实验动物    SPF 级雌性 BALB/c 小鼠，6~8周龄，16~20g  造模方法         于第1、8天以10%卵白蛋白（OVA）致敏液1ml腹腔注射致敏；第15天以OVA激发液开始雾化激发，并将大鼠置于一透明密闭的容器（1000px*1250px*1500px）中，给予大鼠1% OVA  60ml雾化吸入，中等雾量，1次/天，每次30min，每周激发5次，以大鼠出现呼吸加快、口唇发绀、站立不稳等表现为激发成功，连续激发8周。正常对照组以生理盐水进行腹腔注射及雾化吸入。

实验动物    健康，雄性，SD大鼠，（250+50）g 造模方法       大鼠麻醉后，经口气管插管，连接小动物呼吸机。在胸骨左缘扪及心脏搏动处纵行切开皮肤约75px，逐层钝性分离皮下组织、肌肉，于第四肋间开胸并以开睑器固定，小心提起心包并剪开，轻压右侧胸腔，充分暴露心脏、血管。在肺动脉圆锥和左心耳之间，以左冠状静脉主干为标志，用棉签拨起左心耳，于左心耳根部下方2mm处进针，进针深度0.5mm，实验组以6/0缝线结扎左冠状动脉前降支，对照组在相同位置进针穿线，但不结扎动脉。完成后清楚胸腔内积血，并立即关胸并用注射器抽空胸腔内气体，以恢复负压，将肌肉层和皮肤分别缝合。术后给于青霉素80万U肌注3天。

动物规格   SPF 级，成年、雄性，Scid 小鼠  造模方法1、电凝法制作小鼠右侧MCAO 模型（客户没有提供操作方法，以下为文献上的）：大鼠侧卧位固定于手术台，沿左（右）外耳道与左（右）眼外眦连线的重点垂直于连线切开皮肤约50px，手术显微镜下暴露颧骨弓和颞前窝，在颧骨和鳞状骨联合的前下方约2mm处钻孔开颅。显微镜下刺破硬脑膜，在嗅束与大脑中动脉交界处轻挑起大脑中动脉，电凝烧灼嗅束内1mm至大脑下静脉之间的大脑中动脉。假手术仅挑起大脑中动脉而不电凝灼烧。术中注意止血，术后缝合切口，腹腔注射0.2ml生理盐水，以补充术中和术后的体液流失，大鼠保持侧卧位，保温维持肛温在37℃左右，注意保存呼吸道通畅。2、线栓法

实验动物      健康6月龄新西兰成年大白兔，雌雄不限  造模方法      戊巴比妥钠50mg/kg耳缘静脉注射麻醉并维持。常规剪毛，消毒。取兔大腿外侧入路，切开皮肤，皮下组织，切开深筋膜，从股外侧肌与肱二头肌之间的外侧肌间隙钝性分离进入，显露股骨干。按股骨干前凸的弧度预弯钢板，电钻分别前后方向钻4个螺丝钉孔。分别按实验设计在股骨中断切除相应长度的骨膜和骨干，制造实验性骨缺损，以普通四孔钢板螺丝钉固定股骨。在四孔钢板的第1、2和第3、4颗螺丝钉之间分别捆一道钢丝。冲洗伤口后分层缝合。肌注青霉素40万U，1次/d，共3d 。同一条件下分笼饲养，饲料喂养。

1、高脂饮食建立ApoE-/-小鼠AS模型实验动物  第8周龄ApoE-/-雄性小鼠，体重23-25g造模方法       高脂饮食配方：按照3%胆同醇、0.5%胆酸钠、5%白糖、10%猪油、5%蛋黄粉、76.5%标准饲料比例配制而成。        ApoE-/-小鼠36只，普通饲料适应性喂养lW后，随机分配到普通饮食对照组、高脂饮食组、高质饮食+小剂量黄芩苷组和高脂饮食+大剂量黄芩苷组，每组9只。对照组继续给予普通饲料喂养；其余27只用高脂饲料喂养(3-7g/d)，喂养6周后高脂饮食+大、小剂量黄芩苷组给予黄芩苷灌胃，普通饮食对照组和高脂饮食组给予等量生理盐水。  检验：          石蜡切片做HE染色观察粥样硬化血管段的内膜和斑块等病理形态学特征病根据公式计算斑块相对面积（斑块相对面积=斑块面积/血管腔面枳），判断AS模型是否成功。

细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变可分为三个时期：I期，细胞核呈波纹状或折缝样，部分染色质浓缩；II期，细胞核染色质高度凝聚、边缘化；III期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。Hoechst为一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，与双链DNA结合后在荧光显微镜下能够观察细胞核的形态变化，常被应用于细胞凋亡的检测。细胞的保存于运输；复苏好的细胞，灌满培养基常温运输；冻存细胞液氮保存运输；实验外包: 1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建9.SCI论文：SCI论文评估建议、SCI论文设计咨询、SCI论文统计资料处理、SCI论文实验操作咨询、SCI论文编修翻译等

小鼠采用氯胺酮麻醉（55mg/kg），辅以肌松剂甲苯噻嗪（15mg/kg）。我们采用90号聚乙烯管行气管插管后连接小动物呼吸机，通气量控制在250-300毫升/分钟，呼吸频率为110-130次/分钟；中心体温控制在36-37℃。待小鼠麻醉后，取右侧卧位，于第四或第五肋间隙进入胸腔。剥离心包膜，并以7-0丝线距离左心耳下缘2毫米左右水平右行穿过左前降支下方，在左室与右房交界处出针，在结扎左前降支时连同一10号聚乙烯管一同结扎，行缺血实验。在缺血后，移除10号聚乙烯管，恢复再灌120 min后行TTC染色检测梗死面积。

实验动物   健康，成熟未交配过的雌性，SD大鼠，220~250 g   造模方法（附件8）（1）进行阴道涂片检查,在大鼠的动情期建立模型。（2）麻醉:手术在无菌条件下进行,10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠(0.2ml/100 g)。（3）固定、备皮:将大鼠四肢及头部固定于手术板上,腹部剪毛备皮。（4）开腹:络合碘溶液消毒皮肤,从尿道口上端约75px处正中纵向切开皮肤约2~75px，逐层分离进入腹腔,在膀肤后方找到子宫,暴露子宫,见大鼠子宫呈“V”型,在两子宫下端汇合处用血管夹夹住，用无齿镊将一侧子宫拉直,子宫周围垫有无菌纱布，在宫角(子宫输卵管交界处)下0.5 cm处以1 ml针管沿子宫长轴进入宫腔,注入液体,见子宫膨隆且针孔处无明显液体流出(注入液体约0.3ml),即停止注药,保持针头在宫腔不动,2 min后再次注药,如此重复,使液体在宫腔贮留一定时间。对照组宫腔注入生理盐水共约0.5 ml,贮留5 min,实验组宫腔注入95%无水乙醇,分别贮留5 min(用量约0.5 ml)和10 min(用量约0.8 ml),将针头拔出，另外一侧子宫操作如上。反复冲洗腹腔,用棉垫将冲洗液吸干,恢复子宫解剖位置,逐层关腹"苏醒后,将大鼠移入笼中,放回动物房。

石蜡包埋白片是指已经切好但尚未染色的片子，是用切片机从蜡块上切下来的一张厚度3-5微米的蜡片，然后贴在载玻片上，由于没有用盖玻片盖在组织上，容易被刮下来，从而破坏形态。石蜡白片未经染色，可以用于HE染色，行免疫组化检查，特殊染色等病理形态学检查；没有封片，因此可以把组织刮下来行基因检测等分子病理学检查。拿到白片要注意，不能用手去触摸蜡片，也不要把玻片打碎，两张白片之间不能相互接触。

 实验动物    新西兰大白兔  造模方法        3 %戊巴比妥钠( 1mL/kg)耳缘静脉麻醉,人工通气，应用 12 导心电生理记录仪同步记录体表心电图。胸骨正中开胸, 剪开并悬吊心包 ,暴露心房, 分离出肺静脉 ,在肺静脉任意处使用自制双电极电刺激, 电极间距 5 mm 。AF诱发:在基础周长为300 ms和200 ms时加S2、S3直到S4 的早搏刺激 ,在 S1S2 固定于心房有效不应期30 ms 时引入第2个早搏刺激 S3 , S2S3 从基础周长的 80 %开始 , 以10 ms 步长反扫至S3落入不应期 。若2 个早搏刺激仍不能诱发 AF ,则以同样的方法引入第3个早搏刺激S4。如果以上方案不成功 ,则用周长为 100 ms 的 Burst 刺激 20~30 s 进行AF诱发 ,刺激强度为 2 倍舒张期阈值 。如果经上述方法仍未能诱发出 A F , 则为 AF 诱发不成功