【评价原理】半数致死浓度（LC50）是指在动物急性毒性实验中，使受试动物半数死亡的毒性浓度。在比较各种污染物的毒性，不同种或不同发育阶段的动物对污染物的敏感性以及环境因素对毒性影响等方面的研究中，都以LC50为依据。常规急性毒性实验常采用啮齿类和非啮齿类动物进行，能较准确地反映药物的安全性，但实验周期一般较长，药物用量较大。用斑马鱼胚胎检验药物急性毒性，具有体积小，成本低，易于饲养，重复性好，便于观察，繁殖周期短，繁殖频率高，给药方式简单等诸多优点，因此它是一种理想的试验模型，用以确定药物暴露在胚胎中的毒性效应，评价药物半数致死浓度。根据实验终点斑马鱼的死亡率，通过使用OriginPro 8.0统计学软件，拟合半数致死浓度。【实验方案】我们将供试品设置一系列浓度，并设置一个正常对照组。同时设置3个生物学重复。药物通过溶解到养鱼用水中或灌胃的方式摄入到斑马鱼体内进行3天的暴露实验。每天观察记录斑马鱼死亡情况，药物处理结束后，统计各实验组的斑马鱼致死率，使用OriginPro 8.0统计学软件绘制最佳的剂量效应曲线，并计算LC50。【结果展示】图1. 斑马鱼“浓度-死亡率”效应曲线可以看到，利用OriginPro 8.0软件模拟得出药物LC50=8.0 μg/mL。【评价结论】1.根据药物“浓度-死亡率”的统计数据，利用OriginPro 8.0软件模拟得出药物的LC50=8.0 μg/mL。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】神经毒性通常指某些药物影响机体的神经传导，导致神经传导中断或减弱，从而影响机体的正常功能。斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，神经系统形成过程和发育机制与人类高度相似，在6 hpf（受精后6小时）神经系统开始发育，受精6天后所有神经系统发育完成。斑马鱼在短时间内形成整个神经系统，为神经毒性的评价带来了有利的条件。而且斑马鱼对药物神经毒性的预测准确性高，同时兼具快速、高效、经济的优点。我们评价斑马鱼神经毒性有3个指标：1.行为学；2.中枢神经凋亡细胞荧光信号强度；3. 外周运动神经长度。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用/注射药物一段时间后，我们观察斑马鱼的运动行为，通过荧光染色观察中枢神经凋亡细胞，也可以利用转基因运动神经绿色荧光NBT品系斑马鱼观察外周运动神经长度。【结果展示】图1. 斑马鱼神经毒性运动轨迹图可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼运动明显减少。图2. 斑马鱼光暗刺激下每分钟运动速度表型图可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼对光暗刺激不敏感。图3. 斑马鱼中枢神经凋亡细胞表型图黄色虚线框内为中枢神经分析区域，绿色荧光小点为凋亡细胞可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼中枢神经细胞凋亡明显增加。图4. 斑马鱼外周运动神经表型图可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼外周运动神经明显缩短。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼运动明显减少且对光暗刺激不敏感，中枢神经细胞凋亡增加且外周运动神经缩短，与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有神经毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼的听觉外侧系统由内耳和侧线两个关键的感觉结构组成，斑马鱼具有典型的内耳结构，内耳的毛细胞和侧线的毛细胞在结构功能及分子水平上与哺乳动物的内耳毛细胞非常相似，包括对耳毒性药物的相似反应。经过特异性荧光染色（呈绿色），听力损伤的斑马鱼比正常斑马鱼毛细胞明显减少或缺失（荧光减弱或者消失）。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼整体做毛细胞特异性染色，观察毛细胞的变化。【结果展示】图1. 斑马鱼毛细胞表型图绿色荧光颗粒为毛细胞可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼毛细胞减少。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼毛细胞明显减少，与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有听毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】行为是动物毒性应激反应重要而敏感的指标，神经毒性往往会导致机体行为表现异常。斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，神经系统形成过程和发育机制与人类高度相似，且对于药物的反应也有着高度相似性。斑马鱼对药物行为毒性的预测准确性高，同时兼具快速、高效、经济的优点。我们评价斑马鱼行为毒性有4个指标：1.行为学；2.中枢神经凋亡细胞荧光信号强度；3. 外周运动神经长度；4. 脑变性发生率。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用/注射药物一段时间后，我们观察斑马鱼的运动行为，通过荧光染色观察中枢神经凋亡细胞，也可以利用转基因运动神经绿色荧光NBT品系斑马鱼观察外周运动神经长度，同时可以观察脑变性发生率。【结果展示】图1. 斑马鱼行为毒性运动轨迹图可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼运动明显减少。图2. 斑马鱼中枢神经凋亡细胞表型图黄色虚线框内为中枢神经分析区域，绿色荧光小点为凋亡细胞可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼中枢神经细胞凋亡明显增加。图3. 斑马鱼外周运动神经表型图可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼外周运动神经明显缩短。图4. 斑马鱼脑变性表型图可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼脑部变性呈黑色。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼运动明显减少，中枢神经细胞凋亡增加，外周运动神经缩短且脑变性发生率增加，与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有行为毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼胚胎在母体外发育，从合子期到孵化期仅72小时，且发育的完整过程均是透明的，利于实时观察和检测。斑马鱼幼鱼长3~4毫米，拥有6-384孔板的高通量检测体系，可实现低费-高效筛选。斑马鱼与人类基因同源性达到87%，用于药物的体内快速评价实验结果可比性强。故可以利用斑马鱼早期各个阶段的发育形态，准确高效的确定药物暴露在胚胎中的毒性，广泛应用于药物的发育毒性与致畸性研究。实验结束后，以各浓度组织器官反应及死亡情况的统计学分析结果评价药物对斑马鱼的毒性，并对典型毒性器官进行拍照。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和药物组。其中正常对照组未摄入待测药物，药物组按照既定浓度摄入了不同浓度的待测药物（待测药物通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。在药物暴露过程中，每天观察记录各个浓度组斑马鱼的死亡情况，并及时挑走死鱼。实验结束后，统计斑马鱼死亡情况并使用OriginPro 8软件拟合数据曲线，获得药物的最大非致死浓度（MNLC）和LC10。在药物暴露一段时间后，我们在显微镜下观察记录斑马鱼身体各个指标的情况并对典型毒性器官进行拍照。【结果展示】图1. 斑马鱼发最大非致死浓度（MNLC）和LC10摸索数据拟合图可以看到，该药物的MNLC为313 μg/mL，LC10为350 μg/mL。图2. 斑马鱼发育毒性与致畸性表型图H=Heart;J=Jaw;In=Intestinal tract;L=Liver;Y=Yolk sac;E=Eye可以看到，药物组较正常对照组出现卵黄囊吸收延迟、心包水肿、体长变短、眼变小和肝变形。【评价结论】1.该药物的MNLC为313 μg/mL，LC10为350 μg/mL，诱发斑马鱼卵黄囊吸收延迟、心包水肿、体长变短、眼变小和肝变形。2.本实验证实了该药物对斑马鱼有发育毒性与致畸性风险。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼的听觉外侧系统由内耳和侧线两个关键的感觉结构组成，斑马鱼具有典型的内耳结构，内耳的毛细胞和侧线的毛细胞在结构功能及分子水平上与哺乳动物的内耳毛细胞非常相似，包括对耳毒性药物的相似反应。经过DASPEI特异性荧光染色（呈绿色），听力损伤的斑马鱼比正常斑马鱼毛细胞明显减少或缺失（荧光减弱或者消失）。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼整体做毛细胞特异性染色，观察毛细胞的变化。【结果展示】图1. 斑马鱼“浓度-死亡率”效应曲线供试品最大非致死浓度（MNLC）和LC10图2. 斑马鱼毛细胞表型图绿色荧光点为听细胞聚集的神经丘可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼毛细胞减少。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼毛细胞明显减少，与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有听毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼成鱼体长5 cm左右，其胚胎透明，在受精72 h后完成孵化，并在孵出后3个月内性成熟。成年斑马鱼的繁殖周期短(一般7 d左右)，若条件适宜，成年雌性斑马鱼可定期产卵(每次200～300个)。斑马鱼与人类的基因相似率高达87%, 与哺乳类动物相比, 斑马鱼的信号传导以及生理结构和功能方面都非常相似。斑马鱼能够对药物在体内的分布情况、吸收情况、代谢以及排泄等生理动态方面提供准确的信息, 尤其对小分子所引起的内分泌紊乱、再生毒性、行为缺陷、致畸、心血管毒性、肝毒性等毒性反应与人具有高度相似性。因此，使用斑马鱼作为药物早期的安全性评价是非常可靠的。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内）。供试品通过水溶暴露给药或灌胃等方式处理斑马鱼3个月。服用一段时间供试品后，将斑马鱼固定、脱水、包埋、切片，进行H&E染色，我们观察斑马鱼各组织脏器结构病理变化。【结果展示】图1. 斑马鱼致癌性表型图可以看到，服用供试品组11.1 µg/mL浓度组组织结构异常，产生癌变。异位的精原细胞簇可见于中央小叶，远离基膜。精子生成明显减少。【评价结论】1.经过每组10尾斑马鱼的对比实验，服用供试品组的斑马鱼精巢结构明显异常，与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有致癌性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼皮肤结构与功能与人类高度相似，斑马鱼皮肤含有基底层、棘层、颗粒层、透明层和表皮角质细胞层；另外尚有与人皮肤结构相同的固有层、半桥粒、黑色素细胞、血管和皮下脂肪细胞等。斑马鱼皮肤间质结缔组织、胶原及其临近的纤维母细胞及皮肤基因表达亦与人类皮肤相似。我们评价斑马鱼皮肤肌肉毒性有4个指标：1.皮肤刺激；2.肌肉纹理；3.皮肤凋亡细胞定量；4.皮肤色素变化。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内）。皮肤吸收供试品一段时间后，我们通过中性粒转基因荧光斑马鱼，观察皮肤/肌肉刺激性；通过表型拍照，观察肌肉纹理及皮肤色素变化；通过AO染色凋亡细胞，观察皮肤细胞凋亡情况。【结果展示】图1. 斑马鱼皮肤刺激性典型图片可以看到，供试品组皮肤/肌肉可见明显中性粒细胞聚集。图2. 斑马鱼皮肤损伤典型图片可以看到，供试品组可见明显肌肉纹理不清晰。图3. 斑马鱼凋亡细胞表型图可以看到，供试品组尾部可见明显凋亡（绿色荧光亮点）。图4. 斑马鱼皮肤色素异常表型图可以看到，供试品组躯干可见明显色素异常（黄色虚线区域）。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，供试品组的斑马鱼皮肤肌肉产生明显的毒性表型（包括肌肉纹理异常和色素异常），在斑马鱼尾部可见明显的凋亡细胞，在躯干部可见明显的中性粒细胞聚集。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有皮肤肌肉毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】免疫毒性是指化合物对机体免疫系统的损伤作用，包括两类，一是免疫抑制，即免疫系统的广泛抑制，可致机体对感染的易感性增加及肿瘤发生率增高；另一是免疫增强，即免疫系统反应性过度增强，可能包括免疫性产生，过敏反应（超敏反应或变态反应）、自身免疫反应以及不良免疫刺激等。斑马鱼具有先天免疫系统和获得性免疫系统，与果蝇和线虫模型相比，斑马鱼的免疫系统发育的更完整。研究证实斑马鱼与哺乳动物一样，具有T细胞、B细胞、自然杀伤细胞，其免疫系统对于环境中的免疫毒性物质（包括哺乳动物）非常的敏感。免疫毒性指标有3个：（1）应用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼，观察中性粒细胞数量；（2）应用转基因巨噬细胞绿色荧光斑马鱼，观察巨噬细胞数量（荧光强度）；（3）注射红色荧光微球，巨噬细胞吞噬微球排出体外，用体内微球的数量反映巨噬细胞吞噬功能。（4）检测T/B相关基因（rag1和rag2）表达。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成二组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用/注射供试品一段时间后，我们对斑马鱼检测中性粒细胞和巨噬细胞计数、巨噬细胞吞噬功能和T/B相关基因（rag1和rag2）表达。【结果展示】（1）中性粒细胞数量 图1. 斑马鱼中性粒细胞表型图绿色小点为中性粒细胞可以看到，服用供试品组斑马鱼体内中性粒细胞数量比正常对照组明显减少。（2）巨噬细胞数量图2. 斑马鱼巨噬细胞表型图可以看到，服用供试品组斑马鱼体内巨噬细胞数量比正常对照组明显减少。（3）巨噬细胞吞噬功能图3. 斑马鱼巨噬细胞表型图可以看到，服用供试品组的吞噬颗粒的巨噬细胞数量与正常对照组比较有明显减少，说明巨噬细胞吞噬功能下降。（4）T/B相关基因表达（rag1和rag2）图4. 斑马鱼rag1和rag2表达左图为rag1基因相对表达量，右图为rag2基因相对表达量可以看到，服用供试品组的rag1和rag2相对表达量与正常对照组比较均有减少。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用供试品组的中性粒细胞和巨噬细胞数量与正常对照组比较均有减少，其巨噬细胞吞噬功能有所下降，且rag1和rag2相对表达量减少。2.本实验证实了该供试品具有免疫毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】通常来说，炎症是机体的一种抗病反应，机体蒙受损坏后，机体的内坏境以及内境界和外坏境之间达到新的均衡的过程中会引发组装细胞的损坏，使片面组装细胞显现变性、坏死。利用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼（MPO）作为模型，当体内炎症水平上升的时候，中性粒细胞的数量也就相对的增高，在荧光显微镜下，中性粒细胞的数量也就是表现出炎症反应程度的一个重要指标。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照与供试品组，通过服用/注射供试品一段时间后，我们在荧光显微镜下观察斑马鱼中性粒细胞的数量，同时检测体内炎症因子IL-6的表达情况。【结果展示】图1. 斑马鱼中性粒细胞数量（箭头所指的绿色荧光点为中性粒细胞）从实验结果可以看到，供试品组相对正常对照组斑马鱼侧线位置中性粒细胞数显著增多。图2：斑马鱼体内的中性粒细胞数量及体内炎症因子表达水平的变化从实验结果可以看到，斑马鱼供试品组相对正常对照组，IL-6炎症因子相对表达量下降。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，相对于正常对照组，服用或者注射供试品组之后，中性粒细胞增多和炎症因子上升。2.本实验证实了供试品组等具有增加中性粒细胞数量，以及促进炎性因子表达的作用。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼的胃肠道在细胞功能和解剖学方面均与人类相似，由内皮细胞、结缔组织、外纵肌和环状肌组成。胚胎发育至26～126 hpf( hours post fertilization，受精后小时)，斑马鱼胃肠道的管腔形成并不断生长，形成有功能的肠道上皮。在未喂食情况下，斑马鱼胚胎受精约72 hpf，肠道首次出现不稳定的自发收缩。伴随着发育的进行，第120～144 hpf，斑马鱼大部分的卵黄囊被吸收，肠道自发的蠕动及摄食能力增强。我们评价斑马鱼胃肠道毒性有2个指标：1.胃肠道形态的变化；2.肠蠕动功能抑制。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。摄入供试品之前提前给予食物，摄入供试品一段时间后，我们观察斑马鱼肠道表型。服用一段时间供试品后，我们观察胃肠道形态及内容物的情况。【结果展示】可以看到，斑马鱼给予食物后，食物充盈肠道。服用/注射供试品组食物明显多于正常对照组，表明肠蠕动功能被抑制。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼胃肠道形态与正常对照组比较，发生了明显的变化，且肠道蠕动功能被抑制。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有胃肠道毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼作为一种理想的人类血液毒性模型，是以其造血系统与人类造血系统在进化上高度保守性尾前提的。通过与人类造血类似的信号传导通路，斑马鱼形成了以包括红系、髓系、淋系及巨核系为主的造血系统。斑马鱼可建立多种血液系统毒性模型，主要包括红细胞、白细胞、出凝血障碍性毒性三大类，因此主要与斑马鱼中性粒细胞、巨噬细胞、红细胞和血流量相关。由于斑马鱼具有身体积小、实验周期短等优点，可以用作评估血液毒性的一种便捷模型。转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼中性粒细胞自身发出荧光，可以直接在荧光显微镜下观察中性粒细胞个数；黑色素等位基因突变斑马鱼通体透明，经过巨噬细胞染色后可以直接在显微镜下观察巨噬细胞数量；利用邻联茴香胺将斑马鱼心脏红细胞染色，在显微镜下可以直接观察红细胞数量（信号强度）。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和供试品组(供试品通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。处理结束后，(1)通过荧光显微镜观察并统计斑马鱼中性粒细胞数量；(2)通过染色斑马鱼巨噬观察巨噬细胞细胞数量；(3)通过邻联茴香胺染色心脏部位红细胞，在显微镜下观察心脏红细胞染色强度。【结果展示】图1.斑马鱼中性粒细胞表型图（绿色小点为中性粒细胞）可以看到，供试品组中性粒细胞个数较正常对照组明显减少。图2.斑马鱼巨噬细胞表型图（红色小点为巨噬细胞）可以看到，供试品组巨噬细胞数量较正常对照组明显减少。图3.斑马鱼红细胞抑制表型图（蓝色虚线框内为分析区域,分析红细胞染色强度）可以看到，供试品组心脏红细胞染色强度较正常对照组明显降低。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，供试品组的中性粒细胞数量、巨噬细胞数量明显减少，红细胞染色强度明显降低。2.本实验证实了此供试品诱发血液毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】当各种内源性和外源性DNA损伤因子诱发细胞DNA链断裂时，其超螺旋结构受到破坏，在细胞裂解液作用下，细胞膜、核膜等膜结构受到破坏，细胞内的蛋白质、RNA以及其他成分均扩散到细胞裂解液中，而核DNA由于分子量太大只能留在原位。在中性条件下，DNA片段可进入凝胶发生迁移，而在碱性电解质的作用下，DNA发生解螺旋，损伤的DNA断链及片段被释放出来。由于这些DNA的分子量小且碱变性为单链，所以在电泳过程中带负电荷的DNA会离开核DNA 向正极迁移形成“彗星”状图像，而未受损伤的DNA部分保持球形。DNA受损越严重，产生的断链和断片越多，长度也越小，在相同的电泳条件下迁移的DNA量就愈多，迁移的距离就愈长。通过测定DNA迁移部分的光密度或迁移长度就可以测定单个细胞DNA损伤程度，从而确定受试物的作用剂量与DNA损伤效应的关系。彗星实验检测低浓度基因毒物具有高灵敏性，研究的细胞不需处于有丝分裂期。同时，这种技术只需要少量细胞。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用/注射药物一段时间后，检测尾长、彗星长、尾矩和Olive尾矩。【结果展示】图1. 彗星电泳图片可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼细胞核出现拖尾。该供试品改变DNA链的负超螺旋结构、空间构象，使DNA链断裂、形成类核，最终导致细胞死亡（坏死、凋亡或自体吞噬）。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼细胞核出现明显拖尾，与正常对照组存在明显的差别。2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有基因毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼胚胎视力发育迅速，受精后发育4天的幼鱼就已经依赖视觉线索进行捕食和躲避行为。斑马鱼不仅在角膜、晶状体、脉络膜、视网膜以及血管化和神经支配等结构上和人类的眼睛有明显的相似性，而且还有保守的基因表达、细胞构成和组织结构，因此为研究药物眼部毒性提供了一个极好的模型。我们评价斑马鱼眼毒性有4个指标：1.眼睛大小；2.眼部细胞凋亡；3.眼部血管面积；4.眼部病理切片。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和供试品组，供试品组（药物通过溶解到养鱼用水中或灌胃的方式摄入到斑马鱼体内）。服用一段时间眼保护剂后，我们在解剖显微镜下观察眼睛大小；整体做凋亡细胞特异性染色，观察眼部细胞凋亡；通过荧光显微镜观察眼部血管面积，同时制作成病理切片观察眼部的病理结构变化。【结果展示】图1. 斑马鱼眼睛表型图箭头指示区域为眼可以看到，药物组眼睛相较于正常对照组明显减小。图2. 斑马鱼眼细胞凋亡表型图黄色虚线区域为眼，绿色小点为凋亡细胞可以看到，药物组的凋亡细胞较正常对照组明显增多。图3. 斑马鱼眼部血管面积黄色虚线标记血管面积可以看到，药物组眼睛血管面积相较于正常对照组明显增加。图4. 眼部凋亡细胞病理切片可以看到，药物组出现较多的凋亡细胞，表现为细胞固缩、染色质边集，视网膜结构异于正常对照组。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，药物组斑马鱼眼睛明显变小，凋亡细胞明显增多，眼部血管面积明显增多，在病理切片中出现较多的凋亡细胞，表现为细胞固缩、染色质边集，视网膜结构异常。2.本实验证实了药物的眼毒性。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】肠道消化是食物在消化道中分解的过程，包括机械性消化（通过消化道肌肉搜索将食物与消化液混合并向消化道远端推送）和化学性消化（通过消化腺分泌的消化酶将大分子分解为小分子物质的过程）。肠道内的消化液包括胰脂肪酶、胰蛋白酶、胰淀粉酶等。在受精后的26-126 h，斑马鱼肠道的管腔形成，内胚层分化出连续的有功能的肠道上皮。斑马鱼肠道肌肉发达，可分为两层平滑肌，有利于食物的蠕动消化。通过特异性的检测试剂盒检测OD值，可以量化斑马鱼体内胰脂肪酶和胰蛋白酶含量。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成二组，分别是正常对照和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内），加入相应的胰脂肪酶和胰蛋白酶特异性检测试剂。服用供试品后，我们使用酶标仪对斑马鱼进行OD值的检测。【结果展示】图1. 斑马鱼胰脂肪酶和胰蛋白酶OD值可以看到，服用供试品组的胰脂肪酶和胰蛋白酶的OD值与正常对照组比较，有显著性提高。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用供试品组与正常对照组比较胰脂肪酶和胰蛋白酶含量均有明显的升高。2.本实验证实了供试品具有促进肠道消化功能的作用，主要表现为增加胰脂肪酶和胰蛋白酶的含量。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼心血管系统的发育与人高度相似，虽然斑马鱼是单心房单心室，但其心脏结构及功能与人高度保守。同时，由于斑马鱼具有透明易观察等优点，开始被大量应用于心血管疾病研究和药物心血管毒性评价当中。羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶 ( HMGCR) 是他汀类药物发挥抑制作用的直接作用点, HMGCR功能被抑制会影响血管的完整性和稳定性，诱发心脏出血。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和药物组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组与服用改善心脏出血药物组都摄入了等量的辛伐他汀（辛伐他汀通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。药物组在摄入辛伐他汀的同时摄入淫羊藿苷之类的改善心脏出血药物。服用改善心脏出血药物一段时间后，我们通过解剖显微镜对斑马鱼进行心脏出血发生率的统计；对斑马鱼进行行为学分析；通过心跳血流分析系统采集斑马鱼血流影像，并分析血流速度改善作用。【结果展示】图1. 斑马鱼改善心脏出血表型图可以看到，模型对照组的斑马鱼心脏有明显的出血，服用改善心脏出血药物组的心脏出血情况与正常对照组比较相似，没有明显的心脏出血。图2. 斑马鱼运动改善表型图可以看到，模型对照组的运动距离明显减少，服用改善心脏出血药物组的运动距离与正常对照组比较相似，没有明显的运动减少。图3. 斑马鱼改善血流柱状图可以看到，模型组的血流速度明显减慢，服用改善心脏出血药物组的血流速度与模型对照组比较血流速度增加，没有明显的血流速度减慢。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用改善心脏出血药物组的心脏出血情况、运动距离、血流速度均有明显改善作用。2.本实验证实了淫羊藿苷具有明显改善心脏出血的功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】糖尿病是一种由遗传基因决定的与感染、肥胖等环境因素促发有关的疾病，其基本病理生理为绝对或相对性胰岛素分泌不足引起的代谢紊乱。高血脂患者由于血液中胆固醇、油脂含量过多，就会使过多油脂沉积于血管壁上，容易使动脉管壁增厚、变硬、失去弹性，导致动脉硬化。斑马鱼食欲调节（如血清素）和胰岛素调节功能与人类相似，斑马鱼其他涉及葡萄糖体内平衡的器官系统（包括脑、肝、脂肪细胞组织和骨骼肌）的发育和功能也与哺乳动物类似。斑马鱼在糖脂负荷状态下表现出持续高血糖、高血脂现象，用高糖高脂饲料可以诱发斑马鱼高血糖，模拟人的二型糖尿病。用转基因绿色血管荧光斑马鱼（呈绿色），患有高糖高脂的斑马鱼眼部血管壁厚度较正常斑马鱼明显增厚，在共聚焦显微镜下可以观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和降糖降脂产品组。其中正常对照组未摄入高糖高脂饲料，模型对照组与服用降糖降脂产品组都摄入了等量的高糖高脂饲料（高糖高脂饲料通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。降糖降脂产品组在摄入高糖高脂饲料的同时摄入松花蛹虫草之类的降糖降脂产品。服用一段时间降糖降脂产品后，我们用共聚焦显微镜下观察斑马鱼眼部血管壁厚度。【结果展示】图1. 斑马鱼眼部血管壁厚度白色箭头所指为血管壁可以看到，模型对照组的眼部血管壁厚度较正常对照组明显增厚，而降糖降脂产品组斑马鱼眼部血管壁厚度与正常对照组相近。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，降糖降脂产品组斑马鱼眼部血管壁厚度与正常对照组相近，并未出现模型对照组眼部血管壁增厚的情况。2.本实验证实了松花蛹虫草具有眼部血管壁厚度增厚改善功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】蛋黄粉中60%为脂类，用蛋黄粉喂食斑马鱼，可以使斑马鱼血液中的脂肪含量快速升高，从而建立斑马鱼高血脂症模型。经过油红O特异性脂肪染色（与组织内甘油三酯等脂肪滴结合呈橘红色），高血脂斑马鱼血管内肉眼可见明显的脂质聚积，通过静脉注射，可见荧光标记胆固醇的积累。我们评价斑马鱼降低血脂功效有4个指标：1.斑马鱼血脂表型图；2.斑马鱼总甘油三脂含量；3.斑马鱼胆固醇表型图；4.斑马鱼总胆固醇含量。【实验方案】我们先将测试斑马鱼喂食蛋黄粉和荧光标记的胆固醇（蛋黄粉和荧光标记的胆固醇通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内），建立高血脂模型后，再将受测试斑马鱼分成两组，分别是模型对照组和服用降脂剂组，服用降脂组摄入阿托伐他汀钙、辛伐他汀、洛伐他汀之类的降脂剂。服用一段时间降脂剂后，我们对斑马鱼整体做脂肪特异性染色，观察体内甘油三酯聚积的变化，以及观察体内胆固醇的聚积情况，同时利用甘油三酯和胆固醇试剂盒检测斑马鱼体内甘油三酯和胆固醇含量的变化。【结果展示】图1. 斑马鱼血脂表型图橘红色脂滴为血脂可以看到，服用降脂剂组的血脂聚积情况与模型对照组比较明显减少。图2. 斑马鱼胆固醇表型图红色为荧光胆固醇可以看到，服用降脂剂组的胆固醇荧光强度与模型对照组比较明显减少。图3. 斑马鱼总胆固醇含量（mmol/gprot）与模型对照组比较，** p < 0.01从生化指标可以看出，服用降脂剂组的斑马鱼整体总胆固醇含量与模型对照组比较明显降低。图4. 斑马鱼甘油三酯含量（mmol/gprot）与模型对照组比较，*** p < 0.001从实验结果可以看出，服用降脂剂组的斑马鱼整体甘油三酯含量与模型对照组比较明显降低。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用降脂产品组的血脂聚积情况与模型对照组比较明显减少。2.本实验证实了阿托伐他汀钙、辛伐他汀、洛伐他汀类降脂产品具有显著的降脂降胆固醇作用。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，斑马鱼肝脏中有许多与哺乳动物同源的脂质代谢酶，与哺乳动物对外源化学物质的防御机制相当，包括酶的诱导和氧化应激。而且斑马鱼幼鱼通体透明，容易观察到毒性表型。酒精性肝损伤是全世界发病率和死亡率的主要原因，酒精性肝损伤是过量饮酒的结果。当患者继续饮酒时，会诱发严重的肝损伤形式，如脂肪性肝炎，纤维化，肝硬化和肝细胞癌。用乙醇可以诱发斑马鱼肝脏损伤，模拟人的肝脏疾病。我们评价斑马鱼肝脏毒性有4个指标：1.肝脏面积；2.肝脏变性程度；3. 卵黄囊吸收延迟的发生率（卵黄囊是脂肪，卵黄囊吸收与肝功能密切相关）；4. 肝脏病理切片。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用肝保护剂组。其中正常对照组未摄入乙醇，模型对照组与服用肝保护剂组都摄入了等量的乙醇（乙醇通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。肝保护剂组在摄入对乙醇的同时摄入美他多辛之类的肝保护剂。服用一段时间肝保护剂后，我们在显微镜下观察斑马鱼肝脏及卵黄囊表型，同时制作成病理切片观察肝脏的病理结构变化。【结果展示】从病理切片中也能看出来，正常对照组肝细胞核规则清晰，肝细胞结构正常，边缘清晰。乙醇处理后，斑马鱼肝细胞结构模糊、肝细胞核肿大，肝组织出现脂肪空泡样变性，而肝保护剂组细胞和正常斑马鱼中形态相似。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，肝保护剂组斑马鱼肝脏与正常对照组相似，并未出现模型对照组的肝脏肿大、肝变性和卵黄囊吸收延迟情况。2.本实验证实美他多辛对斑马鱼肝脏的保护作用。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】糖尿病是一种由遗传基因决定的与感染、肥胖等环境因素促发有关的疾病，其基本病理生理为绝对或相对性胰岛素分泌不足引起的代谢紊乱。持续的高血糖水平导致糖尿病并发症发生，高血糖累及中枢和周围神经病变，出现神经炎症。感觉神经受损较为多见，出现麻木、触电、发热、蚁行感，运动神经受损则出现肌力下降。斑马鱼胰腺的形态发生和基本细胞结构、排列方式类似于哺乳动物，斑马鱼食欲调节（如血清素）和胰岛素调节功能与人类相似，斑马鱼其他涉及葡萄糖体内平衡的器官系统（包括脑、肝、脂肪细胞组织和骨骼肌）的发育和功能也与哺乳动物类似。斑马鱼在糖负荷状态下表现出持续高血糖现象，用高糖高脂饲料可以诱发斑马鱼高血糖，模拟人的二型糖尿病的神经并发症。用转基因运动神经荧光斑马鱼（呈绿色），患有高血糖的斑马鱼运动神经细胞损伤、荧光强度减弱，在荧光显微镜下可以观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用降糖产品组。其中正常对照组未摄入高糖高脂饲料，模型对照组与服用降糖产品组都摄入了等量的高糖高脂饲料（高糖高脂饲料通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内。降糖产品组在摄入高糖高脂饲料的同时摄入松花蛹虫草之类的降糖产品。服用一段时间降糖产品后，我们用荧光显微镜观察斑马鱼周围运动神经荧光强度。【结果展示】图1. 斑马鱼周围运动神经荧光强度白色箭头代表运动神经可以看到，模型对照组周围运动神经荧光强度较正常对照组明显减弱，而降糖产品组斑马鱼周围运动神经荧光强度明显增强。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，降糖产品组斑马鱼周围运动神经荧光强度与模型对照组比较明显增强。2.本实验证实了松花蛹虫草之类的产品具有神经保护作用。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）