【评价原理】

斑马鱼和哺乳动物的心脏有相似的功能，包括血流方向、由专门的心内膜肌肉组织驱动的高压系统、由电子系统调节的心律以及与起搏活动相关的心跳。斑马鱼对典型的心脏毒素的药理学反应与人类相似。斑马鱼受精后48 h，心血管系统功能全面，呈现出例子通道和代谢过程的复杂性。因此，可以应用斑马鱼评价药物对心衰的防治作用。维拉帕米是苯烷胺类钙离子拮抗剂,其诱导心力衰竭的药理学基础有以下三方面: （1）对心脏的抑制作用,即负性频率、负性传导及负性肌力作用,且为剂量依赖性;（2）扩张血管作用,即对外周血管具有明显的扩张作用,使外周阻力降低,平均动脉压下降; （3）减少冠脉血流,降低心肌血供。我们用维拉帕米建立斑马鱼心衰模型。

患有心衰的斑马鱼与正常斑马鱼比较，出现心包水肿、静脉瘀血、心搏出量减少和血流速度减慢，由于斑马鱼通体透明的特点，可以明显被观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和抗心衰药物组。其中正常对照组未摄入维拉帕米，模型对照组与抗心衰药物组都摄入了等量的维拉帕米（维拉帕米通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。抗心衰药物组在摄入维拉帕米的同时加入地高辛、美托洛尔类的抗心衰药物。

服用一段时间抗心衰药物后，观察斑马鱼心包水肿和静脉淤血的情况；用心跳血流分析系统检测心搏出量和血流速度的情况。

【结果展示】

图1. 斑马鱼心衰表型图

黄色虚线区域为心脏，绿色虚线区域为静脉淤血

可以看到，服用抗心衰药物组的心包面积和静脉瘀血面积与未摄入维拉帕米的正常对照组基本相似，没有明显的心衰情况。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用抗心衰药物组的心包面积和静脉瘀血面积与未摄入维拉帕米的正常对照组基本相似，没有出现模型对照组心包水肿、静脉瘀血的情况。

2.本实验证实了地高辛、美托洛尔具有明显的心衰防治（心脏功能改善）作用。

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【评价原理】

通常来说，炎症是机体的一种抗病反应，机体蒙受损坏后，机体的内坏境以及内境界和外坏境之间达到新的均衡的过程中会引发组装细胞的损坏，使片面组装细胞显现变性、坏死。

利用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼（MPO）作为模型，当体内炎症水平上升的时候，中性粒细胞的数量也就相对的增高，在荧光显微镜下，中性粒细胞的数量也就是表现出炎症反应程度的一个重要指标。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照与供试品组，通过服用/注射供试品一段时间后，我们在荧光显微镜下观察斑马鱼中性粒细胞的数量，同时检测体内炎症因子IL-6的表达情况。

【结果展示】

图1. 斑马鱼中性粒细胞数量

（白色箭头为斑马鱼侧线中性粒细胞）

从实验结果可以看到，供试品组相对正常对照组斑马鱼侧线位置中性粒细胞数显著增多。

图2：斑马鱼体内的中性粒细胞数量及体内炎症因子表达水平的变化

从实验结果可以看到，斑马鱼供试品组相对正常对照组，IL-6炎症因子相对表达量下降。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，相对于正常对照组，服用或者注射供试品组之后，中性粒细胞增多和炎症因子上升。

2.本实验证实了供试品组等具有增加中性粒细胞数量，以及促进炎性因子表达的功效。

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【评价原理】

人和斑马鱼的细胞在高渗溶液中会造成失水皱缩，用高于斑马鱼体内渗透压的氯化钠处理斑马鱼，导致斑马鱼尾部因脱水而面积皱缩、变小。

【实验方案】

我们将发育正常且阶段一致的斑马鱼随机分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和补水保湿剂。其中正常对照组未加入氯化钠，模型对照组与补水保湿剂组加入了等量的氯化钠（氯化钠通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。补水保湿剂组在加入氯化钠的同时加入玻尿酸之类的补水保湿剂。

加入一段时间补水保湿剂后，观察斑马鱼尾部面积的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼尾部面积表型图

可以看到，补水保湿剂组的斑马鱼尾部面积与未摄入氯化钠的正常对照组比较相似，尾部没有明显皱缩。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用补水保湿剂组的尾部面积与未摄入氯化钠的正常对照组相似，并未出现模型对照组尾部脱水皱缩的情况。

2.本实验证实了玻尿酸具有补水保湿功效。

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皮肤亮白是东方女性一直以来对美的直观追求，因此美白类化妆品成为了市场的宠儿。人体皮肤变黑的主要原因是酪氨酸酶的存在促进了黑色素的合成和黑色素基因的表达，而在斑马鱼皮肤上也有类似的表达过程，因此，可以通过斑马鱼技术有效评价化妆品的美白功效。

【评价原理】

斑马鱼在发育初期全身透明，胚胎发育至 24 h时黑色素开始从视网膜上皮生长。色素细胞起源于背部外胚层分化的一群细胞—神经嵴细胞，然后增殖、迁徙、分化成色素母细胞。在黑色素形成的过程中进行干预，可抑制黑色素的形成。

【实验方案】

我们将斑马鱼分成若干组，含正常对照组和供试品组。正常对照组不做处理，供试品组使用受试化妆品，孵育48 hpf后，对斑马鱼头部进行拍照，利用高级图像处理软件分析斑马鱼头部的黑色素信号强度，从而评价其美白功效。

此外，将斑马鱼进行匀浆处理，分别提取其中的酪氨酸酶和黑色素蛋白，进行OD值测定，通过酪氨酸酶活性和黑色素蛋白的含量反映化妆品的美白功效。

【结果展示】（展示图片仅供参考，实际实验组别依据合同而定）

图1. 斑马鱼头部黑色素表型图（蓝色为分析区域）

阳性对照组和化妆品组与正常对照组对比分析，得出美白功效作用。

图2 斑马鱼酪氨酸酶活力

与正常对照组比较，**p<0.01

供试品组与正常对照组相比，酪氨酸酶活性显著降低。

图3 斑马鱼黑色素蛋白含量

与正常对照组比较，***p<0.001

供试品组与正常对照组相比，黑色素含量显著降低。

【评价结论】

1.经过各组斑马鱼对比实验，阳性对照组和化妆品组与正常对照组对比，斑马鱼头部只有少量的黑色素。

2.经过对斑马鱼进行匀浆和蛋白质提取处理，可见供试品组与正常对照组相比，酪氨酸酶活性和黑色素蛋白含量均减少。

3.本实验证实了该化妆品具有美白的作用。

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【评价原理】

由于斑马鱼拥有与人类相似的消化系统，如肝脏、肠道等，消化和营养的吸收及运输与人类高度相似。斑马鱼的卵黄囊70%左右是中性脂肪，如果能够促进斑马鱼卵黄囊的吸收，就相当于可以促进脂肪的分解和代谢，类似于体内脂肪燃烧。

经过脂肪特异性荧光染色（呈红色），斑马鱼的卵黄囊被染红，可以明显被观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组和服用燃脂产品组。其中正常对照组未摄入其他物质，服用燃脂产品组摄入了白藜芦醇之类的燃脂产品（燃脂产品通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用一段时间燃脂产品后，我们对斑马鱼卵黄囊做脂肪特异性荧光染色，观察卵黄囊的脂肪颜色变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼卵黄囊脂肪表型图

黄色虚线区域为斑马鱼卵黄囊

可以看到，服用燃脂产品的斑马鱼卵黄囊荧光强度与正常对照组明显减弱。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用燃脂产品组卵黄囊荧光强度与正常对照组比较明显减弱。

2.本实验证实了白藜芦醇具有明显燃脂（促进脂肪代谢）功效。

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【评价原理】

机体供能主要分为有氧供能与无氧供能，在两种供能条件下ATP均源源不断的合成以维持机体活动的需求。通过ATP含量的测定，可以分析能量调节剂对斑马鱼能量代谢快慢的影响。如持续的促进能量代谢、增加机体能量消耗是行之有效的减肥措施，促进脂肪分解类减肥产品可明显增加斑马鱼体内ATP含量。

【实验方案】

将受测试斑马鱼分成2组，分别是正常对照组、能量调节剂组。服用一段时间能量调节剂后，我们利用ATP试剂盒检测斑马鱼体内ATP含量。

【结果展示】

图1. 斑马鱼体内ATP含量

与正常对照组比较，***p<0.001

可以看到，服用能量调节剂的斑马鱼体内ATP含量明显比正常对照组高。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用能量调节剂的斑马鱼体内ATP含量与正常对照组相比明显升高，说明本次实验中选用的能量调节剂可促进ATP生成，促进能量代谢。

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【评价原理】

糖尿病是一种由遗传基因决定的与感染、肥胖等环境因素促发有关的疾病，其基本病理生理为绝对或相对性胰岛素分泌不足引起的代谢紊乱。持续的高血糖水平导致糖尿病并发症发生，高血糖累及中枢和周围神经病变，出现神经炎症。感觉神经受损较为多见，出现麻木、触电、发热、蚁行感，运动神经受损则出现肌力下降。斑马鱼胰腺的形态发生和基本细胞结构、排列方式类似于哺乳动物，斑马鱼食欲调节（如血清素）和胰岛素调节功能与人类相似，斑马鱼其他涉及葡萄糖体内平衡的器官系统（包括脑、肝、脂肪细胞组织和骨骼肌）的发育和功能也与哺乳动物类似。斑马鱼在糖负荷状态下表现出持续高血糖现象，用高糖高脂饲料可以诱发斑马鱼高血糖，模拟人的二型糖尿病的神经并发症。

用转基因运动神经荧光斑马鱼（呈绿色），患有高血糖的斑马鱼运动神经细胞损伤、荧光强度减弱，在荧光显微镜下可以观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用降糖产品组。其中正常对照组未摄入高糖高脂饲料，模型对照组与服用降糖产品组都摄入了等量的高糖高脂饲料（高糖高脂饲料通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内。降糖产品组在摄入高糖高脂饲料的同时摄入松花蛹虫草之类的降糖产品。

服用一段时间降糖产品后，我们用荧光显微镜观察斑马鱼周围运动神经荧光强度。

【结果展示】

图1. 斑马鱼周围运动神经荧光强度

白色箭头代表运动神经

可以看到，模型对照组周围运动神经荧光强度较正常对照组明显减弱，而降糖产品组斑马鱼周围运动神经荧光强度明显增强。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，降糖产品组斑马鱼周围运动神经荧光强度与模型对照组比较明显增强。

2.本实验证实了松花蛹虫草之类的产品具有神经保护作用。

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人体皮肤逐渐衰老的重要原因是活性氧自由基对皮肤的长期氧化作用，具有抗氧化活性的化妆品能够清除皮肤表面自由基，通过斑马鱼技术可以有效评价化妆品及其原料清除自由基的能力。

【评价原理】

甲萘醌能产生活性氧自由基，当自由基产生量大于机体清除能力时就发生氧化应激反应，通过斑马鱼卵黄囊荧光强度评价供试品抗氧化作用。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成若干组，含正常对照组、模型对照组和化妆品组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组和化妆品组都加入等量的甲萘醌（甲萘醌通过溶解到标准稀释水中的方式摄入到斑马鱼体内）。化妆品组在加入甲萘醌的同时加入一定浓度的化妆品。

使用化妆品24 hpf后，，我们对斑马鱼整体进行特异性荧光染色，观察斑马鱼卵黄囊活性氧自由基产生情况。

【结果展示】（展示图片仅供参考，实际实验组别依据合同而定）

图1. 斑马鱼卵黄囊荧光表型图

黄色为分析区域，绿色荧光代表氧自由基

可以看到，阳性对照组和化妆品组与正常对照组相似，卵黄囊中只有少量的活性氧自由基。

【评价结论】

1.经过各组斑马鱼对比实验，阳性对照组和化妆品组与正常对照组相似，卵黄囊中只有少量的活性氧自由基。

2.本实验证实了该化妆品具有抗氧化的作用。

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【评价原理】

他汀是人工合成的羟甲基戊二酸 单 酰 辅 酶 A 还 原 酶 ( 3－hydroxy-3－methylglutaryl－CoA reductase，HMGCＲ) 抑制剂。在人类和啮齿类动物体内，HMGCＲ功能被抑制可破坏正常血管的稳定性和完整性，导致进行性的血管膨胀、破裂。斑马鱼肝脏组织结构和肝细胞成分与哺乳动物相似。因为斑马鱼幼鱼通体透明性，肝脏出血后可以在显微镜下直接观察到肝脏部位呈现红色。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用肝脏出血保护剂组。其中正常对照组未摄入辛伐他汀，模型对照组与服用肝脏出血保护剂组都加入了等量的辛伐他汀（辛伐他汀通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用肝保护剂组在摄入辛伐他汀的同时摄入淫羊藿苷之类的肝脏出血保护剂。

服用一段时间肝脏出血保护剂后，我们观察肝脏部位出血的情况。

【结果展示】

图1. 斑马鱼肝脏出血表型图

黄色区域为肝脏

可以看到，服用肝脏出血保护剂组的斑马鱼肝脏与未摄入辛伐他汀的正常对照组比较相似，没有明显的肝脏出血。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用肝脏出血保护剂组的斑马鱼肝脏与未摄入辛伐他汀的正常对照组比较相似，并未出现模型对照组的肝脏出血的情况。

2.本实验证实了淫羊藿苷具有显著的保护肝脏作用。

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【评价原理】

血管新生是指在已有血管结构的基础上长出新血管的生物学过程，是一个涉及多种细胞、基质及细胞因子的复杂过程。其中血管内皮细胞是循环血液与血管平滑肌的机械屏障，在缺血性疾病的治疗中，促进内皮细胞的增殖，重建缺血区微循环，促进血管新生是重要的治疗手段之一。羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶 ( HMGCR) 是他汀类药物发挥抑制作用的直接作用点, HMGCR功能被抑制会影响血管的完整性和稳定性。斑马鱼在发育起始阶段，存活不依赖血液循环，不会像哺乳动物那样由于循环缺失导致胚胎死亡。因此，可用辛伐他汀诱导斑马鱼血管缺失模型从而筛选血管再生促进剂。

运用转基因血管内皮荧光斑马鱼（呈绿色），血管缺失的斑马鱼肠下血管面积较正常斑马鱼肠下血管面积减小且肠下血管分支变少。由于转基因斑马鱼的特点，血管的变化可以明显被观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和摄入血管再生促进剂组。其中正常对照组未摄入辛伐他汀，模型对照组与摄入血管再生促进剂组都摄入等量的辛伐他汀（辛伐他汀通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。摄入血管再生促进剂组在摄入辛伐他汀后摄入黄芪甲苷之类的血管再生促进剂。

服用一段时间血管再生促进剂后，我们对斑马鱼进行荧光拍照，观察斑马鱼肠下血管面积和肠下血管分支的变化。

【结果展示】

图1. 肠下血管面积表型图

黄色虚线区域为斑马鱼肠下血管面积

可以看到，服用血管再生促进剂组肠下血管面积与未摄入辛伐他汀的正常对照组比较相似，没有明显的血管缺失。

图2. 肠下血管分支表型图

白色箭头所指为斑马鱼肠下血管分支数

可以看到，服用血管再生促进剂组肠下血管分支与未摄入辛伐他汀的正常对照组比较相似，没有明显的血管缺失。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用血管再生促进剂的肠下血管面积和血管分支均与正常对照组比较相似，并未模型对照组肠下血管面积缩小、血管分支减少的情况。

2.本实验证实了黄芪甲苷具有促进血管再生作用。

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