斑马鱼CRISPR基因编辑技术服务，含基因敲入品系制备、基因敲入品系制备、转基因品系制备等。斑马鱼基因敲入品系制备服务简介：1. 基因敲入(Knock in)非同源依赖的DNA修复技术，在斑马鱼基因组定点插入外源DNA片段（荧光蛋白、PA等）。2. 基因敲入技术特点    2.1 定点插入；    2.2敲入效率较低。服务流程：根据客户基因敲入要求进行基因分析；cas9 mRNA和多个gRNA靶点的设计及合成；高效gRNA靶点的筛选及效率验证；敲入载体设计及构建；斑马鱼胚胎的显微注射和敲入验证；F0代斑马鱼的可遗传性筛选；杂合子F1代斑马鱼的基因型鉴定。环特生物优势：国际一流的斑马鱼敲入技术以及上百例的成功经验；特有的高效筛选方法。案例展示：斑马鱼基因敲除品系制备服务简介1.基因敲除(Gene Knockout)根据给定GeneID或Gene name，分析基因保守结构域，在保守结构域或客户指定区域设计靶点并制备靶点gRNA，gRNA和Cas9共注射使基因产生移码突变，通过PCR筛选得到稳定遗传品系。2. 基因敲除技术特点    2.1 通过将基因敲除斑马鱼品系与野生型相比较，研究者可以揭示特定基因的功能。    2.2 在基因组水平上将目标基因敲除，遗传背景干净清晰，是研究基因功能的金标准。服务流程▲根据客户提供的GeneID或Gene name进行基因分析——▲cas9 mRNA和多个gRNA靶点的设计及合成——▲高效gRNA靶点的筛选及效率验证——▲F0代斑马鱼的可遗传性筛选——▲杂合子F1代斑马鱼的基因型鉴定环特生物优势成熟的基因敲除技术快速获得稳定品系；多靶点共注射F0代验证基因功能。斑马鱼敲除品系成功案例1、基因分析分析目的基因的保守结构域；2、靶点筛选设计4个gRNA靶点，PCR检测包含靶点的区域真实序列，显微注射验证靶点效率；3、大规模注射养殖F0Cas9 pro+gRNA 共注射，共养殖 F0 约 80 条用于后期Founder筛选；4、Founder 筛选 F0代斑马鱼与野生型外交，收集48hpf的F1胚胎抽取基因组，PCR鉴定，测序结果在靶点位置出现双峰的认为产生突变，然后TA clone验证其可能产生的突变方式；5、F1 代筛选F1代斑马鱼剪尾筛选，TA clone验证突变方式：通过对测序图谱的分析获得突变方式为：-5bp，产生移码突变的敲除斑马鱼；通过对测序图谱的分析获得突变方式为：-4-3bp，产生移码突变的敲除斑马鱼模型。斑马鱼转基因品系制备服务简介1. 转基因斑马鱼转基因技术包括显微注射、电穿孔技术（电脉冲介导）、精子载体法、GAL4/UAS 转录激活系统、Tol2转座子介导、拟型反转录病毒介导、重组杆状病毒介导等方法。2. 转基因技术目的    2.1 通过定点敲除技术进行基因鉴定和功能研究；     2.2 利用报告基因对受体等蛋白质进行功能研究；    2.3 构建各种斑马鱼突变体，通过斑马鱼疾病模型进行人类疾病研究和药物筛选；    2.4 构建含有特异性启动子的生物感应器，用于环境监测。3. Tol2转座子介导的转基因技术优点    3.1 Tol2转座子可携带大片段DNA；    3.2 Tol2转座子没有位置偏好性，几乎能整合到染色体的任意位置；    3.3 Tol2转座子的耐受范围很广；    3.4 Tol2作为天然的具有自主转座活性的脊椎动物转座子，能够在胚胎发育的不同时期进行有效的转移；    3.5 Tol2转座子介导的转基因技术能够有效克服外源基因在后代传递频率低的技术难题。服务流程▲客户提出转基因品系制备需求→▲分析可行性→▲构建载体→▲斑马鱼胚胎注射→▲founder筛选→▲F1代斑马鱼养殖→▲F2代斑马鱼养殖环特生物优势1.特有的养殖方法可缩短服务周期；2.丰富的经验和及时沟通助力科研实验。参考文献：[1] 刘丽丽, 王健, 王海胜,等. 斑马鱼转基因平台的建立[J]. 生物技术通报, 2013(010):120-126.[2] 陶然, 常玉梅, 李世国,等. Tol2转座子的特性及其在转基因鱼类中的应用[J]. 水产学杂志, 2014, 000(001):60-64.

环特生物，利用斑马鱼模型实验，为药品企业提供药物临床前研究、临床前动物实验、药理/毒理研究实验、临床前药效评价、临床前安全性评价等服务，周期短、费用低、高效专业。助力企业做好研发、品控和宣传推广。临床前-药物评价-药物筛选-毒性实验检测项目临床前-药效评价-药物功效评价模型临床前-药物安全性评价-毒性评价模型更多药物临床前研究实验及内容，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²生物评价实验室。环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。

超高折扣，亏本迎新。环特双11 “三重礼遇·嘉年华”大型答谢活动！豪礼+钜惠促销+折上折！近年来，环特生物持续深化和拓展健康产品功效与安全性评价技术，以斑马鱼生物评价、细胞测评，人体试验等测评技术为依托先后在中、美两国布局6家子公司，不断以优质的平台与技术，助力健康美丽产业高质量发展！为庆祝环特人体功效业务全面上线、北京环特和上海环特盛大开业的三大喜事，环特生物特推出“三重礼遇·嘉年华”的大型全国性答谢迎新活动。【活动时间】：2022年11月7日-11月20日【活动范围】：化妆品行业【活动内容】01、一重促销礼：折扣低至三折起 叠加实验折上折 免赠服务超惊喜02、二重快筛礼：¥399，让中国原料加速崛起问：为原料研发筛选插上翅膀，需要多少钱？答：只需399元。应用斑马鱼开展化妆品原料高通量筛选的，价格将至历史最低399元/功效，宣扬中国原料，助力本土品牌崛起。03、三重联名礼：一纸长约与君签，四大惊喜任你选活动期内，双方达成长期战略合作框架的，尊享环特斑马鱼实验室联合挂牌、学术论文合作、联合制定标准和项目联合申报等四大超强背书力的创新联名合作。【活动垂询】1、老客户可与您所在地的商务经理联系；2、新客户可致电环特生物客服中心咨询：0571-83782130，项目经理手机17364531293（微信同号）【活动说明】1、活动期间，完成签约后须于11月25日前支付约定款项，且于12月10日前寄送所有测试样品，上述活动权益方可生效；2、名额有限，先到先得。环特生物化妆品事业部，2022年11月1日。本活动最终解释权归环特生物及旗下子公司所有。

类器官简介类器官是一种原代组织来源的成体干细胞体外自组装成的3D器官型结构，可分化为多个器官特异性的细胞类型，并能够表现出细胞与细胞之间、细胞与其周围基质之间的相互作用和空间位置形态，在体外重现人体真实器官的一些关键功能和结构，并具有稳定的表型和遗传学特征。作为新兴的生物学模型，类器官具有细胞系和动物模型所不具有的独特优势，其细胞组成和结构更加类似人体组织，可提供一个高度生理相关的系统，是基础研究的模型。同时，类器官模型相对实验动物更加经济，且时效性更高，可以提高研究效率。类器官模型的应用类器官模型的优势·速度快 ·通量高 ·临床相关性强类器官的构建建立PSC和AdSc类器官的过程● 以 iPS/ES 或成体干细胞为起点, 在 3D 环境下, 利用细胞因子将干细胞定向分化后建立的, 具有各种器官主要组织细胞类型及组织特征的微型结构。● 多能干细胞(PSC)来源的类器官是在PSCs定向分化后建立的, 首先是胚层的形成, 随后是诱导和成熟, 通过加入特定的生长和信号因子来获得所需的器官特定细胞类型。● 成体干细胞(AdSC)衍生的类器官培养需要分离组织特异性干细胞群, 然后将其嵌入细胞外基质中, 并加入明确的组织特异性生长因子, 实现类器官的增殖。类器官构建委托技术服务环特生物简介医-健-美-食产业斑马鱼技术应用服务商环特生物，已通过CNAS、CMA、ILAC-MRA、AAALAC资质认证。环特生物，是专注服务于生物医药和大健康美妆产业的一站式功效与安全评价技术提供商。经多年发展，已形成了以斑马鱼平台为核心，以类器官、哺乳动物、人体和微生物平台为特色，兼具生物医药CRO能力和大健康美妆一站式研发检测的产业平台新格局。作为斑马鱼技术应用服务商，环特生物深度挖掘、创新斑马鱼技术的应用场景，将斑马鱼模型、基因编辑技术和模型，成功应用于药物、保健食品、化妆品、功能食品的原料筛选、配方研发、生产质控、营销背书、新品备案以及斑马鱼实验室的建设运营，为企业提供全产业链条上的功效和安全评价的技术服务。类器官构建委托技术服务，请拨电话咨询 0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）。

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类器官作为新兴的生物学模型，其具有细胞系和动物模型所不具有的独特优势，其细胞组成和结构更加类似人体组织，可提供一个高度生理相关的系统，是基础研究的绝佳模型。通过基于肿瘤类器官药敏的筛查，鉴别出有临床反应的患者具有极高的敏感性和特异性，综合结果表明肿瘤类器官药敏在预测肿瘤治疗效果方面，具有较高的应用价值。斑马鱼PDX模型可为病人能提供即时的、精准化的治疗方案指导，为肿瘤的个性化治疗提供了一个非常理想的体内测试和诊断模型。将斑马鱼PDX模型广泛服务于肿瘤患者并提供个体化用药指导，会显著提高患者肿瘤化疗精准性，提高患者的生活质量，使患者获益。依托类器官和斑马鱼两大技术平台， 环特生物构建起一套具备鲜明特色的“体外（类器官模型）+体内（斑马鱼PDX模型）” 模式的肿瘤精准医疗整体解决方案。类器官 + 斑马鱼PDX，喜迎双“旦”  放肆打“价”！活动对象：医院肿瘤科医生活动时间：2022年12月24日-1月13日特惠1：满五 6.4折凡购买我司类器官科研服务或肿瘤个性化药敏检测中任一项，即可享受8折优惠！当肿瘤样本数量≥5个时，即可再享受折上8折优惠！类器官科研服务（下图）特惠2：周边7折购类器官基质胶、辅助试剂盒、生长因子和小分子等所有周边产品，一律7折！基质胶及其他辅助类试剂盒（下图）类器官相关生长因子（下图）类器官相关小分子（下图）特惠3：预存得豪礼1. 预存5万抵6万元项目经费2. 预存10万抵13万元项目经费3. 预存20万抵28万元项目经费4. 预存40万抵60万元项目经费备注：特惠1和特惠3，不可叠加。项目服务详情，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）。

● 项目意义肿瘤类器官是将肿瘤患者的新鲜组织经体外3D培养系统建立的、与肿瘤患者特征高度相似的一种立体模型，已被证实与患者肿瘤的病理组织学特征、分子特征、药物敏感性等保持高度一致，在对应的药物筛选领域有着巨大的应用空间。同时，环特生物已建立的多癌种实体瘤斑马鱼PDX药敏评价体系已用于临床，为患者提供精准的用药指导。我们基于真实世界肿瘤患者的临床研究，联合国内知名三甲医院，开展全世界首个胃癌斑马鱼PDX与患者治疗效果的一致性评价项目（美国临床研究Clinical Trials注册号：NCT05616533），为斑马鱼PDX的临床应用提供更加充分的科学依据。为满足不同科研场景的行业需求，环特生物联合该医院共同发起“基于胃癌的斑马鱼PDX与类器官抗肿瘤药效评价的科研项目”，通过构建胃癌的精准医疗生物样本库，致力于为广大药企的抗肿瘤药物提供药效评价的科研服务。● 预期成果1）构建不少于50例基于胃癌的类器官生物样本库，并完成类器官样本的临床信息、基因信息的采集2）按需交付药物在胃癌斑马鱼PDX或类器官模型中的定性、定量数据3）共同产出数篇国际前沿的科研论文4）实现相关课题项目、技术创新奖项的申报● 合作伙伴权益标准权益——1）享有项目所述样本库的“联合建设单位”两年冠名权2）享有该项目最终成果的宣传权利3）项目结束后，一定期限内享受特定数量的药物药效评价折扣定制（付费）权益——1）类器官药物研发平台建设（含培训1-3名类器官技术人员、胃癌类器官构建方法的技术转让）2）其他相关需求及服务● 项目分工1）合作医院负责提供胃癌肿瘤组织样本2）环特生物负责斑马鱼PDX与类器官样本库的构建服务与药效评价3）药合作伙伴负责根据实际科研需求提供药物和科研经费● 申报条件1）具有一定新药研发经验的大中型药物研发机构2）药物类型为胃癌的化疗药物、靶向药物（免疫类药物除外）、中药，以及辅助治疗的相关药物● 合作伙伴名额预计招募合作单位3家● 项目周期5-6个月● 合作详询：成先生 17364531293

人源移植性肿瘤动物模型(PDX)已被广泛运用于肿瘤生长和转移机制研究，抗肿瘤药物筛选和新药评估等领域。近亲繁殖的同系小鼠和免疫缺陷型小鼠都是成熟的移植性肿瘤动物模型。 但小鼠PDX模型也存在不足，例如饲养成本高，组内样本数量少，实验周期长，肿瘤组织或肿瘤细胞用量大等；并且小鼠的皮毛阻碍了在体肿瘤细胞的成像与观察。模式动物斑马鱼的优势：斑马鱼与人类基因同源性高达87%，其信号传导通路与人类基本近似；生殖能力强，生殖方式为体外受精，方便大量筛选；饲养成本低；个体小，幼鱼体长为1-2mm；透明，易于观察；遗传操作系统成熟，敲降，敲除，转基因技术都可实现。斑马鱼在早期没有自体免疫，肿瘤异种移植的成功率高，且实验周期短，观察手段丰富，组内样本数量大。目前，斑马鱼肿瘤异种移植模型已经越来越多的被用于肿瘤发生、发展的机制研究以及抗肿瘤药物的筛选和评价。案例一：Z-Avatar 胃癌斑马鱼PDX药敏检测案例案例二：结肠癌细胞在zPDX模型中的增殖和转移能力变化

 服 务 内 容 ● 基础研究  ● 品系构建  ● 基因编辑  ● 行为学分析● 药效与安全评价  ● 保健食品功效与毒理评价  ● 病理学和影像学分析  ● 生化和分子生物学分析一、哺乳动物品系● 小鼠常规品系：C57BL/6J，ICR，BLAB/C-Nude（裸鼠）等。● 小鼠疾病品系：代谢紊乱（糖尿病、三高），免疫缺陷，神经退化，自发性肿瘤，人源化模型等。● 其它哺乳动物常规品系：大鼠SD/Wistar，新西兰白兔，青紫蓝兔，比格犬等。● 体外模型：大小鼠原代神经元模型，原代神经干细胞模型，原代胶质细胞模型等。● 特色 - 转基因猪定制服务：环特具备全国领先的基因编辑猪技术。根据客户构建基因编辑克隆胚胎，以业内顶尖妊娠率与出产率提供成体的基因编辑猪模型。● 特色 - 基因编辑金黄地鼠定制服务：环特具备特色基因编辑金黄地鼠技术平台，拥有全国最尖端的基因敲除、定点突变和大片段插入技术，成功建立多种转基因品系，包括免疫缺陷、代谢紊乱、激素调节异常和条件性敲除模型等。二、功效和安全性分析三、行为学分析四、病理学和影像学分析五、生化和分子生物学分析● 分子生物学检测：原位杂交、质粒构建、基因组提取与测序、彗星电泳、Real-Time PCR等。● 生物化学和组学检测：酶联免疫吸附试验、流式细胞仪检测、肠道菌群组学分析、代谢组学分析、蛋白质组学分析等。 服 务 案 例  平 台 简 介 环特哺乳动物技术平台，专注于药物/保健食品相关研究和基因编辑服务，通过定制动物模型与服务方案以支持各类药物/保健食品的开发、临床前研究和临床研究。平台具备大量的技术经验和专业知识，以SPF级标准饲养环境下的大鼠、小鼠、兔、犬、金黄地鼠以及专业的基因编辑猪为模型基础，为客户提供高质量的转基因动物品系、疾病造模、功效与安全性评价以及行为学分析等专业服务。环特哺乳动物技术平台提供“设计-实验-分析”等各方面的全面支持和服务：（1）方案设计：平台可以根据需求提供合适的动物模型与服务方案策划，以确保能获得最佳的研究结果。（2）体内/外研究：平台可以提供动物模型的繁育和饲养、实验过程中各项体征的观察记录、以及对血液/组织/器官样品的提取、处理和相关分子生物学、生物化学、免疫组化/荧光、蛋白质组学、代谢组学等指标检测。（3）专业数据分析：平台提供行为学实验等结果的全面数据分析和统计服务，以确保研究成果准确可靠。环特哺乳动物技术平台致力于为客户提供高质量、全面和个性化的动物模型和研究服务，以支持各种药物和保健食品的研发和临床应用。 服 务 咨 询 更多大小鼠等动物实验服务内容，请拨电话咨询：0571-83782130，手机 17364531293（微信同号）。环特拥有实验动物生产和使用许可证，已通过CNAS、CMA、AAALAC认证，自有8500m²动物试验实验室。

服务项目环特CRISPR/Cas9基因编辑技术，可构建转基因、基因敲除（KO）、基因敲入（KI）、点突变（PM）等各类基因编辑小鼠模型，为客户提供现大小鼠模型定制、联合研发等服务。找大小鼠基因编辑公司，选环特生物，一站式大小鼠基因编辑服务！大小鼠基因编辑定制流程图：技术介绍Cas9/gRNA复合物在靶位点进行切割，产生双链断裂，迫使细胞进行紧急修复。通常条件下，细胞偏向于使用非同源末端连接的方式对断裂的双链进行修复，进而造成靶位点基因的插入/缺失突变。CRISPR/Cas9技术采用独特的受精卵处理方式让受精卵偏好同源重组修复路径，大大提高同源重组效率，使得DNA大片段敲入（KI）及条件性敲除（CKO）得以实现。四大优势● 周期短，效率高； ● 高嵌合率，生殖遗传稳定； ● 可实现DNA大片段敲入； ● 可实现条件性敲除。服务流程和周期：基因敲除小鼠模型构建完全性基因敲除小鼠通过CRISPR /Cas9基因敲除技术，针对靶基因设计和构建gRNA与Cas9表达质粒，造成目的基因的功能区域被敲除，获得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的小鼠模型。CRISPR-Pro完全性基因敲除包括：移码突变、片段基因敲除、双/多基因敲除。条件性基因敲除小鼠通过把两个LoxP位点插入到目的基因的一个或几个重要外显子的两端以制备出有两个floxed小鼠。该floxed小鼠在与表达Cre重组酶小鼠杂交之前，该基因表达正常；当floxed小鼠与组织特异性表达Cre酶的小鼠进行杂交后，可实现在特定的组织或细胞中敲除该基因，而在其它组织或细胞中该基因表达正常。▲小鼠基因敲除（Cas9-KO）方案图基因敲入小鼠模型构建利用CRISPR/Cas9基因敲入技术，针对靶基因设计、构建相应的 gRNA质粒和donor vector，通过Cas9核酸酶的切割作用和同源臂的同源重组，引入特定的突变或外源基因。比如在目的基因上引入点突变(模拟人类遗传疾病模型)或将报告基因(如EGFP，mRFP，mCherry，mYFP，或LacZ等)引入目的基因的特定位点，从而可以通过报告基因来跟踪目标基因的表达；也可以用报告基因取代大小鼠本身的基因，使KO/KI同时发生。▲小鼠基因敲入（Cas9-KO）方案图CRISPR/Cas9基因敲入小鼠包括：点突变、片段基因敲入。▲点突变（Cas9-PM）方案图转基因小鼠模型构建制作转基因大小鼠最常用的一种方法是DNA原核显微注射。DNA原核显微注射是指将外源DNA通过显微注射的方法注射到受精卵的原核内，注射DNA整合到小鼠受精卵的基因组中，并稳定遗传给后代。 四大优势● 更高的整合效率和目的基因表达概率； ● 更大的目的片段的插入； ● 更“精确”拷贝数的插入； ● 可自由移除插入片段。服务流程和周期质粒或BAC载体构建（2~3周）→ 原核显微注射：大小鼠（3周）→ 大小鼠的鉴定（1~2周）。建立转基因大小鼠品系系原则与流程1、原核显微注射导入的目的基因是将目的基因随机整合到小鼠或者大鼠的基因组，因此首代转基因鼠（F0）将会有不同的整合位点。整合基因的拷贝数可能在不 同的首代转基因鼠中也不同。因此，每只F0代鼠需要作为一个独立的谱系研究，并且与其它F0代鼠分开进行繁殖。由于外源基因一般只整合在二倍体动物的其中 一条染色体上，属于半合子，其后代只有一部分个体带有整合的基因，需要进行筛选鉴定。2、 原核显微注射获得PCR阳性F0代杂合子鼠。3、 F0代鼠达到性成熟后（8周）与野生型鼠进行交配，获得F1代鼠。4、 对交配获得的F1代鼠进行基因型鉴定，理论上，F1代鼠中有50%为转基因杂合子鼠，50%为野生型鼠。转基因小鼠类型● 过表达转基因小鼠； ● RNAi转基因小鼠； ● microRNA转基因小鼠； ● 可诱导性/组织特异性转基因小鼠； ● 可诱导性/组织特异性转基因小鼠。全新基因编辑Immediate-Phenotype技术全新基因编辑Immediate-Phenotype技术可实现三个月内拿到超过100只有表型小鼠，并可得到靶标基因所带来的表型变化，同时实现长达50KB片段基因编辑。目前我们可实现基因敲除 、基因敲入和点突变的Immediate-Phenotype，尤其是点突变技术在遗传性疾病发现和疾病研究上有重大意义，可快速实现罕见病的定性。在商业价值上，可实现生产成本和时间成本大幅降低。 服 务 咨 询 更详细的基因编辑服务内容，请拨电话咨询：0571-83782130，手机 17364531293（微信同号）。环特拥有实验动物生产和使用许可证，已通过CNAS、CMA、AAALAC认证，自有8500m²动物试验实验室。

服务项目环特CRISPR/Cas9基因编辑技术，可构建转基因、基因敲除（KO）、基因敲入（KI）、点突变（PM）等各类基因编辑小鼠模型，为客户提供现大小鼠模型定制、联合研发等服务。找大小鼠基因编辑公司，选环特生物，一站式大小鼠基因编辑服务！大小鼠基因编辑定制流程图：技术介绍Cas9/gRNA复合物在靶位点进行切割，产生双链断裂，迫使细胞进行紧急修复。通常条件下，细胞偏向于使用非同源末端连接的方式对断裂的双链进行修复，进而造成靶位点基因的插入/缺失突变。CRISPR/Cas9技术采用独特的受精卵处理方式让受精卵偏好同源重组修复路径，大大提高同源重组效率，使得DNA大片段敲入（KI）及条件性敲除（CKO）得以实现。四大优势● 周期短，效率高； ● 高嵌合率，生殖遗传稳定； ● 可实现DNA大片段敲入； ● 可实现条件性敲除。服务流程和周期：基因敲除小鼠模型构建完全性基因敲除小鼠通过CRISPR /Cas9基因敲除技术，针对靶基因设计和构建gRNA与Cas9表达质粒，造成目的基因的功能区域被敲除，获得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的小鼠模型。CRISPR-Pro完全性基因敲除包括：移码突变、片段基因敲除、双/多基因敲除。条件性基因敲除小鼠通过把两个LoxP位点插入到目的基因的一个或几个重要外显子的两端以制备出有两个floxed小鼠。该floxed小鼠在与表达Cre重组酶小鼠杂交之前，该基因表达正常；当floxed小鼠与组织特异性表达Cre酶的小鼠进行杂交后，可实现在特定的组织或细胞中敲除该基因，而在其它组织或细胞中该基因表达正常。▲小鼠基因敲除（Cas9-KO）方案图基因敲入小鼠模型构建利用CRISPR/Cas9基因敲入技术，针对靶基因设计、构建相应的 gRNA质粒和donor vector，通过Cas9核酸酶的切割作用和同源臂的同源重组，引入特定的突变或外源基因。比如在目的基因上引入点突变(模拟人类遗传疾病模型)或将报告基因(如EGFP，mRFP，mCherry，mYFP，或LacZ等)引入目的基因的特定位点，从而可以通过报告基因来跟踪目标基因的表达；也可以用报告基因取代大小鼠本身的基因，使KO/KI同时发生。▲小鼠基因敲入（Cas9-KO）方案图CRISPR/Cas9基因敲入小鼠包括：点突变、片段基因敲入。▲点突变（Cas9-PM）方案图转基因小鼠模型构建制作转基因大小鼠最常用的一种方法是DNA原核显微注射。DNA原核显微注射是指将外源DNA通过显微注射的方法注射到受精卵的原核内，注射DNA整合到小鼠受精卵的基因组中，并稳定遗传给后代。 四大优势● 更高的整合效率和目的基因表达概率； ● 更大的目的片段的插入； ● 更“精确”拷贝数的插入； ● 可自由移除插入片段。服务流程和周期质粒或BAC载体构建（2~3周）→ 原核显微注射：大小鼠（3周）→ 大小鼠的鉴定（1~2周）。建立转基因大小鼠品系系原则与流程1、原核显微注射导入的目的基因是将目的基因随机整合到小鼠或者大鼠的基因组，因此首代转基因鼠（F0）将会有不同的整合位点。整合基因的拷贝数可能在不 同的首代转基因鼠中也不同。因此，每只F0代鼠需要作为一个独立的谱系研究，并且与其它F0代鼠分开进行繁殖。由于外源基因一般只整合在二倍体动物的其中 一条染色体上，属于半合子，其后代只有一部分个体带有整合的基因，需要进行筛选鉴定。2、 原核显微注射获得PCR阳性F0代杂合子鼠。3、 F0代鼠达到性成熟后（8周）与野生型鼠进行交配，获得F1代鼠。4、 对交配获得的F1代鼠进行基因型鉴定，理论上，F1代鼠中有50%为转基因杂合子鼠，50%为野生型鼠。转基因小鼠类型● 过表达转基因小鼠； ● RNAi转基因小鼠； ● microRNA转基因小鼠； ● 可诱导性/组织特异性转基因小鼠； ● 可诱导性/组织特异性转基因小鼠。全新基因编辑Immediate-Phenotype技术全新基因编辑Immediate-Phenotype技术可实现三个月内拿到超过100只有表型小鼠，并可得到靶标基因所带来的表型变化，同时实现长达50KB片段基因编辑。目前我们可实现基因敲除 、基因敲入和点突变的Immediate-Phenotype，尤其是点突变技术在遗传性疾病发现和疾病研究上有重大意义，可快速实现罕见病的定性。在商业价值上，可实现生产成本和时间成本大幅降低。 服 务 咨 询 更详细的基因编辑服务内容，请拨电话咨询：0571-83782130，手机 17364531293（微信同号）。环特拥有实验动物生产和使用许可证，已通过CNAS、CMA、AAALAC认证，自有8500m²动物试验实验室。

前言2023年8月，国家市场监督管理总局发布的《保健食品新功能及产品技术评价实施细则（试行）》和《保健食品功能检验与评价方法》等法规接连落地，保健食品新产品的注册与备案工作步入新阶段，同时也为保健食品行业健康发展绘制出新标准和新路径。基于斑马鱼+类器官+哺乳动物+人体试食四大生物技术，环特多维生物技术平台推出面向保健功能性食品开发、注册备案和学术营销的一站式CRO服务。保健食品CRO领导者——环特多维生物技术平台01、保健功能性食品开发环特多维生物技术平台以完整的研发全程链式CRO服务体系，助力解决保健功能性食品新产品的原辅料采购、资质审核、配方筛选和指标功效研究等领域核心痛点，加快推进产品在市场中的开发应用。当前，我国保健食品主要可分为两大类，其一是以补充营养素为目的，但无法提供能量或其他活性成分的营养素补充剂；其二则是以维系并增进人体健康为目的，具备调节机体生理功能，降低相关疾病发生的风险因素等特定保健功能的功能性保健食品。根据《中华人民共和国食品安全法》的相关规定，新食品原料在正式上市前需经过国家卫健委的安全性评估，审批通过后方能应用于食品。随着我国对保健功能性食品的不断开发，一些新兴的原料也随之出现在普罗大众的视野中，枯草芽孢杆菌QK02、麦角硫因、亚麻荠籽油、透明质酸钠等一批新原料近年来正在保健食品领域大放异彩。然而，新食品原料的申报更加注重原料的食用和营养属性并举，安全和功效属性并重。因此，更需要企业从多个角度开展安全性和营养性的科学论证与探究。02、保健食品注册与备案环特多维生物技术平台倚靠业界资深的保健食品审评专家智囊团，辅以强大的省级疾控中心与药检系统联动能力，以科学之力溯本求源，从根本上保证试验数据与结论的专业性，为保健食品的注册备案提供权威背书。“蓝帽子”标识是保健食品的特有身份证明，只有当保健食品的成分、功效和安全性等获得国家食品药品监督管理局的审核批准的“蓝帽子”标识后，才能上市销售。然而根据食品安全部门官方统计显示，“蓝帽子”的平均申请时间达到2-3年之久，同时，申请前期的繁琐程序和相关法规政策的变化调整都有可能延长审批时间，使得申请难度系数倍增。此外，根据相关法律规定保健功能性食品必须经过必要的动物/人体功能功效试验，证明其具有明确、稳定的保健作用后方可申请注册备案。同时，产品的原料、成分和功效性必须具有严格且明确的科学依据，由此极大抬高了行业的准入门槛。昂贵的研发费用和时间成本，使我国成为全世界保健食品行业准入门槛最严格、成本最高的国家，如何高效打通从新产品研发到注册备案再到产品营销的通路环节，成为了重中之重。03、学术营销环特多维生物技术平台凭借丰富的保健食品研发CRO项目经验，成就优秀的项目实施能力和交付质量，以可视化学术证据链，助力保健食品的科技营销。通过检测研究报告的科学论证、试验图片/视频的美学展现、学术论文/发明专利的权威佐证、证书/奖项的官方认可、团标和白皮书的调研数据等成果产出，让产品在线上电商、产品发布会、产品包装、品牌营销和渠道招商的五大应用场景中脱颖而出，实现新质突破。结语保健食品的发展史是我国在美丽健康产业不断探索的进步史，更是数十亿国民对健康生活的美好愿景。“不畏浮云遮望眼，自缘身在最高层”。作为保健食品CRO服务的领导者，环特多维生物技术平台将不断砥砺前行，助力企业探索健康之因，成就健康之美。【技术咨询】17364531293（微信同号）

环特生物技术平台已取得检验检测机构资质认定证书CMA。服 务 项 目 ● 药效与安全评价  ● 营养保健食品功效安全评价、注册备案(CMA)服务  ● 好吸收评价● 模型构建  ● 行为学分析  ● 病理学和影像学分析  ● 生化和分子生物学实验▼ 大小鼠功效与安全性评价模型应 用 场 景 ● 药物研发：药理药效学评价、药代动力学研究、Non-GLP非临床毒理● 营养保健食品：功能与安全性研究、注册备案评价、已上市产品再开发● 科研服务：医学研、药理研究、毒理研究 服 务 案 例 环特哺乳动物平台 环特哺乳动物平台，依托“哺乳动物+斑马鱼+人体+类器官”的多元化技术，专注于药物/营养保健食品的相关研究及科研服务，为客户定制动物模型与服务方案，疾病造模、原料筛选、功效与安全性评价、行为学分析等技术服务。▼ 四大优势多元化生物技术构建完整CRO服务，尽享从原料、配方、产品到上市学术营销全生命周期技术服务。资深保健食品审评专家智囊团，全力保障技术咨询的专业性与有效性。强大的省级疾控中心、药检及医疗资源联动能力，从根本上保证试验过程与数据的权威性。超4700个保健食品研发CRO项目经验，成就了优秀的项目实施能力与交付质量。▼ 资质荣誉环特技术平台已拥有实验动物生产与使用双许可证，通过CMA和AAALAC认证，自有8300m²实验室。环特在技术研发与应用领域，已牵头起草发布产业标准22项，申请发明专利101项，自主开发斑马鱼模型200多种，大小鼠模型200多种，发表SCI及核心期刊论文300多篇，已有8个新药项目成功将环特斑马鱼实验数据用于NMPA（国家药监局）的临床试验申报，累计完成项目20000多个，长期合作客户2000多家。服 务 咨 询 更多大小鼠模型实验项目，请拨电话咨询：0571-83782130，手机 17364531293（微信同号）。

针对HJ 1455—2026 水质急性毒性的测定斑马鱼法标准的执行，环特实验室（HunterLab）具备完善检测、监测平台的搭建能力，为用户提供高性价比、从 0 到 1 快速建成合规斑马鱼水质急性毒性监测体系的整体解决方案。一、交付目标通过全套自研斑马鱼养殖与分析设备、专业技术与团队培训，以及高响应的运维保障体系，助力客户构建100%符合《HJ 1455—2026水质 急性毒性的测定 斑马鱼法》标准要求的高稳定性、高性价比的一站式水质监测检测斑马鱼实验平台。二、独家优势● 16年斑马鱼养殖、280多个模型（近1100个指标）开发与技术应用经验● 全球第一家（2012年）获得AAALAC认证、并连续4次（12年）获得“Full Accreditation”的斑马鱼实验室（该组织以环特实验室运行体系作为该类实验室认证的重要参考依据）● 作为唯一企业参与《GB/T39649-2020实验动物 实验鱼质量控制》标准制订的调研、技术论证、标准草案的重点意见征求和反馈● 国内第一家（2022年1月）同时获批斑马鱼“实验动物生产许可证（SCXK浙2022-0003）”与“实验动物使用许可证（SYXK浙2022-0004）”的机构● 作为第一起草人发布国内第一部斑马鱼实验室建设规范团标《T/CAS 768—2023》● 全系自研斑马鱼实验室专用设备集群，经谭建荣院士领衔的专家委员会联合科技成果鉴定（2025年），被评定为“国际先进水平”（国内唯一，且多项指标填补国际空白）三、交付内容（一）场地规划与设计具有100+斑马鱼实验室设计经验，根据实际场地规划出合规合理的斑马鱼实验室，避免二次改造、空间浪费，温湿度、光照、通风、给排水标准化设计，出具平面布局图、水电图、设备点位图，一站式落地。（二）定制化标准设备集群根据急性毒性测定方法所需要的装置设备，推出标准适配、高性价比、精简高效配套的实验设备，剔除冗余配置，保留核心功能，一次性投入更低，长期使用更划算，包含斑马鱼养殖系统、急性毒性实验系统、PH计、便携式溶氧测定仪、照度计、温度计等1、斑马鱼养殖系统● 满足外购实验斑马鱼≥9 天驯养及自主繁育双重需求。● 自动控温、水质循环、过滤增氧、光照周期可调，稳定维持驯养环境。● 适配 HJ 1455—2026 对受试生物驯养周期的严格要求。● 可规模化繁育标准实验用幼鱼，降低长期实验成本。2、急性毒性实验系统● 支持静态法、半静态法两种国标实验方式。● 集成标准配水、精准分配、恒温、控光、pH 稳定等功能。● 多组实验独立运行，条件一致，减少系统误差。● 适配预实验、正式实验、空白对照、参比物试验全流程。3、配套检测仪器● pH 计、便携式溶氧测定仪、照度计、温度计等实验标准必备仪器。● 出厂提供CNAS认证公司仪器校准报告，无需额外付费校准，省时省钱。（三）现场安装与调试验收● 设备到货、拆箱、安装、通水通电全程一体化实施。● 系统调试：温度、光照、溶氧、pH、配水精度逐项校准达标。● 交付即达标，直接开展正式检测。（四）全流程技术培训● 标准解读：HJ 1455—2026 条文、适用范围、质控要点、结果判定。● 设备实操：养殖系统、实验系统、配套仪器操作与维护。● 实验全流程：提供 SOP、流程图，降低人员培训成本，保证实验人员快速上岗、受试鱼挑选、驯养、暴露实验、观察记录、死亡判定等。（五）合规实验鱼种与耗材供应● 具有斑马鱼实验动物生产许可证和实验动物使用许可证，可提供符合 GB/T 39649的健康斑马鱼种鱼和实验用鱼，来源可溯质量有保障，提供实验动物质量合格证，保障实验用鱼稳定，为实验护航。● 可提供10年斑马鱼从业人员推荐的常用斑马鱼实验耗材。四、代表案例▲佛山市南海区人民医院36套养殖系统交付▲上海海洋大学60套养殖系统交付服务咨询水质检测HJ1455标准解决方案、斑马鱼实验室系统设备服务详细内容，请拨电话咨询：0571-83782130，手机 17364531293（微信同号）。

一、本研究路径中核心技术的优势1.斑马鱼（1）遗传保守性与生理相似性斑马鱼与人类在基因和生理功能上具有高度保守性。超过70%的人类蛋白质在斑马鱼中存在同源物，与疾病相关的蛋白质同源比例高达82%以上。（2）独特的生物学特性胚胎透明。便于观察器官发育和病理变化；每周可产卵数百枚，3-4个月达到性成熟，支持大规模实验；体外受精。易于基因操作和显微注射；成本低廉。远低于哺乳动物模型。（3）技术成熟度高环特在CRISPR/Cas9基因编辑、单碱基编辑器、Morpholino反义寡核苷酸敲低、Tol2转座子转基因等技术成熟，可快速构建精准罕见病模型。2.类器官（1）生理相关性强‌三维结构自组织形成类似原器官的细胞类型、空间架构和功能，比二维细胞系更真实模拟人体组织生理与病理状态。（2）‌患者特异性保留活检组织或iPSC构建，保留个体遗传背景、突变谱和肿瘤异质性，用于个性化药敏测试。（3）‌跨疾病广谱适用可构建肿瘤类器官及遗传性疾病的正常类器官，弥补动物模型在人类特异性机制上的不足。（4）‌高效可扩展培养周期短、适合高通量药筛和CRISPR基因过表达和敲降，且可冻存建立“活体生物银行”。二、本研究路径的经典案例（一）斑马鱼经典案例1.阐明罕见病的发病机制（1）神经肌肉疾病:对于超罕见的布罗迪肌病(Brody Myopathy)，由于小鼠模型因呼吸衰竭早期致死,斑马鱼acc突变体(atp2a1基因突变)成为研究该病的主要动物模型,揭示了SERCA1蛋白功能受损的分子机制。（2）颅面发育障碍：日本九州大学利用斑马鱼模型研究Nager综合征(全球报道不足100例),发现sf3b4基因缺陷通过抑制fgf8基因表达影响神经细胞,导致面部骨骼发育异常,并证实FGF8蛋白注射可减轻病症。（3）淋巴系统罕见病:以色列魏茨曼科学研究所利用斑马鱼胚胎建立了卡波西样淋巴管瘤病（Kaposiform Lymphangiomato-sis, KLA)模型,发现NRAS基因突变被"卡死"在启动状态导致淋巴细胞无限增殖,并筛选出两种安全性更高的候选药物。2.高通量药物筛选（1）大规模筛选可在短时间内测试数百种化合物。例如,在DMD研究中,通过双折射成像技术评估肌肉完整性，筛选出组蛋白去乙酰化酶抑制剂等表观遗传调节剂。（2）药物重定位:检测约150种已获批药物,快速发现新适应症。如线粒体通透性转换孔抑制剂在斑马鱼DMD模型中显示出改善肌肉功能的潜力。（3）自动化系统：结合自动化药物筛选系统，可高效评估候选药物疗效。3.基因修饰因子鉴定利用CRISPR/Cas9筛选平台,研究人员在斑马鱼DMD模型中鉴定出galntl6、manla1等新型疾病修饰基因,为开发联合治疗策略提供了新靶点。4.超罕见疾病的研究突破对于患者极少的超罕见疾病(如XMEA,全球仅33例报道)，斑马鱼模型提供了可行的研究途径。美国阿拉巴马大学通过构建VMA21基因突变斑马鱼,成功模拟了该病的肌肉无力症状,并从中筛选出两种显著改善症状的药物。（二）类器官经典案例服务咨询了解更多罕见病研究，请留言或拨电话咨询：0571-83782130，手机 17364531293（微信同号）。