皮肤微循环是指微动脉和微静脉之间的血液循环。血液循环最根本的功能是进行血液和组织之间的物质交换，皮肤微循环状态与皮肤衰老密切相关。

【评价原理】

转基因血管内皮绿色荧光斑马鱼的节间血管可以在荧光显微镜下被明显地观察到，因而可以通过观察受试物对节间血管直径的影响来评价受试物促进血管新生的功效，进而表征改善微循环功效。此外，可以利用血流分析仪检测受试斑马鱼的血流速度，补充评价改善微循环功效。

【实验方案】

将斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和供试品组。正常对照组不做处理，供试品组添加一定浓度的受试化妆品，孵育24h小时后，在荧光显微镜下观察斑马鱼节间血管并拍照保存图片，用高级图像处理软件进行图像分析，计算斑马鱼节间直径，通过其统计学意义评价供试品改善微循环功效。

此外，通过血流分析仪分析观察各组斑马鱼的血流速度，以血流速度的增加量评价受试化妆品改善微循环功效。

【结果展示】

1、斑马鱼节间血管直径

图4. 供试品改善微循环功效表型图

黄色虚线标记部分为斑马鱼肠下血管，红色箭头所指为出芽数

2、斑马鱼血流速度（提供各组实验柱状图）

图5 斑马鱼血流速度

与模型对照组比较，***p<0.001

【评价结论】

1、经过斑马鱼对比实验，供试品组与正常对照组对比，肠下血管面积增大，出芽数增多，直径变大。

2、与正常对照组相比，化妆品组斑马鱼血流速度明显增大。

3、本实验证实了该化妆品具有改善微循环的功效。

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【评价原理】

斑马鱼与人类生理结构和功能高度相似。斑马鱼消化道的解剖结构和细胞结构与人类消化道相似，具有同心圆层的内上皮、结缔组织、环状肌肉和外纵肌层。因此，可利用斑马鱼模型评价调节胃肠功效。

饲喂特异性的荧光染料（呈红色），在斑马鱼体内荧光染料不被其他组织干扰，且不会被吸收，荧光染料的残留量取决于胃肠道蠕动功能。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是模型对照组和服用胃肠调节剂组。模型对照组与服用胃肠调节剂组都摄入了等量的荧光染料（荧光染料通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用胃肠调剂组在摄入荧光染料的之后摄入多潘立酮（吗丁啉）之类的胃肠调节剂。

服用一段时间胃肠调节剂后，我们在荧光显微镜下观察斑马鱼胃肠道荧光强度。

【结果展示】

图1. 斑马鱼胃肠道表型图

可以看到，胃肠调节剂组肠道荧光强度明显比模型对照组弱，说明胃肠调节剂通过促进胃肠道蠕动将荧光染料排出体外。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用胃肠调节剂组的胃肠道荧光情况比模型对照组明显减弱。

2.本实验证实了多潘立酮（吗丁啉）具有明显的胃肠调节功效。

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随着年龄的增长，人体皮肤因自身生理调节和外界因素的作用而逐渐出现雀斑、日晒斑、黄褐斑等色斑，色斑的形成与皮肤中黑色素的沉着有关，祛斑功效实质上是对黑色素的清除作用。通过班斑马鱼技术能简洁而有效的评价化妆品的祛斑功效。

【评价原理】

斑马鱼在发育初期全身透明，胚胎发育至 24 h时黑色素开始从视网膜上皮生长，48h逐渐形成稳定并可见的黑色素色斑。将受试物于斑马鱼发育48h时加入鱼水中，72h时观察黑色素的降低程度，从而评价祛斑功效

【实验方案】

我们挑选2dpf的斑马鱼分成若干组，含正常对照组和供试品组。正常对照组不做处理，供试品组使用受试化妆品，孵育24hpf后，对斑马鱼头部进行拍照，利用高级图像处理软件分析斑马鱼头部的黑色素信号强度，从而评价其祛斑功效。

【结果展示】（展示图片仅供参考，实际实验组别依据合同而定）

图1. 斑马鱼头部黑色素表型图（蓝色为分析区域）

阳性对照组和化妆品组与正常对照组对比分析，得出祛斑功效作用。

【评价结论】

1.经过各组斑马鱼对比实验，阳性对照组和化妆品组与正常对照组对比，斑马鱼头部只有少量的黑色素。

2.本实验证实了该化妆品具有祛斑作用。

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小鼠胆管类器官培养试剂盒是一种用于构建、维持和扩增小鼠胆管类器官的细胞培养基，即买即用。本产品由我司自主研发，不含血清，成分明确。

人小肠类器官培养试剂盒是一种用于构建、维持和扩增人小肠类器官的细胞培养基，即买即用。本产品由我司自主研发，不含血清，成分明确。

【评价原理】

炎症是免疫系统对组织损伤和感染的一种反应，主要特点就是白细胞（粒细胞、巨噬细胞）会聚集在感染组织周围。斑马鱼的免疫系统非常类似于哺乳动物。创伤发生时，中性粒细胞、巨噬细胞对创伤性炎症几乎同时作出应答，中性粒细胞迁移速度快，先募集到损伤部位处，随后巨噬细胞才到达。数小时后，炎症开始消退，巨噬细胞和中性粒细胞离开损伤部位。内毒素（LPS）是革兰氏阴性菌细胞壁的组成成分，我们将其注射到斑马鱼卵黄囊，诱导炎症介质的产生。斑马鱼的中性粒细胞发生免疫应答，聚集在卵黄囊。

采用转基因中性粒细胞荧光鱼（呈绿色），可在荧光显微镜在观察到斑马鱼卵黄囊的中性粒细胞比正常斑马鱼明显增多。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用抗炎组。其中正常对照组未注射LPS，模型对照组和抗炎组均注射LPS（LPS通过注射到卵黄囊的方式摄入到斑马鱼体内）。抗炎药组在注射LPS之前摄入吲哚美辛、阿司匹林、布洛芬和双氯芬酸之类的抗炎药。

服用一段时间抗炎药后，我们观察斑马鱼卵黄囊内中性粒细胞数量，并通过Q-PCR检测TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎症相关因子的表达。

【结果展示】

图1. 斑马鱼卵黄囊内中性粒细胞表型图

黄色虚线区域为卵黄囊，绿色颗粒为中性粒细胞

可以看到，服用/注射抗炎药组卵黄囊内中性粒细胞比模型对照组明显，未出现中性粒细胞大量募集情况。

以IL-6、IL-10基因为例，提供柱状图。

图2. 斑马鱼IL-6基因相对表达量

与模型对照组比较，**p < 0.01

可以看到，服用/注射抗炎药组斑马鱼与模型对照组比较，IL-6基因表达明显下调。

图3. 斑马鱼IL-10基因相对表达量

与模型对照组比较，***p < 0.001

可以看到，服用/注射抗炎药组斑马鱼与模型对照组比较，IL-10基因表达明显下调。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射抗炎药组卵黄囊内中性粒细胞数量比正常对照组略多，未出现模型对照组中性粒细胞募集情况，且TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎症因子明显下调。

2.本实验证实了吲哚美辛、阿司匹林、布洛芬和双氯芬酸具有显著的抗炎作用，且抑制TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎症相关因子的表达。

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【评价原理】

斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，斑马鱼肝脏中有许多与哺乳动物同源的脂质代谢酶，与哺乳动物对外源化学物质的防御机制相当，包括酶的诱导和氧化应激。而且斑马鱼幼鱼通体透明，容易观察到毒性表型。酒精性肝损伤是全世界发病率和死亡率的主要原因，酒精性肝损伤是过量饮酒的结果。当患者继续饮酒时，会诱发严重的肝损伤形式，如脂肪性肝炎，纤维化，肝硬化和肝细胞癌。用乙醇可以诱发斑马鱼肝脏损伤，模拟人的肝脏疾病。

我们评价斑马鱼肝脏毒性有4个指标：1.肝脏面积；2.肝脏变性程度；3. 卵黄囊吸收延迟的发生率（卵黄囊是脂肪，卵黄囊吸收与肝功能密切相关）；4. 肝脏病理切片。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用肝保护剂组。其中正常对照组未摄入乙醇，模型对照组与服用肝保护剂组都摄入了等量的乙醇（乙醇通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。肝保护剂组在摄入对乙醇的同时摄入美他多辛之类的肝保护剂。

服用一段时间肝保护剂后，我们在显微镜下观察斑马鱼肝脏及卵黄囊表型，同时制作成病理切片观察肝脏的病理结构变化。

【结果展示】

从病理切片中也能看出来，正常对照组肝细胞核规则清晰，肝细胞结构正常，边缘清晰。乙醇处理后，斑马鱼肝细胞结构模糊、肝细胞核肿大，肝组织出现脂肪空泡样变性，而肝保护剂组细胞和正常斑马鱼中形态相似。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，肝保护剂组斑马鱼肝脏与正常对照组相似，并未出现模型对照组的肝脏肿大、肝变性和卵黄囊吸收延迟情况。

2.本实验证实美他多辛对斑马鱼肝脏的保护作用。

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【评价原理】

糖尿病是一种由遗传基因决定的与感染、肥胖等环境因素促发有关的疾病，其基本病理生理为绝对或相对性胰岛素分泌不足引起的代谢紊乱。高血脂患者由于血液中胆固醇、油脂含量过多，就会使过多油脂沉积于血管壁上，容易使动脉管壁增厚、变硬、失去弹性，导致动脉硬化。斑马鱼食欲调节（如血清素）和胰岛素调节功能与人类相似，斑马鱼其他涉及葡萄糖体内平衡的器官系统（包括脑、肝、脂肪细胞组织和骨骼肌）的发育和功能也与哺乳动物类似。斑马鱼在糖脂负荷状态下表现出持续高血糖、高血脂现象，用高糖高脂饲料可以诱发斑马鱼高血糖，模拟人的二型糖尿病。

用转基因绿色血管荧光斑马鱼（呈绿色），患有高糖高脂的斑马鱼眼部血管壁厚度较正常斑马鱼明显增厚，在共聚焦显微镜下可以观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和降糖降脂产品组。其中正常对照组未摄入高糖高脂饲料，模型对照组与服用降糖降脂产品组都摄入了等量的高糖高脂饲料（高糖高脂饲料通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。降糖降脂产品组在摄入高糖高脂饲料的同时摄入松花蛹虫草之类的降糖降脂产品。

服用一段时间降糖降脂产品后，我们用共聚焦显微镜下观察斑马鱼眼部血管壁厚度。

【结果展示】

图1. 斑马鱼眼部血管壁厚度

白色箭头所指为血管壁

可以看到，模型对照组的眼部血管壁厚度较正常对照组明显增厚，而降糖降脂产品组斑马鱼眼部血管壁厚度与正常对照组相近。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，降糖降脂产品组斑马鱼眼部血管壁厚度与正常对照组相近，并未出现模型对照组眼部血管壁增厚的情况。

2.本实验证实了松花蛹虫草具有眼部血管壁厚度增厚改善功效。

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【评价原理】

细菌感染是致病菌或条件致病菌侵入血循环中生长繁殖，产生毒素和其他代谢产物所引起的急性全身性感染。斑马鱼有着与哺乳动物非常相似的发育良好的免疫系统(包括特异性免疫和非特异性免疫），使得斑马鱼成为了研究病菌感染机制和筛选抗菌剂非常有用的动物模型。

经过荧光标记的细菌（呈红色）注射进入斑马鱼体内，生长繁殖，可以明显地被观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是模型对照组和服用抗菌剂组。模型对照组与服用细菌抑制剂组都注射了等量的细菌（细菌通过静脉注射的方式入到斑马鱼体内）。服用抗菌剂组在注射细菌后摄入阿奇霉素、比阿培南、利奈唑酮之类的抗菌剂。

服用一段时间抗菌剂后，我们将斑马鱼置于荧光显微镜下观察细菌数量的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼体内细菌繁殖表型图

白色箭头所指红色颗粒为细菌

可以看到，服用抗菌剂组的体内细菌数量较模型对照组显著减少，未出现全身性感染。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用抗菌剂组的斑马鱼体内细菌数量较模型对照组显著减少，未出现全身性感染。

2.本实验证实了阿奇霉素、比阿培南、利奈唑酮等抗生素具有显著的抑制细菌作用。

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【评价原理】

多发性硬化是以中枢神经系统白质炎性脱髓鞘病变为主要特点的自身免疫病，可能是遗传易感个体与环境因素作用而发生的神经免疫过程，由于其发病率较高，成慢性病程和倾向于年轻人罹患，而成为最重要的神经系统疾病之一。研究表明斑马鱼的髓鞘少突胶质细胞的结构特性和细胞谱系关系与哺乳动物具有高度的可比性。斑马鱼体内与髓鞘形成相关的基因与哺乳动物具有很好的同源性。尽管这些基因与哺乳动物有些不同，但高度保守的基因序列足够表达出功能类似的蛋白。

溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，能诱导斑马鱼脑脊髓神经细胞髓鞘损伤。经过特异性荧光染色，髓鞘损伤的斑马鱼荧光比正常斑马鱼弱很多，可以在荧光显微镜下明显被观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用髓鞘保护剂组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组与服用髓鞘保护剂组都摄入了等量的溴化乙锭（溴化乙锭通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用髓鞘保护剂组先摄入溴化乙锭再摄入L-甲状腺素钠之类的髓鞘保护剂。

服用髓鞘保护剂后，我们对斑马鱼整体进行荧光染色，对斑马鱼髓鞘进行定量。

【结果展示】

图1. 斑马鱼多发性硬化症表型图

黄色箭头为斑马鱼髓鞘细胞

可以看到，模型对照组的髓鞘细胞荧光强度较正常对照组明显减弱，服用髓鞘保护剂组的髓鞘细胞荧光强度明显增强。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用髓鞘保护剂组的髓鞘细胞荧光强度明显增强，并未出现模型对照组明显髓鞘损伤的情况。

2.本实验证实了L-甲状腺素钠具有明显治疗多发性硬化症的功效。

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