类器官简介

类器官是一种原代组织来源的成体干细胞体外自组装成的3D器官型结构，可分化为多个器官特异性的细胞类型，并能够表现出细胞与细胞之间、细胞与其周围基质之间的相互作用和空间位置形态，在体外重现人体真实器官的一些关键功能和结构，并具有稳定的表型和遗传学特征。

作为新兴的生物学模型，类器官具有细胞系和动物模型所不具有的独特优势，其细胞组成和结构更加类似人体组织，可提供一个高度生理相关的系统，是基础研究的模型。同时，类器官模型相对实验动物更加经济，且时效性更高，可以提高研究效率。

类器官模型的应用

类器官模型的优势

·速度快 ·通量高 ·临床相关性强

类器官的构建

建立PSC和AdSc类器官的过程

● 以 iPS/ES 或成体干细胞为起点, 在 3D 环境下, 利用细胞因子将干细胞定向分化后建立的, 具有各种器官主要组织细胞类型及组织特征的微型结构。

● 多能干细胞(PSC)来源的类器官是在PSCs定向分化后建立的, 首先是胚层的形成, 随后是诱导和成熟, 通过加入特定的生长和信号因子来获得所需的器官特定细胞类型。

● 成体干细胞(AdSC)衍生的类器官培养需要分离组织特异性干细胞群, 然后将其嵌入细胞外基质中, 并加入明确的组织特异性生长因子, 实现类器官的增殖。

类器官构建委托技术服务

环特生物简介

医-健-美-食产业斑马鱼技术应用服务商

环特生物，已通过CNAS、CMA、ILAC-MRA、AAALAC资质认证。

环特生物，是专注服务于生物医药和大健康美妆产业的一站式功效与安全评价技术提供商。经多年发展，已形成了以斑马鱼平台为核心，以类器官、哺乳动物、人体和微生物平台为特色，兼具生物医药CRO能力和大健康美妆一站式研发检测的产业平台新格局。

作为斑马鱼技术应用服务商，环特生物深度挖掘、创新斑马鱼技术的应用场景，将斑马鱼模型、基因编辑技术和模型，成功应用于药物、保健食品、化妆品、功能食品的原料筛选、配方研发、生产质控、营销背书、新品备案以及斑马鱼实验室的建设运营，为企业提供全产业链条上的功效和安全评价的技术服务。

类器官构建委托技术服务，请拨电话咨询 0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）。

【评价原理】

过高的血尿酸浓度可以引起痛风,并与其他代谢类疾病相关联。斑马鱼具有与嘌呤代谢有关的黄嘌呤脱氢酶，尿酸氧化酶，尿囊素酶和尿囊酸酶。尿酸氧化酶是动物嘌呤代谢过程中一种重要的酶,能催化尿酸氧化生成尿裹素、CO2和H2O2。大多数脊椎动物的肝脏、肾脏和脑髓里均发现有此酶的存在。

经过尿酸荧光试剂盒特异性反应，患有高尿酸的斑马鱼的尿酸荧光信号强度会比正常斑马鱼的尿酸荧光信号强度明显增多。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和降尿酸产品组。其中正常对照组未摄入氧嗪酸钾和黄嘌呤，模型对照组与降尿酸产品组都摄入了等量的氧嗪酸钾和黄嘌呤（氧嗪酸钾和黄嘌呤通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。降尿酸产品组在摄入氧嗪酸钾和黄嘌呤的同时摄入鲣鱼胶原肽和蛹虫草之类的降尿酸产品。

服用一段时间降尿酸产品组后，我们用尿酸荧光检测试剂盒检测斑马鱼体内尿酸水平。

【结果展示】

图1. 斑马鱼体内尿酸水平（荧光信号强度）

与模型对照组比较，*** p < 0.001

可以看到，服用降尿酸产品组的斑马鱼体内尿酸水平与未摄入氧嗪酸钾和黄嘌呤的正常对照组相似，没有明显的尿酸升高现象。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

环特生物可定制的斑马鱼实验模型有数百种，主要应用于化妆品,保健食品,药物功效与安全性评价、药理毒理评价、临床前研究实验、药物高通量筛选、化合物筛选、活性成分筛选、分子生物学实验、斑马鱼行为分析等，周期短、费用低、高效专业。

▼斑马鱼模型实验-CRO实验外包-定制服务项目（部分）

▼药物实验类服务项目（CRO外包委托实验）

▼食品/保健食品功效与毒性安全性评价检测项目（部分）

▼化妆品/原料 评价备案检测项目（部分）

更多更详细的斑马鱼模型实验定制服务项目，请拨电话咨询 0571-83782130，项目经理手机 17364531293。

环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²斑马鱼生物评价实验室。

环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。

环特生物，利用斑马鱼模型实验，为客户提供毒性评价、毒理学实验、急毒长毒实验、化妆品,保健食品,药物毒性评价检测、生态水质毒性检测等服务，周期短、费用低、高效专业。

毒性实验-毒理学评价检测

疾病/病理 毒性评价-安全性评价模型

更多的毒理实验-毒性评价检测及内容，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293

环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²斑马鱼生物评价实验室。

环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。

【评价原理】

斑马鱼作为一种理想的人类血液毒性模型，是以其造血系统与人类造血系统在进化上高度保守性尾前提的。通过与人类造血类似的信号传导通路，斑马鱼形成了以包括红系、髓系、淋系及巨核系为主的造血系统。斑马鱼可建立多种血液系统毒性模型，主要包括红细胞、白细胞、出凝血障碍性毒性三大类，因此主要与斑马鱼中性粒细胞、巨噬细胞、红细胞和血流量相关。由于斑马鱼具有身体积小、实验周期短等优点，可以用作评估血液毒性的一种便捷模型。

转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼中性粒细胞自身发出荧光，可以直接在荧光显微镜下观察中性粒细胞个数；黑色素等位基因突变斑马鱼通体透明，经过巨噬细胞染色后可以直接在显微镜下观察巨噬细胞数量；利用邻联茴香胺将斑马鱼心脏红细胞染色，在显微镜下可以直接观察红细胞数量（信号强度）。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和供试品组(供试品通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。

处理结束后，(1)通过荧光显微镜观察并统计斑马鱼中性粒细胞数量；(2)通过染色斑马鱼巨噬观察巨噬细胞细胞数量；(3)通过邻联茴香胺染色心脏部位红细胞，在显微镜下观察心脏红细胞染色强度。

【结果展示】

图1.斑马鱼中性粒细胞表型图

（绿色小点为中性粒细胞）

可以看到，供试品组中性粒细胞个数较正常对照组明显减少。

图2.斑马鱼巨噬细胞表型图

（红色小点为巨噬细胞）

可以看到，供试品组巨噬细胞数量较正常对照组明显减少。

图3.斑马鱼红细胞抑制表型图

（蓝色虚线框内为分析区域,分析红细胞染色强度）

可以看到，供试品组心脏红细胞染色强度较正常对照组明显降低。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，供试品组的中性粒细胞数量、巨噬细胞数量明显减少，红细胞染色强度明显降低。

2.本实验证实了此供试品诱发血液毒性。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

更多斑马鱼实验以及斑马鱼品系，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293

环特生物，依托斑马鱼模型实验，可做上百种筛选模型，如动物模型药物筛选、药物高通量筛选、活性成分筛选、化合物筛选、中药新药筛选、毒性筛选、抑制剂筛选、酶活性筛选、多肽药物筛选等服务，周期短、费用低、高效专业。

药物筛选项目

病理药物筛选模型

高通量药物筛选

更多药物筛选模型及内容，请拨电话咨询 0571-83782130，项目经理手机 17364531293

环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²斑马鱼生物评价实验室。

环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。

斑马鱼CRISPR基因编辑技术服务，含基因敲入品系制备、基因敲入品系制备、转基因品系制备等。

斑马鱼基因敲入品系制备

服务简介：

1. 基因敲入(Knock in)

非同源依赖的DNA修复技术，在斑马鱼基因组定点插入外源DNA片段（荧光蛋白、PA等）。

2. 基因敲入技术特点

    2.1 定点插入；

    2.2敲入效率较低。

服务流程：

根据客户基因敲入要求进行基因分析；

cas9 mRNA和多个gRNA靶点的设计及合成；

高效gRNA靶点的筛选及效率验证；

敲入载体设计及构建；

斑马鱼胚胎的显微注射和敲入验证；

F0代斑马鱼的可遗传性筛选；

杂合子F1代斑马鱼的基因型鉴定。

环特生物优势：

国际一流的斑马鱼敲入技术以及上百例的成功经验；

特有的高效筛选方法。

案例展示：

斑马鱼基因敲除品系制备

服务简介

1.基因敲除(Gene Knockout)

根据给定GeneID或Gene name，分析基因保守结构域，在保守结构域或客户指定区域设计靶点并制备靶点gRNA，gRNA和Cas9共注射使基因产生移码突变，通过PCR筛选得到稳定遗传品系。

2. 基因敲除技术特点

    2.1 通过将基因敲除斑马鱼品系与野生型相比较，研究者可以揭示特定基因的功能。

    2.2 在基因组水平上将目标基因敲除，遗传背景干净清晰，是研究基因功能的金标准。

服务流程

▲根据客户提供的GeneID或Gene name进行基因分析——▲cas9 mRNA和多个gRNA靶点的设计及合成——▲高效gRNA靶点的筛选及效率验证——▲F0代斑马鱼的可遗传性筛选——▲杂合子F1代斑马鱼的基因型鉴定

环特生物优势

成熟的基因敲除技术快速获得稳定品系；

多靶点共注射F0代验证基因功能。

斑马鱼敲除品系成功案例

1、基因分析

分析目的基因的保守结构域；

2、靶点筛选

设计4个gRNA靶点，PCR检测包含靶点的区域真实序列，显微注射验证靶点效率；

3、大规模注射养殖F0

Cas9 pro+gRNA 共注射，共养殖 F0 约 80 条用于后期Founder筛选；

4、Founder 筛选 

F0代斑马鱼与野生型外交，收集48hpf的F1胚胎抽取基因组，PCR鉴定，测序结果在靶点位置出现双峰的认为产生突变，然后TA clone验证其可能产生的突变方式；

5、F1 代筛选

F1代斑马鱼剪尾筛选，TA clone验证突变方式：

通过对测序图谱的分析获得突变方式为：-5bp，产生移码突变的敲除斑马鱼；

通过对测序图谱的分析获得突变方式为：-4-3bp，产生移码突变的敲除斑马鱼模型。

斑马鱼转基因品系制备

服务简介

1. 转基因

斑马鱼转基因技术包括显微注射、电穿孔技术（电脉冲介导）、精子载体法、GAL4/UAS 转录激活系统、Tol2转座子介导、拟型反转录病毒介导、重组杆状病毒介导等方法。

2. 转基因技术目的

    2.1 通过定点敲除技术进行基因鉴定和功能研究； 

    2.2 利用报告基因对受体等蛋白质进行功能研究；

    2.3 构建各种斑马鱼突变体，通过斑马鱼疾病模型进行人类疾病研究和药物筛选；

    2.4 构建含有特异性启动子的生物感应器，用于环境监测。

3. Tol2转座子介导的转基因技术优点

    3.1 Tol2转座子可携带大片段DNA；

    3.2 Tol2转座子没有位置偏好性，几乎能整合到染色体的任意位置；

    3.3 Tol2转座子的耐受范围很广；

    3.4 Tol2作为天然的具有自主转座活性的脊椎动物转座子，能够在胚胎发育的不同时期进行有效的转移；

    3.5 Tol2转座子介导的转基因技术能够有效克服外源基因在后代传递频率低的技术难题。

服务流程

▲客户提出转基因品系制备需求→▲分析可行性→▲构建载体→▲斑马鱼胚胎注射→▲founder筛选→▲F1代斑马鱼养殖→▲F2代斑马鱼养殖

环特生物优势

1.特有的养殖方法可缩短服务周期；

2.丰富的经验和及时沟通助力科研实验。

参考文献：

[1] 刘丽丽, 王健, 王海胜,等. 斑马鱼转基因平台的建立[J]. 生物技术通报, 2013(010):120-126.

[2] 陶然, 常玉梅, 李世国,等. Tol2转座子的特性及其在转基因鱼类中的应用[J]. 水产学杂志, 2014, 000(001):60-64.

超高折扣，亏本迎新。环特双11 “三重礼遇·嘉年华”大型答谢活动！豪礼+钜惠促销+折上折！

近年来，环特生物持续深化和拓展健康产品功效与安全性评价技术，以斑马鱼生物评价、细胞测评，人体试验等测评技术为依托先后在中、美两国布局6家子公司，不断以优质的平台与技术，助力健康美丽产业高质量发展！为庆祝环特人体功效业务全面上线、北京环特和上海环特盛大开业的三大喜事，环特生物特推出“三重礼遇·嘉年华”的大型全国性答谢迎新活动。

【活动时间】：2022年11月7日-11月20日

【活动范围】：化妆品行业

【活动内容】

01、一重促销礼：折扣低至三折起 叠加实验折上折 免赠服务超惊喜

02、二重快筛礼：¥399，让中国原料加速崛起

问：为原料研发筛选插上翅膀，需要多少钱？答：只需399元。应用斑马鱼开展化妆品原料高通量筛选的，价格将至历史最低399元/功效，宣扬中国原料，助力本土品牌崛起。

03、三重联名礼：一纸长约与君签，四大惊喜任你选

活动期内，双方达成长期战略合作框架的，尊享环特斑马鱼实验室联合挂牌、学术论文合作、联合制定标准和项目联合申报等四大超强背书力的创新联名合作。

【活动垂询】

1、老客户可与您所在地的商务经理联系；

2、新客户可致电环特生物客服中心咨询：0571-83782130，项目经理手机17364531293（微信同号）

【活动说明】

1、活动期间，完成签约后须于11月25日前支付约定款项，且于12月10日前寄送所有测试样品，上述活动权益方可生效；

2、名额有限，先到先得。

环特生物化妆品事业部，2022年11月1日。

本活动最终解释权归环特生物及旗下子公司所有。

环特生物，利用斑马鱼模型实验，为药品企业提供药物临床前研究、临床前动物实验、药理/毒理研究实验、临床前药效评价、临床前安全性评价等服务，周期短、费用低、高效专业。助力企业做好研发、品控和宣传推广。

临床前-药物评价-药物筛选-毒性实验检测项目

临床前-药效评价-药物功效评价模型

临床前-药物安全性评价-毒性评价模型

更多药物临床前研究实验及内容，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293

环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²生物评价实验室。

环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。