衡的器官系统（包括脑、肝、脂肪细胞组织和骨骼肌）的发育和功能也与哺乳动物类似。斑马鱼在糖负荷状态下表现出持续高血糖现象，用高糖高脂饲料可以诱发斑马鱼高血糖，模拟人的二型糖尿病的神经并发症。

用转基因运动神经荧光斑马鱼（呈绿色），患有高血糖的斑马鱼运动神经细胞损伤、荧光强度减弱，在荧光显微镜下可以观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用降糖产品组。其中正常对照组未摄入高糖高脂饲料，模型对照组与服用降糖产品组都摄入了等量的高糖高脂饲料（高糖高脂饲料通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内。降糖产品组在摄入高糖高脂饲料的同时摄入松花蛹虫草之类的降糖产品。

服用一段时间降糖产品后，我们用荧光显微镜观察斑马鱼周围运动神经荧光强度。

【结果展示】

图1. 斑马鱼周围运动神经荧光强度

白色箭头代表运动神经

可以看到，模型对照组周围运动神经荧光强度较正常对照组明显减弱，而降糖产品组斑马鱼周围运动神经荧光强度明显增强。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，降糖产品组斑马鱼周围运动神经荧光强度与模型对照组比较明显增强。

2.本实验证实了松花蛹虫草之类的产品具有神经保护作用。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

肤色暗沉是体内外多种因素共同作用的结果，其中重要的一种因素是由活性氧自由基引起的氧化应激反应，导致皮肤色素沉着，看上去黯淡无光。通过斑马鱼技术能有效评价化妆品提亮肤色的功效作用。

【评价原理】

甲萘醌能产生活性氧自由基，当自由基产生量大于机体清除能力时就发生氧化应激反应,最终导致皮肤色素沉着。用甲萘醌处理后的斑马鱼，被供试品作用后，在白光条件下分析皮肤局部亮度，通过亮度的增加程度反映受试物提亮肤色的功效。

【实验方案】

我们将斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。正常对照组不做处理，模型对照组用甲萘醌处理，供试品组用甲萘醌处理后再用供试品处理，孵育一定时间后，对斑马鱼进行拍照，利用高级图像处理软件分析斑马卵黄囊部分的色素信号强度，从而评价其提亮肤色功效。

【结果展示】

图1. 斑马鱼卵黄囊色素表型图（红色为分析区域）

【评价结论】

1.经过各组斑马鱼对比实验，供试品组与模型对照组对比，斑马鱼卵黄囊部分的色素明显降低，亮度增加。

2.本实验证实了该供试品具有提亮肤色的功效。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

人体皮肤逐渐衰老的重要原因是活性氧自由基对皮肤的长期氧化作用，具有抗氧化活性的化妆品能够清除皮肤表面自由基，通过斑马鱼技术可以有效评价化妆品及其原料清除自由基的能力。

【评价原理】

甲萘醌能产生活性氧自由基，当自由基产生量大于机体清除能力时就发生氧化应激反应，通过斑马鱼卵黄囊荧光强度评价供试品抗氧化作用。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成若干组，含正常对照组、模型对照组和化妆品组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组和化妆品组都加入等量的甲萘醌（甲萘醌通过溶解到标准稀释水中的方式摄入到斑马鱼体内）。化妆品组在加入甲萘醌的同时加入一定浓度的化妆品。

使用化妆品24 hpf后，，我们对斑马鱼整体进行特异性荧光染色，观察斑马鱼卵黄囊活性氧自由基产生情况。

【结果展示】（展示图片仅供参考，实际实验组别依据合同而定）

图1. 斑马鱼卵黄囊荧光表型图

黄色为分析区域，绿色荧光代表氧自由基

可以看到，阳性对照组和化妆品组与正常对照组相似，卵黄囊中只有少量的活性氧自由基。

【评价结论】

1.经过各组斑马鱼对比实验，阳性对照组和化妆品组与正常对照组相似，卵黄囊中只有少量的活性氧自由基。

2.本实验证实了该化妆品具有抗氧化的作用。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】

机体供能主要分为有氧供能与无氧供能，在两种供能条件下ATP均源源不断的合成以维持机体活动的需求。通过ATP含量的测定，可以分析能量调节剂对斑马鱼能量代谢快慢的影响。如持续的促进能量代谢、增加机体能量消耗是行之有效的减肥措施，促进脂肪分解类减肥产品可明显增加斑马鱼体内ATP含量。

【实验方案】

将受测试斑马鱼分成2组，分别是正常对照组、能量调节剂组。服用一段时间能量调节剂后，我们利用ATP试剂盒检测斑马鱼体内ATP含量。

【结果展示】

图1. 斑马鱼体内ATP含量

与正常对照组比较，***p<0.001

可以看到，服用能量调节剂的斑马鱼体内ATP含量明显比正常对照组高。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用能量调节剂的斑马鱼体内ATP含量与正常对照组相比明显升高，说明本次实验中选用的能量调节剂可促进ATP生成，促进能量代谢。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】

血管新生是指在已有血管结构的基础上长出新血管的生物学过程，是一个涉及多种细胞、基质及细胞因子的复杂过程。其中血管内皮细胞是循环血液与血管平滑肌的机械屏障，在缺血性疾病的治疗中，促进内皮细胞的增殖，重建缺血区微循环，促进血管新生是重要的治疗手段之一。羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶 ( HMGCR) 是他汀类药物发挥抑制作用的直接作用点, HMGCR功能被抑制会影响血管的完整性和稳定性。斑马鱼在发育起始阶段，存活不依赖血液循环，不会像哺乳动物那样由于循环缺失导致胚胎死亡。因此，可用辛伐他汀诱导斑马鱼血管缺失模型从而筛选血管再生促进剂。

运用转基因血管内皮荧光斑马鱼（呈绿色），血管缺失的斑马鱼肠下血管面积较正常斑马鱼肠下血管面积减小且肠下血管分支变少。由于转基因斑马鱼的特点，血管的变化可以明显被观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和摄入血管再生促进剂组。其中正常对照组未摄入辛伐他汀，模型对照组与摄入血管再生促进剂组都摄入等量的辛伐他汀（辛伐他汀通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。摄入血管再生促进剂组在摄入辛伐他汀后摄入黄芪甲苷之类的血管再生促进剂。

服用一段时间血管再生促进剂后，我们对斑马鱼进行荧光拍照，观察斑马鱼肠下血管面积和肠下血管分支的变化。

【结果展示】

图1. 肠下血管面积表型图

黄色虚线区域为斑马鱼肠下血管面积

可以看到，服用血管再生促进剂组肠下血管面积与未摄入辛伐他汀的正常对照组比较相似，没有明显的血管缺失。

图2. 肠下血管分支表型图

白色箭头所指为斑马鱼肠下血管分支数

可以看到，服用血管再生促进剂组肠下血管分支与未摄入辛伐他汀的正常对照组比较相似，没有明显的血管缺失。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用血管再生促进剂的肠下血管面积和血管分支均与正常对照组比较相似，并未模型对照组肠下血管面积缩小、血管分支减少的情况。

2.本实验证实了黄芪甲苷具有促进血管再生作用。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】

半数致死浓度（LC50）是指在动物急性毒性实验中，使受试动物半数死亡的毒性浓度。在比较各种污染物的毒性，不同种或不同发育阶段的动物对污染物的敏感性以及环境因素对毒性影响等方面的研究中，都以LC50为依据。常规急性毒性实验常采用啮齿类和非啮齿类动物进行，能较准确地反映食品及保健食品的安全性，但实验周期一般较长，用量较大。用斑马鱼胚胎检验食品及保健食品的急性毒性，具有体积小，成本低，易于饲养，重复性好，便于观察，繁殖周期短，繁殖频率高，给药方式简单等诸多优点。因此斑马鱼是一种理想的试验模型，用以确定食品及保健品暴露在胚胎中的毒性效应，评价其半数致死浓度。

根据实验终点斑马鱼的死亡率，通过使用OriginPro 8.0统计学软件，拟合半数致死浓度。

【实验方案】

我们将供试品（保健食品）设置一系列浓度，并设置一个正常对照组。同时设置3个生物学重复。药物通过溶解到养鱼用水中或灌胃的方式摄入到斑马鱼体内进行3天的暴露实验。

每天观察记录斑马鱼死亡情况，药物处理结束后，统计各实验组的斑马鱼致死率，使用OriginPro 8.0统计学软件绘制最佳的剂量效应曲线，并计算LC50。

【结果展示】

图1. 斑马鱼“浓度-死亡率”效应曲线

可以看到，利用OriginPro 8.0软件模拟得出保健食品LC50= 8.0 μg/mL。

【评价结论】

1.根据保健食品“浓度-死亡率”统计数据，利用OriginPro 8.0软件模拟得出LC50=8.0 μg/mL。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

环特斑马鱼技术，完美契合《化妆品功效宣称评价指导原则》新规要求——是您开展功效宣称备案检测的理想之选！

环特生物，利用斑马鱼模型实验，为化妆品企业提供化妆品功效宣称评价、人体功效评价、功效备案检测、毒理安全性评价、原料筛选验证、微生物检测等服务，周期短、费用低、直观高效。助力化妆品企业做好研发、品控和宣传推广。

化妆品功效评价（人体功效/斑马鱼评价）- 备案检测

化妆品安全性评价-毒理评价

化妆品及原料评价检测项目

更多化妆品评价检测项目及内容，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）。

环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²化妆品功效实验室。

环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。

【评价原理】

斑马鱼的胃肠道在细胞功能和解剖学方面均与人类相似，由内皮细胞、结缔组织、外纵肌和环状肌组成。胚胎发育至26～126 hpf( hours post fertilization，受精后小时)，斑马鱼胃肠道的管腔形成并不断生长，形成有功能的肠道上皮。在未喂食情况下，斑马鱼胚胎受精约72 hpf，肠道首次出现不稳定的自发收缩。伴随着发育的进行，第120～144 hpf，斑马鱼大部分的卵黄囊被吸收，肠道自发的蠕动及摄食能力增强。

我们评价斑马鱼胃肠道毒性有2个指标：1.胃肠道形态的变化；2.肠蠕动功能抑制。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。摄入供试品之前提前给予食物，摄入供试品一段时间后，我们观察斑马鱼肠道表型。

服用一段时间供试品后，我们观察胃肠道形态及内容物的情况。

【结果展示】

可以看到，斑马鱼给予食物后，食物充盈肠道。服用/注射供试品组食物明显多于正常对照组，表明肠蠕动功能被抑制。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼胃肠道形态与正常对照组比较，发生了明显的变化，且肠道蠕动功能被抑制。

2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有胃肠道毒性。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】

他汀是人工合成的羟甲基戊二酸 单 酰 辅 酶 A 还 原 酶 ( 3－hydroxy-3－methylglutaryl－CoA reductase，HMGCＲ) 抑制剂。在人类和啮齿类动物体内，HMGCＲ功能被抑制可破坏正常血管的稳定性和完整性，导致进行性的血管膨胀、破裂。斑马鱼肝脏组织结构和肝细胞成分与哺乳动物相似。因为斑马鱼幼鱼通体透明性，肝脏出血后可以在显微镜下直接观察到肝脏部位呈现红色。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用肝脏出血保护剂组。其中正常对照组未摄入辛伐他汀，模型对照组与服用肝脏出血保护剂组都加入了等量的辛伐他汀（辛伐他汀通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用肝保护剂组在摄入辛伐他汀的同时摄入淫羊藿苷之类的肝脏出血保护剂。

服用一段时间肝脏出血保护剂后，我们观察肝脏部位出血的情况。

【结果展示】

图1. 斑马鱼肝脏出血表型图

黄色区域为肝脏

可以看到，服用肝脏出血保护剂组的斑马鱼肝脏与未摄入辛伐他汀的正常对照组比较相似，没有明显的肝脏出血。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用肝脏出血保护剂组的斑马鱼肝脏与未摄入辛伐他汀的正常对照组比较相似，并未出现模型对照组的肝脏出血的情况。

2.本实验证实了淫羊藿苷具有显著的保护肝脏作用。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）