● 项目意义

肿瘤类器官是将肿瘤患者的新鲜组织经体外3D培养系统建立的、与肿瘤患者特征高度相似的一种立体模型，已被证实与患者肿瘤的病理组织学特征、分子特征、药物敏感性等保持高度一致，在对应的药物筛选领域有着巨大的应用空间。

同时，环特生物已建立的多癌种实体瘤斑马鱼PDX药敏评价体系已用于临床，为患者提供精准的用药指导。我们基于真实世界肿瘤患者的临床研究，联合国内知名三甲医院，开展全世界首个胃癌斑马鱼PDX与患者治疗效果的一致性评价项目（美国临床研究Clinical Trials注册号：NCT05616533），为斑马鱼PDX的临床应用提供更加充分的科学依据。

为满足不同科研场景的行业需求，环特生物联合该医院共同发起“基于胃癌的斑马鱼PDX与类器官抗肿瘤药效评价的科研项目”，通过构建胃癌的精准医疗生物样本库，致力于为广大药企的抗肿瘤药物提供药效评价的科研服务。

● 预期成果

1）构建不少于50例基于胃癌的类器官生物样本库，并完成类器官样本的临床信息、基因信息的采集

2）按需交付药物在胃癌斑马鱼PDX或类器官模型中的定性、定量数据

3）共同产出数篇国际前沿的科研论文

4）实现相关课题项目、技术创新奖项的申报

● 合作伙伴权益

标准权益——

1）享有项目所述样本库的“联合建设单位”两年冠名权

2）享有该项目最终成果的宣传权利

3）项目结束后，一定期限内享受特定数量的药物药效评价折扣

定制（付费）权益——

1）类器官药物研发平台建设（含培训1-3名类器官技术人员、胃癌类器官构建方法的技术转让）

2）其他相关需求及服务

● 项目分工

1）合作医院负责提供胃癌肿瘤组织样本

2）环特生物负责斑马鱼PDX与类器官样本库的构建服务与药效评价

3）药合作伙伴负责根据实际科研需求提供药物和科研经费

● 申报条件

1）具有一定新药研发经验的大中型药物研发机构

2）药物类型为胃癌的化疗药物、靶向药物（免疫类药物除外）、中药，以及辅助治疗的相关药物

● 合作伙伴名额

预计招募合作单位3家

● 项目周期

5-6个月

● 合作详询：成先生 17364531293

【评价原理】

炎症是免疫系统对组织损伤和感染的一种反应，主要特点就是白细胞（粒细胞、巨噬细胞）会聚集在感染组织周围。斑马鱼的免疫系统非常类似于哺乳动物。创伤发生时，中性粒细胞、巨噬细胞对创伤性炎症几乎同时作出应答，中性粒细胞迁移速度快，先募集到损伤部位，随后巨噬细胞才到达。数小时后，炎症开始消退，巨噬细胞和中性粒细胞离开损伤部位。用手术刀截断斑马鱼尾鳍，诱发急性损伤，促使斑马鱼中性粒细胞发生免疫应答。

采用转基因中性粒细胞荧光鱼（呈绿色），可在荧光显微镜在观察到尾鳍截断的斑马鱼创面中性粒细胞数量比正常斑马鱼明显增加。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用抗炎药组。其中正常对照组未截断尾鳍，模型对照组和服用抗炎药组均截断尾鳍。服用抗炎药组在切断尾鳍后摄入吲哚美辛、阿司匹林、布洛芬、双氯芬酸之类的抗炎药。

服用一段时间抗炎药后，我们观察斑马鱼尾鳍中性粒细胞数量，并通过Q-PCR检测TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎症相关因子的表达。

【结果展示】

图1. 斑马鱼尾鳍炎症中性粒细胞表型图

黄色虚线区域为尾鳍，绿色颗粒为中性粒细胞

可以看到，服用/注射抗炎药组尾鳍中性粒细胞与正常对照组相似，未出现创面中性粒细胞募集情况。

以TNF-α、COX-2基因为例，提供柱状图。

图2. 斑马鱼TNF-α基因相对表达量

与模型对照组比较，**p < 0.01

可以看到，服用/注射抗炎药组斑马鱼与模型对照组比较，TNF-α基因表达明显下调。

图3. 斑马鱼COX-2基因相对表达量

与模型对照组比较，***p < 0.001

可以看到，服用/注射抗炎药组斑马鱼与模型对照组比较，COX-2基因表达明显下调。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射抗炎药组尾鳍中性粒细胞数量与正常对照组相似，未出现创面中性粒细胞募集情况，且TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎症因子明显下调。

2.本实验证实了吲哚美辛、阿司匹林、布洛芬、双氯芬酸具有显著的抗炎作用，且抑制TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎症相关因子的表达。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】

药物骨毒性的安全性研究与肝、肾、心脏毒性等一般毒性相比较为薄弱，尤其是儿科人群用药的骨毒性安全问题，骨毒性非临床安全性评价愈加受到重视。斑马鱼是一种与人类同源性较高的脊椎动物，和哺乳动物一样，斑马鱼的骨骼是从3种胚胎干细胞系即神经嵴、体节中胚层和侧板发育而来的。

斑马鱼骨骼经过特异性的荧光染色后，经荧光显微镜采集到荧光强度能反映出骨密度和脊椎骨的数量，从而评价供试品骨毒性。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用/注射供试品一段时间后，我们对斑马鱼整体做骨钙染色，以脊椎骨荧光强度和脊椎骨数量评价供试品的骨毒性。

【结果展示】

图1. 斑马鱼骨密度表型图

黄色虚线区域为计算用脊椎骨

可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼脊椎骨荧光强度明显减弱。

图2. 斑马鱼脊椎骨数量表型图

可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼脊椎骨数量明显减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼脊椎骨荧光强度明显减弱、数量明显减少，与正常对照组存在明显的差别。

2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有骨毒性。

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【评价原理】

便秘的主要表现是排便次数减少和排便困难。斑马鱼是一种与人类同源性较高的脊椎动物，它的肠道组成与人类相似，具有内皮细胞、结缔组织、环状肌肉和外纵肌层。硫酸铝能减少肠道蠕动，诱发斑马鱼便秘。

经过喂食不被肠道吸收的特异性荧光材料，可以明显的观察到被便秘斑马鱼肠道蠕动减慢，肠道内的荧光强度明显比正常斑马鱼亮。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用通便剂组。服用通便剂组提前服用一段时间吗丁啉、派立清口服液和慈素粉之类的通便剂后，正常对照组、模型对照组与服用通便剂组都摄入了等量荧光材料。荧光材料摄入后，正常对照组不做任何处理，模型对照组和服用通便剂组都摄入了等量硫酸铝（荧光材料和硫酸铝通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用一段时间通便剂后，我们在荧光显微镜下观察斑马鱼肠道荧光强度。

【结果展示】

图1. 斑马鱼肠道荧光强度表型图

可以看到，服用通便剂组的肠道荧光强度较模型对照组明显减弱。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用通便剂组的肠道荧光强度较模型对照组明显减弱。

2.本实验证实了吗丁啉、派立清口服液和慈素粉等具有明显通便功效。

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【评价原理】

斑马鱼与人类的基因相似率高达87%, 与哺乳类动物相比, 斑马鱼的信号传导以及生理结构和功能方面都非常相似。斑马鱼能够对药物在体内的分布情况、吸收情况、代谢以及排泄等生理动态方面提供准确的信息, 尤其对小分子所引起的内分泌紊乱、再生毒性、行为缺陷、致畸、心血管毒性、肝毒性等毒性反应与人具有高度相似性。因此，使用斑马鱼作为药物早期的安全性评价是非常可靠的。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内）。通过环特生物剂量换算公式，将人每日推荐服用剂量换算为斑马鱼使用浓度进行安全性评价,梯度设置浓度进行安全性评价。

服用一段时间供试品后，我们观察斑马鱼各组织脏器的表型。

【结果展示】

图1. 斑马鱼毒性表型图

J：下颌；E:眼；H：心脏；L：肝脏；In：胃肠道；Y：卵黄囊

可以看到，服用2倍及以下人每日推荐服用剂量的供试品组未见明显异常，服用3倍人每日推荐服用剂量的供试品组诱发斑马鱼肝脏变性和卵黄囊吸收延迟。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用2倍及以下人每日推荐服用剂量的供试品未诱发斑马鱼明显毒性表型，与正常对照组斑马鱼类似；服用3倍人每日推荐服用剂量的供试品诱发斑马鱼明显的肝脏毒性表型。

2.本实验证实了在短期服用中，该供试品应限量使用，否则会出现安全性风险。

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【评价原理】

斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，斑马鱼肝脏中有许多与哺乳动物同源的脂质代谢酶，与哺乳动物对外源化学物质的防御机制相当，包括酶的诱导和氧化应激。而且斑马鱼幼鱼通体透明，容易观察到毒性表型。

我们评价斑马鱼肝脏毒性有4个指标：1.肝脏面积；2.肝脏变性程度；3. 卵黄囊吸收延迟的发生率（卵黄囊是脂肪，卵黄囊吸收与肝功能密切相关）；4. 肝脏病理切片。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用/注射药物一段时间后，我们观察斑马鱼肝脏及卵黄囊表型，同时制作成病理切片观察肝脏的病理结构变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼肝脏毒性表型图

可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼肝脏肿大、变性、卵黄囊吸收延迟。

图2. 斑马鱼肝脏病理切片

绿色箭头指向红细胞淤积

从病理切片中可见，正常对照组肝组织结构规则，肝细胞形态完整，细胞质均匀，细胞核呈规则圆形，位于细胞中央；服用/注射供试品组的斑马鱼肝脏红细胞淤积严重，细胞肿胀现象严重，细胞核萎缩变形，位于细胞边缘，局部可见炎性浸润，坏死。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼肝脏产生明显的毒性表型且组织病理学改变，与正常对照组存在明显的差别。

2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有肝脏毒性。

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【评价原理】

蛋黄粉中60%为脂类，用蛋黄粉喂食斑马鱼，可以使斑马鱼血液中的脂肪含量快速升高，从而建立斑马鱼高血脂症模型。

经过油红O特异性脂肪染色（与组织内甘油三酯等脂肪滴结合呈橘红色），高血脂斑马鱼血管内肉眼可见明显的脂质聚积。

【实验方案】

我们先将测试斑马鱼喂食蛋黄粉（蛋黄粉通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内），建立高血脂模型后，再将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组（不喂食蛋黄粉），模型对照组和服用降脂剂组，服用降脂组摄入阿托伐他汀钙之类的降脂剂。

服用一段时间降脂剂后，我们对斑马鱼整体做脂肪特异性染色，观察体内脂质聚积的变化。同时利用甘油三酯试剂盒检测斑马鱼体内甘油三酯含量的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼血脂表型图

橘红色脂滴为血脂

可以看到，服用降脂剂组的血脂聚积情况与模型对照组比较明显减少。

图2. 斑马鱼甘油三酯含量（mmol/gprot）

与模型对照组比较，*** p < 0.001

从生化指标可以看出，服用降脂剂组的斑马鱼整体甘油三酯含量与模型对照组比较明显降低。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用降脂产品组的血脂聚积情况和整体甘油三酯含量与模型对照组比较明显减少。

2.本实验证实了降脂产品具有显著的降脂作用。

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【评价原理】

近年来，随着工业化的发展，空气污染越来越严重，雾霾天也越来越多，对人的侵害也越来越严重。二氧化硫、氮氧化物、可吸入颗粒物（PM10）和细颗粒物（PM2.5）是雾霾的主要组成成分。研究表明，进入斑马鱼和大鼠体内的纳米活性炭颗粒能通过肠道的杯状细胞分泌而排泄，这一新颖的纳米排泄途径被命名为肠杯状细胞分泌通路（IGCSP)。用红色荧光微球模拟PM2.5微粒，激活斑马鱼炎症机制，引起其体内吞噬细胞的吞噬作用肠道分泌得以将异物排除。

根据体内荧光微球的数量（呈红色），抗雾霾剂组斑马鱼体内微球数量明显减少。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是模型对照组和抗雾霾剂组。其中模型对照组与服用抗雾霾剂组都给予了等量的荧光微球（荧光微球通过注射方式到斑马鱼体内）。抗雾霾剂组在注射荧光微球的同时摄入冬虫夏草之类的抗雾霾剂。

服用一段时间抗雾霾剂后，我们在荧光显微镜下观察斑马鱼体内荧光微球数量的变化来反映机体清除PM2.5的能力。

【结果展示】

图1. 斑马鱼抗雾霾表型图

红色点为荧光微球

可以看到，服用抗雾霾剂组的荧光微球数量与模型对照组比较明显减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用抗雾霾剂组的荧光微球数量与模型对照组比较明显减少。

2.本实验证实了冬虫夏草具有抗雾霾功效。

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类器官作为新兴的生物学模型，其具有细胞系和动物模型所不具有的独特优势，其细胞组成和结构更加类似人体组织，可提供一个高度生理相关的系统，是基础研究的绝佳模型。通过基于肿瘤类器官药敏的筛查，鉴别出有临床反应的患者具有极高的敏感性和特异性，综合结果表明肿瘤类器官药敏在预测肿瘤治疗效果方面，具有较高的应用价值。

斑马鱼PDX模型可为病人能提供即时的、精准化的治疗方案指导，为肿瘤的个性化治疗提供了一个非常理想的体内测试和诊断模型。将斑马鱼PDX模型广泛服务于肿瘤患者并提供个体化用药指导，会显著提高患者肿瘤化疗精准性，提高患者的生活质量，使患者获益。

依托类器官和斑马鱼两大技术平台， 环特生物构建起一套具备鲜明特色的“体外（类器官模型）+体内（斑马鱼PDX模型）” 模式的肿瘤精准医疗整体解决方案。

类器官 + 斑马鱼PDX，喜迎双“旦”  放肆打“价”！

活动对象：医院肿瘤科医生

活动时间：2022年12月24日-1月13日

特惠1：满五 6.4折

凡购买我司类器官科研服务或肿瘤个性化药敏检测中任一项，即可享受8折优惠！

当肿瘤样本数量≥5个时，即可再享受折上8折优惠！

类器官科研服务（下图）

特惠2：周边7折购

类器官基质胶、辅助试剂盒、生长因子和小分子等所有周边产品，一律7折！

基质胶及其他辅助类试剂盒（下图）

类器官相关生长因子（下图）

类器官相关小分子（下图）

特惠3：预存得豪礼

1. 预存5万抵6万元项目经费

2. 预存10万抵13万元项目经费

3. 预存20万抵28万元项目经费

4. 预存40万抵60万元项目经费

备注：特惠1和特惠3，不可叠加。

项目服务详情，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）。

【评价原理】

斑马鱼与人类的基因相似率高达87%, 与哺乳类动物相比, 斑马鱼的信号传导以及生理结构和功能方面都非常相似。斑马鱼能够对药物在体内的分布情况、吸收情况、代谢以及排泄等生理动态方面提供准确的信息, 尤其对小分子所引起的内分泌紊乱、再生毒性、行为缺陷、致畸、心血管毒性、肝毒性等毒性反应与人具有高度相似性。因此，使用斑马鱼作为药物早期的安全性评价是非常可靠的。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内）。通过环特生物剂量换算公式，将人每日推荐服用剂量换算为斑马鱼使用浓度进行安全性评价。

服用一段时间供试品后，我们观察斑马鱼各组织脏器的表型。

【结果展示】

图1. 斑马鱼毒性表型图

J：下颌；E:眼；H：心脏；L：肝脏；In：胃肠道；Y：卵黄囊

可以看到，服用人每日推荐服用剂量的供试品组未见明显异常。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用人每日推荐服用剂量的供试品组未诱发斑马鱼明显的毒性表型，与正常对照组斑马鱼相似。

2.本实验证实了在短期服用时，该供试品以人每日推荐服用剂量使用并未诱发安全性风险。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）