【评价原理】
抑郁症是一种常见的精神疾病,主要表现为情绪低落,兴趣减低,悲观,思维迟缓,缺乏主动性,自责自罪,饮食、睡眠差,担心自己患有各种疾病,感到全身多处不适,严重者可出现自杀念头和行为,目前国内的抑郁症情况越来越严峻,所以对于如何缓解抑郁迫在眉睫。
抑郁症患者单胺类神经递质含量较少,单胺氧化酶活性较平常人增高,单胺氧化酶抑制剂(MAO)能抑制单胺类酶活性,从而对机体内的神经递质例如5-HT,Dopamine能减少降解的作用,那么神经系统内的这些神经递质含量活性会持续性升高,从而有一定治疗抑郁症的结果。
我们评价斑马鱼抗抑郁作用指标:单胺氧化酶活性的检测。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成两组,分别是正常对照组与抗抑郁剂组。其中正常对照组未经任何处理。之后通过化学发光法测量组织内单胺氧化酶的相对活性。
【结果展示】
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用抗抑郁剂情况与对照组相比较,机体内的单胺类氧化酶活性明显降低。
2.本实验证实了盐酸司来吉兰,吗氯贝氨等具有显著的降低单胺氧化酶活性的作用。
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【评价原理】
甲萘醌是一种氧化剂,通过细胞内还原酶系统(微粒体的P450还原酶和线粒体的呼吸链还原酶),产生不稳定的半醌,进入氧化还原循环,产生活性氧族。用甲萘醌可诱导斑马鱼建立氧化应激模型。
经过特异性荧光染色(呈绿色,主要定位于细胞核和线粒体),发生氧化应激反应斑马鱼全身明显比正常斑马鱼绿很多,可以用荧光显微镜下观察到斑马鱼体内的活性氧含量。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和抗氧化剂组。其中正常对照组未摄入甲萘醌,模型对照组与抗氧化剂组都摄入了等量的甲萘醌(甲萘醌通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。抗氧化剂组在摄入甲萘醌之后摄入还原型谷胱甘肽之类的抗氧化剂。
服用一定时间抗氧化剂后,我们对斑马鱼整体做活性氧染色,观察整体绿色荧光强度的变化。
【结果展示】
图1. 斑马鱼活性氧表型图
绿色荧光为活性氧
可以看到,抗氧化剂组的荧光强度较正常对照组强,但较模型对照组明显减弱。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,抗氧化剂组的荧光强度比模型对照组弱。
2.本实验证实了还原型谷胱甘肽具有明显抗氧化功效。
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斑马鱼专用成像系统,是一款为斑马鱼定制的软硬件系统,其中包括前端的流式限位功能、光学成像模块与斑马鱼分析软件。可用于斑马鱼荧光和白光图像采集、图像分析,适用于所有3-7天的斑马鱼幼鱼实验终点活体成像,可自动将斑马鱼部位微观图像拼接合成为宏观整鱼图像。
产品参数(示例):
【评价原理】
斑马鱼的鳔从器官进化、组织结构以及生物学等多个层面都类似于哺乳动物的肺泡。
病毒性肺炎:注射给予聚肌胞——poly(i:c)建立斑马鱼病毒性肺炎模型。poly(i:c)的双链RNA结构非常类似于病毒或病毒复制过程中形成的双链RNA,所以poly(i:c)类似某些病毒,具有很强的干扰素诱生作用。
通过使用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼和转基因巨噬细胞绿色荧光斑马鱼,在荧光显微镜下可以直接观察斑马鱼中性粒细胞和巨噬细胞,并分时间点视频记录巨噬细胞和中性粒细胞溢出血管情况,使用实时荧光定量PCR仪可获得基因表达水平,通过制作组织病理切片观察斑马鱼鱼鳔部位的病理结构变化。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用抗炎药组。其中,模型对照组与抗炎药组都注射了等量的聚肌胞——poly(i:c)建立病毒性肺炎模型。抗炎药组在注射了poly(i:c)的同时摄入吲哚美辛之类的抗炎药。
服用一段时间抗炎药后,我们在荧光显微镜下拍摄斑马鱼中性粒细胞和巨噬细胞的数量,并分时间点视频记录巨噬细胞和中性粒细胞溢出血管情况,用实时荧光定量PCR仪检测TNF-α、IL-1β值,同时制作成病理切片观察鱼鳔部位的病理结构变化。
【结果展示】
图1. 斑马鱼中性粒表型图
黄色虚线区域为鱼鳔,绿色荧光颗粒为中性粒细胞
可以看到,抗炎药组斑马鱼鱼鳔位置处的中性粒细胞聚集情况明显改善。
图2. 斑马鱼巨噬细胞表型图
黄色虚线区域为鱼鳔,绿色荧光为巨噬细胞
可以看到,抗炎药组斑马鱼鱼鳔位置处的巨噬细胞聚集情况明显改善。
图3. TNF-α基因表达水平
与模型对照组比较,**p < 0.01
可以看到,抗炎药组能显著抑制斑马鱼的炎症基因TNF-α表达水平。
图4. IL-1β基因表达水平
与模型对照组比较,**p < 0.01
可以看到,抗炎药组能显著抑制斑马鱼的炎症基因IL-1β表达水平。
图5. 鱼鳔部位病理切片
从病理切片中能看出来,抗炎药组斑马鱼鱼鳔病理结构与正常对照组相似,未出现模型对照组渗入的炎性细胞明显增多的情况。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,抗炎药组与模型对照组比较,能显著抑制中性粒细胞和巨噬细胞的聚集,能显著抑制炎症基因表达水平,能改善炎性浸润情况。
2.本实验证实了吲哚美辛具有显著的病毒性肺炎防治作用。
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【评价原理】
斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87%,与哺乳动物对外源化学物质的防御机制相当,包括酶的诱导和氧化应激。当生物暴露在环境污染物中,生物可能会发生氧化应激,主要表现为活性氧(ROS)产生和消耗的不平衡。在需氧生物的活细胞中,活性氧被一种由水和脂溶性低分子量自由基清除剂、特异性抗氧化酶组成的抗氧化防御机制解毒。
应用ROS特异性荧光检测试剂,它的水解产物能被ROS氧化为高荧光物质,用多功能酶标仪检测荧光值反映氧化应激的程度。本方法已被授予国家发明专利。
【实验方案】
我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是底物对照组、正常对照和服用供试品组(供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内),并加入ROS特异性荧光检测试剂。
服用供试品一段时间后,我们使用酶标仪对斑马鱼体内ROS进行荧光定量。
【结果展示】
图1. 斑马鱼体内ROS荧光值
可以看到,服用供试品组斑马鱼体内荧光值比正常对照组有明显升高。
【评价结论】
1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验,服用供试品组的斑马鱼ROS水平明显高于正常对照组,与正常对照组存在显著性差异。
2.本实验证实了该供试品诱发斑马鱼氧化应激。
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B-27是一种优化的无血清补充剂,是最常用的神经细胞培养添加剂,用于支持胚胎、出生后和成年海马神经元和其他中枢神经系统神经元的低或高密度生长和短期或长期存活。本产品以浓缩液形式提供(50x),添加入相关基础培养基后适用于神经元细胞培养而不需要星形胶质细胞饲养层。 主要功能包括:优化产前和胚胎神经元的活性和长期存活率;保证神经来源的肿瘤细胞系的活性;扩增来自小鼠胚胎纹状体和中脑的EGF响应性的前体细胞。