PAS染色又称过碘酸雪夫染色,糖原染色。一般用来显示糖元和其它多糖物质。 [1] 原理:过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛,再与Schiff氏液的无色品红结合,红色,定位于胞浆上。固定液Carnoy固定液: 纯酒精60 ml 冰醋酸10ml氯仿 30ml,也可以选用75%酒精。液配制1) 过碘酸酒清夜配法:过碘酸(HIO4·2H2O) 0.4g 95%酒精 35ml M/5醋酸钠(2.72g+蒸馏水100ml) 5ml蒸馏水10ml。保存于冰箱内,用棕色瓶,可用两周。2)Schiff氏液:0.5克碱性品红加入100毫升蒸馏水中,时时摇动三角瓶5分钟,使之充分溶解。冷却至50℃后过滤加入10毫升1N盐酸,冷却至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸钠,在室温中至少静置24小时,然后密封冰箱保存。3) Schiff氏酒精液配置 Schiff氏液 11.5ml 1N HCI 0.5ml 纯酒精 23ml4) 亚硫酸水 1%偏重亚硫酸钠10ml 1N HCI 10ml 蒸馏水 180ml的树胶溶解。5)哈瑞或迈耶苏木精染色步骤1. 石蜡切片脱蜡至水(细胞涂片,冰冻切片直接水洗);2. 蒸馏水洗;3. 过碘酸酒清夜10min;4. 自来水冲洗10min;5. Schiff氏液10min;6. 流水冲洗5min;7.用哈瑞苏木精或迈耶苏木精染核3min(细胞核染色过深可用盐酸酒精分化);8. 流水冲洗5min;9. 常规脱水、透明、封固。结果PAS阳性为红色,细胞核蓝色。
ROS活性氧检测 ROS活性氧检测利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧的检测。DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF,检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。客户注意事项 1、 抗体:事先咨询长沙南科生物,明确抗体种属以及是否有该抗体可使用,如有一抗使用费300元每指标,如无可由双方协商而定,客户自己购买提供或我公司代购;2、 标本收集与保存: 组织样品 新鲜组织放入液氮或-70度保存,组织不少于100mg(约绿豆大小); 培养细胞 通过细胞计数取不少于2000000个细胞于EP管,加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,混匀后保存于冰箱(-70℃,避免反复冻融); 血液细胞标本 以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,保存(-70℃可长期保存,避免反复冻融) 血清或细胞培养液标本 离心去掉杂质后取上清入EP管,保存(以上4℃可保存15-20天,-70℃可长期保存,避免反复冻融) 3 、 样本运输:可选以下任何的一种方式寄送标本 组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后加冰袋运输; 细胞样本也可以直接快件寄送培养瓶(密封保证不污染,培养液不漏出,细胞不要长得太满,50%左右,灌满培养液); 血清或上清液直接加冰袋寄送(密封保证液体不漏出,视路途远近2-3天可到达)。