【评价原理】

益生菌的使用可以维持包括鱼类在内的动物及人体肠道微生态平衡，调节免疫力，增强斑马鱼的繁殖能力。

益生菌通过特异性染色（呈红色），肠道内益生菌增殖的斑马鱼肠道会明显变红，由于斑马鱼通体透明的特点，可以明显被观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是模型对照组和服用调节肠道菌群产品组。其中模型对照组与服用调节肠道菌群产品组都饲喂等量的益生菌（益生菌通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用调节肠道菌群产品组在饲喂益生菌同时摄入膳乐星益生菌固体饮料。

服用一段时间调节肠道菌群产品后，我们观察斑马鱼肠道内益生菌数量的变化。

【结果展示】

图1. 肠道益生菌表型图

红色荧光颗粒为肠腔内的益生菌

可以看到，经过调节肠道菌群产品处理的斑马鱼肠道益生菌比模型对照组明显增多。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用调节肠道菌群产品组的肠道益生菌数量与模型对照组的相比明显增多。

2.本实验证实了膳乐星益生菌固体饮料具有肠道菌群调节功效。

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【评价原理】

近年来，各种各样的美食迫使人们越来越关注胃肠道健康问题。斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，并拥有与人类结构和功能相似的胃肠道组织。斑马鱼胃肠道粘膜屏障系统由较完整的机械屏障、化学屏障和免疫屏障构成，与哺乳动物高度相似，可作为胃肠道粘膜屏障研究的动物模型。三硝基苯磺酸（TNBS）可破坏胃肠粘膜屏障，与肠组织蛋白结合形成抗原，发生变态反应，诱发溃疡性胃肠道损伤。胃肠道病变累及肌层和神经，导致胃肠壁张力减退，胃肠腔扩大。胃肠道病变时出现炎症反应，中性粒细胞募集到损伤部位。杯状细胞主要分泌黏蛋白，形成黏膜屏障以保护上皮细胞，胃肠黏膜损伤时杯状细胞数量减少。通过病理切片可观察胃肠道组织学改变（如溃疡形成等）的情况。

我们评价斑马鱼胃肠道粘膜损伤辅助保护功效有4个指标：1. 观察胃肠腔面积；2. 应用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼，观察胃肠道中性粒细胞数量；3. 应用特异性的染料（呈蓝色），观察肠道杯状细胞数目；4. 胃肠道病理切片。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用胃肠道粘膜辅助保护剂组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组与服用胃肠道粘膜辅助保护剂组都摄入了等量的TNBS（TNBS通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用胃肠道粘膜辅助保护剂组在TNBS诱导胃肠道粘膜损伤之后摄入常欣卫口服液之类的胃肠道粘膜辅助保护剂。

服用一段时间胃肠道粘膜辅助保护剂后，我们观察斑马鱼胃肠道表型，分析胃肠腔面积，胃肠道中性粒细胞数目和杯状细胞数目，同时制作成病理切片观察胃肠道的病理结构变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼胃肠道表型图（蓝色虚线区域为胃肠腔）

可以看到，服用胃肠道粘膜辅助保护组的胃肠腔面积与正常对照组比较相似，没有明显的胃肠腔扩张。

图2. 斑马鱼胃肠道中性粒细胞表型图（黄色虚线区域为肠腔）

可以看到，服用胃肠道粘膜辅助保护剂组的肠道中性粒细胞数量与正常对照组比较相似，没有明显的增多。

图3. 斑马鱼胃肠道杯状细胞表型图

可以看到，服用胃肠道粘膜辅助保护剂组的肠道杯状细胞数量与正常对照组比较相似，没有明显的减少。

图4. 斑马鱼胃肠道病理切片

可以看到，服用胃肠道粘膜辅助保护剂组的胃肠粘膜形态与正常对照组比较相似，没有明显的胃肠腔扩张、粘膜糜烂溃疡等症状。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用胃肠道粘膜辅助保护剂组的胃肠腔情况与正常对照组相似，并未出现模型对照组胃肠腔扩张、中性粒细胞数量增加、肠道杯状细胞数目减少、粘膜糜烂溃疡等情况。

2.本实验证实了常欣卫口服液具有明显胃肠道粘膜辅助保护功效。

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【评价原理】

斑马鱼与人类具有高度的形态、生理和遗传同源性，神经系统与哺乳动物相似。氯化铝超过正常摄入量可导致动物行为异常，同时破坏胆碱能神经功能，还可增加淀粉样蛋白的产量，最终导致记忆力减退、学习能力降低。

我们用两种方法去评价斑马鱼的记忆力。1. 通过行为分析仪检测斑马鱼的对外界刺激的反应能力，经氯化铝诱发的记忆减退斑马鱼反应能力比正常斑马鱼差；2. 通过酶标仪检测斑马鱼的乙酰胆碱酯酶，经氯化铝诱发的记忆减退斑马鱼乙酰胆碱酯酶活性高于正常斑马鱼。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和改善记忆产品组。其中正常对照组未给予氯化铝造模，模型对照组与服用改善记忆产品组都给予等量的氯化铝（氯化铝通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。改善记忆产品组在给予氯化铝的同时摄入参枝苓口服液之类的改善记忆产品。

服用一段时间改善记忆产品后，我们对斑马鱼进行行为学检测，观察斑马鱼的外界光暗刺激的反应能力（反应速度）；同时酶标仪检测斑马鱼体内乙酰胆碱酯酶活性。

【结果展示】

图1. 反应能力轨迹图

可以看到，模型对照组反应能力比正常对照组显著降低，经过改善记忆产品处理的斑马鱼的反应能力比模型对照组明显改善。

图2. 乙酰胆碱酯酶检测

可以看到，模型对照组斑马鱼乙酰胆碱酯酶活性显著上升，而改善记忆产品组的乙酰胆碱酯酶活性显著降低与正常对照组相似。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用改善记忆产品的斑马鱼反应能力较模型对照组有明显的改善，且对氯化铝诱导的记忆减退斑马鱼的乙酰胆碱酯酶活性也有显著降低的作用。

2.本实验证实了参枝苓口服液有明显的改善记忆功效。

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【评价原理】

斑马鱼体内的生理基础（如伤害感受器神经细胞）支持它能感受到有害的刺激和疼痛，比如高温、强压和腐蚀性化学物质。和哺乳动物一样，斑马鱼鱼体内阿片样神经递质和神经连接。

应用行为分析仪检测，疼痛斑马鱼的总运动距离明显比正常对照组增加，类似于鼠的扭体反应。通过分析斑马鱼的总运动距离，可以评价药物的镇痛作用。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用镇痛剂组。其中正常对照组未摄入冰乙酸，模型对照组与服用镇痛剂组都摄入了等量的冰乙酸（冰乙酸通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用镇痛剂组在摄入冰乙酸之前摄入阿司匹林之类的镇痛剂。

服用一段时间镇痛剂后，我们利用行为分析仪检测斑马鱼总运动距离，观察斑马鱼疼痛情况的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼运动轨迹图

黑线表示慢速运动轨迹，绿线表示中速运动轨迹，红线表示快速运动轨迹

可以看到，服用镇痛剂组的总运动距离比模型对照组明显减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用镇痛剂组的总运动距离与模型对照组比较明显减少。

2.本实验证实了阿司匹林具有明显的镇痛作用。

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【评价原理】

癫痫发作是指大脑神经元广泛同步放电所致的大脑功能紊乱。若反复发作则称为癫痫或癫痫综合征。GABA是哺乳动物中枢神经系统中重要的抑制性神经传达物质。戊四唑（PTZ）是γ-氨基丁酸（简称GABA）抑制剂，大剂量PTZ可诱导癫痫发作，是哺乳动物癫痫模型中的常用诱导剂。斑马鱼已被建议作为一种替代动物模型用于研究癫痫的机制和筛选抗癫痫药。用戊四唑诱导斑马鱼后，中枢神经系统受影响，斑马鱼幼鱼表现出运动行为异常(类似人类癫痫的痉挛)和c-fos基因表达的上调。

用行为分析仪记录斑马鱼的运动（快速运动类似于癫痫发作的线呈现红色），癫痫斑马鱼快速运动距离较正常斑马鱼明显增多。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和药物组。其中正常对照组未摄入PTZ，模型对照组与服用抗癫痫药物组都摄入了等量的PTZ（PTZ通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。抗癫痫药物组在摄入PTZ之前摄入苯妥英钠、丙戊酸钠之类的抗癫痫药物。

服用一段时间抗癫痫药物后，我们利用行为分析仪追踪记录斑马鱼的运动，同时检测与癫痫相关的c-fos和gabra1（GABA A受体α1）基因。

【结果展示】

图1. 斑马鱼癫痫表型图

红线代表快速运动距离（>20mm/s抽搐）

可以看到，模型对照组的快速运动距离较正常对照组明显增多，而抗癫痫药物组快速运动距离明显减少。

图2. c-fos和gabra1基因图

从基因图中也能看出来，模型对照组c-fos基因上调，gabra1下调，而抗癫痫药物组c-fos基因下调，gabra1上调。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，抗癫痫药物组斑马鱼运动与模型对照组比较，快速运动距离明显减少。

2.本实验证实了苯妥英钠、丙戊酸钠具有抗癫痫作用。

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【评价原理】

斑马鱼和哺乳动物的心脏有相似的功能，包括血流方向、由专门的心内膜肌肉组织驱动的高压系统、由电子系统调节的心律以及与起搏活动相关的心跳。而且斑马鱼幼鱼通体透明，血细胞在心脏和血液循环系统的堆积非常容易观察，因而利用斑马鱼模型研究心血管毒性极为方便。

我们评价斑马鱼心血管毒性有4个指标：1.心率；2.心节律；3.心包水肿面积；4.静脉瘀血面积。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼的心脏进行观察评价。

【结果展示】

图1. 斑马鱼心血管毒性表型图

红色虚线框内为心脏

可以看到，服用/注射供试品组的斑马鱼出现明显的心包水肿。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼出现明显的心包水肿，与正常对照组存在明显的差别。

2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有心血管毒性。

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【评价原理】

糖尿病是一种由遗传基因决定的与感染、肥胖等环境因素促发有关的疾病，其基本病理生理为绝对或相对性胰岛素分泌不足引起的代谢紊乱。高血脂患者由于血液中胆固醇、油脂含量过多，就会使过多油脂沉积于血管壁上，容易使动脉管壁增厚、变硬、失去弹性，导致动脉硬化。斑马鱼食欲调节（如血清素）和胰岛素调节功能与人类相似，斑马鱼其他涉及葡萄糖体内平衡的器官系统（包括脑、肝、脂肪细胞组织和骨骼肌）的发育和功能也与哺乳动物类似。斑马鱼在糖脂负荷状态下表现出持续高血糖、高血脂现象，用高糖高脂饲料可以诱发斑马鱼高血糖，模拟人的二型糖尿病。

用转基因绿色血管荧光斑马鱼（呈绿色），患有高糖高脂的斑马鱼眼部血管壁厚度较正常斑马鱼明显增厚，在共聚焦显微镜下可以观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和降糖降脂产品组。其中正常对照组未摄入高糖高脂饲料，模型对照组与服用降糖降脂产品组都摄入了等量的高糖高脂饲料（高糖高脂饲料通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。降糖降脂产品组在摄入高糖高脂饲料的同时摄入松花蛹虫草之类的降糖降脂产品。

服用一段时间降糖降脂产品后，我们用共聚焦显微镜下观察斑马鱼眼部血管壁厚度。

【结果展示】

图1. 斑马鱼眼部血管壁厚度

白色箭头所指为血管壁

可以看到，模型对照组的眼部血管壁厚度较正常对照组明显增厚，而降糖降脂产品组斑马鱼眼部血管壁厚度与正常对照组相近。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，降糖降脂产品组斑马鱼眼部血管壁厚度与正常对照组相近，并未出现模型对照组眼部血管壁增厚的情况。

2.本实验证实了松花蛹虫草具有眼部血管壁厚度增厚改善功效。

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【评价原理】

斑马鱼为鲤科短担尼鱼属的小型硬骨鱼，1998年国际经济合作与发展组织将斑马鱼胚胎发育方法列入测定单一化学品毒性的标准方法。由于斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，近年来斑马鱼被广泛应用于人类疾病模型及药物筛选、毒理学与环境检测中，使其成为新型的脊椎模式生物。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或胚胎注射的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼整体进行观察评价，观察斑马鱼心脏、脑部、耳、下颌、眼、肝脏、肠道、躯干/尾/脊索、肌肉/体节、鳍、体长、身体着色、循环系统、身体水肿和出血等毒性反应情况，统计毒性发生率。

【结果展示】

图1. 斑马鱼胚胎毒性表型图

可以看到，服用/注射供试品组的斑马鱼眼变小、心包水肿、肝脏变性、卵黄囊吸收延迟、胃肠道发育延迟。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的组织器官产生明显的毒性表型，与正常对照组存在明显的差别。

2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有胚胎毒性。

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【评价原理】

细胞色素P450酶是许多同工酶组成的超大家族，主要位于肝脏微粒体中，参与生物体许多内源性和外源性物质的生物转化。许多临床相关药物间的相互作用与抑制和/或诱导CYP酶有关，改变CYP酶的活性对药效有重要影响，有时甚至会威胁生命。在众多肝脏细胞色素P450酶家族中，CYP3A4和CYP2D6与70%以上的药物代谢有关，其中CYP3A4占50%以上，而CYP2D6占20%左右，因此目前药物代谢研究集中于评价药物对CYP3A4和CYP2D6的影响。

我们评价斑马鱼对细胞色素P450的影响作用有2个指标：1.对CYP3A4的影响作用；2.对CYP2D6的影响作用。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用/注射药物一段时间后，利用特异性试剂盒检测斑马鱼体内细胞色素P450的活性。

【结果展示】

图1. 斑马鱼CYP3A4活性

与正常对照组比较，*** p < 0.001

图2. 斑马鱼CYP2D6活性

与正常对照组比较，*** p < 0.001

可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼细胞色素P450活性抑制。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼细胞色素P450活性明显抑制，与正常对照组存在明显的差别。

2.本实验证实了该供试品对斑马鱼细胞色素P450有抑制作用。

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【评价原理】

斑马鱼与哺乳动物有相似的神经系统。在哺乳动物体内起到睡眠调节作用的分子和细胞群（单胺能、胆碱能、下丘脑素能）的斑马鱼体内大部分是守恒的。各种催眠药物如H1组胺能拮抗剂、褪黑激素激动剂、-2肾上腺素能激动剂和γ-氨基丁酸（GABA）能调节剂在斑马鱼体内的反应也很保守。GABA是一种天然存在的非蛋白质氨基酸，是哺乳动物中枢神经系统中重要的抑制性神经传达物质。戊四唑（PTZ）是GABA抑制剂，小剂量PTZ可诱导既有躁狂症又有抑郁症的双相精神障碍，从而造成失眠。

患有失眠症的斑马鱼会表现出行为异常，表现为总运动距离明显增加，可以用行为分析仪观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和安神助眠剂组。其中正常对照组未摄入PTZ，模型对照组与安神助眠剂组都摄入了等量的PTZ（PTZ通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。安神助眠剂组在摄入PTZ前服用睡安片之类的安神助眠剂。

服用一段时间安神助眠剂后，我们通过行为分析仪检测斑马鱼的总运动距离。

【结果展示】

图1. 斑马鱼的运动轨迹图

红色线条表示快速运动轨迹，绿色线条表示中速运动轨迹，黑色线条表示慢速运动轨迹

可以看到，服用安神助眠剂组的运动明显比加了模型对照组减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用安神助眠剂组的总运动距离相对于模型对照组明显减少，能缓解斑马鱼的躁狂症。

2.本实验证实了睡安片具有安神助眠功效。

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