【评价原理】
铅中毒的器官主要是造血系统、心脏和神经系统。对于儿童的神经系统损伤导致智商降低,注意力缺陷多动障碍以及阅读和学习能力下降,其毒性机制与神经元生长和轴索束变化相关。
通过斑马鱼体内铅含量、轴索荧光强度和运动神经长度检测,铅中毒的斑马鱼体内铅含量明显比正常斑马鱼的高很多,而轴索荧光强度和运动神经长度铅中毒斑马鱼均明显少于正常斑马鱼。由于斑马鱼可被整体免疫荧光染色以及转基因荧光鱼运动神经发荧光的特性,我们可以通过荧光强度观察到明显的轴索细胞和运动神经的变化。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成五组,分别是正常对照组、模型对照组和服用促排铅剂组。其中正常对照组未摄入铅,模型对照组与服用促排铅剂组都摄入了等量的铅(铅通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用促排铅剂组在摄入铅的同时摄入绿豆肽复方之类的促排铅剂。
服用一段时间促排铅剂后,我们(1)检测体内铅含量;(2)用荧光显微镜采集轴索荧光强度;(3)用荧光显微镜采集运动神经长度。
【结果展示】
(1)体内铅含量:
图1. 斑马鱼体内铅含量
与模型对照组比较,*p < 0.05
可以看到,服用排铅剂组的铅含量与摄入相同铅的模型对照组比较相似明显减少。
(2)轴索荧光强度:
可以看到,服用排铅剂组脑部轴索荧光强度与摄入相同铅的模型对照组比较明显增加。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用促排铅剂组的铅含量、轴索荧光强度和运动神经长度与未摄入铅的正常对照组相似,并未出现模型对照组的铅含量升高,轴索荧光强度和运动神经长度减少的情况。
2.本实验证实了绿豆多肽复方具有明显的促排铅功效。
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【评价原理】
醉酒实为急性乙醇中毒,使人大脑兴奋,引起行为异常。乙醇进入人体后90%进入肝脏进行代谢,乙醇脱氢酶(ADH)可以将其氧化为乙醛,在乙醛脱氧酶(ALDH)催化下,乙醛转化为乙酸,最后转化为二氧化碳和水。在ADH和ALDH两种酶的作用下,乙醇能够被机体代谢而避免引起机体损伤。由于斑马鱼拥有与人类相似的消化系统,如肝脏、肠道等,消化和营养的吸收及运输与人类高度相似,当乙醇被过量摄入后,经过代谢产生大量乙醛,致使乙醛在体内积累,出现醉酒现象。
解酒有两种评价方法:1. 总运动距离,应用行为分析仪分析斑马鱼的运动轨迹,醉酒斑马鱼的总运动距离比正常斑马鱼明显增多。2. ADH和ALDH两种酶的含量,通过检测斑马鱼体内ADH和ALDH两种酶的含量,分析两种酶的调节作用。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用解酒剂组。其中正常对照组未摄入酒精,模型对照组和服用解酒剂组都摄入了等量的酒精(酒精通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用解酒剂组在摄入酒精之前摄入RU21、海王金樽之类的解酒剂。
服用一段时间解酒剂后,应用行为分析仪分析摄入酒精后的斑马鱼总运动距离;同时用ALDH和ADH试剂盒检测两种酶的含量。
【结果展示】
图1. 斑马鱼运动轨迹图
黑线:慢速运动轨迹;绿线:中速运动;红线:快速运动,红线代表醉酒行为状态
可以看到,服用解酒剂组的运动轨迹与模型对照组比较,快速运动明显减少,醉酒行为有所改善。
从柱状图中可以出来,服用解酒剂组的ADH和ALDH两种酶含量与模型对照组比较明显增高。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用解酒剂组的总运动距离与模型对照组比较明显降低,并ADH和ALDH两种酶含量明显增高。
2.本实验证实了RU21、海王金樽具有明显的解酒功效。
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空调、环境污染、季节转换带来的温度变化与压力,以及皮肤衰老、代谢减缓等因素,都会造成肌肤水份流失,令肌肤粗糙、黯哑、形成干纹、引发诸多肌肤问题。皮肤缺水可表现为表面失去光泽变得暗淡无光,失去弹性,出现细纹。补水保湿是护肤化妆品最基础的功效,通过斑马鱼技术能有效评价化妆品及其原料的补水保湿功效。
【评价原理】
斑马鱼用氯化钠处理,由于渗透压的原因皮肤表面将会失水皱缩,尾部面积因皱缩而变小,通过对尾部面积的影响评价化妆品的补水保湿效果。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和供试品组(供试品通过溶解到标准稀释水中的方式接触到斑马鱼皮肤)。
正常对照组不做处理,模型对照组用氯化钠溶液处理,供试品组在用氯化钠处理的同时定量加入受试的化妆品。孵育一段时间后,对斑马鱼进行拍照,以斑马鱼尾部面积评价供试品的补水保湿功效。
【结果展示】
图1 斑马鱼尾部面积(红色区域为尾部面积)
模型对照组斑马鱼尾鳍皱缩、面积明显减小
可以看到,供试品组斑马鱼的尾部面积与正常对照组相似,没有明显的皱缩。
【评价结论】
1.经过各组斑马鱼的对比实验,供试品组的斑马鱼尾部面积与正常对照组相似,没有出现明显的皱缩。
2.本实验证实了该供试品对具有明显的补水保湿功效。
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N-2添加剂是一种基于Bottenstein的N-1配方,成分确定的无血清添加剂。推荐用于神经母细胞瘤以及来自周围神经系统(peripheral nervous system)和中枢神经系统(central nervous system)的有丝分裂后神经元的生长与表达。本品以浓缩液的形式提供(100x),适用于添加生长因子(如碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子)的无血清神经基础培养基,也可以与DMEM/F12培养基一起使用。
【评价原理】
贫血是指人体外周血红细胞容量减少,低于正常范围下限的一种常见的临床症状。斑马鱼造血系统的形成,包括红系、髓系、淋系及巨核系为主的造血系统,其相关的转录因子及信号转导通路同人类有高度的同源性,这些特点使斑马鱼在人类造血系统和血液疾病的研究中有着更加广泛的应用。由于斑马鱼早期出现血液循环时胚胎透明,可通过染色剂在显微镜直接观察心脏红细胞的数量。
苯肼导致红细胞外翻和氧化应激产生,红细胞外翻能够引起血细胞聚集,氧化应激产生导致内皮细胞损伤,进而导致血小板聚集、纤维蛋白原形成,最终诱导血栓发生。
用特异性红细胞染色剂(呈红色),贫血斑马鱼心脏部位的红细胞较正常斑马鱼明显减少,在解剖显微镜下可以观察到。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用补血药物组。其中正常对照组未经任何处理,模型对照组与服用补血药物组都摄入了等量的苯肼(苯肼通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用补血药物组先摄入生血宁之类的改善贫血药物后再摄入苯肼。
服用改善贫血药物一段时间后,再加入苯肼共同处理一段时间后,我们对斑马鱼整体做红细胞特异性染色,最终分析斑马鱼的红细胞信号强度。
【结果展示】
图1. 斑马鱼贫血表型图
可以看到,模型对照组红细胞信号强度较正常对照组明显减少,服用补血药物组的红细胞信号强度与正常对照组比较相似,没有明显的红细胞减少情况。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用补血药物组的红细胞信号强度与正常对照组相似,并未出现模型对照组红细胞减少的情况。
2.本实验证实了生血宁具有明显改善贫血的功效。
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【评价原理】
过敏原/致敏因子诱导组织学上肥大细胞脱颗粒,释放活性介质如组胺、5-HT,前列腺素D、白三烯、血小板活化因子等,表现为平滑肌收缩,毛细血管扩大和通透性增强,腺体分泌物增多等,诱发多种过敏症状。 类胰蛋白酶是肥大细胞内预先合成的中性蛋白酶,是临床上检验人体是否过敏的重要指标。斑马鱼产生过敏反应时,亦诱导肥大细胞分泌类胰蛋白酶。C48/80作为肥大细胞活化剂,可以诱导组织学上肥大细胞脱颗粒,释放类胰蛋白酶。
我们检测过敏有两种方法。1. 类胰蛋白酶的含量:用酶标仪检测类胰蛋白酶的含量。2. 肥大细胞数量:制作病理切片,经过过碘酸雪夫染色,肥大细胞呈蓝色,肥大细胞释放的组胺和白三烯等物质呈红色。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成四组,分别是正常对照组和滴注致敏剂低、中、高剂量组。其中正常对照组未滴注C48/80,滴注致敏剂组均滴注C48/80低、中、高剂量(C48/80通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。
滴注C48/80一段时间后,利用酶标仪检测类胰蛋白酶含量(吸光度值),同时制作病理切片进行过碘酸雪夫染色。
【结果展示】
图1. 斑马鱼类胰蛋白酶含量(吸光度值)
与正常对照组比较,*p < 0.05,***p < 0.001
可以看到,滴注中、高浓度致敏剂组类胰蛋白酶含量与正常对照组比较明显升高。
图2. 斑马鱼体内肥大细胞染色典型图
箭头指示为肥大细胞
从病理切片中也能看出来,滴注致敏剂组斑马鱼的肥大细胞与正常对照组相比数量明显上升。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,滴注致敏剂组斑马鱼类胰蛋白酶含量和肥大细胞数量与正常对照组相比数量明显上升。
2.本实验证实了C48/80具有明显的致敏作用。
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