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随着年龄的增长，人体皮肤因自身生理调节和外界因素的作用而逐渐出现雀斑、日晒斑、黄褐斑等色斑，色斑的形成与皮肤中黑色素的沉着有关，祛斑功效实质上是对黑色素的清除作用。通过班斑马鱼技术能简洁而有效的评价化妆品的祛斑功效。
【评价原理】
斑马鱼在发育初期全身透明，胚胎发育至 24 h时黑色素开始从视网膜上皮生长，48h逐渐形成稳定并可见的黑色素色斑。将受试物于斑马鱼发育48h时加入鱼水中，72h时观察黑色素的降低程度，从而评价祛斑功效
【实验方案】
我们挑选2dpf的斑马鱼分成若干组，含正常对照组和供试品组。正常对照组不做处理，供试品组使用受试化妆品，孵育24hpf后，对斑马鱼头部进行拍照，利用高级图像处理软件分析斑马鱼头部的黑色素信号强度，从而评价其祛斑功效。
【结果展示】（展示图片仅供参考，实际实验组别依据合同而定）
图1. 斑马鱼头部黑色素表型图（蓝色为分析区域）
阳性对照组和化妆品组与正常对照组对比分析，得出祛斑功效作用。
【评价结论】
1.经过各组斑马鱼对比实验，阳性对照组和化妆品组与正常对照组对比，斑马鱼头部只有少量的黑色素。
2.本实验证实了该化妆品具有祛斑作用。
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【评价原理】
斑马鱼与哺乳动物有相似的神经系统。在哺乳动物体内起到睡眠调节作用的分子和细胞群（单胺能、胆碱能、下丘脑素能）的斑马鱼体内大部分是守恒的。各种催眠药物如H1组胺能拮抗剂、褪黑激素激动剂、-2肾上腺素能激动剂和γ-氨基丁酸（GABA）能调节剂在斑马鱼体内的反应也很保守。GABA是一种天然存在的非蛋白质氨基酸，是哺乳动物中枢神经系统中重要的抑制性神经传达物质。戊四唑（PTZ）是GABA抑制剂，小剂量PTZ可诱导既有躁狂症又有抑郁症的双相精神障碍，从而造成失眠。
患有失眠症的斑马鱼会表现出行为异常，表现为总运动距离明显增加，可以用行为分析仪观察到。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和安神助眠剂组。其中正常对照组未摄入PTZ，模型对照组与安神助眠剂组都摄入了等量的PTZ（PTZ通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。安神助眠剂组在摄入PTZ前服用睡安片之类的安神助眠剂。
服用一段时间安神助眠剂后，我们通过行为分析仪检测斑马鱼的总运动距离。
【结果展示】
图1. 斑马鱼的运动轨迹图
红色线条表示快速运动轨迹，绿色线条表示中速运动轨迹，黑色线条表示慢速运动轨迹
可以看到，服用安神助眠剂组的运动明显比加了模型对照组减少。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用安神助眠剂组的总运动距离相对于模型对照组明显减少，能缓解斑马鱼的躁狂症。
2.本实验证实了睡安片具有安神助眠功效。
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【评价原理】
细菌感染是致病菌或条件致病菌侵入血循环中生长繁殖，产生毒素和其他代谢产物所引起的急性全身性感染。斑马鱼有着与哺乳动物非常相似的发育良好的免疫系统(包括特异性免疫和非特异性免疫），使得斑马鱼成为了研究病菌感染机制和筛选抗菌剂非常有用的动物模型。
经过荧光标记的细菌（呈红色）注射进入斑马鱼体内，生长繁殖，可以明显地被观察到。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是模型对照组和服用抗菌剂组。模型对照组与服用细菌抑制剂组都注射了等量的细菌（细菌通过静脉注射的方式入到斑马鱼体内）。服用抗菌剂组在注射细菌后摄入阿奇霉素、比阿培南、利奈唑酮之类的抗菌剂。
服用一段时间抗菌剂后，我们将斑马鱼置于荧光显微镜下观察细菌数量的变化。
【结果展示】
图1. 斑马鱼体内细菌繁殖表型图
白色箭头所指红色颗粒为细菌
可以看到，服用抗菌剂组的体内细菌数量较模型对照组显著减少，未出现全身性感染。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用抗菌剂组的斑马鱼体内细菌数量较模型对照组显著减少，未出现全身性感染。
2.本实验证实了阿奇霉素、比阿培南、利奈唑酮等抗生素具有显著的抑制细菌作用。
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【评价原理】
多发性硬化是以中枢神经系统白质炎性脱髓鞘病变为主要特点的自身免疫病，可能是遗传易感个体与环境因素作用而发生的神经免疫过程，由于其发病率较高，成慢性病程和倾向于年轻人罹患，而成为最重要的神经系统疾病之一。研究表明斑马鱼的髓鞘少突胶质细胞的结构特性和细胞谱系关系与哺乳动物具有高度的可比性。斑马鱼体内与髓鞘形成相关的基因与哺乳动物具有很好的同源性。尽管这些基因与哺乳动物有些不同，但高度保守的基因序列足够表达出功能类似的蛋白。
溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，能诱导斑马鱼脑脊髓神经细胞髓鞘损伤。经过特异性荧光染色，髓鞘损伤的斑马鱼荧光比正常斑马鱼弱很多，可以在荧光显微镜下明显被观察到。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用髓鞘保护剂组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组与服用髓鞘保护剂组都摄入了等量的溴化乙锭（溴化乙锭通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用髓鞘保护剂组先摄入溴化乙锭再摄入L-甲状腺素钠之类的髓鞘保护剂。
服用髓鞘保护剂后，我们对斑马鱼整体进行荧光染色，对斑马鱼髓鞘进行定量。
【结果展示】
图1. 斑马鱼多发性硬化症表型图
黄色箭头为斑马鱼髓鞘细胞
可以看到，模型对照组的髓鞘细胞荧光强度较正常对照组明显减弱，服用髓鞘保护剂组的髓鞘细胞荧光强度明显增强。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用髓鞘保护剂组的髓鞘细胞荧光强度明显增强，并未出现模型对照组明显髓鞘损伤的情况。
2.本实验证实了L-甲状腺素钠具有明显治疗多发性硬化症的功效。
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【评价原理】
体力疲劳常表现为肌肉出现僵硬、肿胀和疼痛，动作慢、不协调；反应迟钝，判断错误，注意力不集中等。斑马鱼大部分器官的作用机理与人类高度相似，而且斑马鱼生长发育周期短，器官发育较快，有利于开展缓解体力疲劳功效的研究。亚硫酸钠通过化学反应消耗水中的氧气，造成水中斑马鱼缺氧，经过一段时间诱发缺氧性疲劳。斑马鱼在氧气不足的情况下，机体自发活动将会减弱，同时，肌肉贮备糖原无氧酵解生成乳酸，乳酸堆积可使局部H+浓度升高，过量H+直接作用于肌原纤维，抑制肌动蛋白和肌球蛋白的结合，导致肌肉收缩能力下降，机体运动能力减弱。疲劳斑马鱼运动距离下降、乳酸堆积、氧自由基（ROS）上升、ATP酶含量降低。
我们评价疲劳有4个指标：（1）行为分析仪检测斑马鱼总运动距离；（2）酶标仪检测乳酸含量；（3）酶标仪检测ROS水平；（4）酶标仪检测ATP含量。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用抗疲劳剂组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组和服用抗疲劳剂摄入等量的亚硫酸钠以诱发斑马鱼疲劳模型（亚硫酸钠通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用抗疲劳剂组摄入亚硫酸钠的同时摄入中华跌打丸、红牛和脉动饮料之类的抗疲劳剂。
服用一段时间抗疲劳剂后，我们检测斑马鱼的总运动距离、乳酸含量、ROS水平和ATP含量。
【结果展示】
图1. 斑马鱼运动轨迹图
黑线：斑马鱼静止运动轨迹；绿线：中速运动；红线：快速运动
可以看到，服用抗疲劳剂组的斑马鱼运动情况与正常对照组比较相似，没有明显的总运动距离减少。
图2. 斑马鱼乳酸含量
与模型对照组比较，*p<0.05
可以看到，服用抗疲劳剂组的斑马鱼乳酸含量比模型对照组明显降低。
图3. 斑马鱼ROS水平
与模型对照组比较，***p<0.001
可以看到，服用抗疲劳剂组的斑马鱼ROS水平比模型对照组明显降低。
图4. 斑马鱼ATP含量
与模型对照组比较，***p<0.001
可以看到，服用抗疲劳剂组的斑马鱼ATP含量比模型对照组明显升高。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用抗疲劳剂组与模型对照组比较，总运动距离明显增加、乳酸明显减少、ROS水平明显降低、ATP含量明显升高。
2.本实验证实了中华跌打丸、红牛和脉动饮料等具有明显缓解体力疲劳功效。
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【评价原理】
炎症是免疫系统对组织损伤和感染的一种反应，主要特点就是白细胞（粒细胞、巨噬细胞）会聚集在感染组织周围。斑马鱼的免疫系统非常类似于哺乳动物。创伤发生时，中性粒细胞、巨噬细胞对创伤性炎症几乎同时作出应答，中性粒细胞迁移速度快，先募集到损伤部位，随后巨噬细胞才到达。数小时后，炎症开始消退，巨噬细胞和中性粒细胞离开损伤部位。硫酸铜损伤斑马鱼神经丘（斑马鱼体表侧线器的末稍器官），造成神经丘细胞死亡，斑鱼的中性粒细胞发生免疫应答，聚集在神经丘周围，吞噬死亡的细胞 。
采用转基因中性粒细胞荧光鱼（呈绿色），可在荧光显微镜在观察到斑马鱼体表侧线上的中性粒细胞比正常斑马鱼明显增多。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用抗炎药组。其中正常对照组未摄入硫酸铜，模型对照组和服用/注射抗炎药组均摄入硫酸铜（硫酸铜通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用/注射抗炎药组在摄入硫酸铜之前摄入吲哚美辛、阿司匹林、布洛芬和双氯芬酸之类的抗炎药。
服用一段时间抗炎药后，我们观察斑马鱼体表侧线上的中性粒细胞数量，并通过Q-PCR检测TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎症相关因子的表达。
【结果展示】
图1. 斑马鱼体表侧线上中性粒细胞表型图
黄色箭头所指为中性粒细胞
可以看到，服用/注射抗炎药组侧线上中性粒细胞与正常对照组相似，未出现中性粒细胞募集情况。
以IL-1β基因为例，提供柱状图。
图2. 斑马鱼IL-1β基因相对表达量
与模型对照组比较，**p < 0.01
可以看到，服用/注射抗炎药组斑马鱼与模型对照组比较，IL-1β基因表达明显下调。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用抗炎药组侧线上中性粒细胞数量与正常对照组数量相当，未出现模型对照组中性粒细胞募集情况，且TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎症因子明显下调。
2.本实验证实了吲哚美辛、阿司匹林、布洛芬和双氯芬酸具有显著的抗炎作用，且抑制TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎症相关因子的表达。
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【评价原理】
斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，与哺乳动物对外源化学物质的防御机制相当，包括酶的诱导和氧化应激。当生物暴露在环境污染物中，生物可能会发生氧化应激，主要表现为活性氧（ROS）产生和消耗的不平衡。在需氧生物的活细胞中，活性氧被一种由水和脂溶性低分子量自由基清除剂、特异性抗氧化酶组成的抗氧化防御机制解毒。
应用ROS特异性荧光检测试剂，它的水解产物能被ROS氧化为高荧光物质，用多功能酶标仪检测荧光值反映氧化应激的程度。本方法已被授予国家发明专利。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是底物对照组、正常对照和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内），并加入ROS特异性荧光检测试剂。
服用供试品一段时间后，我们使用酶标仪对斑马鱼体内ROS进行荧光定量。
【结果展示】
图1. 斑马鱼体内ROS荧光值
可以看到，服用供试品组斑马鱼体内荧光值比正常对照组有明显升高。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用供试品组的斑马鱼ROS水平明显高于正常对照组，与正常对照组存在显著性差异。
2.本实验证实了该供试品诱发斑马鱼氧化应激。
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【评价原理】
过敏原/致敏因子诱导组织学上肥大细胞脱颗粒，释放活性介质如组胺、5-HT，前列腺素D、白三烯、血小板活化因子等，表现为平滑肌收缩，毛细血管扩大和通透性增强，腺体分泌物增多等，诱发多种过敏症状。 类胰蛋白酶是肥大细胞内预先合成的中性蛋白酶，是临床上检验人体是否过敏的重要指标。斑马鱼产生过敏反应时，亦诱导肥大细胞分泌类胰蛋白酶。C48/80作为肥大细胞活化剂，可以诱导组织学上肥大细胞脱颗粒，释放类胰蛋白酶。
我们检测过敏有两种方法。1. 类胰蛋白酶的含量：用酶标仪检测类胰蛋白酶的含量。2. 肥大细胞数量：制作病理切片，经过过碘酸雪夫染色，肥大细胞呈蓝色，肥大细胞释放的组胺和白三烯等物质呈红色。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成四组，分别是正常对照组和滴注致敏剂低、中、高剂量组。其中正常对照组未滴注C48/80，滴注致敏剂组均滴注C48/80低、中、高剂量（C48/80通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。
滴注C48/80一段时间后，利用酶标仪检测类胰蛋白酶含量（吸光度值），同时制作病理切片进行过碘酸雪夫染色。
【结果展示】
图1. 斑马鱼类胰蛋白酶含量（吸光度值）
与正常对照组比较，*p < 0.05，***p < 0.001
可以看到，滴注中、高浓度致敏剂组类胰蛋白酶含量与正常对照组比较明显升高。
图2. 斑马鱼体内肥大细胞染色典型图
箭头指示为肥大细胞
从病理切片中也能看出来，滴注致敏剂组斑马鱼的肥大细胞与正常对照组相比数量明显上升。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，滴注致敏剂组斑马鱼类胰蛋白酶含量和肥大细胞数量与正常对照组相比数量明显上升。
2.本实验证实了C48/80具有明显的致敏作用。
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