miRNA已知参与了许多生物活动,其异常表达与人类疾病相关。许多方法如芯片或微珠的方法常用于同时检测多种miRNA的表达,不过这些方法在分析时需要把miRNA转换成cDNA探针。中帜生物研发出一种简单的miRNA直接杂交微孔板阵列方法,该方法中用于杂交的总RNA无需预处理,方法简单只是杂交和检测,重要的是用此简单方法可同时分析比较48种miRNA。 A.优点: 中帜生物基于其自有专利技术的miRNA直接杂交微孔板阵列方法具有下列优点: ·操作简单——检测48种miRNA的表达如ELISA试验一样简单,无需用酶转换miRNA成cDNA,检测步骤只是孵育和洗涤 ·灵敏度高——较miRNA Northern blotting分析敏感100倍 ·分辨力强——在分辨同源miRNA 时,较Northern blot有更高的分辨力 ·差别定量——二个或更多标本miRNA表达的差异可定量分析 B.原理: 中帜生物的miRNA直接杂微孔板交阵列方法是简单的二步法。板杂交和链霉亲和素-辣根酶检测。微孔板包被上oligo mix,其包括一对oligo—与特定靶miRNA并列杂交的相应oligo、通用捕获oligo和生物素标记oligo。该方法中,总RNA直接用于杂交。当RNA中存在靶miRNA时,其做为桥将生物素标记的oligo与捕获oligo连接起来,这样可以通过链霉亲和素辣根酶结合物以及化学发光底物检测。如果不存在靶miRNA时,生物素标记的探针就被冲洗掉,因此无检测信号。在微孔板阵列中,48个孔包被上不同的oligo mix来检测不同的miRNA,96孔板可定量测定和比较二个样品中48种miRNA,U6用于标化。
转录因子(TF)的转录活性常常是通过报告载体测定的,载体含有TF的顺式因子(DNA结合序列)和荧光素酶样的报告基因。报告体导入细胞,激活的TF与顺式因子结合,介导报告基因的启动。这种启动可以通过生化分析报告基因的产物进行测定。然而这是一种单项测定,一次测一个TF。由于细胞的变化会导致多种TF的激活,检测这些TF就需要多次转染和生化测定。此外,由于被导入到不同的细胞培养孔,还需要标准化规范转染。美国Signosis 公司基于自有专利开发一种同时检测7种TF活性的技术。 A. 优点: 美国Signosis 公司基于自有专利技术研发的TF报告体微孔板阵列试剂,具有下列优势: · 基于细胞的方法---基于细胞的方法检测TF 的活性 · 多种复合---单一板条可测定7种TF的活性 · 定量比较---二个或以上样本可同时定量分析 B. 原理 基于自有专利技术可同时检测多种TF活性。在该项技术中,构建一系列报告载体,每个载体含有顺式因子和报告体标示序列。当载体做为文库导入细胞,TF的激活将使其与相应的载体结合,介导标示序列的表达。表达的标示序列采用cDNA微孔板芯片分析。该芯片中,每个特异的靶序列由相应的捕获寡核苷酸识别,该捕获寡核苷酸固相在对应的微孔中。在转录因子(TF)报告体微孔板芯片试剂I中,7个TF报告载体合在一起可同时检测7种TF的激活,其中有NFkB、HIF-1、AP1、ISRE、Stat1、Stat3和P53以及无顺式因子的TA对照载体。
NFkB 是一种广泛存在的转录因子,在细胞对各种刺激的反应中起着重要作用,这些刺激包括:压力、细胞因子、自由基、紫外线照射、氧化的LDL、细菌和病毒的抗原。NFkB的异常调节与癌症、炎症、自身免疫性疾病、脓毒性休克、病毒感染和不适当的免疫进展相关联。NFkB激活时,与其抑制剂IkB解离,从细胞质移到细胞核,在此与靶DNA 结合,正调节基因的转录,参与免疫和炎症反应、细胞调节以及凋亡。美国Signosis公司研发的cDNA微孔板阵列检测试剂可检测20多种NFkB调节基因表达。 A. 优点: 美国Signosis公司基于其自有的cDNA微孔板阵列专利技术研发的小鼠NFkB调控的cDNA微孔板阵列检测试剂具有以下优点: ·操作简单---做基因表达试验像做ELISA酶免试验一样简单。 ·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 ·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 B. 原理: 美国Signosis 公司自有的cDNA微孔板阵列专利检测技术是基于微孔板杂交的检测方法,该方法是将mRNA反转录成cDNA来检测多种基因的表达。与芯片分析方法相似,加入生物素-dUTP后,总RNA先转录成生物素标记的cDNA。通过预包被在微孔板上的特异的寡核酸,将靶基因捕获到微孔板上(而不是膜上)。捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物,cDNA的浓度与待测标本的发光强度成正比。
血管内皮细胞生长因子(VEGF)是最强的和最特异的血管生成因子之一。VEGF是被用于缺氧细胞促进血管生长的。它结合到在内皮细胞表面的特定受体引导构建新的血管。 一些抗血管生成的药物显示能够减少血管的数量。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对小鼠VEGF的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: 小鼠VEGF试剂为固相酶免法。方法采用兔抗鼠VEGF抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗鼠VEGF抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测,待测样品小鼠VEGF夹在捕获抗体和标记抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。小鼠VEGF的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对小鼠VEGF的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: 小鼠VEGF试剂为固相酶免法。方法采用兔抗鼠VEGF抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗鼠VEGF抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测,待测样品小鼠VEGF夹在捕获抗体和标记抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。小鼠VEGF的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。
人瘦素(leptin)由167氨基酸组成的蛋白,在调控能量摄取和能量消耗时发挥重要作用,包括调节食欲(减退)和代谢(增加)。瘦素由脂肪组织产生,循环中的瘦素的水平与身体中的脂肪总量呈正比。一旦瘦素与Ob-Rb受体结合即激活Stat3,被磷酸化并移动到细胞核,介导基因表达。其中基因表达的一个主要作用是下调内源性大麻素的表达。有许多功能的内源性大麻素负责增加食欲。瘦素激活的有其它细胞内通路,但是较少知道它们是怎样在这个系统中起作用的。瘦素是减少食欲的一个循环信号,一般来说,对瘦素作用有抵抗的肥胖人群瘦素的循环浓度特别的高,对胰岛素作用有抵抗的II型糖尿病人也是同样的。已发现瘦素刺激内皮细胞增殖和血管形成。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对人瘦素的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: 人瘦素试剂为固相酶免法。方法采用鼠抗人瘦素不同决定簇单克隆抗体做为微孔板的固相捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的鼠抗人瘦素抗体做检测抗体,待测样品瘦素夹在捕获抗体和检测抗体之间与二者反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。瘦素的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。 A. 优点: · 性价比高——高质量,低价格 · 高效灵活——多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量 · 特异性强——优选高度特异的针对人瘦素的配对抗体 · 操作简单——96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: 人瘦素试剂为固相酶免法。方法采用鼠抗人瘦素不同决定簇单克隆抗体做为微孔板的固相捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的鼠抗人瘦素抗体做检测抗体,待测样品瘦素夹在捕获抗体和检测抗体之间与二者反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体。加入TMB底物,产生蓝色反应,加入终止液后转成黄色。瘦素的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450nm处测定吸光值进行定量。
趋化因子(RANTES)是T细胞、嗜酸性细胞和嗜碱性细胞的趋化蛋白质。 RANTES由循环T细胞产生,TNF-a和IL1a诱导合成,在吸引白细胞到炎症部位过程中扮演积极的角色。 借助于T细胞分泌的特殊细胞因子, Rantes也引发某些自然杀伤性细胞(NK)的增殖和活化,形成CC趋化因子激活的杀伤细胞。Rantes还是CD8+ T细胞释放的HIV抑制因子。 RANTES增加单核细胞对内皮细胞的黏附。 A. 优点: · 性价比高---高质量,低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对人RANTES的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: RANTES试剂为固相酶免法。 方法采用兔抗人RANTES抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗人RANTES抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测, 待测样品RANTES夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。RANTES的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
快速生长的肿瘤会出现缺氧区,大部分细胞对缺氧的反应是(1)产生VEGF和其它缺氧诱导的血管生成因子以促进增加血管生成,从而增加组织的氧合(2)从有氧的磷酸化到缺氧的糖酵解的代谢转换。缺氧诱导因子-1(HIF-1)是在缺氧反应过程中有重要作用的一种氧调控转录激动剂。HIF-1a亚单位是氧依赖性泛素化和蛋白酶体降解。细胞因子如白介素-1和肿瘤坏死因子-a刺激HIF-1依赖的基因表达。HIF-1增加促进血流及炎症的数种基因的表达,如血管生成因子(VEGF)。美国Signosis公司的HIF-1调控的cDNA微孔板阵列检测试剂可检测20 多种相关的基因。 A. 优点: 美国Signosis公司基于其自有的cDNA微孔板阵列专利技术研发的人HIF-调控的cDNA微孔板阵列检测试剂具有以下优点: ·操作简单---做基因表达试验像做ELISA酶免试验一样简单。 ·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 ·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 B. 原理: 美国Signosis 公司自有的cDNA微孔板芯片专利检测技术是基于微孔板杂交的检测方法,该方法是将mRNA反转录成cDNA来检测多种基因的表达。与芯片分析方法相似,加入生物素-dUTP后,总RNA先转录成生物素标记的cDNA。通过预包被在微孔板上的特异的寡核酸,将靶基因捕获到微孔板上(而不是膜上)。捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物,cDNA的浓度与待测标本的发光强度成正比。
干扰素-r诱导蛋白(IP-10)是细胞因子中属于趋化因子家族的成员,是在各种细胞对r-干扰素和脂多糖应答时诱导的,由一些细胞包括单核细胞,内皮细胞和成纤维细胞分泌。 IP-10有若干作用,例如对单核细胞/巨噬细胞、T细胞、NK细胞和树状T细胞的趋化性,促进T细胞对内皮细胞的黏附, 抗肿瘤活性,抑制骨髓集落形成。 数种类型细胞对IFN-r反应时, IP-10是体内血管形成的强抑制剂。 A. 优点: · 性价比高---高质量,低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对人IP-10的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: IP-10试剂为固相酶免法。 方法采用兔抗人IP-10抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗人IP-10抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测, 待测样品IP-10夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。IP-10的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
IL1a和IL-1ß 是介导炎症和免疫调节作用的强激动剂。 二者由巨噬细胞、单核细胞和树状突细胞产生,是针对感染后炎症反应的重要部分。 它们增加内皮细胞黏附因子的表达,转运白细胞到感染部位。 IL1a是参与各种免疫反应、炎症过程和造血作用的多功能细胞因子,由许多类型细胞产生,但是仅由单核细胞和巨噬细胞分泌。 A. 优点: · 性价比高---高质量,低价格。 · 高效灵活---多个样品可同时分析,灵活确定分析试样的数量。 · 特异性强---优选高度特异的针对人IL1a的配对抗体。 · 操作简单---96孔预包被板的完整试剂系统 B. 原理: IL1a试剂为固相酶免法。 方法采用兔抗人IL1a抗体做为微孔板的固相捕获抗体,生物素标记的兔抗人IL1a抗体做检测抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素进行检测, 待测样品IL1a夹在捕获抗体和标记检测抗体之间与二者反应,随后与链酶亲和素酶结合物反应。孵育后,洗去未结合的检测抗体及随后的酶结合物。 加入TMB底物,产生蓝色反应, 加入终止液后转成黄色。IL1a的浓度与待测样品的颜色深浅呈正比,450 nm处测定吸光值进行定量。
过氧化物酶增殖物激活受体r(PPARr)是转录因子核受体超级家族成员之一。PPARr在各种生物过程中非常重要,如脂肪细胞分化、糖代谢、脂质堆积及血管功能和高血压。PPAR-r以受体依赖的方式通过靶基因转录发挥其作用。激活时,PPARr-RXR异源二聚体在靶基因启动子部位与特异的DNA序列结合,调节转录。美国Signosis公司PPARr 调控的cDNA微孔板阵列检测试剂可检测20多种PPARr 调控的基因。 A. 优点: 美国Signosis公司基于其自有的cDNA微孔板阵列专利技术研发的大鼠PPARr 调控的cDNA微孔板阵列检测试剂具有以下优点: ·操作简单---做基因表达试验像做ELISA酶免试验一样简单。 ·灵敏度高---检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测。 ·定量对比---二个或以上样品基因表达的差异可定量分析。 B. 原理: 美国Signosis 公司自有的cDNA微孔板阵列专利检测技术是基于微孔板杂交的检测方法,该方法是将mRNA反转录成cDNA来检测多种基因的表达。与芯片分析方法相似,加入生物素-dUTP后,总RNA先转录成生物素标记的cDNA。通过预包被在微孔板上的特异的寡核酸,将靶基因捕获到微孔板上(而不是膜上)。捕获的cDNA进一步通过链酶亲和素辣根酶(HRP)检测。加入HRP发光底物,cDNA的浓度与待测标本的发光强度成正比。