【评价原理】

细菌感染是致病菌或条件致病菌侵入血循环中生长繁殖，产生毒素和其他代谢产物所引起的急性全身性感染。斑马鱼有着与哺乳动物非常相似的发育良好的免疫系统(包括特异性免疫和非特异性免疫），使得斑马鱼成为了研究病菌感染机制和筛选抗菌剂非常有用的动物模型。

经过荧光标记的细菌（呈红色）注射进入斑马鱼体内，生长繁殖，可以明显地被观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是模型对照组和服用抗菌剂组。模型对照组与服用细菌抑制剂组都注射了等量的细菌（细菌通过静脉注射的方式入到斑马鱼体内）。服用抗菌剂组在注射细菌后摄入阿奇霉素、比阿培南、利奈唑酮之类的抗菌剂。

服用一段时间抗菌剂后，我们将斑马鱼置于荧光显微镜下观察细菌数量的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼体内细菌繁殖表型图

白色箭头所指红色颗粒为细菌

可以看到，服用抗菌剂组的体内细菌数量较模型对照组显著减少，未出现全身性感染。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用抗菌剂组的斑马鱼体内细菌数量较模型对照组显著减少，未出现全身性感染。

2.本实验证实了阿奇霉素、比阿培南、利奈唑酮等抗生素具有显著的抑制细菌作用。

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【评价原理】

机体供能主要分为有氧供能与无氧供能，在两种供能条件下ATP均源源不断的合成以维持机体活动的需求。通过ATP含量的测定，可以分析能量调节剂对斑马鱼能量代谢快慢的影响。如持续的促进能量代谢、增加机体能量消耗是行之有效的减肥措施，促进脂肪分解类减肥产品可明显增加斑马鱼体内ATP含量。

【实验方案】

将受测试斑马鱼分成2组，分别是正常对照组、能量调节剂组。服用一段时间能量调节剂后，我们利用ATP试剂盒检测斑马鱼体内ATP含量。

【结果展示】

图1. 斑马鱼体内ATP含量

与正常对照组比较，***p<0.001

可以看到，服用能量调节剂的斑马鱼体内ATP含量明显比正常对照组高。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用能量调节剂的斑马鱼体内ATP含量与正常对照组相比明显升高，说明本次实验中选用的能量调节剂可促进ATP生成，促进能量代谢。

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【评价原理】

糖尿病是一种由遗传基因决定的与感染、肥胖等环境因素促发有关的疾病，其基本病理生理为绝对或相对性胰岛素分泌不足引起的代谢紊乱。持续的高血糖水平导致糖尿病并发症发生，高血糖累及中枢和周围神经病变，出现神经炎症。感觉神经受损较为多见，出现麻木、触电、发热、蚁行感，运动神经受损则出现肌力下降。斑马鱼胰腺的形态发生和基本细胞结构、排列方式类似于哺乳动物，斑马鱼食欲调节（如血清素）和胰岛素调节功能与人类相似，斑马鱼其他涉及葡萄糖体内平衡的器官系统（包括脑、肝、脂肪细胞组织和骨骼肌）的发育和功能也与哺乳动物类似。斑马鱼在糖负荷状态下表现出持续高血糖现象，用高糖高脂饲料可以诱发斑马鱼高血糖，模拟人的二型糖尿病的神经并发症。

用中性粒细胞荧光与运动神经荧光杂交品系斑马鱼（呈绿色），患有高血糖的斑马鱼周围运动神经中性粒细胞数目增多，在荧光显微镜下可以观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和降糖产品组。其中正常对照组未摄入高糖高脂饲料，模型对照组与服用降糖产品组都摄入了等量的高糖高脂饲料（高糖高脂饲料通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。降糖产品组在摄入高糖高脂饲料的同时摄入松花蛹虫草之类的降糖产品。

服用一段时间降糖产品后，我们用荧光显微镜观察斑马鱼周围运动神经中性粒细胞数目。

【结果展示】

图1. 斑马鱼周围运动神经中性粒细胞数目

黄色框线内绿色荧光点代表中性粒细胞

可以看到，模型对照组的周围运动神经中性粒细胞数目较正常对照组明显增多，而降糖产品组斑马鱼明显减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，降糖产品组斑马鱼周围运动神经中性粒细胞数目与模型对照组比较明显减少。

2.本实验证实了松花蛹虫草之类的降糖产品具有神经炎症消退功效。

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光毒性检测是化妆品安全性评价的重要内容之一，皮肤接触到光敏性物质后，在光照下可能产生局部或全身的毒性效应。根据斑马鱼胚胎的生长发育状况可以评价受试物的光毒性。

【评价原理】

将斑马鱼胚胎暴露于不同浓度的受试物溶液，采用同等剂量的光进行照射，一定时间段后记录斑马鱼胚胎的死亡率，确定50%试验鱼胚胎死亡的受试物浓度，用LC50表示。

【实验方案】

配制一定浓度系列的受试物溶液，在斑马鱼发育初期（4hpf-6hpf）分别水溶加入受试物，同时设置正常对照组。受试物组经过同等剂量的光照后，分别观察每组斑马鱼的发育状况，以卵凝结、体节异常、尾部未分离等判定胚胎死亡。记录每组斑马鱼胚胎的死亡率，绘制“浓度-死亡率”效应曲线，计算LC50值。

【结果展示】

1、斑马鱼胚胎死亡判定

图1.斑马鱼胚胎死亡表型图

2、LC50值：“浓度-死亡率”效应曲线

图2. 斑马鱼胚胎“浓度-死亡率”效应曲线

【评价结论】

经实验比对，斑马鱼胚胎随着受试物浓度的增加逐渐出现死亡特征，LC50

值为31.5μg/ml。

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【评价原理】

癫痫发作是指大脑神经元广泛同步放电所致的大脑功能紊乱。若反复发作则称为癫痫或癫痫综合征。GABA是哺乳动物中枢神经系统中重要的抑制性神经传达物质。戊四唑（PTZ）是γ-氨基丁酸（简称GABA）抑制剂，大剂量PTZ可诱导癫痫发作，是哺乳动物癫痫模型中的常用诱导剂。斑马鱼已被建议作为一种替代动物模型用于研究癫痫的机制和筛选抗癫痫药。用戊四唑诱导斑马鱼后，中枢神经系统受影响，斑马鱼幼鱼表现出运动行为异常(类似人类癫痫的痉挛)和c-fos基因表达的上调。

用行为分析仪记录斑马鱼的运动（快速运动类似于癫痫发作的线呈现红色），癫痫斑马鱼快速运动距离较正常斑马鱼明显增多。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和药物组。其中正常对照组未摄入PTZ，模型对照组与服用抗癫痫药物组都摄入了等量的PTZ（PTZ通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。抗癫痫药物组在摄入PTZ之前摄入苯妥英钠、丙戊酸钠之类的抗癫痫药物。

服用一段时间抗癫痫药物后，我们利用行为分析仪追踪记录斑马鱼的运动，同时检测与癫痫相关的c-fos和gabra1（GABA A受体α1）基因。

【结果展示】

图1. 斑马鱼癫痫表型图

红线代表快速运动距离（>20mm/s抽搐）

可以看到，模型对照组的快速运动距离较正常对照组明显增多，而抗癫痫药物组快速运动距离明显减少。

图2. c-fos和gabra1基因图

从基因图中也能看出来，模型对照组c-fos基因上调，gabra1下调，而抗癫痫药物组c-fos基因下调，gabra1上调。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，抗癫痫药物组斑马鱼运动与模型对照组比较，快速运动距离明显减少。

2.本实验证实了苯妥英钠、丙戊酸钠具有抗癫痫作用。

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【评价原理】

斑马鱼的听觉外侧系统由内耳和侧线两个关键的感觉结构组成，斑马鱼具有典型的内耳结构，内耳的毛细胞和侧线的毛细胞在结构功能及分子水平上与哺乳动物的内耳毛细胞非常相似，包括对耳毒性药物的相似反应。

经过特异性荧光染色（呈绿色），听力损伤的斑马鱼比正常斑马鱼毛细胞明显减少或缺失（荧光减弱或者消失）。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼整体做毛细胞特异性染色，观察毛细胞的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼毛细胞表型图

绿色荧光颗粒为毛细胞

可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼毛细胞减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼毛细胞明显减少，与正常对照组存在明显的差别。

2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有听毒性。

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【评价原理】

随着电子产品的广泛使用，用眼的时间和强度已远超过去，用眼过度引起一系列视力问题。研究表明，高度近视、视网膜疾病、白内障、眼干燥关节综合征均与眼细胞凋亡相关。斑马鱼的眼部血管结构跟人非常相似，斑马鱼视网膜结构也跟人高度相似。用霉酚酸吗啉乙酯可以诱发斑马鱼眼细胞凋亡，模拟人的眼部疾病。

用特异性荧光染色（呈绿色），患有眼疾的斑马鱼眼细胞凋亡较正常斑马鱼明显增多，在荧光显微镜下可以观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和药物组。其中正常对照组未摄入霉酚酸吗啉乙酯，模型对照组与服用眼保护剂组都摄入了等量的霉酚酸吗啉乙酯（霉酚酸吗啉乙酯通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。眼保护剂组在摄入霉酚酸吗啉乙酯的同时摄入蓝莓叶黄素酯之类的眼保护剂。

服用一段时间眼保护剂后，我们对斑马鱼整体做凋亡细胞特异性染色，观察细胞凋亡，同时制作成病理切片观察眼部的病理结构变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼眼细胞凋亡表型图

黄色虚线区域为眼，绿色小点为凋亡细胞

可以看到，模型对照组的凋亡细胞较正常对照组明显增多，而眼保护剂组凋亡细胞与正常细胞相似。

图2. 眼部凋亡细胞病理切片

红色箭头指向凋亡细胞

从病理切片中也能看出来，模型对照组出现较多的凋亡细胞，表现为细胞固缩、染色质边集，而眼保护剂组细胞和正常斑马鱼中形态相似。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，眼保护剂组斑马鱼眼细胞与正常对照组相似，并未出现模型对照组的大面积细胞凋亡情况。

2.本实验证实了蓝莓叶黄素酯具有保护视力功效。

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【评价原理】

体力疲劳常表现为肌肉出现僵硬、肿胀和疼痛，动作慢、不协调；反应迟钝，判断错误，注意力不集中等。斑马鱼大部分器官的作用机理与人类高度相似，而且斑马鱼生长发育周期短，器官发育较快，有利于开展缓解体力疲劳功效的研究。亚硫酸钠通过化学反应消耗水中的氧气，造成水中斑马鱼缺氧，经过一段时间诱发缺氧性疲劳。斑马鱼在氧气不足的情况下，机体自发活动将会减弱，同时，肌肉贮备糖原无氧酵解生成乳酸，乳酸堆积可使局部H+浓度升高，过量H+直接作用于肌原纤维，抑制肌动蛋白和肌球蛋白的结合，导致肌肉收缩能力下降，机体运动能力减弱。疲劳斑马鱼运动距离下降、乳酸堆积、氧自由基（ROS）上升、ATP酶含量降低。

我们评价疲劳有4个指标：（1）行为分析仪检测斑马鱼总运动距离；（2）酶标仪检测乳酸含量；（3）酶标仪检测ROS水平；（4）酶标仪检测ATP含量。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用抗疲劳剂组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组和服用抗疲劳剂摄入等量的亚硫酸钠以诱发斑马鱼疲劳模型（亚硫酸钠通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用抗疲劳剂组摄入亚硫酸钠的同时摄入中华跌打丸、红牛和脉动饮料之类的抗疲劳剂。

服用一段时间抗疲劳剂后，我们检测斑马鱼的总运动距离、乳酸含量、ROS水平和ATP含量。

【结果展示】

图1. 斑马鱼运动轨迹图

黑线：斑马鱼静止运动轨迹；绿线：中速运动；红线：快速运动

可以看到，服用抗疲劳剂组的斑马鱼运动情况与正常对照组比较相似，没有明显的总运动距离减少。

图2. 斑马鱼乳酸含量

与模型对照组比较，*p<0.05

可以看到，服用抗疲劳剂组的斑马鱼乳酸含量比模型对照组明显降低。

图3. 斑马鱼ROS水平

与模型对照组比较，***p<0.001

可以看到，服用抗疲劳剂组的斑马鱼ROS水平比模型对照组明显降低。

图4. 斑马鱼ATP含量

与模型对照组比较，***p<0.001

可以看到，服用抗疲劳剂组的斑马鱼ATP含量比模型对照组明显升高。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用抗疲劳剂组与模型对照组比较，总运动距离明显增加、乳酸明显减少、ROS水平明显降低、ATP含量明显升高。

2.本实验证实了中华跌打丸、红牛和脉动饮料等具有明显缓解体力疲劳功效。

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【评价原理】

益生菌的使用可以维持包括鱼类在内的动物及人体肠道微生态平衡，调节免疫力，增强斑马鱼的繁殖能力。

益生菌通过特异性染色（呈红色），肠道内益生菌增殖的斑马鱼肠道会明显变红，由于斑马鱼通体透明的特点，可以明显被观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是模型对照组和服用调节肠道菌群产品组。其中模型对照组与服用调节肠道菌群产品组都饲喂等量的益生菌（益生菌通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用调节肠道菌群产品组在饲喂益生菌同时摄入膳乐星益生菌固体饮料。

服用一段时间调节肠道菌群产品后，我们观察斑马鱼肠道内益生菌数量的变化。

【结果展示】

图1. 肠道益生菌表型图

红色荧光颗粒为肠腔内的益生菌

可以看到，经过调节肠道菌群产品处理的斑马鱼肠道益生菌比模型对照组明显增多。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用调节肠道菌群产品组的肠道益生菌数量与模型对照组的相比明显增多。

2.本实验证实了膳乐星益生菌固体饮料具有肠道菌群调节功效。

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【评价原理】

斑马鱼与哺乳动物有相似的神经系统。在哺乳动物体内起到睡眠调节作用的分子和细胞群（单胺能、胆碱能、下丘脑素能）的斑马鱼体内大部分是守恒的。各种催眠药物如H1组胺能拮抗剂、褪黑激素激动剂、-2肾上腺素能激动剂和γ-氨基丁酸（GABA）能调节剂在斑马鱼体内的反应也很保守。GABA是一种天然存在的非蛋白质氨基酸，是哺乳动物中枢神经系统中重要的抑制性神经传达物质。戊四唑（PTZ）是GABA抑制剂，小剂量PTZ可诱导既有躁狂症又有抑郁症的双相精神障碍，从而造成失眠。

患有失眠症的斑马鱼会表现出行为异常，表现为总运动距离明显增加，可以用行为分析仪观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和安神助眠剂组。其中正常对照组未摄入PTZ，模型对照组与安神助眠剂组都摄入了等量的PTZ（PTZ通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。安神助眠剂组在摄入PTZ前服用睡安片之类的安神助眠剂。

服用一段时间安神助眠剂后，我们通过行为分析仪检测斑马鱼的总运动距离。

【结果展示】

图1. 斑马鱼的运动轨迹图

红色线条表示快速运动轨迹，绿色线条表示中速运动轨迹，黑色线条表示慢速运动轨迹

可以看到，服用安神助眠剂组的运动明显比加了模型对照组减少。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用安神助眠剂组的总运动距离相对于模型对照组明显减少，能缓解斑马鱼的躁狂症。

2.本实验证实了睡安片具有安神助眠功效。

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