环特斑马鱼技术，完美契合《化妆品功效宣称评价指导原则》新规要求——是您开展功效宣称备案检测的理想之选！

环特生物，利用斑马鱼模型实验，为化妆品企业提供化妆品功效宣称评价、人体功效评价、功效备案检测、毒理安全性评价、原料筛选验证、微生物检测等服务，周期短、费用低、直观高效。助力化妆品企业做好研发、品控和宣传推广。

化妆品功效评价（人体功效/斑马鱼评价）- 备案检测

化妆品安全性评价-毒理评价

化妆品及原料评价检测项目

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环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²化妆品功效实验室。

环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。

环特生物是中国首家斑马鱼生物技术研究开发企业，专注于药物与大健康产品研发及毒理学评价等领域的技术外包服务，是中国首家通过AAALAC国际认证的斑马鱼研发机构，也是国家高新技术企业和国家火炬计划企业，并通过了中国合格评定国家认可委员会（CNAS，China National Accreditation Service for Conformity Assessment）和中国计量认证/认可（CMA，China Metrology Accredidation）的认证，检验检测项目表如下。

CNAS是由国家认证认可监督管理委员会批准设立并授权的国家认可机构，主要负责认证机构、实验室和检查机构等相关机构的认可工作。中国合格评定国家认可委员会是国际认可论坛（IAF）、国际实验室认可合作组织（IL-AC）、亚太实验室认可合作组织（APLAC）和太平洋认可合作组织（PAC）的正式成员，获得CNAS认证的实验室，也得到上述国际组织认可。

CMA是对检测机构的检测能力及可靠性进行全面的认证及评价。认证对象为所有对社会出具公正数据的产品质量监督检验机构及其他各类实验室如各种产品质量监督检验站、环境检测站、疾病预防控制中心等等。

下图为CNAS检测项目表：

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人源移植性肿瘤动物模型(PDX)已被广泛运用于肿瘤生长和转移机制研究，抗肿瘤药物筛选和新药评估等领域。近亲繁殖的同系小鼠和免疫缺陷型小鼠都是成熟的移植性肿瘤动物模型。 但小鼠PDX模型也存在不足，例如饲养成本高，组内样本数量少，实验周期长，肿瘤组织或肿瘤细胞用量大等；并且小鼠的皮毛阻碍了在体肿瘤细胞的成像与观察。

模式动物斑马鱼的优势：斑马鱼与人类基因同源性高达87%，其信号传导通路与人类基本近似；生殖能力强，生殖方式为体外受精，方便大量筛选；饲养成本低；个体小，幼鱼体长为1-2mm；透明，易于观察；遗传操作系统成熟，敲降，敲除，转基因技术都可实现。

斑马鱼在早期没有自体免疫，肿瘤异种移植的成功率高，且实验周期短，观察手段丰富，组内样本数量大。目前，斑马鱼肿瘤异种移植模型已经越来越多的被用于肿瘤发生、发展的机制研究以及抗肿瘤药物的筛选和评价。

案例一：Z-Avatar 胃癌斑马鱼PDX药敏检测案例

案例二：结肠癌细胞在zPDX模型中的增殖和转移能力变化

【评价原理】

静脉注射给予长春瑞滨造模斑马鱼免疫力低下模型。大剂量长春瑞滨骨髓抑制明显，导致血小板、红细胞及白细胞数目（中性粒细胞、巨噬细胞、T细胞等）减少和贫血，最终导致免疫力低下人类与斑马鱼在免疫系统的细胞组成上极为相似，而且斑马鱼是目前所有同时具有特异性免疫和非特异性免疫动物个体中体积最小的，适合高通量评价调节免疫功效。斑马鱼静脉注射大剂量长春瑞滨后可造成免疫低下。

采用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼，可在荧光显微镜在观察到免疫力低下的斑马鱼体内的中性粒细胞荧光强度明显减弱。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用免疫调节剂组。其中正常对照组未注射长春瑞滨，模型对照组与服用免疫调节剂组都注射了等量的长春瑞滨（长春瑞滨通过静脉注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用免疫调节剂组在注射长春瑞滨后摄入盐酸小檗胺等免疫调节剂。

服用一段时间免疫调节剂后，我们观察中性粒细胞荧光强度变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼中性粒细胞表型图

绿色荧光颗粒代表中性粒细胞

可以看到，免疫调节剂组中性粒细胞荧光强度与正常对照组相似，没有出现中性粒细胞荧光强度明显减弱的情况。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，免疫调节剂组中性粒细胞数量与正常对照组相似，并未出现模型对照组免疫力低下的情况。

2.本实验证实了盐酸小檗胺具有增强免疫力的功效。

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【评价原理】

斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，斑马鱼血液系统与人类血液系统的血小板和凝血因子有许多共同点。大剂量肾上腺素（AH）能够引起动物血管内皮损伤和血小板活性增强，造成体内处于高凝状态。肾上腺素的大量增加模拟人体暴怒、大怒，导致气机阻滞，气滞血瘀。

经过特异性红细胞染色（邻联茴香胺染色），患有血栓的斑马鱼在尾部静脉会布满红细胞，可以明显被观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用抗血栓药物组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组与服用抗血栓药物组都摄入了等量的AH（AH通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用抗血栓药物组在摄入AH的同时摄入阿司匹林、氯吡格雷等抗血栓药物。

服用一段时间抗血栓药物后，我们对斑马鱼整体进行特异性红细胞染色，观察尾部静脉血栓情况。

【结果展示】

图1. 斑马鱼尾部静脉血栓表型图

可以看到，服用抗血栓药物组的尾部静脉血栓情况与正常对照组比较相似，没有明显的血栓。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用抗血栓药物组的血栓情况与正常对照组相似，并未出现模型对照组尾部静脉大量血栓的情况。

2.本实验证实了阿司匹林和氯吡格雷具有明显抗血栓作用。

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【评价原理】

花生四烯酸主要为AA在TXA2合成酶作用下生成TXA2，激活血小板，活化血小板通过GPⅡb／III a受体与纤维蛋白原交联在一起形成血栓。斑马鱼拥有凝血因子、血小板受体，并对临床应用的抗凝血和抗血栓药物具有很好的反应，适合于血栓形成机制和治疗药物的评价。

躯干出现血栓后，血流速度便会减慢，回心血量便会减少。经过红细胞特异性染色（呈红色），患有血小板聚集性血栓的斑马鱼心脏红细胞数量比正常斑马鱼明显减少。由于斑马鱼血液系统发育过程透明的特点，可以明显被观察到。患有血小板聚集性血栓的斑马鱼血流速度会明显比正常斑马鱼明显减慢，在血流分析仪下可以明显观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和抗血栓药物组。其中正常对照组未摄入花生四烯酸，模型对照组与服用/注射抗血栓药物组都摄入了等量的花生四烯酸（花生四烯酸通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。抗血栓药物组在摄入花生四烯酸的同时摄入阿司匹林、氯吡格雷、丹参多酚酸、盐酸地尔硫卓、血栓通、血塞通之类的抗血栓药物。

服用一段时间抗血栓药物后，我们（1）对斑马鱼做红细胞特异性染色，观察心脏红细胞数量的变化；（2）观察血流速度的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼心脏红细胞表型图

绿色虚线区域为心脏，心脏内红色为红细胞

可以看到，服用抗血栓药物组的心脏情况与模型对照组比较，红细胞数量明显增多。

图2. 斑马鱼血流速度

与模型对照组比较，*** p < 0.001

可以看到，服用抗血栓药物组的血流情况与模型对照组比较，血流速度明显加快。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用抗血栓药物组与模型对照组比较，心脏红细胞数量明显增加、血流速度明显加快。

2.本实验证实了阿司匹林、氯吡格雷、丹参多酚酸、盐酸地尔硫卓、血栓通和血塞通具有显著的抗血栓作用。

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【评价原理】

苯肼导致红细胞外翻和氧化应激产生，红细胞外翻能够引起血细胞聚集，氧化应激产生导致内皮细胞损伤，进而导致血小板聚集、纤维蛋白原形成，最终诱导血栓发生。斑马鱼的造血遗传网络在进化上和人类高度保守，适合于血栓形成机制和治疗药物的评价。

躯干出现血栓后，回心血量便会减少。经过血红细胞特异性染色（呈红色），患有血栓的斑马鱼心脏红细胞比正常斑马鱼心脏红细胞明显减少，由于斑马鱼血液系统发育过程透明的特点，可以明显被观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用血管疏通剂组。其中正常对照组未摄入苯肼，模型对照组与服用血管疏通剂组都摄入了等量的苯肼（苯肼通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用血管疏通剂组在加入苯肼的同时摄入阿司匹林、氯吡格雷之类的血管疏通剂。

服用一段时间血管疏通剂后，我们对斑马鱼整体做血红细胞特异性染色，观察心脏红细胞变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼血栓表型图

黄色虚线区域为心脏，心脏内红色为红细胞

可以看到，服用血管疏通剂组的肝脏情况与未摄入苯肼的正常对照组比较相似，没有明显的红细胞减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用血管疏通剂组的心脏红细胞数量与未摄入苯肼的正常对照组相似，并未出现模型对照组的心脏红细胞数量减少的情况。

2.本实验证实了阿司匹林、氯吡格雷和养血清脑颗粒具有显著的疏通血管（抗血栓）功效。

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【评价原理】

人类在整个生命周期中,不断地更新血液成分、骨骼肌、皮肤等, 修复骨骼、 肌肉、指尖等部位较小的损伤。斑马鱼鱼鳍相当于人的手臂或腿，其修复再生能力比人类更加强大。紫外线通过破坏和蛋白质等生物大分子的结构，进而影响细胞和生物组织的正常生长和发育，引起细胞异常凋亡和发育畸形。长期暴露于紫外线辐射是导致皮肤光老化、光损伤和光致癌发生的主要环境因素，表现为皮炎、皮肤松弛增厚、变硬、皱纹增多、胶原降解和皮肤癌。被紫外线照射的斑马鱼尾鳍也会变得粗糙、皱缩并发生细胞凋亡。

在较短的时间内，斑马鱼尾鳍可完成修复，表现为在显微镜下可以被观察到尾鳍面积的恢复，同时用特异性的荧光染色（凋亡细胞呈绿色）可被观察到凋亡细胞的减少。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和使用防晒剂组。其中正常对照组未照射紫外线，模型对照组与使用防晒剂组都照射了同等强度的紫外线。防晒剂主要使用茶多酚、SOD等。

使用防晒剂一段时间后，我们将斑马鱼置于解剖显微镜下观察斑马鱼尾鳍面积变化；同时，使用特异性荧光染色，观察斑马鱼尾鳍凋亡细胞数量。

【结果展示】

图1. 斑马鱼紫外线照射尾鳍面积表型图

绿色虚线区域为斑马鱼尾鳍

可以看到，使用防晒剂组的斑马鱼尾鳍与未照射紫外线的正常对照组比较相似，没有模型的尾鳍面积缩小。

图2. 斑马鱼紫外线照射尾鳍凋亡细胞表型图

白色箭头指向尾鳍凋亡细胞

可以看到，使用防晒剂组的斑马鱼尾鳍凋亡细胞个数与未照射紫外线的正常对照组比较相似，没有明显的细胞凋亡。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，使用防晒剂组的尾鳍面积、凋亡细胞个数与未照射紫外线的正常对照组比较相似，没有模型对照组尾鳍面积缩小和细胞凋亡增多的情况。

2.本实验证实了茶多酚、SOD等具有显著的防晒（晒后修复）功效。

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【斑马鱼高通量技术】

斑马鱼高通量技术，是一种可支持同时间对数十、上百样品进行检测，并以相应的数据库支持整个实验体系高效运转的高可靠性筛选技术。

目前，环特通过实验设计和数据分析等重要节点进行深度优化，强势推出斑马鱼高通量筛选技术。该技术可将项目交付周期缩短至10-15天，并衍生出三个梯度的技术方案。

【显著优势】

高效：斑马鱼胚胎发育速度快，其1天生长相当于鼠类8～10天，实验周期大幅缩短，效率更高。

高可靠：基因相似度与人体达87%，与人体对应性强，雌鱼单次产卵超200枚，样本量大、个体差异小，结果更可靠。

高性价比：斑马鱼实验用样量仅为小鼠的1/1000～1/100，加之实验效率大幅提升后，带来极具吸引力的成本优势。

定制灵活：方案设计灵活，可定制化程度高，能满足不同样品数量和实验目的需求。

【实验方案】

【实验结果】

基于斑马鱼的高通量筛选技术，以上三个梯度方案，实现项目交付周期短至10-15天。相比其它动物高通量筛选方案，斑马鱼更高效、更可靠、性价比更高、周期更短。

【合作案例】

【服务流程】

1、提出需求及样品信息 → 2、提供解决方案 → 3、确认报价及周期 → 4、支付首付款开始实验 → 5、验收实验支付尾款。

【附】：高通量药物筛选服务项目（部分）

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环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²生物评价实验室。

环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。

环特生物，利用斑马鱼模型实验，为功能食品/保健食品企业提供产品功效评价、功能检测、毒理安全性评价、原料筛选验证及安全检测、微生物检测等服务，周期短、费用低、直观高效。助力企业做好研发、品控和推广。

功效评价检测

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食品/保健食品及原料 评价检测项目

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环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²斑马鱼生物评价实验室。

环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。