光毒性检测是化妆品安全性评价的重要内容之一，皮肤接触到光敏性物质后，在光照下可能产生局部或全身的毒性效应。根据斑马鱼胚胎的生长发育状况可以评价受试物的光毒性。

【评价原理】

将斑马鱼胚胎暴露于不同浓度的受试物溶液，采用同等剂量的光进行照射，一定时间段后记录斑马鱼胚胎的死亡率，确定50%试验鱼胚胎死亡的受试物浓度，用LC50表示。

【实验方案】

配制一定浓度系列的受试物溶液，在斑马鱼发育初期（4hpf-6hpf）分别水溶加入受试物，同时设置正常对照组。受试物组经过同等剂量的光照后，分别观察每组斑马鱼的发育状况，以卵凝结、体节异常、尾部未分离等判定胚胎死亡。记录每组斑马鱼胚胎的死亡率，绘制“浓度-死亡率”效应曲线，计算LC50值。

【结果展示】

1、斑马鱼胚胎死亡判定

图1.斑马鱼胚胎死亡表型图

2、LC50值：“浓度-死亡率”效应曲线

图2. 斑马鱼胚胎“浓度-死亡率”效应曲线

【评价结论】

经实验比对，斑马鱼胚胎随着受试物浓度的增加逐渐出现死亡特征，LC50

值为31.5μg/ml。

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【评价原理】

缺氧可能导致心血管系统、呼吸系统、神经系统、消化系统等等一系列危害身体的疾病。斑马鱼心血管系统在分子信号通路上与人和哺乳动物的同源性达到85%以上,近年来斑马鱼广泛地被用于心血管疾病研究领域。因此，斑马鱼适用于评价耐缺氧功效。亚硝酸钠中毒是临床常见的一种化学性中毒，将正常的血红蛋白氧化成为高铁血红蛋白而失去携氧能力，造成组织细胞缺氧。统计斑马鱼的死亡情况。

经过解剖显微镜观察，通过斑马鱼死亡率的差别判断耐缺氧功效。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用耐缺氧剂组。其中正常对照组未服用亚硝酸钠，模型对照组与服用耐缺氧剂组都摄入了等量的亚硝酸钠（亚硝酸钠通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用耐缺氧剂组在摄入亚硝酸钠之前摄入红景天苷之类的耐缺氧剂。

服用耐缺氧剂一段时间后，我们统计斑马鱼死亡和存活情况。

【结果展示】

图1. 斑马鱼死亡和存活数量

可以看到，服用耐缺氧剂组未出现模型对照组死亡率明显增多的情况。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用耐缺氧剂组未出现模型对照组死亡率明显增多的情况。

2.本实验证实了红景天苷具有明显的耐缺氧功效。

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【评价原理】

斑马鱼的听觉外侧系统由内耳和侧线两个关键的感觉结构组成，斑马鱼具有典型的内耳结构，内耳的毛细胞和侧线的毛细胞在结构功能及分子水平上与哺乳动物的内耳毛细胞非常相似，包括对耳毒性药物的相似反应。

经过特异性荧光染色（呈绿色），听力损伤的斑马鱼比正常斑马鱼毛细胞明显减少或缺失（荧光减弱或者消失）。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼整体做毛细胞特异性染色，观察毛细胞的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼毛细胞表型图

绿色荧光颗粒为毛细胞

可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼毛细胞减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼毛细胞明显减少，与正常对照组存在明显的差别。

2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有听毒性。

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人胆管类器官培养试剂盒是一种用于构建、维持和扩增人胆管类器官的细胞培养基，即买即用。本产品由我司自主研发，不含血清，成分明确。

【评价原理】

斑马鱼体内的生理基础（如伤害感受器神经细胞）支持它能感受到有害的刺激和疼痛，比如高温、强压和腐蚀性化学物质。和哺乳动物一样，斑马鱼鱼体内阿片样神经递质和神经连接。

应用行为分析仪检测，疼痛斑马鱼的总运动距离明显比正常对照组增加，类似于鼠的扭体反应。通过分析斑马鱼的总运动距离，可以评价药物的镇痛作用。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用镇痛剂组。其中正常对照组未摄入冰乙酸，模型对照组与服用镇痛剂组都摄入了等量的冰乙酸（冰乙酸通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用镇痛剂组在摄入冰乙酸之前摄入阿司匹林之类的镇痛剂。

服用一段时间镇痛剂后，我们利用行为分析仪检测斑马鱼总运动距离，观察斑马鱼疼痛情况的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼运动轨迹图

黑线表示慢速运动轨迹，绿线表示中速运动轨迹，红线表示快速运动轨迹

可以看到，服用镇痛剂组的总运动距离比模型对照组明显减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用镇痛剂组的总运动距离与模型对照组比较明显减少。

2.本实验证实了阿司匹林具有明显的镇痛作用。

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【评价原理】

糖尿病是一种由遗传基因决定的与感染、肥胖等环境因素促发有关的疾病，其基本病理生理为绝对或相对性胰岛素分泌不足引起的代谢紊乱。斑马鱼胰腺的形态发生和基本细胞结构、排列方式类似于哺乳动物，斑马鱼食欲调节（如血清素）和胰岛素调节功能与人类相似，斑马鱼其他涉及葡萄糖体内平衡的器官系统（包括脑、肝、脂肪细胞组织和骨骼肌）的发育和功能也与哺乳动物类似。斑马鱼在糖负荷状态下表现出持续高血糖现象，用高糖高脂饲料可以诱发斑马鱼高血糖，模拟人的二型糖尿病。

用血糖仪对高糖高脂斑马鱼进行血糖检测。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用降糖产品组。其中正常对照组未摄入高糖高脂饲料，模型对照组与服用降糖产品组都摄入了等量的高糖高脂饲料（高糖高脂饲料通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。降糖产品组在摄入高糖高脂饲料的同时摄入蜂胶软胶囊、苦瓜素胶囊、苦瓜洋参软胶囊之类的降糖产品。

服用一段时间降糖产品后，我们对斑马鱼进行血糖检测。

【结果展示】

图1. 斑马鱼体内葡萄糖水平

与模型对照组比较，*** p < 0.001

可以看到，模型对照组的血糖值较正常对照组明显增高，而降糖产品组血糖值明显下降。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，降糖产品组斑马鱼血糖值与模型对照组比较血糖明显下降。

2.本实验证实了蜂胶软胶囊、苦瓜素胶囊、苦瓜洋参软胶囊之类的降糖产品具有降糖作用。

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【评价原理】

斑马鱼消化道的解剖结构、组织细胞形态与人类消化道相似，具有内皮、结缔组织、环状肌肉和外纵肌层。斑马鱼发育至5 dpf时，其消化道即出现了自发有节奏的肌肉收缩活动。经过喂食不被吸收的特异性荧光材料尼罗红，可以明显的观察到被鱼吃进去的荧光染料，以胃肠道尼罗红的量（荧光强度）为指标，若供试品有胃肠动力抑制作用，则胃肠道内尼罗红无法排出，堆积的尼罗红的量增加，胃肠道荧光强度明显变亮。

【实验方案】

我们先给斑马鱼喂饲特异性荧光材料尼罗红，然后将受测试斑马鱼分成2组，分别是正常对照组、胃肠动力抑制剂组。服用一段时间胃肠动力抑制剂后，我们在荧光显微镜下观察斑马鱼胃肠道荧光强度。

【结果展示】

图1. 斑马鱼胃肠道荧光强度表型图

可以看到，服用胃肠动力抑制剂斑马鱼的胃肠道荧光强度明显比正常对照组亮。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用胃肠动力抑制剂斑马鱼的胃肠道荧光强度明显比正常对照组亮。

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人气管类器官培养试剂盒是一种用于构建、维持和扩增人气管类器官的细胞培养基，即买即用。本产品由我司自主研发，不含血清，成分明确。

【评价原理】

药物主要通过影响血管生长因子的表达、阻滞血管生成因子受体的活性、抑制内皮细胞增殖、抑制基底膜降解和阻断内皮细胞特异性整合素等机制发挥抗血管生成作用。

利用特有的转基因血管内皮发荧光斑马鱼（呈绿色），摄入血管形成抑制剂的斑马鱼肠下血管面积会明显较正常斑马鱼的肠下血管面积变小，节间血管会断裂而失去完整性。由于转基因斑马鱼的特点，可以明显被观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和服用/注射血管形成抑制剂组（血管形成抑制剂索拉非尼通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内，血管形成抑制剂恩度通过静脉注射吸收到斑马鱼体内）。

服用或注射一段时间血管形成抑制剂后，我们对斑马鱼进行荧光拍照，观察斑马鱼肠下血管和节间血管的变化。

【结果展示】

图1. 肠下血管表型图

黄色虚线区域为斑马鱼肠下血管

可以看到，服用血管抑制剂组的肠下血管面积明显小于正常对照组。

图2. 供试品对节间血管形成的抑制作用表型图

白色箭头指向断裂的血管

可以看到，注射血管形成抑制剂组的节间血管出现断裂。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，给予血管抑制组的肠下血管较正常对照组变小，节间血管较正常对照组失去完整性。

2.本实验证实了索拉非尼和恩度具有抑制血管形成作用。

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【评价原理】

斑马鱼胃肠道粘膜屏障系统由较完整的机械屏障、化学屏障和免疫屏障构成，与哺乳动物高度相似，可作为胃肠道粘膜屏障研究的动物模型。三硝基苯磺酸（TNBS）可破坏肠道粘膜屏障，与肠组织蛋白结合形成抗原，发生变态反应，诱发结肠炎。杯状细胞主要分泌黏蛋白，形成黏膜屏障以保护上皮细胞，肠黏膜损伤时杯状细胞数量减少。我们可以应用特异性的染料（呈蓝色），观察肠道杯状细胞数目，评价肠道粘液分泌功能。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用肠道粘膜辅助保护剂组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组与服用肠道粘膜辅助保护剂组都摄入了等量的TNBS（TNBS通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用肠道粘膜辅助保护剂组在TNBS诱导肠道粘膜损伤之后摄入常欣卫口服液之类的肠道粘膜辅助保护剂。

服用一段时间肠道粘膜辅助保护剂后，我们观察和分析肠道杯状细胞数目。

【结果展示】

图1. 斑马鱼肠道杯状细胞表型图

可以看到，服用肠道粘膜辅助保护剂组的肠道杯状细胞数量与正常对照组比较相似，没有明显的减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用肠道粘膜辅助保护剂组的肠道杯状细胞量与正常对照组比较相似，没有明显的减少。

2.本实验证实了常欣卫口服液具有明显的促肠道粘液分泌功能。

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