医药生物行业生命科学领域产业链系列报告显示，随着科研发展与对新靶点的持续追求，基因修饰动物凭借可以精准满足用户需求的特点，正快速发展为模式动物市场主流产品。GMI 数据披露，2019 年全球基因修饰动物模型市场规模约为 100 亿美元，预计 2023 年将增至 141 亿美元，占动物模型服务市场近67%[1]。技术进步重塑市场格局，基因修饰模式动物地位日益凸显。相较于野生型的模式动物，基因修饰模式动物能够对目标基因开展功能缺失或功能获得的研究，达到人类生理或病理更精确的模拟，因此更适合探索研究人类基因功能和人类疾病致病机制，是目前行业重要的发展方向。这其中Cre工具鼠和疾病模型鼠亦扮演着举足轻重的角色。一起围观下百奥动物的蓝宝小家伙带来的好物分享吧～ 鼠界“爱德华”--Cre工具鼠系列INTRODUCTION基因敲除鼠常被用来研究基因的功能，但据研究报道，小鼠有超过30%的基因敲除后导致了胚胎致死或者出生后不久死亡[2]，从而无法对该基因在体内发挥的生理功能进行更好的研究。为了解决这个问题，科学家发现了Cre/loxP系统。 1 什么是Cre/loxP系统？Cre-loxp 系统来自于P1 噬菌体，是噬菌体感染病毒实现寄生的“杀手锏”。 Cre重组酶(cyclization recombination enzyme)，它是一种由343个氨基酸组成的单体蛋白，可以引发loxP位点的DNA 重组。loxP是一段长34bp的DNA序列，是Cre重组酶识别的位点，被称为loxP位点。Cre重组酶的调控方式有多种多样，有如特异性基因启动子调控的Cre（Promoter-regulated Cre）、配体或药物诱导的Cre（Inducible Cre）、荧光报告的Cre（Fluorescent Cre）以及同时被不同启动子调控的Cre（Split Cre，NCre 和CCre）等。不同调控方式的选择造就了不同的Cre工具鼠。 2  Cre/loxP系统在基因编辑大小鼠中的应用根据Cre-loxp 系统工作的原理，在基因编辑大小鼠中，分别制作Cre重组酶工具大小鼠和带有loxp位点的flox鼠，通过杂交可以实现组织特异性基因敲除，这样可以避免全身性敲除引起的纯合致死情况。你是不是也正在经历实验设计选不到合适Cre鼠的窘境？百奥动物自主开发了一系列Cre工具鼠，助力不同应用场景的科学研究。B-Pgr-iCre小鼠基本信息应用领域生殖系统功能研究表型分析ROSA26-CAG-LSL-tdTomato mice是公司自主研发并验证成功的tdTomato报告小鼠品系。在与Cre小鼠交配后，剔除stop元件，可表达tdTomato红色荧光蛋白。本实验方案利用B-Pgr-iCre mice与CAG-LSL-tdTomato报告小鼠交配，iCre重组酶可介导子代小鼠中表达Pgr的细胞删除LSL元件，表达tdTomato红色荧光蛋白，荧光显微镜下可观察到红色荧光信号，可证明表达Pgr的细胞成功表达iCre重组酶并介导基因重组功能。上图为小鼠不同器官中实验结果的显示，(a)代表小鼠的生殖系统，包括子宫、输卵管和卵巢。(b)代表小鼠的乳腺。IF 检测 tdTomato 红色荧光蛋白和绿色荧光标记 Pgr(progesterone) 的表达。纵轴代表不同基因型的小鼠，横轴代表不同的荧光标记。B-Pgr-iCre(Mut/+)；CAG-tdTomato(Mut/+) 小鼠表现出明显的 tdTomato 红色荧光蛋白表达。B-Cdh5-iCreERT2 mice小鼠基本信息应用领域心血管系统，肿瘤和细胞分化机制研究表型分析ROSA26-CAG-LSL-tdTomato mice是公司自主研发并验证成功的tdTomato报告小鼠品系。在与Cre小鼠交配后，剔除stop元件，可表达tdTomato红色荧光蛋白。本次实验中B-Cdh5-iCreERT2 mice与ROSA26-CAG-LSL-tdTomato mice交配，可实现Cdh5-iCreERT2(Mut/+);CAG-LSL-tdTomato(Mut/+)双阳性小鼠在tamoxifen诱导下，在血管淋巴管内皮细胞特异性表达tdTomato红色荧光蛋白。上图为双阳性小鼠主要器官中 tdTomato 和 CD31 的免疫荧光图像。CD31是内皮标记物。（比例尺：25 μm）百奥动物Cre工具鼠产品列表向上滑动查看列表 高能“cosplay”--疾病模型鼠系列INTRODUCTION疾病动物模型是研究人类疾病机制、诊断预后标志物发现、药物筛选和评价等的重要支撑条件。利用基因工程技术对基因进行修饰，可建立敏感动物品系和与人类疾病相同的疾病模型进行药物筛选和药效研究，这类动物可培育为稳定遗传的品系，且具有特定的病理特征，已经成为药物快速筛选的重要手段。百奥动物建立了丰富的疾病模型资源，为疾病治疗药物评价提供稳定有效的模型资源，并能够基于此为广大合作伙伴提供符合国际水平的药理药效服务。血友病模型--B-F8 KO 小鼠F8又称AHF，FVIII（coagulation factor VIII），是位于X染色体上编码凝血因子VIII的基因，在外源性和内源性凝血途径中都不可或缺。它作为凝血因子IXa的辅助因子参与凝血过程，同时借助于Ca2 +和膜磷脂，形成复合物以激活X因子，并进行一系列后续的凝血反应。F8基因的缺失导致严重的凝血障碍，形成伴X染色体隐性遗传的A型血友病。F8基因敲除模型为血友病患者的药物筛选提供了重要的临床前借鉴意义。‍模型数据验证将实验动物随机分组，分别尾静脉注射给予生理盐水或1mg/kg诺其，给药30min后腹主动脉采血检测血凝指标：活化部分凝血活酶时间 APTT。结果显示：F8 KO小鼠APTT值远高于WT小鼠，给予重组人凝血因子VIIa后，APTT恢复至正常值。结果证明：B-F8 KO小鼠可以作为抗凝血药药效验证的有力工具。高血糖和肥胖症模型--B-ob/ob 小鼠瘦素（Leptin）是由肽链构成的肽类激素。主要由脂肪细胞分泌,其表达主要在白色脂肪组织。此外,在心肌、骨骼肌、胎盘、肺、乳腺上皮和胃黏膜等均有表达。在功能上能够有抑制食欲，增加能量消耗，抑制脂肪合成促进其分解。胰岛素可促进瘦素的分泌，反过来瘦素对胰岛素的合成、分泌发挥负反馈调节。ob是瘦素的编码基因，百奥动物利用基因编辑技术将ob基因2、3号外显子敲除制备的B-ob/ob小鼠，具有肥胖症和高血糖症状，是研究高血糖和肥胖症的有力模型。模型数据验证纯合B-ob/ob小鼠4周龄后体重和血糖(-/-)均持续高于对照组。抗人GCGR抗体药物crotedumab在B-ob/ob小鼠体内的药效。(A)B-ob/ob小鼠的体重变化。(B-C)非空腹血糖和空腹血糖测量。将8-10周龄的雄性B-ob/ob小鼠随机分为2组，每组6-7只。给药组第0天进行给药，第0、3、7天测定非空腹血糖，禁食6小时后测定空腹血糖。(D)Crotedumab可改善葡萄糖耐量。(E)血糖含量曲线下面积。小鼠在自由取水的条件下禁食6h,尾尖取血测定空腹血糖(0 min)，腹腔注射葡萄糖2 g/kg,在指定时间测定血糖。(F-G)胰高血糖素和胰岛素测量。结果显示，crotedumab在禁食和非禁食状态下均具有降糖作用，同时能够改善B-ob/ob小鼠的葡萄糖耐量。百奥动物疾病模型鼠产品列表百奥动物可提供多种稳定优质的基因编辑自发疾病动物模型，如肿瘤模型鼠(B-p53 KO 小鼠，B-p53 KO大鼠)，高血糖模型鼠（B-ob/ob小鼠），凝血模型鼠（B-F8 KO小鼠，B-F9 KO小鼠）等，提供客户用于相关研究。向上滑动查看产品列表意犹未尽？想要共享蓝宝的更多好物清单，欢迎扫描下方二维码查看或者来电咨询。参考资料：[1]https://mp.weixin.qq.com/s/rhhEFL5A9KhVKAULO29COw[2]Huimin Zhang, Qi Zheng, Ruby Yanru Chen-Tsai；Establishment of a Cre-rat resource for creating conditional and physiological relevant models of human diseases. Transgenic Res. 2021 Feb;30(1):91-104

肿瘤相关髓系细胞（tumor-associated myeloid cells, TAMC）是肿瘤微环境（TME）中重要的组成部分，具有异质性，在肿瘤微环境中可以发挥不同，甚至是相反的作用，如免疫抑制或免疫刺激。靶向TAMCs作为单一疗法或与化疗、免疫疗法联合应用的研究正在火热进行中。深入研究TAMCs在肿瘤中的功能和作用机制将有助于发现新的治疗方法。研究最多的肿瘤相关髓系细胞包括单核细胞、肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）、树突状细胞（DC）、癌症相关循环中性粒细胞、肿瘤相关中性粒细胞（TANs）和骨髓来源抑制细胞（MDSCs）。TAMC的主要功能是调节淋巴细胞行为进而形成免疫刺激或免疫抑制性TME，从而抑制或促进包括肿瘤细胞的恶性克隆进化、生长、存活、侵袭、播散和转移、血管生成在内的各个肿瘤发展阶段。单核细胞单核细胞是一组异质性的单核吞噬细胞，分为经典型单核细胞、中间型单核细胞和非经典型单核细胞，在炎症期间循环外周血中发挥先天免疫功能。肿瘤发展的不同阶段，不同的单核细胞亚群表现出不同甚至相反的作用。从机制上讲，中间型单核细胞经肿瘤细胞刺激后，促炎细胞因子TNF- α和白细胞介素12（IL-12）的产生增加，而抗炎细胞因子白细胞介素10（IL-10）的产生减少，并对肿瘤细胞产生直接的细胞毒性，促进肿瘤细胞凋亡。经典型单核细胞产生VEGF，促进肿瘤细胞外渗，导致转移。相比之下，非经典型单核细胞在吞噬肿瘤细胞衍生微粒后被激活，从而减少肿瘤细胞的转移。肿瘤中单核细胞的功能肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)巨噬细胞作为单核吞噬细胞系统，在组织稳态和炎症中起着关键作用。巨噬细胞分为两个主要亚群，M1和M2巨噬细胞，在功能上是异质的。M1巨噬细胞是对抗微生物感染的第一道防线，具有很强的抗原呈递能力诱导强烈的Th1反应。在脂多糖（LPS）、IFN-γ和粒细胞-巨噬细胞刺激因子（GM-CSF）的作用下，M1巨噬细胞经历经典激活，并优先分泌抗菌分子和促炎细胞因子。M2巨噬细胞在限制免疫反应、诱导血管生成和组织修复方面起着关键作用。在白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素13（IL- 13）、IL-10和CSF-1的作用下，M2巨噬细胞发生选择性激活并优先分泌抗炎细胞因子。TAMs在肿瘤中的作用树突状细胞(DC)DC是最有效的抗原呈递细胞（APCs），连接先天免疫和适应性免疫，在生理条件下具有表型和功能异质性。在对微生物感染的反应中，细胞外微生物蛋白通常被成熟DC吞噬或内吞，并通过MHC II分子呈递给CD4+ T细胞。相比之下，胞质微生物蛋白通常通过MHC I分子呈现给CD8+ T细胞。TME浸润的DC包括不同发育阶段的树突状细胞亚群，这些肿瘤相关树突状细胞根据不同的细胞亚群和肿瘤分期，发挥免疫刺激或免疫抑制作用。DC在肿瘤中的作用粒细胞粒细胞可大致分为癌症相关循环中性粒细胞、肿瘤相关中性粒细胞（TANs）以及其他中性粒细胞。癌症相关循环中性粒细胞这些与癌症相关的循环中性粒细胞由功能异质性亚群组成，是循环外周血的多形核吞噬细胞，具有对抗微生物病原体的先天免疫功能。在癌症患者中，特别是在晚期和转移后，循环中性粒细胞数量增加，高中性粒细胞与淋巴细胞比率（NLR）与侵袭性癌症相关。肿瘤相关中性粒细胞（TANs）研究表明TME中的TANs可促进肿瘤细胞增殖、外渗和迁移，在肿瘤发展和转移中起着关键作用。TANs可释放弹性蛋白酶等颗粒内容物，促进肿瘤增殖和侵袭细胞；分泌IL-1β和MPPs促进肿瘤细胞外渗到转移前壁龛，从而促进癌细胞的扩散；激活TLR通路，促进肿瘤细胞的迁移、黏附、侵袭和转移。除促肿瘤作用外，TANs还被证明通过产生ROS和TRAIL介导肿瘤细胞的细胞毒性。研究也表明TANs与TME中的淋巴细胞相互作用并调节其功能。其他粒细胞除了嗜中性粒细胞（neutrophilic），其他类型的粒细胞，如嗜酸性粒细胞（eosinophils）和嗜碱性粒细胞（basophils），对肿瘤也有影响。研究表明嗜酸性粒细胞具有抗肿瘤活性，对各种癌细胞都表现出直接的或间接的细胞毒性，从而抑制肿瘤生长。中性粒细胞在肿瘤中的作用骨髓来源抑制细胞（MDSCs）MDSCs是一组异质性的髓系祖细胞和处于不同发育阶段的未成熟髓系细胞，它们在血管中循环。在感染时，MDSCs迅速扩张并分化为粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞，在调节免疫反应和组织修复中发挥重要作用。肿瘤相关的MDSC由两个主要亚群体组成，粒细胞骨髓来源抑制细胞（GrMDSCs）和单核细胞骨髓来源抑制细胞（MoMDSCs）。GrMDSCs在表型和形态上与中性粒细胞相似，MoMDSCs在表型和形态上与单核细胞相似，研究表明GrMDSCs和MoMDSCs均参与T细胞介导的免疫抑制。MDSCs及其亚群在肿瘤中的作用髓系细胞在肿瘤免疫治疗的研究中的作用是毋庸置疑的，调节这些髓系细胞的发育、成熟和功能有助于发现新的肿瘤免疫治疗策略。然而，由于各种可互换亚群的复杂性和可塑性，这些髓系细胞执行重叠或相反的功能，目前控制TAMCs行为的分子机制在很大程度上尚不清楚。为进一步阐明髓系细胞各亚群在不同癌症中的功能，并确定其促肿瘤和抗肿瘤活性相关的分子机制，百奥动物自主研发一些列髓系靶点人源化小鼠，助力深入了解髓系细胞的复杂性，并设计新的肿瘤靶向治疗方法。B-hTREM2 mice(C) 基本信息体内药效抗人TREM2抗体在B-hTREM2(C)小鼠中的抗肿瘤活性。纯合子B-hTREM2(C)小鼠（雌性，10周龄，n=6）小鼠皮下接种小鼠乳腺癌EMT-6细胞。当肿瘤体积达到约50-80 mm3时，对小鼠进行分组，然后使用抗人TREM2抗体进行治疗。如图A所示，抗人TREM2抗体在B-hTREM2(C)小鼠中有效地控制肿瘤生长，证实B-hTREM2(C)小鼠模型是抗人TREM2抗体临床前体内药效评估的优质模型。数值以平均值±SEM表示。B-hCD36 mice基本信息体内药效抗小鼠PD-1抗体和抗人CD36抗体联合治疗在B-hCD36小鼠中的抗肿瘤活性。纯合子B-hCD36小鼠（雌性，7周龄，n=5）小鼠皮下接种小鼠结肠癌MC38细胞。当肿瘤体积达到约60 mm3时，对小鼠进行分组，然后使用抗体进行治疗。如图A所示，抗体组合在B-hCD36小鼠中有效地控制肿瘤生长，证实B-hCD36小鼠模式是抗CD36抗体临床前体内药效评估的优质模型。数据来自合作者，数值以平均值±SEM表示。B-hPD-1/hPD-L1/hVSIR mice基本信息蛋白表达分析通过流式细胞术分析野生型C57BL/6小鼠和纯合子B-hPD-1/hPD-L1/hVSIR小鼠中种属特异性PD-1和PD-L1的表达。用抗CD3ε抗体体内刺激野生型C57BL/6小鼠和纯合子B-hPD-1/hPD-L1/hVSIR小鼠，收集脾细胞并进行流式分析。结果显示：小鼠PD-1和PD-L1在野生型C57BL/6小鼠中检测到。人PD-1和PD-L1只在纯合子B-hPD-1/hPD-L1/hVSIR小鼠中检测到，而在野生型C57BL/6小鼠中检测不到。通过流式细胞术分析野生型C57BL/6小鼠和纯合子B-hPD-1/hPD-L1/hVSIR小鼠中种属特异性VSIR的表达。取野生型C57BL/6小鼠和纯合子B-hPD-1/hPD-L1/hVSIR小鼠脾细胞进行流式分析。结果显示：小鼠VSIR仅在野生型C57BL/6小鼠中检测到。人VSIR只在纯合子B-hPD-1/hPD-L1/hVSIR小鼠中检测到，而在野生型C57BL/6小鼠中检测不到。髓系靶点人源化小鼠列表参考资料：1. Aixia Dou, Jing Fan. Heterogeneous Myeloid Cells in Tumors. Cancers (Basel). 2021 Aug; 13(15): 3772.2. Sijin Cheng, Ziyi Li, et al. A pan-cancer single-cell transcriptional atlas of tumor infiltrating myeloid cells. Cell. 2021Feb; 184, 792–809.

上半年，宝船生物与百奥赛图合作研发的TNFR2非阻断型全人抗体药物（代号BC011）的实验数据已在2022年美国癌症研究协会（AACR）年会上公布。 BC011是一款新型TNFR2非阻断治疗抗体，来源于RenMab人源化IgG小鼠。通过在TNFR2人源化的肿瘤同源小鼠模型中进行无差别、高通量的体内有效性筛选，从大量候选抗体中筛选出了BC011。BC011能够促进CD8+T细胞增殖，耗竭Treg细胞，从而增加肿瘤微环境中效应T细胞的比例。 TNFR2靶点概览TNFRSF1B（TNF receptor superfamily member 1b）为TNF受体超家族成员，也称为TNFR2，在某些免疫细胞亚群（如CD4+和CD8+ T细胞）、内皮细胞、小胶质细胞和特异性神经元亚群、少突胶质细胞、心肌细胞和人间充质干细胞上表达。在多种肿瘤细胞中也有高表达，如黑色素瘤、肠癌和卵巢癌等。在肿瘤微环境中，TNFR2在Treg细胞中高表达，具有很好的特异性，是免疫逃逸和肿瘤增殖的潜在驱动力。TNFR2是I型跨膜糖蛋白，由461个氨基酸组成，其中前256个氨基酸形成包含四个富含半胱氨酸基序的胞外结构，31个氨基酸形成跨膜结构域，后174个氨基酸形成具有TRAF2结合位点的胞内结构。图1. TNFR2结构[1]TNFR1(p55，TNFRSF1A)和TNFR2(p75，TNFRSF1B)是同源关系最近的两个蛋白，他们分别激活两个独立的细胞内信号通路进行基因转录。TNFR1几乎在身体的所有细胞上都有表达，包括整个淋巴系统。从功能上讲，TNF主要依赖TNFR1进行凋亡，依赖TNFR2进行与T细胞存活相关的功能--TNFR2信号通过核转录因子NF-κB促进pro-survival基因的转录。图2. TNFR2信号在肿瘤中的作用机制[2]许多实验表明TNFR2抑制剂一方面可以有效阻断TNF跟TNFR2的结合，抑制Treg的增殖和功能，也可以靶向杀伤TNFR2高表达的肿瘤细胞，跟PD-(L)1抑制剂在体内都有非常好的协同效果；然而针对自身免疫病，TNFR2激活剂可进一步活化Treg细胞，抑制Teff细胞，下调免疫细胞的过度活化。因此，TNFR2作为肿瘤和自身免疫病的新一代治疗靶点，为肿瘤和自免疾病治疗提供了一种全新的策略。图3. 激动剂与抑制剂作用示意图[3]TNFR2靶点药物在研进展TNFR2作为肿瘤和自身免疫病治疗的潜力靶点，目前在研项目较少，绝大多数仍处于临床前阶段，速度最快的也仅推进至Ⅰ期临床。BioInvent全面布局了TNFR2抑制剂与TNFR2激动剂，其中TNFR2抑制剂BI-1808已处于临床Ⅰ期，除了单药疗法外，与PD-1抑制剂联用方案是药物重要的开发策略。聚焦国内，维立志博的TNFR2抗体药物LBL-019于9月29日临床试验申请获CDE受理，临床进展居前。此外，百济神州于2021年2月由Boston Immune（BITT）引入TNFR2抗体BITR2101，计划探索与替雷利珠单抗的联用方案。数据来源于科睿唯安相关动物模型对于TNFR2靶向调节剂的开发可谓至关重要，BioMice百奥动物自主研发的TNFR2系列人源化小鼠是评估TNFR2相关抗体药物的优质临床前实验动物模型。B-hTNFR2 mice蛋白表达分析通过流式细胞术对野生型C57BL/6和B-hTNFR2纯合鼠中TNFR2蛋白表达进行分析。用抗小鼠CD3ε抗体体内刺激野生型C57BL/6和B-hTNFR2纯合鼠，收集脾细胞，并用种属特异性抗TNFR2抗体进行流式细胞术分析。结果显示：在C57BL/6小鼠B、T和Treg细胞表面检测到mTNFR2，在B-hTNFR2纯合鼠B、T和Treg细胞表面检测到hTNFR2。TNFR2人源化不影响脾脏、淋巴结中白细胞各亚群比例（数据未展示）。TNFR2抗体与B-hTNFR2纯合鼠T细胞结合分析 从B-hTNFR2小鼠（n=3）中分离出脾细胞。通过流式细胞术测试TNFR2抗体与脾细胞的结合。从anti-mCD3ε(0.2或1μg/mL)和anti-mCD28(1μg/mL)体内刺激的B-hTNFR2小鼠分离出脾细胞。如图所示，与同型对照抗体(hIgG)相比，hTNFR2 Ab2与B-hTNFR2纯合鼠的T细胞是结合的。在anti-mCD3ε(0.2μg /mL)刺激条件下，mTNFα增强了hTNFR2 Ab2与B-hTNFR2纯合鼠的T细胞结合，这表明mTNFα/hTNFR2信号通路在B-hTNFR2纯合鼠中是可行的。TNFR2抗体药效验证抗人TNFR2抗体在B-hTNFR2小鼠中的抗肿瘤活性。B-hTNFR2小鼠(雌性，6-7周龄，n=8)皮下接种小鼠结肠癌MC38细胞(5E5)。当肿瘤体积达到约100 mm3时，对小鼠进行分组，然后使用抗人TNFR2抗体进行治疗。如图A所示，抗人TNFR2抗体能够有效控制B-hTNFR2小鼠的肿瘤生长，且呈剂量依赖性，证实B-hTNFR2小鼠模型是体内TNFR2抗体药理功效研究的有力工具。(hTNFR2 Ab2由客户提供)B-hTNFA/hTNFR2 mice抗人TNFR2抗体的体内有效性抗人TNFR2抗体在B-hTNFA/hTNFR2小鼠中的抗肿瘤活性。B-hTNFA/hTNFR2 小鼠(雌性，7周龄)皮下接种小鼠结肠癌MC38细胞(5E5)。当肿瘤体积达到约100 mm3时，对小鼠进行分组，然后使用抗人TNFR2抗体进行治疗。如图A所示，抗人TNFR2抗体能够有效控制B-hTNFA/hTNFR2 小鼠的肿瘤生长，证实B-hTNFA/hTNFR2 小鼠模型是体内TNFR2抗体药理功效研究的有力工具。B-hTNFR2/hTNFR1 mice蛋白表达分析通过流式细胞术检测野生型C57BL/6和纯合B-hTNFR2/hTNFR1 小鼠中TNFR2的蛋白表达。用抗小鼠CD3ε抗体体内刺激野生型C57BL/6和纯合B-hTNFR2/hTNFR1(H/H)小鼠，收集野生型C57BL/6和纯合B-hTNFR2/hTNFR1 小鼠的脾细胞，并用种属特异性抗TNFR2抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠TNFR2仅在野生小鼠中检测到，人TNFR2仅在纯合B-hTNFR2/hTNFR1小鼠中检测到。通过流式细胞术检测野生型C57BL/6和纯合B-hTNFR2/hTNFR1 小鼠中TNFR1的蛋白表达。收集野生型C57BL/6和纯合B-hTNFR2/hTNFR1(H/H) 小鼠的脾细胞和血液，并用种属特异性抗TNFR1抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠TNFR1仅在野生小鼠中检测到，人TNFR1仅在纯合B-hTNFR2/hTNFR1小鼠中检测到。B-hCTLA4/hTNFR2 mice蛋白表达分析通过流式细胞术检测野生型C57BL/6和纯合B-hCTLA4/hTNFR2 小鼠中CTLA4的蛋白表达。收集野生型C57BL/6和纯合B-hCTLA4/hTNFR2 小鼠的脾脏，并用种属特异性抗CD152(CTLA4)抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠CTLA4仅在野生小鼠中检测到，人CTLA4仅在纯合B-hCTLA4/hTNFR2小鼠中检测到。通过流式细胞术检测野生型C57BL/6和纯合B-hCTLA4/hTNFR2小鼠中TNFR2的蛋白表达。收集野生型C57BL/6和纯合B-hCTLA4/hTNFR2小鼠的脾脏，并用种属特异性抗TNFR2抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠TNFR2仅在野生小鼠中检测到，人TNFR2仅在纯合B-hCTLA4/hTNFR2小鼠中检测到。B-hPD-1/hPD-L1/hTNFR2 mice抗人PD-1和抗人TNFR2抗体联合治疗抗人PD-1抗体联合抗人TNFR2抗体在B-hPD-1/hPD-L1/hTNFR2小鼠中的抗肿瘤活性。B-hPD-1/hPD-L1/hTNFR2小鼠(雌性，6-7周龄，n=5)皮下接种hPD-L1 MC38细胞。当肿瘤体积达到约100 mm3时，对小鼠进行分组，然后使用抗人PD-1抗体和人hTNFR2抗体进行治疗。如图A所示，PD-1和hTNFR2抗体联合给药组的抑制作用强于单独给药组，证明B-hPD-1/hPD-L1/hTNFR2小鼠为评价hTNFR2抗体和hPD-1抗体联合给药疗效提供了有力的体内临床前模型。B-hTNFA/hTNFR2/hTNFR1 mice抗人TNFR2抗体的体内有效性抗人TNFR2抗体在B-hTNFA/hTNFR2/hTNFR1小鼠中的抗肿瘤活性。B-hTNFA/hTNFR2/hTNFR1 小鼠(雌性，8周龄，n=6)皮下接种鼠结肠癌 MC38 细胞。根据体重差异对小鼠进行分组，此时用客户提供的抗 TNFR2 Ab1 处理。如图 A 所示，抗人 TNFR2 抗体可有效控制 B-hTNFA/hTNFR2/hTNFR1 小鼠的肿瘤生长，且呈剂量依赖性，证明 B-hTNFA/hTNFR2/hTNFR1 小鼠为体内评价抗人 TNFR2 抗体提供了有力的临床前模型。TNFR2靶点相关模型列表参考文献[1] Medler, J.; Kucka, K.;Wajant, H. Tumor Necrosis Factor Receptor 2 (TNFR2): An Emerging Target in Cancer Therapy. Cancers 2022, 14, 2603. https://doi.org/ 10.3390/cancers14112603[2] Hiroyuki Takahash, Gumpei Yoshimatsu, Denise Louise Faustman. The Roles of TNFR2 Signaling in Cancer Cells and the Tumor Microenvironment and the Potency of TNFR2 Targeted Therapy. Cells. 2022;11(12):1952.[3] éva S. Vanamee, Faustman D L . TNFR2: A Novel Target for Cancer Immunotherapy. https://doi.org/10.1016/j.molmed.2017.09.007

多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma, MM)是全球第二大常见的恶性血液肿瘤，始于骨髓中健康的浆细胞恶性增殖。在当前是一种较难治愈的疾病，大多数患者终将复发。据统计，2020年全球有超过17万人被诊断出患有多发性骨髓瘤，60岁以上老人属于该病的高发群体，发病年龄亦有呈年轻化的趋势。随着我国人口老龄化趋势上升，多发性骨髓瘤的防治负担将逐年加剧，成为危害人们身体健康的一大挑战。多发性骨髓瘤从癌前到有明显疾病症状的演变过程，在SMM阶段的早期发现和早期干预以及预防或治疗策略可能是提高这种复杂疾病治愈率的途径。[1]  左图：正常的骨髓 ，右图：多发性骨髓瘤；多发性骨髓瘤中可见大量恶性浆细胞，其特征是在细胞核附近的细胞质内有一个苍白的区域。[2]目前，针对MM的治疗药物有糖皮质激素、细胞毒性药物、免疫抑制剂、蛋白酶抑制剂、单抗和细胞疗法等。其中，免疫治疗已经在许多癌症领域被证明是革命性疗法，但由于MM存在免疫抑制微环境现象，影响了免疫治疗的疗效，导致其对MM的治疗进展较为缓慢。MM细胞与骨髓（BM）微环境之间的相互作用，对MM的发病起着关键作用，可通过诱导或分泌细胞因子促进肿瘤细胞生长、免疫逃逸及耐药，增加Treg细胞的数量，抑制效应T细胞的杀伤等。靶向特定肿瘤抗原或逆转具有免疫抑制作用的骨髓微环境的免疫疗法可以帮助改善MM的标准治疗方案。骨髓MM微环境中的抗骨髓瘤作用[3]细胞重定向BiAb和BiTE同时结合MM细胞上的骨髓瘤特异性抗原和T细胞上的CD3。MM抗原包括BCMA, CD38, CS1/SLAMF7, GPRC5D和FcRH5，如图示。BiAbs或自然杀伤细胞衔接器(NKCEs)也靶向自然杀伤(NK)细胞相关受体抗原(如CD16A, NKG2D, NKp30)，激活NK细胞并增强其抗MM活性。双特异性分子，包括双特异性抗体(BsAbs)和双特异性T细胞衔接器(BiTEs)，通过同时结合MM细胞和免疫效应细胞上的抗原，使这些细胞靠近从而促进免疫细胞裂解MM细胞。靶向BCMA和GPRC5D的BsAbs已展示出很好的临床疗效，针对FcRH5的早期临床试验结果也非常有前景。这些药物的免疫调节作用不依赖主要组织相容性复合体(MHC) I类的抗原提呈，可在没有共刺激的情况下发生，适用于免疫系统功能失调的MM患者。BCMA01全称B细胞成熟抗原，又名CD269或TNFRSF17，属于肿瘤坏死因子受体超家族成员，仅高表达于浆细胞表面，部分表达于浆细胞样树突状细胞，是MM免疫治疗的理想靶点。针对BCMA靶点开发的肿瘤免疫疗法主要分为3类：嵌合抗原受体T细胞疗法（CAR-T）、双特异性抗体（BsAb）、抗体药物偶联物（ADC）。GPRC5D02全称G蛋白偶联受体C57家族亚型D，为7次跨膜蛋白，高表达于浆细胞表面，低表达于毛囊区域，其他健康细胞则不表达，为治疗MM的潜在候选靶点。GPRC5D的表达与BCMA不相关，联合靶向这两个靶点的疗法可以发挥互补效应或开发双靶点CAR-T、双抗。FcRH503又称FcRL5、CD307或免疫球蛋白超家族受体易位相关蛋白2 (Immunoglobulin Superfamily Receptor Translocation Associated 2, IRTA2)，是一种功能未知的膜蛋白，只表达于B细胞系，包括骨髓瘤细胞。临床前研究的数据表明，FcRH5/CD3双抗可成功激活T细胞，诱导细胞因子产生，并清除恶性浆细胞。根据科睿唯安数据库检索，靶向MM相关靶点药物研究数量众多，部分靶点研究进展情况见下表。强生的Darzalex是在2015年第一批被批准用于MM治疗的免疫疗法，这一时期MM的抗体药研发主要集中在靶向CD38靶点；到2020年GSK研发的首个靶向BCMA药物Blenrep在美获批，2021年BMS的Abecma上市，今年传奇生物的Carvykti上市以及强生的Teclistamab作为全球首个CD3/BCMA双抗获批即将上市，另外还有众多管线处在临床前或临床试验阶段，靶向BCMA赛道的药物研发可谓相当火热。布局靶向MM治疗药物的新靶点，避免同质化竞争，或许也不失为后来者开发该适应症药物以占得先机的上策，当然面临的风险也随之提高。部分药物研究进展整理自科睿唯安数据库及网络百奥动物利用基因编辑技术自主开发了MM相关靶点人源化小鼠及细胞系，助力抗体药物临床前研究。部分数据展示如下：B-hCD38 mice蛋白表达分析采集野生型C57BL/6小鼠和纯合B-hCD38小鼠的脾细胞和血液，用种特异性抗CD38抗体进行流式细胞术分析。小鼠CD38在WT小鼠中检测到。纯合B-hCD38中只检测到人CD38，而WT小鼠检测不到人CD38。药效验证将小鼠T淋巴细胞瘤B-hCD38-luc E.G7-OVA细胞经尾静脉注射到B-hCD38纯合小鼠(雌性，6周龄，n=6)体内。当总通量达到约106 Ig时，将小鼠分组，并用抗人CD38抗体对其进行治疗。(A) 抗人CD38抗体(内部合成)抑制B-hCD38-luc E.G7-OVA小鼠肿瘤生长。(B) 治疗期间体重变化。(C) B-hCD38-luc E.G7-OVA细胞的体内荧光素酶成像图。每周2次测量信号强度和体重，第0、3、7、10天行影像学检查。值表示为平均值±SEM。B-hBCMA micemRNA表达分析RT-PCR分析野生型C57BL/6小鼠和B-hBCMA小鼠BCMA基因特异性表达情况，鼠Bcma mRNA仅在野生型C57BL/6小鼠脾细胞中检测到，人BCMA mRNA仅在纯合B-hBCMA小鼠中检测到。B-hGPRC5D micemRNA和蛋白表达分析(A) RT-PCR分析野生型C57BL/6小鼠和B-hGPRC5D小鼠GPRC5D基因的特异性表达情况，鼠Gprc5d mRNA仅在野生型C57BL/6小鼠睾丸中检测到。人GPRC5D mRNA仅在纯合B-hGPRC5D小鼠中检测到。(B) 取野生型C57BL/6小鼠和纯合B-hGPRC5D小鼠的脾脏，用抗GPRC5D抗体进行western blot分析。由于抗体的交叉反应性，GPRC5D在WT小鼠和纯合B-hGPRC5D小鼠中均可检测到。 相关产品列表 更多数据信息，欢迎联系我们。参考资料[1] https://doi.org/10.1016/j.ctrv.2021.102284[2] https://www.cancer.net/cancer-types/multiple-myeloma/introduction[3] doi: 10.3389/fonc.2022.1032775[4] doi:10.3390/jcm9072166

近年来，免疫治疗在抗肿瘤治疗中的作用备受关注，基于免疫治疗的新药开发和标志物探索，成为了当前肿瘤研究的热点，这也对临床前研究动物模型的建立提出了更高的要求。即可以模拟人肿瘤特征又同时存在“人源化”免疫系统的免疫重建小鼠模型，成为了免疫肿瘤研发中的优质模型。百奥动物B-NDG小鼠缺乏成熟的T、B、NK细胞，是目前国际公认的免疫缺陷程度高、适合人源细胞或组织移植的工具小鼠。将人的免疫细胞、造血干细胞移植到B-NDG及B-NDG衍生小鼠中构建的免疫系统重建小鼠，能够更好的模拟人的免疫系统，进行免疫学研究和免疫药物评价。但在使用重度免疫缺陷小鼠进行PBMC和CD34+ HSC免疫重建时会面临一些常见问题，如PBMC重建后的T细胞会对小鼠自身细胞进行攻击导致严重的xeno-GvHD反应；CD34+ HSC重建后的NK细胞和髓系细胞重建比例不足。我们以B-NDG小鼠为基础分别开发了可延缓xeno-GvHD反应和可促进髓系细胞发育的二代系列小鼠，以满足特定细胞功能研究和相应靶点药物评价的需求。减轻GvHD反应，延长实验窗口期B-NDG MHC I/II DKO mice plus 不表达MHC I/II 类分子B-NDG小鼠、B-NDG B2m KO plus小鼠和B-NDG MHC I/II DKO plus小鼠进行人PBMC重建后GvHD严重程度的比较 第0天将3个健康供体的人PBMCs (5E6)静脉注射B-NDG小鼠、B-NDG B2m KO plus小鼠和B-NDG MHC I/II DKO plus小鼠(雌性，5周龄，n=5)中。A.用Kaplan Meier生存曲线分析小鼠存活率。B.体重变化。GvHD临床体征每周评分两次。结果表明：B-NDG MHC I/II DKO plus小鼠可显著延缓GvHD发生，并降低GvHD严重程度。因此B-NDG MHC I/II DKO plus小鼠更适合将人PBMC移植到免疫缺陷小鼠模型。B-NDG B2m KO mice plus B-NDG小鼠、B-NDG B2m KO plus进行人PBMC重建后GvHD严重程度的比较将3个健康供体的2E6人PBMC静脉注射B-NDG B2m KO plus小鼠(雌性，11周龄，n=5)和B-NDG小鼠(雌性，10周龄，n=6)中。GvHD临床体征每周评分两次。结果表明：在人PBMC诱导的GvHD模型中，B-NDG B2m KO plus小鼠比B-NDG小鼠生存期明显延长，B-NDG B2m KO plus小鼠可延缓GvHD的发病并减轻其严重程度。促进髓系细胞重建B-NDG MGMT3 mice 人源化IL3, CSF2, CSF1, THPO 基因未经辐照的B-NDG MGMT3小鼠进行人CD34+HSC重建将人CD34+HSC造血干细胞(3E4)静脉注射B-NDG小鼠和B-NDG MGMT3小鼠(出生后24-72h，n=15)。B-NDG小鼠给予1.0 gy辐照，B-NDG MGMT3小鼠不辐照。流式细胞分析两种小鼠进行人CD34+HSC免疫重建后的外周血淋巴细胞。结果表明：未经辐照的B-NDG MGMT3小鼠的CD45+细胞比例从移植后12周开始达到25%，并持续上升，明显高于B-NDG小鼠。B-NDG MGMT3小鼠单核细胞、MDSCs、DCs和Treg的比例高于B-NDG小鼠。（注:A面板第18周数据因流式细胞检测问题无意义。）B-NDG hCSF1/hTHPO mice 未经辐照的B-NDG hCSF1/hTHPO小鼠进行人CD34+HSC重建将人CD34+HSC细胞(0.15 M)静脉注射到纯合B-NDG hCSF1/hTHPO小鼠(雌性，6周龄，n=15)。流式细胞术分析人CD34+HSC免疫重建后小鼠外周血淋巴细胞。结果显示：未经辐照的B-NDG hCSF1/hTHPO小鼠成功重建了T、包括B、NK、髓系细胞、单核细胞和中性粒细胞在内的人多系细胞。免疫缺陷动物产品列表

特应性皮炎（Atopic dermatitis, AD）是一种慢性皮肤疾病，其主要症状为发痒、红疹和鳞状病变，伴发心血管，精神疾患（抑郁，焦虑，睡眠障碍等）以及其他疾病。为了更好的研究特应性皮炎，研究者在小鼠上开发出多种特应性皮炎的动物模型，包括（1）利用上皮敏感性抗原、半抗原等增强皮肤敏化引起的AD模型；（2）基因工程小鼠AD模型；（3）自发AD小鼠模型等。百奥动物在C57BL/6小鼠和相同背景品系的B-hIL4/hIL4RA双基因人源化小鼠上，利用Oxazolone（OXA）致敏和持续激发，产生皮炎样病损，建立AD疾病模型，用于AD相关药物的药效评价。01AD小鼠模型的构建模型评价内容l 小鼠体重l 背部及耳部表皮厚度测量l 血清中总IgE检测l 病理分析：皮肤炎症等病变，嗜酸性粒细胞等在野生型C57BL/6小鼠中通过OXA诱导的AD模型。（A） 小鼠体重；（B） 耳部厚度；（C） 血清总IgE浓度。实验结果显示OXA诱导组的耳部厚度和血清IgE显著增加。数值以平均值±标准误表示。在野生型C57BL/6小鼠中诱导的 AD模型的耳部皮肤病理学和淋巴细胞浸润分析。（A）小鼠耳组织切片的苏木精-伊红（H&E）染色；（B）耳表皮嗜酸性粒细胞浸润评分。数值以平均值±标准误表示。治疗策略可以选择在免疫接种时开始治疗-预防性策略，也可以在小鼠发病后开始治疗-治疗性策略。02AD小鼠模型药效评价实例AD小鼠模型（C57BL/6）用于Dexamethasone药效评价1）从B图可以看出，OXA造模组的耳部厚度有明显的增加，同时血清中总的IgE（图C）有明显的升高，证明造模成功。2）从耳部厚度和IgE变化情况可以看出，不同浓度的Dexamethasone对AD疾病具有不同程度的缓解作用。3）高剂量组（0.09% Dexamethasone）对耳部皮肤水肿的缓解作用达到了与对照组持平的效果。但与对照组相比，也会导致明显的体重减轻。4）小鼠耳组织切片苏木精-伊红(H&E)染色(图D)；耳表皮嗜酸性粒细胞浸润评分(图E)。数值以平均值±标准误表示。❉ 病理分析组别设置组别只数受试品浓度G15//G25//G35Dexamethasone0.03%G45Dexamethasone0.06%G55Dexamethasone0.09%从病理统计结果发现，除对照组外，其余四组动物背部和耳部皮肤表皮均可见不同程度的基质细胞增生、表皮增厚、角化过度伴角化不全、表皮痂皮、真皮及皮下组织可见混合炎症细胞浸润等特应性皮炎相关的病理性改变，表明G2造模组和G3-G5给药组的模型动物均造模成功。对各组动物的背部皮肤和耳部皮肤嗜酸性粒细胞浸润变化进行了病理学评分和统计，给药组G3-G5背部和耳部皮肤嗜酸粒细胞浸润均低于G2造模组。其中，背部皮肤中，给药组G3-G5嗜酸粒细胞浸润程度未见显著差异。耳部皮肤中，给药组G4、G5组嗜酸粒细胞浸润程度要低于G2和G3组。上述结果表明三组浓度的受试品均对特应性皮炎相关症状有一定改善作用，其中浓度为0.06%和0.09%的Dexamethasone药效较好。AD小鼠模型(B-hIL4/hIL4RA小鼠)用于Dupilumab（内部合成）药效评价Dupilumab减轻OXA诱导的B-hIL4/IL4RA小鼠特应性皮炎。第0天在小鼠的耳部和皮肤上注射0.8%的OXA，然后从第7天到第25天，每周3次注射0.4%的OXA，记录小鼠体重和耳部厚度。小鼠从第6天起每周2次接受PBS或Dupilumab(10，25 mg/kg)治疗，共6次。最后收集耳部、背部皮肤和血液(图A)。Dupilumab对体重没有影响(图C)。Dupilumab给药组小鼠的耳部厚度(图B)和血清IgE (图D)降低。Dupilumab (内部合成)能剂量依赖性治疗OXA诱导的B-hIL4/IL4RA小鼠皮肤损伤。用ELISA法分析OXA诱导的B-hIL4/hIL4RA小鼠AD模型中的蛋白表达。分别于第9、16、23、26天采集建模区耳部和皮肤样本，进行ELISA分析。Dupilumab可以减轻OXA诱导的B-hIL4/hIL4RA小鼠中人IL-4的升高。用Luminex分析OXA诱导的B-hIL4/hIL4RA小鼠AD模型中的蛋白表达。分别于第9、16、23、26天采集建模区耳部和皮肤样本，采用Luminex进行分析。用MSD分析OXA诱导的B-hIL4/hIL4RA小鼠AD模型的蛋白表达。分别于第9、16、23、26天采集建模区耳部和皮肤样本，采用MSD进行分析。用qRT-PCR分析小鼠IL-5和IL-13在OXA诱导的B-hIL4/hIL4RA小鼠AD模型中的表达。分别于第9天和第26天采集耳部样本，提取总RNA。然后逆转录RNA样本，用qRT-PCR检测小鼠IL-5、IL-13水平，用小鼠GAPDH作为管家基因。表1 细胞因子分析汇总03特应性皮炎（AD）模型可提供的临床前检测项目04特应性皮炎（AD）相关人源化小鼠列表

导读趋化因子是一类分子量小的细胞因子，其主要作用是在稳态和病理条件下募集白细胞亚群，又被称为趋化性细胞因子。根据其主要蛋白质结构的前两个半胱氨酸（C）残基的位置，将趋化因子分为 C 、CC 、CXC 和 CX3C 趋化因子四大亚家族，其主要负责参与调控机体的器官发育、免疫监视、宿主防御和组织更新等生理过程。趋化因子也可以根据其表达和功能分为炎性趋化因子和稳态趋化因子。炎症性细胞因子在炎症部位迅速分泌，从而将效应细胞募集到发炎组织中；而稳态趋化因子在生理条件下组成性表达并在细胞迁移和归巢中发挥作用，因此趋化因子在协调炎症及正常状态下的体内细胞群定位中发挥核心作用。  图1.趋化因子配体与受体[1]趋化因子受体表达于细胞表面，是与G蛋白偶联的7次跨膜蛋白，趋化因子就是与受体结合后传递细胞信号的，故受体根据其结合的趋化因子亚家族来命名，如 XCR、CCR、CXCR、CX3CR 等。这些受体负责调控多条细胞信号通路，如调动肌动蛋白聚合、细胞骨架重排、粘着斑组装和解聚，此外也在细胞存活等生命活动中发挥着重要作用。图2.趋化因子信号通路图[2]此外，趋化因子还参与多种癌症发展过程，如血管生成、转移、癌细胞增殖、干性和侵袭性，是疾病进展的关键决定因素，对治疗反应和患者预后有很大影响。由于它们在癌细胞和免疫浸润细胞中重要的调节功能，使得趋化因子配体及其受体成为非常强大的治疗靶点。趋化因子的靶向治疗目前，国内外已有多家药企开启了针对趋化因子及其受体的药物开发，其中临床已批准的靶向趋化因子的药物包括：2012年上市的抗CCR4抗体（Mogamulizumab）和2007年上市的CXCR4拮抗剂（Maraviroc）等，用于治疗恶性血液瘤。此外，还有更多的针对不同趋化因子受体-配体轴作为癌症治疗策略的多种努力，这些治疗策略目前已表现出巨大的潜力，正处于临床开发中。数据来源于科睿唯安趋化因子及其受体对于维持机体稳态具有重要意义。然而一旦趋化因子活性失控，则会导致慢性炎症和自身免疫性疾病。针对一系列疾病靶点的研究机理，BioMice百奥动物自主开发了CCR家族靶点人源化小鼠，包括CCR1-CCR9，可以为该靶点药物的开发提供有效的临床前药效评价工具，助力靶向药物研究。B-hCCR1 mice基本信息 蛋白表达分析 通过流式细胞术检测野生型C57BL/6和纯合B-hCCR1小鼠中CCR1的蛋白表达。收集野生型C57BL/6和纯合B-hCCR1小鼠的腹腔巨噬细胞，并用种属特异性抗CCR1抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠CCR1仅在野生小鼠中检测到，人CCR1仅在纯合B-hCCR1小鼠中检测到。 B-hCCR2 mice基本信息  蛋白表达分析  通过流式细胞术检测野生型C57BL/6和纯合B-hCCR2小鼠中CCR2的蛋白表达。收集野生型C57BL/6和纯合B-hCCR2小鼠的骨髓，并用种属特异性抗CCR2抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠CCR2仅在野生小鼠中检测到，人CCR2仅在纯合B-hCCR2小鼠中检测到。 B-hCCR3 mice基本信息  蛋白表达分析  通过流式细胞术检测野生型C57BL/6和纯合B-hCCR3小鼠中CCR3的蛋白表达。收集野生型C57BL/6和纯合B-hCCR3小鼠的骨髓，并用种属特异性抗CCR3抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠CCR3仅在野生小鼠中检测到，人CCR3仅在纯合B-hCCR3小鼠中检测到。 B-hCCR4 mice基本信息 蛋白表达分析   通过流式细胞术检测野生型C57BL/6和纯合B-hCCR4小鼠中CCR4的蛋白表达。收集野生型C57BL/6和纯合B-hCCR4小鼠的脾细胞，并用种属特异性抗CCR4抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠CCR4仅在野生小鼠中检测到，人CCR4仅在纯合B-hCCR4小鼠中检测到。 B-hCCR4小鼠的T细胞能与抗人CCR4抗体结合通过流式细胞术（FACS）分析B-hCCR4小鼠的T细胞结合抗人CCR4抗体的能力。收集B-hCCR4 小鼠的脾细胞（雌性，6周龄），使用FACS检测T细胞与抗人CCR4抗体（内部合成）的结合。结果显示：与同型对照相比，B-hCCR4小鼠的T细胞可以很好地结合抗人CCR4抗体。 B-hCCR5 mice基本信息  蛋白表达分析   通过流式细胞术检测野生型C57BL/6和纯合B-hCCR5小鼠中CCR5的蛋白表达。收集野生型C57BL/6和纯合B-hCCR5小鼠的腹腔冲洗液，并用种属特异性抗CCR5抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠CCR5仅在野生小鼠中检测到，人CCR5仅在纯合B-hCCR5小鼠中检测到。 B-hCCR6 mice基本信息  蛋白表达分析  通过流式细胞术检测野生型C57BL/6和纯合B-hCCR6小鼠中CCR6的蛋白表达。收集野生型C57BL/6和纯合B-hCCR6小鼠的脾细胞，并用种属特异性抗CCR6抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠CCR6仅在野生小鼠中检测到，人CCR6仅在纯合B-hCCR6小鼠中检测到。B-hCCR7 mice基本信息蛋白表达分析   通过流式细胞术检测野生型C57BL/6和纯合B-hCCR7小鼠中CCR7的蛋白表达。收集野生型C57BL/6和纯合B-hCCR7小鼠的脾细胞，并用种属特异性抗CCR7抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠CCR7仅在野生小鼠中检测到，人CCR7仅在纯合B-hCCR7小鼠中检测到。 B-hCCR8 mice基本信息  蛋白表达分析 人CCR8在纯合B-hCCR8小鼠肿瘤中CD4+ T细胞和Treg细胞均可检测到，但在脾细胞和血细胞中不能检测到。鼠CCR8在野生型小鼠的肿瘤中可检测到，脾细胞中弱表达，而在血细胞中不表达。血常规检测 收集野生型C57BL/6和B-hCCR8小鼠的外周血进行血常规检测（n=8，雌性，9周龄），结果显示：B-hCCR8小鼠的各指标与野生C57BL/6小鼠无明显差异，表明CCR8的人源化未改变血细胞的组成及形态。血生化检测收集野生型C57BL/6和B-hCCR8小鼠的血清进行血生化检测（n=8，雌性，9周龄），结果显示：B-hCCR8小鼠的各指标与野生C57BL/6小鼠无明显差异，表明CCR8的人源化未影响小鼠的肝、肾功能及脂肪代谢能力。 抗人CCR8抗体药效验证 抗人CCR8抗体在B-hCCR8小鼠接种MC38模型和B-Tg(hCCL1) MC38模型中均有较好的抑瘤效果。TILs分析显示：抗人CCR8抗体给药组(G2、G4)与未给药组(G1、G3)相比，总的Tregs和hCCR8+ Tregs的比例显著性降低。 B-hCCR9 mice基本信息 蛋白表达分析 通过流式细胞术检测野生型C57BL/6和纯合B-hCCR9小鼠中CCR9的蛋白表达。收集野生型C57BL/6和纯合B-hCCR9小鼠的胸腺细胞，并用种属特异性抗CCR9抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠CCR9仅在野生小鼠中检测到，人CCR9仅在纯合B-hCCR9小鼠中检测到。趋化因子受体及其配体的相互作用非常复杂，尽管面临挑战，但目前还是有大量针对不同趋化因子受体的抑制剂正在临床前研究或临床试验阶段，可以相信未来趋化因子受体抑制剂将在调节TME的组成并优化患者的免疫反应方面发挥重大作用，为肿瘤患者带来更多希望。参考文献[1] Märkl, F., Huynh, D., Endres, S. & Kobold, S. Utilizing chemokines in cancer immunotherapy. Trends in Cancer 8, 670–682 (2022)[2] R&D Systems.lnc.The Chemokine Superfamily: Critical Regulators of Homeostasis & Inflammation，2019

CD20（Cluster of Differentiation 20）是MS4A家族的一员，由297个氨基酸组成的磷蛋白，具有4个跨膜结构域，在B细胞发育中起关键作用。在血液、扁桃体、阑尾、淋巴结和脾脏等多组织表达，正常脑组织和一些免疫细胞上检测不到表达。CD20敲除小鼠与同窝野生型小鼠一样茁壮成长和繁殖，在其出生后第一年未出现任何明显的解剖或形态学异常，或对感染的易感性。CD20没有已知的天然配体，其功能是实现最佳的B细胞免疫应答，特别是针对T细胞非依赖性抗原。CD20表达密度存在B细胞亚群特异性差异，在B细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、B细胞慢性淋巴细胞性白血病和黑色素瘤癌干细胞高表达。尽管CD20的功能尚不完全清楚，但它具有动态的细胞活性，是B细胞恶性肿瘤的理想特异性治疗靶标。CD20抗体的6种作用机制[1]CD20抗体CD20抗体是迄今为止最成功的抗肿瘤治疗方案之一，各大药企进行了各种基因工程研究和人源化改造，试图设计和生成强大的CD20抗体。CD20抗体生产的初步成功，推进了单克隆抗体设计方法不断改进。其中4种类型的CD20抗体，包括利妥昔单抗、Ofatumumab、Obinutuzumab和Ublituximab分别于1997年、2010年和2014年在美国和欧洲获批用于治疗慢性淋巴细胞白血病。CD20单克隆抗体设计的不断改进[2]CD20单克隆抗体批准上市时间表及对应症[3]目前，抗 CD20 单抗已经发展到第三代，每一代抗体药物均有各自特有的临床应用价值。01第一代CD20单克隆抗体第一代CD20抗体以利妥昔为代表，针对B细胞上CD20抗原的利妥昔单抗是一种基因工程嵌合鼠/人单克隆抗体，是全球第一款CD20单克隆抗体(mAb)上市药物，上市后迅速成为治疗某些B细胞恶性肿瘤特定类型的标准方案，延续至今。美罗华@利妥昔单抗注射液第一代CD20单抗的疗效很好，甚至对于一直以来的治疗方案产生革命性的影响，但由于其是嵌合鼠/人单克隆抗体，因此使用时会存在一定的排异反应，产生负作用影响治疗效果。为提升治疗效果降低副作用，CD20单抗的药物制备技术不断更新换代，衍生出了第二代CD20单抗。02第二代CD20单克隆抗体第二代抗CD20 mAb将CD20人源化或者全人源改造，降低免疫原性，包括Ofatumumab、Veltuzumab和Ocrelizumab。Ofatumumab (OFA)是一种全人源 I 型抗CD20 IgG1k mAb。Ofatumumab与CD20分子的小和大胞外环(ECL)均结合，在杀伤靶细胞方面比利妥昔单抗更有效。OFA(arzerra)已获批用于治疗氣达拉滨和阿仑单抗治疗失败的复发性或难治性CLL(FA-ref)，目前正在开发OFA联合其他药物治疗各种B细胞肿瘤。第二代CD20单克隆抗体[4]与一代CD20抗体相比二代CD20抗体免疫原性降低，减少不良反应，但是二代CD20抗体特异性和抗原结合的亲和力有所下降，因此第三代产品应运而生。03第三代CD20单克隆抗体第三代人源化CD 20 mAb具有Fc工程化改造，以增加其与FcyRIIIa受体的结合亲和力，包括 Ocaratuzumab、PR0131921和Obinutuzumab，均在进行不同适应症的临床开发。Ocaratuzumab（AME-133v）是一种 I  型人源化IgG1 mAb。其与CD20的结合亲和力增加13-20倍，与FcyRIIIa受体低亲和力(F/F和F/V)变体的亲和力增加5-7倍。这些可能是克服利妥昔单抗缓解率较低和缓解持续时间较短的机制。Obinutuzumab（GA101）在2013 年已获得美国 FDA 批准上市，主要适用于未经治疗的慢性淋巴细胞白血病患者以及联合苯达莫司汀二线治疗复发性滤泡性淋巴瘤。第三代CD20单抗[4]虽然CD20单抗的药物制备技术经过多次更新换代，二代三代各具优势，但与一代产品利妥昔单抗相比，在适应症和疗效上并未更具优势，因此目前市场上第一代产品利妥昔单抗依然占据绝对地位。发展前景CD20 单抗是世界上第一个上市的单克隆抗体，具有多年的临床治疗数据，对应不同的适应症以及设计优化，该靶点尚具有巨大的市场潜力。此外基于CD20靶点的研究的人源化单克隆抗体、双特异性抗体、CAR-T疗法、抗体偶联药物（ADC）、与小分子药物联合治疗等研究，均取得良好的效果。国内外有多家企业展开针对CD20靶点的单抗，双抗以及联用药物的研究，超110多个研究管线处于临床前期或已进入临床阶段，超23款药物已上市。今年9月，北京神州细胞自主研发的新型抗CD20单抗——“安平希”瑞帕妥单抗获批上市，是国产首款抗CD20单抗上市药物。国内外部分CD20药物临床研发进展数据来源：Cortellis通过众多临床试验及以往多年研究积累，证实了 CD20 靶点是治疗 B 细胞淋巴瘤的重要靶点，以CD20 为靶点研发出的药物在临床治疗 B 细胞淋巴瘤中发挥了关键作用。百奥动物自主研发的CD20系列人源化小鼠及细胞系，是靶向CD20抗体开发相关药物进行药效评价的优质模型。B-hCD20 mice01基本信息02mRNA表达分析RT-PCR分析CD20基因在野生型小鼠和B-hCD20小鼠中的表达情况。鼠CD20 mRNA仅在野生型(+/+)小鼠脾细胞中可检测到。人CD20 mRNA仅在纯合子B-hCD20(H/H)小鼠中检测到，而在野生型(+/+)小鼠中检测不到。03蛋白表达分析  用流式细胞术分析B-hCD20纯合子小鼠CD20的蛋白表达。采集野生型C57BL/6小鼠和纯合子B-hCD20(H/H)小鼠脾细胞，用种属特异性抗CD20抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠CD20仅在野生型C57BL/6(+/+)小鼠中检测到；人CD20仅在纯合子B-hCD20(H/H)小鼠中检测到，在C57BL/6(+/+)小鼠中检测不到。B-hCD28/hCD20 mice01基本信息02蛋白表达分析流式细胞术分析B-hCD28/hCD20纯合子小鼠CD28的蛋白表达。采集野生型C57BL/6(+/+)小鼠和纯合子B-hCD28/hCD20(H/H;H/H)小鼠脾细胞，用种属特异性抗CD28抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠CD28仅在C57BL/6(+/+)小鼠中检测到；人CD28仅在纯合子B-hCD28/hCD20(H/H;H/H)小鼠中检测到，在C57BL/6(+/+)小鼠中检测不到。流式细胞术分析B-hCD28/hCD20纯合子小鼠CD20特异性表达。采集野生型C57BL/6(+/+)小鼠和纯合B-hCD28/hCD20 (H/H;H/H)小鼠脾细胞，用种属特异性抗CD20抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠CD20仅在C57BL/6(+/+)小鼠中检测到；人CD20仅在纯合子B-hCD28/hCD20(H/H;H/H)小鼠中检测到，在C57BL/6(+/+)小鼠中检测不到。B-hCD3E/hCD20 mice01基本信息02蛋白表达分析流式细胞术分析B-hCD3E/hCD20纯合子小鼠CD3E的蛋白表达。采集野生型C57BL/6(+/+)小鼠和纯合子B-hCD3E/hCD20(H/H;H/H)小鼠脾细胞，用种属特异性抗CD3E抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠CD3E仅在C57BL/6(+/+)小鼠中检测到；人CD3E仅在纯合子B-hCD3E/hCD20(H/H;H/H)小鼠中检测到，在C57BL/6(+/+)小鼠中检测不到。流式细胞术分析B-hCD3E/hCD20纯合子小鼠CD20的蛋白表达。采集野生型C57BL/6(+/+)小鼠和纯合子B-hCD3E/hCD20(H/H;H/H)小鼠脾细胞，用种属特异性抗CD20抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠CD20仅在C57BL/6(+/+)小鼠中检测到；人CD20仅在纯合子B-hCD3E/hCD20(H/H;H/H)小鼠中检测到，而在C57BL/6(+/+)小鼠中检测不到。03免疫分型脾脏白细胞亚群的流式分析。分离野生C57BL/6(+/+)小鼠和B-hCD3E/hCD20 (H/H;H/H)小鼠（雌性，n=3，6周龄）的脾细胞并进行白细胞亚群流式分析。A.代表性单活CD45+细胞的流式分析。B.图A的统计学分析。结果显示：纯合子B-hCD3E/hCD20小鼠的T细胞、B细胞、NK细胞、树突状细胞、粒细胞、单核细胞和巨噬细胞的比例与C57BL/6小鼠相似，证明人源化CD3E/CD20不影响脾脏中这些细胞集群总体的发育、分化或分布。数值：平均值 ± SEM脾脏T细胞亚群的流式分析。分离野生型C57BL/6(+/+)小鼠和B-hCD3E/hCD20 (H/H;H/H)小鼠(雌性，n=3，6周龄)的脾细胞并进行T细胞亚群流式分析。A.代表性CD3+ T细胞的流式图分析。B. 图A的统计学分析。结果显示：纯合子B-hCD3E/hCD20小鼠的CD8+ T细胞、CD4+ T细胞和Treg细胞的比例与C57BL/6小鼠相似，证明人源化CD3E/CD20不影响脾脏中这些T细胞集群总体的发育、分化和分布。数值：平均值 ± SEM人源化CD3E/CD20同样也不影响淋巴结、血液中白细胞亚群和T细胞亚群总体的发育、分化和分布。（数据未展示）B-hCD3EDG/hCD20 mice01基本信息02mRNA表达分析RT-PCR分析CD3DG基因在野生型小鼠和B-hCD3EDG/hCD20小鼠中的表达。小鼠Cd3d和Cd3g mRNA仅在野生型(+/+)小鼠胸腺细胞中检测到。人CD3D和CD3G mRNA仅在纯合B-hCD3EDG/hCD20(H/H;H/H)小鼠中检测到，而在野生型(+/+)小鼠中检测不到。03蛋白表达分析流式细胞术分析纯合B-hCD3EDG/hCD20小鼠中CD3E的蛋白表达。采集野生型C57BL/6 (+/+)小鼠和纯合子B-hCD3EDG/hCD20(H/H;H/H)小鼠脾细胞，用种属特异性抗CD3E抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠CD3E仅在C57BL/6 (+/+)小鼠中检测到；人CD3E仅在纯合子B-hCD3EDG/hCD20 (H/H;H/H)小鼠中检测到，而在C57BL/6 (+/+)小鼠中检测不到。流式细胞术分析B-hCD3EDG/hCD20纯合子小鼠中CD20的蛋白表达。采集野生型C57BL/6 (+/+)小鼠和纯合子B-hCD3EDG/hCD20 (H/H;H/H)小鼠脾细胞，采用种属特异性抗CD20抗体进行流式细胞术分析。结果显示：鼠CD20仅在C57BL/6 (+/+)小鼠中可检测到；人CD20仅在纯合子B-hCD3EDG/hCD20(H/H;H/H)小鼠中检测到，而在C57BL/6 (+/+)小鼠中检测不到。CD20靶点相关模型列表参考文献:1. Payandeh, Z. et al. The applications of anti-CD20 antibodies to treat various B cells disorders. Biomed Pharmacother 109, 2415-2426 (2019).2.  Lim, S.H. et al. Anti-CD20 monoclonal antibodies: historical and future perspectives. Haematologica 95, 135-143 (2010).3. Marshall, M.J.E., Stopforth, R.J. & Cragg, M.S. Therapeutic Antibodies: What Have We Learnt from Targeting CD20 and Where Are We Going? Front Immunol 8, 1245 (2017).4. Shundong Cangl, N.M., Kemeng Wang2 and Delong Liu2. Novel CD20 monoclonal antibodies for lymphoma therapy. Cang et al. Journal of Hematology & Oncology 5 (2012).

异常的脂质循环和存储是导致心血管疾病和代谢性疾病的风险因素。富含TG（triglycerides，甘油三酯）的脂蛋白（如VLDL，乳糜微粒）在脂蛋白脂肪酶（LPL）的作用下将TG水解成为自由脂肪酸（FFA），进而被不同组织摄取和利用。因此，LPL对于TG代谢和脂肪分布具有重要作用，而LPL的活性受ANGPTL3, 4, 8的调节[1]。ANGPTL（Angiopoietin-like proteins，血管生成素样蛋白）家族包括8个成员，是分泌型糖蛋白，具有3个保守的结构域，即N端的信号肽、coiled-coil结构域（CCD）和C端fibrinogen-like结构域（FLD）；只有ANGPTL8例外，它没有C端的FLD。对于ANGPTL3, 4, 8来说，它们都具有LPL和内皮脂肪酶（EL）的抑制结构域（specific epitope1, SE1）。图1. ANGPTL家族蛋白结构域[2]ANGPTL3主要在肝脏中表达，可抑制LPL和EL的酶活性，从而抑制TG水解，也就是抑制VLDL/乳糜微粒向TG含量低的脂蛋白（LDL, HDL）的转换，于是血浆中VLDL水平升高，可引发动脉粥样硬化斑块的产生。另一方面，ANGPTL3的FLD可与α5β3整合素结合，引发斑块新生血管、内膜增厚和炎症等。目前为止，三类ANGPTL3抑制剂药物在开发中，分别是单抗，反义寡核苷酸（ASO）和CRISPR/Cas9基因编辑，它们可促进VLDL的水解。已有的PCSK9抑制剂可促进LDL受体循环，增强肝脏摄取LDL并抑制肝脏分泌VLDL。由于ANGPTL3抑制剂与PCSK9抑制剂的作用机制不同，二者可能具有协同治疗冠心病（CHD）的作用。图2. ANGPTL3的生物学功能及其抑制剂药物的工作机制[3]ANGPTL3的活性依赖ANGPTL8的活化，但相对稳定，不受营养状况的影响。而ANGPTL4和ANGPTL8的水平受进食状况的影响，且呈相反的关系。 禁食或运动状态下，ANGPTL4表达上调（ANGPTL8下调），使WAT中LPL的活性减弱。于是，循环中的TG就进入外周组织（如心脏和肌肉）被利用。 ANGPTL3/8复合物分泌入血，可抑制循环系统、以及氧化组织（如心脏、肌肉）中的LPL活性。喂食状态下，ANGPTL8上调（ANGPTL4下调），使得心脏和肌肉中的LPL活性受ANGPTL3/8抑制，进而使得循环中的TG进入白色脂肪组织（WAT）存储起来。 总的来说，ANGPTLs可调节LPL活性，在禁食条件下促进TG被外周组织的利用，并在进食状态下促进脂质存储[4]。图3. ANGPTL3, 4, 8在不同营养状况下调节血脂的工作机制[1]ANGPTL3，4，8相关药物ANGPTL3是一个值得期待的心血管疾病靶点。2021年2月，FDA批准再生元的依维库单抗（evinacumab, anti-hANGPTL3 antibody）治疗家族性高胆固醇血症，这是此类药物中首个被批准上市的（first-in-class）。依维库单抗可降低甘油三酯，用于治疗纯合子家族性高胆固醇血症(HoFH)患者，增加循环中含apoB的脂蛋白的清除率来降低LDL。另外，还有一些开发靶向ANGPTL3的创新疗法的药物，其中比较领先的是辉瑞从Akcea 和 Ionis处获得全球独家许可的Vupanorsen。Vupanorsen作为ANGPTL3的反义寡核苷酸，能够通过抑制ANGPTL3合成，提高脂蛋白脂肪酶（LPL）的活性，从而降低富含TG脂蛋白（TRL）水平。国内也已开始对ANGPTL靶点进行药物研发，如苏州瑞博生物正在开发靶向ANGPTL3的siRNA抑制剂。活跃在研的ANGPTL8药物只有一款礼来公司的LY-3475766，处于临床I期。这是一款单克隆抗体药物，靶向ANGPTL3/8复合物，可显著降低血脂异常病人血浆中的TG和残存胆固醇含量。靶向ANGPTL4的药物主要有再生元开发的单克隆抗体REGN-1001和Lexicon医药开发的14D12单抗，均用于降血脂。为助力调控脂质代谢的药物开发，百奥动物自主研发了ANGPTL3, 4, 8的人源化小鼠。B-hANGPTL3 mice品系名称：C57BL/6-Angptl3tm1(ANGPTL3)/Bcgen背景：C57BL/6产品编号：112224蛋白表达分析用ELISA分析杂合B-hANGPTL3小鼠中ANGPTL3蛋白的种属特异性表达。取野生型C57BL/6小鼠和杂合B-hANGPTL3小鼠的血浆进行分析。mANGPTL3的表达在两种鼠中均可检测到，而hANGPTL3的表达只在杂合B-hANGPTL3小鼠中检测到，野生型小鼠中检测不到。B-hANGPTL3 mice plus品系名称：C57BL/6-Angptl3tm4(ANGPTL3)/Bcgen背景：C57BL/6产品编号：112523B-hANGPTL3 mice plus小鼠中的mANGPTL3基因（包括3'UTR）被替换为hANGPTL3基因（包括3'UTR），拟用于针对3'UTR设计的核酸药物评估。蛋白表达分析用ELISA分析纯合B-hANGPTL3 mice plus小鼠中ANGPTL3蛋白的种属特异性表达。取野生型C57BL/6小鼠和纯合B-hANGPTL3 mice plus小鼠的血浆进行分析。mANGPTL3的表达在野生型小鼠中可检测到。hANGPTL3的表达只在纯合B-hANGPTL3 mice plus小鼠中检测到，野生型小鼠中检测不到。B-hANGPTL4 mice品系名称：C57BL/6N-Angptl4tm1(ANGPTL4)/Bcgen背景：C57BL/6N产品编号：111085mRNA表达分析用RT-PCR分析纯合B-hANGPTL4小鼠中ANGPTL4基因的种属特异性表达。mANGPTL4 mRNA的表达仅在野生型小鼠的脂肪组织中检测到，而hANGPTL4 mRNA的表达只在纯合B-hANGPTL4小鼠中检测到，野生型小鼠中检测不到。 蛋白表达分析  用western blot分析纯合B-hANGPTL4小鼠中ANGPTL4蛋白的种属特异性表达。取野生型小鼠和纯合B-hANGPTL4小鼠的脂肪组织进行western blot分析。ANGPTL4的表达在两种鼠中均可检测到，因为ANGPTL4可种属交叉识别。并且，对于两种鼠来说，ANGPTL4的表达量在禁食状态下更高。 B-hANGPTL8 mice品系名称：C57BL/6N-Angptl8tm1(ANGPTL8)/Bcgen背景：C57BL/6N产品编号：111230mRNA表达分析 用RT-PCR分析纯合B-hANGPTL8小鼠中ANGPTL8基因的种属特异性表达。mANGPTL8 mRNA的表达仅在野生型小鼠中检测到，而hANGPTL8 mRNA的表达只在纯合B-hANGPTL8小鼠中检测到，野生型小鼠中检测不到。蛋白表达分析 用ELISA分析纯合B-hANGPTL8小鼠中ANGPTL8蛋白的种属特异性表达。取野生型C57BL/6小鼠和纯合B-hANGPTL8小鼠的血浆进行ELISA分析。ANGPTL8的表达在两种鼠中均可检测到，因为抗体可种属交叉识别。参考文献1. Sylvers-Davie KL, Davies BSJ. Regulation of lipoprotein metabolism by ANGPTL3, ANGPTL4, and ANGPTL8. Am J Physiol Endocrinol Metab. 2021;321(4):E493-E508. doi:10.1152/ajpendo.00195.20212. Carbone C, Piro G, Merz V, et al. Angiopoietin-Like Proteins in Angiogenesis, Inflammation and Cancer. Int J Mol Sci. 2018;19(2):431. Published 2018 Feb 1. doi:10.3390/ijms190204313. Rhee JW, Wu JC. Dyslipidaemia: In vivo genome editing of ANGPTL3: a therapy for atherosclerosis?. Nat Rev Cardiol. 2018;15(5):259-260. doi:10.1038/nrcardio.2018.384. Aryal, Binod et al. “ANGPTL4 in Metabolic and Cardiovascular Disease.” Trends in molecular medicine vol. 25,8 (2019): 723-734. doi:10.1016/j.molmed.2019.05.010

药物靶点，即药物与人体生物大分子的结合部位，是新药发现的源头。目前全世界在研的抗体类药物靶点有一千多个，如何在其中找到好的药物靶点，开发出一类新药是所有创新药企面临的共同问题。靶点基因的鉴定和验证在药物发现、开发过程中是必不可少且至关重要的一步。在哺乳动物生理学的背景下，基因敲除动物的表型研究已经成为破译基因功能及靶点验证的有力手段。与其他技术相比，基因敲除模型在药物靶点发现方面有自身独特的优势，敲除动物模拟了该靶点被完全抑制时的表型，因而能帮助我们了解该靶点在疾病中的作用，增加我们对人类正常生理过程及疾病发生机制的理解。图片来源 [1]小鼠作为在临床前生物医学研究中常用的模式动物之一，具有诸多方面的优势[2]：小鼠和人类有着绝大部分同源序列，尽管二者在生理和免疫学存在一些差异，但基因组测序发现，小鼠和人类的~30,000个基因中，只有300个(即1%)是两个物种特有的；在一项研究中所有小鼠通常具有相同的遗传背景(即单一近交系或回交到同一个遗传背景)。因此，所有研究对象的基因是相同的，消除了如遗传变异和基因多态性等潜在的复杂因素影响；小鼠繁殖周期短，代际间隔小于3个月，且每窝产仔数量多，可以快速扩繁获得具有统计学意义数量的实验用鼠；在特定的研究中小鼠具有明确的病史，且所有动物可在相同的环境下饲养，排除了其对实验结果可重复性的影响；在一项特定的研究中，所有小鼠采用相同的实验方案，并可进行终点病理学的完整评估，包括检测生理参数和组织病理学分析；小鼠基因组计划已经完成且小鼠基因改造技术成熟，可以构建模拟人类疾病的转基因小鼠模型以了解发病机制及对药物的反应等研究。转基因小鼠模型在生物医学研究中的应用[2]基因敲除小鼠模型除了可以提供表型分析信息外，其在抗体产生和鉴定方面具有两个优势。（1）与野生型小鼠相比，理论上特定基因敲除小鼠产生抗体的效率应该更高，因为敲除小鼠的免疫系统从未接触过免疫蛋白。（2）用于验证抗体特异性，“……严格控制抗体特异性，要求将野生型组织或细胞中的抗体反应性与敲除动物中的抗体反应性进行比较……”。[3] 因此，基因敲除小鼠是开发新型药物或新治疗策略非常有用的实验工具。百奥动物开发了一系列靶点基因敲除（KO）小鼠，可以满足新药开发中“靶点发现”过程的动物模型需求，助力新药研发。扫描下方二维码查看700+基因敲除小鼠资源库，下面以B-IL4ra KO mice(C）为例进行部分数据介绍。B-IL4ra KO mice(C)哮喘小鼠模型构建实验动物：BALB/c，B-IL4ra KO mice(C)，4-5周龄，雌性；致敏阶段：第0，7，14天腹腔注射OVA+AI(OH)3；激发阶段：小鼠在第21-25天每天接受2%的OVA雾化30分钟。检测分析（B）哮喘小鼠的支气管肺泡灌洗液(BALF)中免疫细胞浸润分析；（C）血清中IgE的检测；（D）肺组织的HE染色。通过对IL4RA靶点敲除小鼠的哮喘模型数据分析发现：Il4ra基因敲除后，与对照组相比，BALF中浸润的嗜酸性粒细胞数量和比例有显著性下降；血清中检测不到IgE；肺组织中浸润的炎性细胞和粘液分泌减少。这些结果证明IL4RA可以作为哮喘治疗的潜在靶点进行开发。更多小鼠数据信息，欢迎联系我们。参考资料[1] Disease Models & Mechanisms (2016) 9, 101-103. doi:10.1242/dmm.024547[2] Transgenic Res (2012) 21:327–349. doi:10.1007/s11248-011-9537-3[3] Disease Models & Mechanisms (2019) 12, dmm038224.[4] Drug Discovery Today, Volume 17, Supplement, February 2012, Pages S24-S30. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2011.09.007