茜素红（Alizarin Red,AR）是众多染料中的一种，属于蒽醌类化合物，被广泛用于染料、酸碱指示剂，具有较高毒性、复杂结构以及化学需氧量（COD）值大等特点，是有代表性的染料之一。实验步骤1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min，自来水洗。2、茜素红染色：切片用茜素红染液染5-10min，自来水洗，将切片放置烤箱内烤干。3、透明封片：切片入干净的二甲苯透明5min，中性树胶封片。4、显微镜镜检，图像采集分析。结果判读：钙盐沉积处呈深红色，背景淡红色或者近无色。实验外包: 1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建9.SCI论文：SCI论文评估建议、SCI论文设计咨询、SCI论文统计资料处理、SCI论文实验操作咨询、SCI论文编修翻译等

transwell侵袭实验，其实原理简单地说就是用一层膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开，细胞放在低营养的培养液里，为了找吃的，细胞会往高营养的培养液里面跑，但是有膜挡着，所以要穿过膜才行。在膜上涂上一层基质胶，模仿细胞外基质，细胞要把基质消化了才可以从低营养的培养液跑到高营养的培养液里面，最后检测高营养的培养液里细胞量就可以知道细胞的侵袭能力。实验材料（1）Matrigel (BD 5mg/ml)，-20℃保存（2）其余材料同迁移实验 操作步骤（1）Matrigel在4℃过夜融化；（2）用4℃预冷的无血清培养基稀释Matrigel至终浓度1mg/ml，冰上操作；（3）在chamber上室底部中央垂直加入100μl稀释后的Matrigel，37℃温育4－5小时使其干成胶状；（4）后续步骤同迁移实验（1-8）。 注意事项（1）Matrigel在过高或过低的温度均易凝固，因此操作所需枪头和离心管应提前在4℃预冷；（2）铺胶时保证液面水平，胶的厚度均匀一致，切勿产生气泡；（3）其他注意事项同迁移试验实验外包: 1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建9.SCI论文：SCI论文评估建议、SCI论文设计咨询、SCI论文统计资料处理、SCI论文实验操作咨询、SCI论文编修翻译等

包埋，就是将已经经过固定，脱水，透明，浸蜡的组织块从最后的蜡浴取出置入充满熔融石蜡的包埋框内，包埋成块，使组织和包埋剂相熔一体并迅速冷却，这个程序称为包埋。包埋剂凝固后，进一步加强了组织的硬度和韧度而便于进行切片。 

Edu细胞增殖检测EdU可以在DNA复制的时候掺入到新合成的DNA链中,通过一个“Click”反应,把荧光基团标记到新合成的含有EdU的DNA上面,这样我们就能通过检测荧光而知道细胞的增殖情况了。 操作步骤1. 细胞培养：取对数生长期细胞，以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中，培养至正常生长阶段2. 药物处理：根据实验需要进行各种药物处理3. EdU标记：用细胞培养基按1000：1的比例稀释EdU溶液 (试剂A)，制备适量50μM EdU培养基； 注：1)EdU浓度与孵育时间相关，短时间孵育(<2h)宜采用高浓度(10~50 μM)，长时间孵育(>24h)宜采用低浓度             (1~10μM)；           a.如果需配置10μM EdU培养基，需调整为5000：1稀释比例；             b.配置好的培养基的保存时间取决于培养基的性质。4. 细胞固定5. Apollo染色6. 图像获取及分析

尼氏染色即Nissl染色法，用来鉴定神经元胞体中的尼氏体，是最常用的神经细胞染色，在该染色中，尼氏小体清晰可见，可区分轴突和树突等。染色结果：尼氏体呈紫色、细胞核呈蓝色。常用的碱性染料有Cresyl violet (焦油紫，甲酚紫，克紫）；thionine (硫荲)；tolridine blue (甲苯胺蓝)等尼氏染色步骤：1.常规脱蜡至水（二甲苯I、二甲苯II各15min，然后梯度酒精脱水：100%I、100%II、95%、90%、80%、70%、50%各5min）2.蒸馏水冲洗3次，每次5min3.然后置于60℃温箱用1%甲苯胺蓝染色40 min(或用焦油紫染色30s)4.蒸馏水洗净染料后，于分别置于70%，80%和95%以及100%乙醇中脱水，再用二甲苯透明5.最后用中性树胶封片。实验外包:1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建9.SCI论文：SCI论文评估建议、SCI论文设计咨询、SCI论文统计资料处理、SCI论文实验操作咨询、SCI论文编修翻译等

TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感复合物，1894年首次合成用来检测种子的生存能力，1958年开始用来染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体，与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白。实验外包:1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建9.SCI论文：SCI论文评估建议、SCI论文设计咨询、SCI论文统计资料处理、SCI论文实验操作咨询、SCI论文编修翻译等

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质功能的实验方法。Co-IP是在IP的基础上衍生出来的实验方法，是证明蛋白相互作用的金标准。通过检测免疫沉淀下来的蛋白复合物来证实中是否存在与X蛋白相互作用的Y蛋白。 其基本原理是，在细胞裂解液中加入抗X蛋白的抗体，孵育后再加入与抗体FC片段特异结合的Protein A/G-琼脂糖微珠，若细胞中有与Y结合的X蛋白，就可以形成这样一种复合物： Y—X—抗X抗体—Protein A或G ，经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，复合物又被分开。然后经免疫印迹或质谱检测目的蛋白。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。实验外包:1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建9.SCI论文：SCI论文评估建议、SCI论文设计咨询、SCI论文统计资料处理、SCI论文实验操作咨询、SCI论文编修翻译等

一、细胞迁移是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程。细胞迁移是正常细胞的基本功能之一，是机体正常生长发育的生理过程，也是活细胞普遍存在的一种运动形式。胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等过程中都涉及细胞迁移。检测细胞迁移能力的实验包括划痕实验和Transwell实验。 二、实验原理 细胞划痕实验是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间是一种简单易行的检测细胞运动的方法，实验成本低，可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。Transwell的基本原理是将transwell小室放入培养板中，小室内称为上室，培养板内称为下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，上室内添加上层培养液，下室内添加下层培养液。将细胞种在上室内，由于膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。 三、实验流程Transwell实验 1. 采用未铺 Matrigel 胶的 Transwell 小室用于实验； 2. 制备细胞悬液； 3. 接种细胞； 4. 检测穿过的细胞数； 5. 结果统计分析。 四、服务说明 1. 客户提供：细胞株(冻存株或培养好的细胞)，所需药品，药物处理方式和浓度。 2. 公司提供：基本实验步骤、图片、数据分析结果、剩余药品。 3. 实验周期：大约2-3周左右，具体需要根据细胞生长情况及实验内容而定。注意事项（1）根据待测细胞体积大小选择合适孔径的chamber。常用的为8.0-μm孔径（如AGS细胞），如果细胞体积较大可以考虑用10-μm孔径；（2）根据待测细胞的迁移能力强弱调整细胞数和迁移时间。常规24-well chamber接种细胞数约为2≈5×104/well，迁移时间12≈36小时；（3）由于Corning公司的24-Transwell内含12个独立的chamber，为了避免操作污染，每次实验可预先另准备一块24孔普通培养板（Corning）；（4）如果细胞迁移能力较弱，下室液体可用3T3细胞无血清培养24小时获得的上清加50μg/ml FN（Fibronectin），具体可查阅相关文献；（5）细胞悬液加入膜中央，尽量保证液面水平；（6）固定染色擦洗时动作小心，避免擦去膜底面的细胞。但一定要充分擦净膜表面上未迁移的细胞，以免影响读数。尤其是膜周边上可用细牙签或小镊子缠上湿棉花擦洗，但要小心避免将膜戳破；（7）Chamber和膜上都无法标记，操作时应小心避免混淆实验组和对照组；（8）充分晾干，避免残留水分导致镜下聚焦不一致。 

一、组织和细胞标本类型：（一） 组织标本类：1、 石蜡切片：组织形态保存好2、 冰冻切片：抗原性保存好（二）细胞标本类：1、组织印片 2、细胞培养片（细胞爬片） 3、细胞涂片二、组织取材1、脑组织和神经组织应采用灌注固定后，再进行后固定。2、组织取材注意事项：（1）标本新鲜：组织要求离体后30min~2h内浸入固定液，尤其是开展分子生物学工作。动物组织取材要求心脏还在跳动时取材。（2）注意防止人为因素的影响 刀和剪要快，避免挤压。（3）组织块的大小 厚为0.1~0.3cm，大小可根据需要而定。三、活细胞标本的制备法（1）细胞大量培养后，经消化将细胞制成悬液（106）涂在涂有切片粘合剂的载玻片上，凉干后固定。（2）将细胞直接培养在盖玻片上。（3）将细胞直接培养在6孔或9孔板上，经固定后可行IHC。 

实时荧光定量PCR的化学原理1、染料法：SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有激发波长的染料。在游离状态下，SYBR Green I不能发出荧光，一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。2、探针法：TaqMan 探针法是PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。PCR实验流程一、引物设计二、RNA提取三、CDNA逆转录四、PCR扩增五、数据导出和分析客户需要提供；基本检测信息：1、样本类型（组织、血液、细胞、DNA、RNA、cDNA）及种属；实验的目的（靶基因的mRNA、MicroRNA或lncRNA定量、单核苷酸多态性分析、甲基化检测）；需要检测基因的中英文名称。2、样本量：PCR检测样本根据不同组织中DNA和RNA丰度高低，所需要的样本量也不同，一般组织样本不低于50mg、细胞样本不低于10^5，全血样本不少于300ul就可以检测多个基因；（建议动物组织或临床样本每组不低于6例，细胞样本建议做三复孔（提取逆转录后扩增时同一样本加三个平行孔），便于统计分析）实验周期：PCR实验周期为10个工作日实验外包:1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建9.SCI论文：SCI论文评估建议、SCI论文设计咨询、SCI论文统计资料处理、SCI论文实验操作咨询、SCI论文编修翻译等