爱思益普建立了完善的靶点验证和方法学构建开发平台，助力基于新靶点的研究和化合物筛选。 对于全新靶点，爱思益普建立了从头合成的蛋白表达能力，结合SPR（Biacore 8K等）平台，提供完整的新靶点验证筛选能力。研究内容1. 蛋白纯化• 蛋白表达系统(E.coli, Sf9昆虫细胞,哺乳动物细胞)• 蛋白标签(His, GST,  FLAG, Avi, MBP, Fc-fusion)• 蛋白鉴定(SDS Page, Brandford test, LC-MS analysis, Activity test) 2.酶学研究• 结合试验(HTRF, Alpha )， ADP 定量 (ADP-Glo, etc.)• 磷酸化底物检测 (Ulight, HTRF, Lantha, Alpha)• 细胞磷酸化蛋白检测(AlphaScreen, HCS, WB)• 激酶, 表观遗传酶学, E3. DUBs, 磷酸酶, 蛋白酶, 解旋酶, 核酸酶3.细胞系工程• 建立了超过1000 株细胞株• 报告基因，突变, 标签和无标签表达• 过表达稳转细胞株 (Flip-In, lentiviral and Retroviral system, Neon electroporation, T-REx system, HiBiT and PPI systems etc.)• 敲出 (KO) 和敲入 (KI) ：CRISPR/Cas 9 system, siRNA, shRNA4.离子通道• 基于荧光功能筛选 (FLIPR)• 电生理实验(手动膜片钳和自动膜片钳QpatchII)• Panel screening (100+ targets validated)5.GPCR• GPCR 稳转细胞系构建• cAMP(HTRF; agonist/antagonist, CRE-BLA/Fluc)• 钙流(Flipr; IP-one, NFAT-Luc)• β-arrestin((PPI/NanoBRET)• Panel screening (100+ targets validated)6.核受体• 荧光偏振结合试验 (lantha)• 基于TaqMan的基因表达• 报告基因筛选(transient transfection, stable cell line)• Panel screening (30+ nuclear receptors)7.免疫-肿瘤靶点研究• 检查点阻断生化结合试验和细胞报告基因试验• 共培养报告基因试验• 全血, PBMC, T cell, Tregs, DC, B and NK cellular assays• 体外实验 MLR, co-culture, etc• 细胞因子释放试验FACS, ELISA8.Panel screening• Safety panel (47个/90个靶点)• 激酶谱 >400 assays validated (provide 207 and 310 panel screening)• 其他panels: TK family (76x), CDK family (16x) and Mini kinase (60x)• 定制激酶谱• 体外脱靶效应筛选(基于不同疾病靶点)• GLP hERG/心脏安全研究• Cell panel screening

我司利用损伤的DNA会激活PARPs酶通过NAD+使核蛋白进行聚腺苷二磷酸核糖基化，从而使组蛋白与DNA分离，通过对底物的生物素标记，检测PARPs的活性，来建立检测体系。研究内容聚ADP核糖聚合酶(PARPs)家族ADP核糖基化（ADPr）是蛋白质的一种可逆的、进化保守的转录后修饰过程，参与调节体内多种生物过程，在维持基因的稳定性和细胞凋亡等方面发挥着重要的作用。ADPr主要由ADP-核糖基转移酶（ART）蛋白超家族催化，研究最多的ADP-核糖基转移酶蛋白家族是聚腺苷二磷酸核糖聚合酶家族（PARPs）。聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）是一个蛋白质家族，它将ADP核糖单元从NAD+转移到目标核蛋白上，形成长支链的聚ADP-糖链。目前已经在哺乳动物体内发现17个PARP家族蛋白，被命名为PARP1-17。  PARP抑制剂是一种靶向聚ADP核糖聚合酶（Poly ADP-ribose Polymerase）的癌症疗法，是一种成功利用合成致死 (Synthetic Lethality) 概念获得批准在临床使用的抗癌药物。为此，对PARP抑制剂的研发已经成为抗癌领域的一个热点我司利用损伤的DNA会激活PARPs酶通过NAD+使核蛋白进行聚腺苷二磷酸核糖基化，从而使组蛋白与DNA分离，通过对底物的生物素标记，检测PARPs的活性，来建立检测体系。以下是部分PARPs系列酶测试的数据展示：组蛋白去乙酰化酶家族（HDACs）组蛋白去乙酰化酶（HDACS）催化组蛋白的去乙酰化，维系组蛋白乙酰化与去乙酰化的平衡状态，与癌相关基因转录表达、细胞增殖分化及细胞凋亡等诸多过程密切相关。我司为客户提供了HDACs系列相关的酶学化合物筛选服务。以下是部分HDACs系列酶测试的数据展示。

表观遗传（Epigenetics）是指DNA序列不发生变化，但基因表达却发生了可遗传的改变。这种改变可在生物体发育和细胞增殖的过程中稳定遗传给后代。其主要分子机制有：DNA甲基化、非编码RNA调控、组蛋白修饰、染色质重塑等。随着表观遗传学的深入研究，与其相关的疾病得以了解甚至攻克，极大推进了疾病研究和药物研发进程。表观遗传靶点是近十年以来出现的左右希望的一类成药靶点，这些靶点不仅与肿瘤学研究相关，而且对代谢、神经、炎症、心血管疾病研究也存在潜在影响。爱思益普专注新药靶点，助力新药发现。目前，已经构建多个靶点的药物筛选体系。图1.表观遗传相关靶点展示图图2.表观遗传相关靶点数据展示图

GPCR是一类重要的成药性靶点，超过800个成员，是最大的成药性靶点家族。FDA批准的药物中，超过25%的药物作用于GPCR靶点。 根据下游信号差异，爱思益普建立了基于荧光的多种筛选方法和平台，已经构建和正在优化的GPCR受体超过130个，并正在快速扩大，可以按客户需求定制。研究内容GPCR是一类重要的成药性靶点，超过800个成员，是大的成药性靶点家族。FDA批准的药物中，超过25%的药物作用于GPCR靶点。根据下游信号差异，爱思益普建立了基于荧光的多种筛选方法和平台，已经构建和正在优化的GPCR受体超过130个，并正在快速扩大，可以按客户需求定制。图1，爱思益普GPCR靶点药物开发能力布局 GPCR Receptor stable cell lines at ICEA1GCGR5-HT1AGPR52A2AGLP-15-HT1BGPR81A2BmGLP-15-HT1DGPR84A3rGLP-15-HT1EGPR55Alpha 1AGLP-25-HT1FGPR75Alpha 1BGIP5-HT2AGPR183Alpha 1DH15-HT2BAT1Alpha 2AH25-HT2CAT2Alpha 2BH35-HT4ANPY1RAlpha 2CH45-HT4BBDKRB2Beta 1M15-HT7AC5AR1Beta 2M25-HT7BNPFFR1 Beta 3M35-HT7DNPFFR2CB1M4SSTR1PTAFRCB2M5SSTR2GABAB(1a)CCR1deltaSSTR3mGlu5CCR2kappaSSTR4CysLT1CCR3muSSTR5MC1CCR4muAVPR1A MC4CCR5muAVPR1BNK1CCR6NOPAVPR2MT1CCR7NOPS1P1MT2CCR8NOPS1P2TAAR1CCR9ADP1S1P3SMOCCR9BDP2S1P4NK1CXCR1EP1S1P5NK2CXCR2EP2LPA1NK3CXCR3EP3LPA2CASRCXCR4EP4LPA3OX1CXCR5FPLPA4OX2CX3CR1TPLPA5GnRHD1IPFPR1CCK1D2LP2Y12FPR2CCK2D2SD4ETAETBD3D5图2 爱思益普已经构建的GPCR靶点图3 GPCR抗体筛选平台

钙通道对Ca2+的通透具有高度选择性， 钙通道开放使钙离子进入细胞，从而产生特定的生理功能。钙通道是重要的药物作用靶点，与心血管系统疾病，疼痛，阿尔茨海默症等都密切相关。

Cell Panel Screening用于评价测试化合物对不同人类癌症细胞系的治疗效果。爱思益普（ICE）已有500株细胞，如图1所示，准备就绪用于化合物基于Cell Panel的活力筛选。同时，ICE已构建了2个固定的Cell Panel和一个Blood Cell Panel。其中120 株细胞组成的Cell Panel包含有18个癌种；60株细胞组成的Cell Panel包含有16个癌种，Blood Cell Panel由50株细胞组成且含有6种血液瘤类型。目前，ICE已完成了细胞扩库、阳性药（PDD; Staurosparine，STS；AZD1775; Talazoparib等）验证等工作以助力新药研发勇攀高峰。ICE’s mini cell panel screening 如图2所示，其敏感性如图3所示，及ICE’s cell panel screening数据展示如图4所示。图1. ICE tumor types图2. ICE’s mini cell panel screening图3. ICE’s sensitivity of cells

目前发现48个成员，与代谢性疾病关系密切；建立了以荧光素酶报告基因为主的核受体筛选平台　研究内容目前发现48个成员，与代谢性疾病关系密切；建立了以荧光素酶报告基因为主的核受体筛选平台 已建立的核受体列表Nuclear receptor familyTargetsThyroid hormone receptorTRα, TRβPeroxisome proliferator-activated receptorLXRα, LXRβ, FXR, FXR-βRetinoic acid receptorRARα, RARβ, RARγLiver X receptor-likeLXRα, LXRβ3-Ketosteroid receptorsGR, MR, PR, AREstrogen receptorErα, ErβExample：荧光素酶报告基因验证

安全药理学 ICH S7A（2001年）要求安全药理学需要考虑药物的脱靶效应，“Ligand binding or enzyme assay data suggesting a potential for adverse effects” should be considered in the “Selection and Design of Safety Pharmacology Studies ” (ll.B.3 ）。制药公司的经验表明，监管机构认为这一数据很重要，但是测试内容、最佳测试时间或最佳测试方式尚未明确要求。我们参考Eurofins的SAFETYscan 47，SafetyScreen87，BioPrint® Panel132，以及Roche 50及Abbvie 70等多个国际药企的经验，建立了SafetyOneTM 47个靶点以及SafetyMaxTM 90个靶点的safety panel，帮助客户在先导化合物优化的阶段早期发现化合物潜在的脱靶效应风险。 爱思益普脱靶效应筛选Panel优势：1. 是基于功能的筛选，关注最终功能，假阴性和假阳性远远优于binding assay。2. 能够同时进行激动效应和抑制效应的测试，提供更加全面的药物脱靶效应信息。3. 提供中英文报告，全面支持中美IND申报。4. 周期短，3-4周 爱思益普Safety Panel包含靶点列表

钠通道是细胞膜上选择性允许钠离子跨膜流动的蛋白质孔道，开放主要受电压控制，维持细胞膜的兴奋性及动作电位传导。生理功能：神经系统的信号产生，传导；肌肉收缩；心脏兴奋的形成和传导，腺体分泌等。钠通道有9个亚型，NaV1.1-NaV1.9爱思益普构建了人源性和鼠源性钠通道稳定表达细胞系及原代细胞检测方法，用于钠通道靶点的药物筛选。

爱思益普激酶谱筛选（ICE Kinase Panel）激酶谱包括分布在AGC、CAMK、CMGC、CK1、STE、TK、TKL、脂质和非典型激酶家族中的207个激酶，以及重要的突变型。可用于评估各阶段的化合物选择性。建立了多个灵活的小激酶谱，包括TK激酶家族、CDK激酶家族等，满足不同的客户需求功能性筛选，激酶活性更准确。筛选周期短至一周以内。激酶谱筛选验证数据CabozantinibLarotrectinib(Loxo101)Suntinib