前言2023年8月，国家市场监督管理总局发布的《保健食品新功能及产品技术评价实施细则（试行）》和《保健食品功能检验与评价方法》等法规接连落地，保健食品新产品的注册与备案工作步入新阶段，同时也为保健食品行业健康发展绘制出新标准和新路径。基于斑马鱼+类器官+哺乳动物+人体试食四大生物技术，环特多维生物技术平台推出面向保健功能性食品开发、注册备案和学术营销的一站式CRO服务。保健食品CRO领导者——环特多维生物技术平台01、保健功能性食品开发环特多维生物技术平台以完整的研发全程链式CRO服务体系，助力解决保健功能性食品新产品的原辅料采购、资质审核、配方筛选和指标功效研究等领域核心痛点，加快推进产品在市场中的开发应用。当前，我国保健食品主要可分为两大类，其一是以补充营养素为目的，但无法提供能量或其他活性成分的营养素补充剂；其二则是以维系并增进人体健康为目的，具备调节机体生理功能，降低相关疾病发生的风险因素等特定保健功能的功能性保健食品。根据《中华人民共和国食品安全法》的相关规定，新食品原料在正式上市前需经过国家卫健委的安全性评估，审批通过后方能应用于食品。随着我国对保健功能性食品的不断开发，一些新兴的原料也随之出现在普罗大众的视野中，枯草芽孢杆菌QK02、麦角硫因、亚麻荠籽油、透明质酸钠等一批新原料近年来正在保健食品领域大放异彩。然而，新食品原料的申报更加注重原料的食用和营养属性并举，安全和功效属性并重。因此，更需要企业从多个角度开展安全性和营养性的科学论证与探究。02、保健食品注册与备案环特多维生物技术平台倚靠业界资深的保健食品审评专家智囊团，辅以强大的省级疾控中心与药检系统联动能力，以科学之力溯本求源，从根本上保证试验数据与结论的专业性，为保健食品的注册备案提供权威背书。“蓝帽子”标识是保健食品的特有身份证明，只有当保健食品的成分、功效和安全性等获得国家食品药品监督管理局的审核批准的“蓝帽子”标识后，才能上市销售。然而根据食品安全部门官方统计显示，“蓝帽子”的平均申请时间达到2-3年之久，同时，申请前期的繁琐程序和相关法规政策的变化调整都有可能延长审批时间，使得申请难度系数倍增。此外，根据相关法律规定保健功能性食品必须经过必要的动物/人体功能功效试验，证明其具有明确、稳定的保健作用后方可申请注册备案。同时，产品的原料、成分和功效性必须具有严格且明确的科学依据，由此极大抬高了行业的准入门槛。昂贵的研发费用和时间成本，使我国成为全世界保健食品行业准入门槛最严格、成本最高的国家，如何高效打通从新产品研发到注册备案再到产品营销的通路环节，成为了重中之重。03、学术营销环特多维生物技术平台凭借丰富的保健食品研发CRO项目经验，成就优秀的项目实施能力和交付质量，以可视化学术证据链，助力保健食品的科技营销。通过检测研究报告的科学论证、试验图片/视频的美学展现、学术论文/发明专利的权威佐证、证书/奖项的官方认可、团标和白皮书的调研数据等成果产出，让产品在线上电商、产品发布会、产品包装、品牌营销和渠道招商的五大应用场景中脱颖而出，实现新质突破。结语保健食品的发展史是我国在美丽健康产业不断探索的进步史，更是数十亿国民对健康生活的美好愿景。“不畏浮云遮望眼，自缘身在最高层”。作为保健食品CRO服务的领导者，环特多维生物技术平台将不断砥砺前行，助力企业探索健康之因，成就健康之美。【技术咨询】17364531293（微信同号）

环特生物，利用斑马鱼模型实验，为功能食品/保健食品企业提供产品功效评价、功能检测、毒理安全性评价、原料筛选验证及安全检测、微生物检测等服务，周期短、费用低、直观高效。助力企业做好研发、品控和推广。功效评价检测安全性评价-毒理评价检测食品/保健食品及原料 评价检测项目更多的食品/保健食品评价检测项目及内容，请拨电话咨询：0571-83782130环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²斑马鱼生物评价实验室。环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。

● 项目意义肿瘤类器官是将肿瘤患者的新鲜组织经体外3D培养系统建立的、与肿瘤患者特征高度相似的一种立体模型，已被证实与患者肿瘤的病理组织学特征、分子特征、药物敏感性等保持高度一致，在对应的药物筛选领域有着巨大的应用空间。同时，环特生物已建立的多癌种实体瘤斑马鱼PDX药敏评价体系已用于临床，为患者提供精准的用药指导。我们基于真实世界肿瘤患者的临床研究，联合国内知名三甲医院，开展全世界首个胃癌斑马鱼PDX与患者治疗效果的一致性评价项目（美国临床研究Clinical Trials注册号：NCT05616533），为斑马鱼PDX的临床应用提供更加充分的科学依据。为满足不同科研场景的行业需求，环特生物联合该医院共同发起“基于胃癌的斑马鱼PDX与类器官抗肿瘤药效评价的科研项目”，通过构建胃癌的精准医疗生物样本库，致力于为广大药企的抗肿瘤药物提供药效评价的科研服务。● 预期成果1）构建不少于50例基于胃癌的类器官生物样本库，并完成类器官样本的临床信息、基因信息的采集2）按需交付药物在胃癌斑马鱼PDX或类器官模型中的定性、定量数据3）共同产出数篇国际前沿的科研论文4）实现相关课题项目、技术创新奖项的申报● 合作伙伴权益标准权益——1）享有项目所述样本库的“联合建设单位”两年冠名权2）享有该项目最终成果的宣传权利3）项目结束后，一定期限内享受特定数量的药物药效评价折扣定制（付费）权益——1）类器官药物研发平台建设（含培训1-3名类器官技术人员、胃癌类器官构建方法的技术转让）2）其他相关需求及服务● 项目分工1）合作医院负责提供胃癌肿瘤组织样本2）环特生物负责斑马鱼PDX与类器官样本库的构建服务与药效评价3）药合作伙伴负责根据实际科研需求提供药物和科研经费● 申报条件1）具有一定新药研发经验的大中型药物研发机构2）药物类型为胃癌的化疗药物、靶向药物（免疫类药物除外）、中药，以及辅助治疗的相关药物● 合作伙伴名额预计招募合作单位3家● 项目周期5-6个月● 合作详询：成先生 17364531293

【评价原理】斑马鱼与人类的基因相似率高达87%, 与哺乳类动物相比, 斑马鱼的信号传导以及生理结构和功能方面都非常相似。斑马鱼能够对药物在体内的分布情况、吸收情况、代谢以及排泄等生理动态方面提供准确的信息, 尤其对小分子所引起的内分泌紊乱、再生毒性、行为缺陷、致畸、心血管毒性、肝毒性等毒性反应与人具有高度相似性。因此，使用斑马鱼作为药物早期的安全性评价是非常可靠的。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内）。通过环特生物剂量换算公式，将人每日推荐服用剂量换算为斑马鱼使用浓度进行安全性评价。服用一段时间供试品后，我们观察斑马鱼各组织脏器的表型。【结果展示】图1. 斑马鱼毒性表型图J：下颌；E:眼；H：心脏；L：肝脏；In：胃肠道；Y：卵黄囊可以看到，服用人每日推荐服用剂量的供试品组未见明显异常。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用人每日推荐服用剂量的供试品组未诱发斑马鱼明显的毒性表型，与正常对照组斑马鱼相似。2.本实验证实了在短期服用时，该供试品以人每日推荐服用剂量使用并未诱发安全性风险。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】OECD近年大力推崇的“有害结局路径”（Adverse Outcome Pathway，AOP）毒性评估策略来测试类雌激素这一大类有害物质。本方法参照粮农组织和世界卫生组织（FAO/WHO，2000）关于雌激素物质最高日摄取量来评估测试物的安全性，通过转基因标记技术表达的绿色荧光蛋白含量来量化类雌激素物质含量，绿色荧光蛋白特异性地在肝脏表达，一旦供试品中含一定量的类雌激素化学物质，雌激素转基因斑马鱼暴露后肝脏部位会出现绿色荧光，可用绿色荧光量化供试品中的类雌激素物质含量，从而达到检测效果。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。摄入供试品一段时间后，我们在荧光显微镜下观察斑马鱼肝脏荧光。【结果展示】图1.含类雌激素物质的供试品处理后斑马鱼荧光表型图黄色曲线部位为肝脏，绿色荧光量化类雌激素含量可以看到，摄入供试品组肝脏部位有明显的绿色荧光。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，摄入含类雌激素物质的供试品组斑马鱼肝脏荧光明显，与正常对照组存在明显差别。2.本实验证实了该供试品含有类雌激素物质。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】OECD近年大力推崇的“有害结局路径”（Adverse Outcome Pathway，AOP）毒性评估策略来测试类雌激素这一大类有害物质。本方法参照粮农组织和世界卫生组织（FAO/WHO，2000）关于类雌激素物质最高日摄取量来评估测试物的安全性，通过转基因标记技术表达的绿色荧光蛋白含量来量化类雌激素物质含量，绿色荧光蛋白特异性地在肝脏表达，一旦供试品中含一定量的类雌激素化学物质，雌激素转基因斑马鱼暴露后肝脏部位会出现绿色荧光，可用绿色荧光量化供试品中的类雌激素物质含量，从而达到检测效果。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。摄入供试品一段时间后，我们在荧光显微镜下观察斑马鱼肝脏荧光。【结果展示】图1.含类雌激素物质的供试品处理后斑马鱼荧光表型图黄色曲线部位为肝脏，绿色荧光量化类雌激素含量可以看到，摄入供试品组肝脏部位有明显的绿色荧光。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，摄入含类雌激素物质的供试品组斑马鱼肝脏荧光明显，与正常对照组存在明显差别。2.本实验证实了该供试品含有类雌激素物质。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼消化道的解剖结构、组织细胞形态与人类消化道相似，具有内皮、结缔组织、环状肌肉和外纵肌层。斑马鱼发育至5 dpf时，其消化道即出现了自发有节奏的肌肉收缩活动。经过喂食不被吸收的特异性荧光材料尼罗红，可以明显的观察到被鱼吃进去的荧光染料，以胃肠道尼罗红的量（荧光强度）为指标，若供试品有胃肠动力抑制作用，则胃肠道内尼罗红无法排出，堆积的尼罗红的量增加，胃肠道荧光强度明显变亮。【实验方案】我们先给斑马鱼喂饲特异性荧光材料尼罗红，然后将受测试斑马鱼分成2组，分别是正常对照组、胃肠动力抑制剂组。服用一段时间胃肠动力抑制剂后，我们在荧光显微镜下观察斑马鱼胃肠道荧光强度。【结果展示】图1. 斑马鱼胃肠道荧光强度表型图可以看到，服用胃肠动力抑制剂斑马鱼的胃肠道荧光强度明显比正常对照组亮。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用胃肠动力抑制剂斑马鱼的胃肠道荧光强度明显比正常对照组亮。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】机体供能主要分为有氧供能与无氧供能，在两种供能条件下ATP均源源不断的合成以维持机体活动的需求。通过ATP含量的测定，可以分析能量调节剂对斑马鱼能量代谢快慢的影响。如持续的促进能量代谢、增加机体能量消耗是行之有效的减肥措施，促进脂肪分解类减肥产品可明显增加斑马鱼体内ATP含量。【实验方案】将受测试斑马鱼分成2组，分别是正常对照组、能量调节剂组。服用一段时间能量调节剂后，我们利用ATP试剂盒检测斑马鱼体内ATP含量。【结果展示】图1. 斑马鱼体内ATP含量与正常对照组比较，***p<0.001可以看到，服用能量调节剂的斑马鱼体内ATP含量明显比正常对照组高。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用能量调节剂的斑马鱼体内ATP含量与正常对照组相比明显升高，说明本次实验中选用的能量调节剂可促进ATP生成，促进能量代谢。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】机体供能主要分为有氧供能与无氧供能，在两种供能条件下ATP均源源不断的合成以维持机体活动的需求。通过ATP含量的测定，可以分析能量调节剂对斑马鱼能量代谢快慢的影响。如持续的促进能量代谢、增加机体能量消耗是行之有效的减肥措施，促进脂肪分解类减肥产品可明显增加斑马鱼体内ATP含量。【实验方案】将受测试斑马鱼分成2组，分别是正常对照组、能量调节剂组。服用一段时间能量调节剂后，我们利用ATP试剂盒检测斑马鱼体内ATP含量。【结果展示】图1. 斑马鱼体内ATP含量与正常对照组比较，***p<0.001可以看到，服用能量调节剂的斑马鱼体内ATP含量明显比正常对照组高。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用能量调节剂的斑马鱼体内ATP含量与正常对照组相比明显升高，说明本次实验中选用的能量调节剂可促进ATP生成，促进能量代谢。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】Wnt是一种分泌的糖蛋白，发育调控的的wnt基因编码分泌的糖基化蛋白质，作用于细胞表面，大多数的wnt基因在机体伤口修复和再生需要组成受伤组织的各种细胞类型之间做协调。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分为体轴发育和断尾再生两种模型。体轴发育评价分成两组，分别是正常对照组和服用Wnt信号通路抑制剂组（Wnt信号通路抑制剂LGK974通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用一段时间Wnt信号通路抑制剂后，对斑马鱼体轴长度进行测量，观察体轴长度的变化。断尾再生评价分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用Wnt信号通路抑制剂组（Wnt信号通路抑制剂LGK974通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用一段时间Wnt信号通路抑制剂后，对斑马鱼尾鳍面积进行测量，观察尾鳍再生的变化。【结果展示】图1. 斑马鱼体轴发育表型图黑色箭头所指为缺失的尾鳍可以看到，服用Wnt信号通路抑制剂组的体轴长度较正常对照组明显变短。 图2. 斑马鱼尾鳍再生表型图红色区域为向尾鳍再生部位可以看到，服用Wnt信号通路抑制剂组的斑马鱼尾鳍再生面积相比模型对照组明显变小。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用Wnt信号通路抑制剂的体轴长度和尾鳍再生面积均小于正常对照组。2.本实验证实了LGK974具有体轴发育和组织再生抑制作用，作用机制与抑制wnt信号通路相关。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】中枢神经损伤常表现为偏瘫、失语、智力障碍或昏迷，甚至死亡。斑马鱼是一种与人类同源性较高的脊椎动物，大脑具有典型脊椎动物脑部形态学特征，髓鞘结构特征和少突胶质细胞分化过程与哺乳动物高度一致。而且斑马鱼生长发育周期短，神经系统简单，有利于开展中枢神经保护剂的研究。霉酚酸吗啉乙酯可以抑制斑马鱼神经元轴突的生长，干扰神经及细胞的迁移和导致发育畸形，使神经元细胞凋亡。经过特异性荧光染色（凋亡细胞呈绿色），中枢神经损伤的斑马鱼在脑和脊髓部位会布满凋亡细胞，比正常斑马鱼多很多，可以明显被观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用中枢神经保护剂组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组与服用中枢神经保护剂组都摄入了等量的霉酚酸吗啉乙酯（霉酚酸吗啉乙酯通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用中枢神经保护剂组在摄入霉酚酸吗啉乙酯的同时摄入还原型谷胱甘肽、养血清脑颗粒和安宫牛黄丸之类的中枢神经保护剂。服用中枢神经保护剂一段时间后，我们对斑马鱼整体进行特异性荧光染色，观察中枢神经细胞的凋亡情况。【结果展示】图1. 斑马鱼中枢神经保护表型图黄色虚线区域为中枢神经，绿色光点为凋亡细胞可以看到，服用中枢神经保护剂组的中枢神经情况与正常对照组比较相似，没有明显的细胞凋亡。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用中枢神经保护剂组的中枢神经情况与正常对照组相似，并未出现模型对照组大量凋亡细胞的情况。2.本实验证实了还原型谷胱甘肽、养血清脑颗粒和安宫牛黄丸具有明显保护中枢神经作用。

【评价原理】斑马鱼与人类的基因相似率高达87%, 与哺乳类动物相比, 斑马鱼的信号传导以及生理结构和功能方面都非常相似。斑马鱼能够对药物在体内的分布情况、吸收情况、代谢以及排泄等生理动态方面提供准确的信息, 尤其对小分子所引起的内分泌紊乱、再生毒性、行为缺陷、致畸、心血管毒性、肝毒性等毒性反应与人具有高度相似性。因此，使用斑马鱼作为药物早期的安全性评价是非常可靠的。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内）。通过环特生物剂量换算公式，将人每日推荐服用剂量换算为斑马鱼使用浓度进行安全性评价,梯度设置浓度进行安全性评价。服用一段时间供试品后，我们观察斑马鱼各组织脏器的表型。【结果展示】图1. 斑马鱼毒性表型图J：下颌；E:眼；H：心脏；L：肝脏；In：胃肠道；Y：卵黄囊可以看到，服用2倍及以下人每日推荐服用剂量的供试品组未见明显异常，服用3倍人每日推荐服用剂量的供试品组诱发斑马鱼肝脏变性和卵黄囊吸收延迟。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用2倍及以下人每日推荐服用剂量的供试品未诱发斑马鱼明显毒性表型，与正常对照组斑马鱼类似；服用3倍人每日推荐服用剂量的供试品诱发斑马鱼明显的肝脏毒性表型。2.本实验证实了在短期服用中，该供试品应限量使用，否则会出现安全性风险。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】利用物理/化学方法损伤斑马鱼肌肉、皮肤，伤口愈合过程中黑色素细胞会募集到伤口部位，伤口愈合相关基因表达量（如皮肤胶原蛋白colla1b基因）会显著增加以促进伤口愈合。由于斑马鱼通体透明的特点，可以明显被观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和伤口愈合促进剂组。其中正常对照组未经过物理/化学损伤，模型对照组与伤口愈合促进组都经过了同程度的损伤。服用伤口愈合促进组在损伤后摄入胶原蛋白等伤口愈合促进剂。服用一段时间伤口愈合促进剂后，观察伤口色素变化，并用实时荧光定量PCR仪检测伤口愈合相关基因的表达量。【结果展示】图1.伤口部位色素募集表型图黄色虚线内为损伤部位可以看出，伤口愈合促进剂组的伤口黑色素募集程度与同等程度损伤的模型对照组比较明显减轻。 图2. 斑马鱼体内cola1b基因相对表达量与模型对照组比较，***p < 0.001 可以看出，服用伤口愈合促进剂组cola1b相对表达量明显高于模型对照组。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用伤口愈合促进剂组的黑色素募集情况较模型对照组明显减轻，cola1b相对表达量也明显高于模型对照组。2.本实验证实了胶原蛋白具有促进伤口愈合功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】铅中毒的器官主要是造血系统、心脏和神经系统。对于儿童的神经系统损伤导致智商降低，注意力缺陷多动障碍以及阅读和学习能力下降，其毒性机制与神经元生长和轴索束变化相关。通过斑马鱼体内铅含量、轴索荧光强度和运动神经长度检测，铅中毒的斑马鱼体内铅含量明显比正常斑马鱼的高很多，而轴索荧光强度和运动神经长度铅中毒斑马鱼均明显少于正常斑马鱼。由于斑马鱼可被整体免疫荧光染色以及转基因荧光鱼运动神经发荧光的特性，我们可以通过荧光强度观察到明显的轴索细胞和运动神经的变化。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成五组，分别是正常对照组、模型对照组和服用促排铅剂组。其中正常对照组未摄入铅，模型对照组与服用促排铅剂组都摄入了等量的铅（铅通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用促排铅剂组在摄入铅的同时摄入绿豆肽复方之类的促排铅剂。服用一段时间促排铅剂后，我们（1）检测体内铅含量；（2）用荧光显微镜采集轴索荧光强度；（3）用荧光显微镜采集运动神经长度。【结果展示】（1）体内铅含量：图1. 斑马鱼体内铅含量与模型对照组比较，*p < 0.05可以看到，服用排铅剂组的铅含量与摄入相同铅的模型对照组比较相似明显减少。（2）轴索荧光强度：可以看到，服用排铅剂组脑部轴索荧光强度与摄入相同铅的模型对照组比较明显增加。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用促排铅剂组的铅含量、轴索荧光强度和运动神经长度与未摄入铅的正常对照组相似，并未出现模型对照组的铅含量升高，轴索荧光强度和运动神经长度减少的情况。2.本实验证实了绿豆多肽复方具有明显的促排铅功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】由于硬骨鱼和人类在骨骼发育过程中的基因、信号通路有高度同源性，而且与其他的动物模型相比，斑马鱼具有个体小适合高通量化学筛选、幼鱼身体透明易于观察骨骼发育的特点，所以近年来以斑马鱼为模型的骨骼研究逐渐成为这一领域的热点。斑马鱼从前向后的脊椎发育过程是非连续的，而是分成两个不同的区域：前域（包括前3块椎骨）和后域（包括第4-31块椎骨）。将斑马鱼脊椎骨钙化过程分成两个不同区域是基于第2和第3椎骨的出现晚于第4椎骨。我们利用斑马鱼骨骼发育的规律，摄入生长发育促进剂的斑马鱼脊椎骨发育会加快。脊椎骨染色应用与钙特异性结合的荧光染料（呈绿色），经荧光显微镜观察脊椎骨的数量。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和服用生长发育促进剂组（维生素D3、碳酸钙之类的生长发育促进剂通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用一段时间生长发育促进剂后，我们对斑马鱼做骨骼特异性荧光染色，观察斑马鱼脊椎骨的发育情况。【结果展示】图1. 斑马鱼脊椎骨荧光图黄色虚线区域为定量的脊椎骨可以看到，服用生长发育促进剂的脊椎骨数量明显比正常对照组增多。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用生长发育促进剂的斑马鱼脊椎骨数量比正常对照组增多。2.本实验证实了维生素D3、碳酸钙具有明显促进生长发育功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】由于硬骨鱼和人类在骨骼发育过程中的基因、信号通路有高度同源性，而且与其他的动物模型相比，斑马鱼具有个体小适合高通量化学筛选、幼鱼身体透明易于观察骨骼发育的特点，所以近年来以斑马鱼为模型的骨骼研究逐渐成为这一领域的热点。斑马鱼从前向后的脊椎发育过程是非连续的，而是分成两个不同的区域：前域（包括前3块椎骨）和后域（包括第4-31块椎骨）。将斑马鱼脊椎骨钙化过程分成两个不同区域是基于第2和第3椎骨的出现晚于第4椎骨。我们利用斑马鱼骨骼发育的规律，摄入生长发育促进剂的斑马鱼脊椎骨发育会加快。脊椎骨染色应用与钙特异性结合的荧光染料（呈绿色），经荧光显微镜观察脊椎骨的数量。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和服用生长发育促进剂组（维生素D3、碳酸钙之类的生长发育促进剂通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用一段时间生长发育促进剂后，我们对斑马鱼做骨骼特异性荧光染色，观察斑马鱼脊椎骨的发育情况。【结果展示】图1. 斑马鱼脊椎骨荧光图黄色虚线区域为定量的脊椎骨可以看到，服用生长发育促进剂的脊椎骨数量明显比正常对照组增多。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用生长发育促进剂的斑马鱼脊椎骨数量比正常对照组增多。2.本实验证实了维生素D3、碳酸钙具有明显促进生长发育功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】伤口在愈合过程中会出现一系列的机体反应，如形成新生毛细血管、损伤部位出现黑色素募集现象、伤口部位会出现大量的白细胞以增强伤口对感染的抵抗能力，并有大量的坏死细胞以及凋亡细胞被清除等。利用斑马鱼幼鱼通体透明，成年斑马鱼尾鳍结构简单、易于手术操作、损伤后不影响生存等特点，通过物理/化学方法损伤斑马鱼肌肉、皮肤造成斑马鱼组织再生或伤口损伤。可以观察到幼鱼伤口部位（1）黑色素；（2）新生血管；（3）凋亡细胞；（4）巨噬细胞；（5）坏死细胞。可以观察到成鱼尾鳍的再生面积和长度。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和伤口愈合促进剂组。其中正常对照组未经过物理/化学损伤，模型对照组与伤口愈合促进剂组都经过了同程度的损伤。服用伤口愈合促进剂组在损伤后摄入胶原蛋白类等伤口愈合促进剂。在幼鱼上服用一段时间伤口愈合促进剂后，观察伤口色素变化、新生血管情况、伤口部位凋亡细胞和巨噬细胞的荧光强度以及坏死细胞的数量。在成鱼上服用一段时间伤口愈合促进剂后，观察成鱼尾鳍再生面积和长度的情况。【结果展示】 白色虚线为尾鳍切除范围，红色虚线为尾鳍再生面积，黑色箭头所指为沿鳍条再生射线方向统计尾鳍再生长度的示意图可以看出，伤口愈合促进剂组的组织再生面积与模型对照组比较增多。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用伤口愈合促进剂组与模型对照组比较，黑色素明显减轻、新生血管数明显增多、凋亡细胞、巨噬细胞及坏死细胞明显减少。2.经过每组10尾斑马成鱼的对比实验，服用伤口愈合促进剂组与模型对照组比较，组织再生面积较模型对照组增多。3.本实验证实了胶原蛋白具有促进伤口愈合功效。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】血管新生是指在已有血管结构的基础上长出新血管的生物学过程，是一个涉及多种细胞、基质及细胞因子的复杂过程。其中血管内皮细胞是循环血液与血管平滑肌的机械屏障，在缺血性疾病的治疗中，促进内皮细胞的增殖，重建缺血区微循环，促进血管新生是重要的治疗手段之一。羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶 ( HMGCR) 是他汀类药物发挥抑制作用的直接作用点, HMGCR功能被抑制会影响血管的完整性和稳定性。斑马鱼在发育起始阶段，存活不依赖血液循环，不会像哺乳动物那样由于循环缺失导致胚胎死亡。因此，可用辛伐他汀诱导斑马鱼血管缺失模型从而筛选血管再生促进剂。运用转基因血管内皮荧光斑马鱼（呈绿色），血管缺失的斑马鱼肠下血管面积较正常斑马鱼肠下血管面积减小且肠下血管分支变少。由于转基因斑马鱼的特点，血管的变化可以明显被观察到。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和摄入血管再生促进剂组。其中正常对照组未摄入辛伐他汀，模型对照组与摄入血管再生促进剂组都摄入等量的辛伐他汀（辛伐他汀通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。摄入血管再生促进剂组在摄入辛伐他汀后摄入黄芪甲苷之类的血管再生促进剂。服用一段时间血管再生促进剂后，我们对斑马鱼进行荧光拍照，观察斑马鱼肠下血管面积和肠下血管分支的变化。【结果展示】图1. 肠下血管面积表型图黄色虚线区域为斑马鱼肠下血管面积可以看到，服用血管再生促进剂组肠下血管面积与未摄入辛伐他汀的正常对照组比较相似，没有明显的血管缺失。图2. 肠下血管分支表型图白色箭头所指为斑马鱼肠下血管分支数可以看到，服用血管再生促进剂组肠下血管分支与未摄入辛伐他汀的正常对照组比较相似，没有明显的血管缺失。【评价结论】1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用血管再生促进剂的肠下血管面积和血管分支均与正常对照组比较相似，并未模型对照组肠下血管面积缩小、血管分支减少的情况。2.本实验证实了黄芪甲苷具有促进血管再生作用。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】斑马鱼胚胎在母体外发育，从合子期到孵化期仅72小时，且发育的完整过程均是透明的，利于实时观察和检测。斑马鱼幼鱼长3~4毫米，拥有6-384孔板的高通量检测体系，可实现低费-高效筛选。斑马鱼与人类基因同源性达到87%，用于保健食品的体内快速评价实验结果可比性强。故可以利用斑马鱼早期各个阶段的发育形态，准确高效的确定保健食品暴露在胚胎中的毒性，广泛应用于保健食品的发育毒性与致畸性研究。实验结束后，在显微镜下观察并记录各浓度组织器官反应及死亡情况，用来保健食品对斑马鱼的毒性，并对典型毒性器官进行拍照。【实验方案】我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和保健食品组。其中正常对照组为标准稀释水处理组，保健食品组按照既定浓度摄入了不同浓度的待测保健食品（待测保健食品通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。在保健食品暴露过程中，每天观察记录各个浓度组斑马鱼的死亡情况，并及时挑除死鱼。实验结束后，统计斑马鱼死亡情况并使用OriginPro 8软件拟合数据曲线，获得保健食品的最大非致死浓度（MNLC）和LC10。保健食品暴露一段时间后，我们在显微镜下观察记录斑马鱼身体各个指标的情况并对典型毒性器官进行拍照。【结果展示】图1. 斑马鱼发最大非致死浓度（MNLC）和LC10摸索数据拟合图可以看到，该保健食品的MNLC为313 μg/mL，LC10为350 μg/mL。图2. 斑马鱼发育毒性与致畸性表型图H=Heart;J=Jaw;In=Intestinal tract;L=Liver;Y=Yolk sac;E=Eye可以看到，保健食品组较正常对照组出现卵黄囊吸收延迟、心包水肿、体长变短、眼变小和肝变形。【评价结论】1.该保健食品的MNLC为313 μg/mL，LC10为350 μg/mL，诱发斑马鱼卵黄囊吸收延迟、心包水肿、体长变短、眼变小和肝变形。2.本实验证实了该保健食品对斑马鱼有发育毒性与致畸性风险。更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）