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今年Claudin 18.2靶点临床进展消息不断,相关创新疗法相继发布,其中包括单抗、双抗、CAR-T、ADC等疗法。Claudin18.2成为各大药企争相研究的热门靶点。据不完全统计,全球在研的靶向Claudin18.2药物共有30余款,还未有靶向Claudin18.2的药物上市,但全球研发已相继展开,其可能成为继HER-2之后胃癌的第二重要靶点。Claudin 18.2在研项目信息不完全统计信息来源于Clinicaltrial,CDE等其他公开信息;项目进展仅展示最快阶段Claudin18.2发展潜力Claudin蛋白是人体正常组织中紧密连接最重要的一种蛋白质,具有4个跨膜结构域,是细胞紧密连接的重要分子[1]。其家族至少有27个成员组成,其中Claudin18有Claudin18.1和Claudin18.2两种异构体。不同的Claudins在不同的组织上表达,它们的功能改变与各自组织的癌症形成有关[2.3]。Claudin蛋白结构示意图[4]Claudin-18.2在原发性胃癌、转移性胃癌、胰腺癌、食管癌、卵巢癌、肺癌等多种实体瘤中高表达。这种在正常细胞无/低表达、在癌细胞高表达的特性使Claudin 18.2近年来成为实体瘤免疫疗法的理想靶点,受到研究人员的高度关注。NDG girl女团出击百奥动物超人气女团NDG girl,携全新单曲《Claudin18.2》重磅归来,沸腾生物医药界。你,准备好了吗?B-NDG小鼠体内双抗药效研究新用PBMCs重建的B-NDG小鼠进行CD3×Claudin18.2双特异性抗体药效研究将人PBMCs (5E6)静脉植入B-NDG小鼠(雌性,7周龄,n=6)后,皮下植入NUGC4细胞(5E6)。当肿瘤大小约为50-80 mm3,人血hCD45%的百分比高于10%时,动物被分为对照组和治疗组,用CD3×Claudin18.2双特异性抗体药治疗。结果显示,CD3×Claudin18.2双特异性抗体具有明显的肿瘤抑制作用。用PBMC重建的B-NDG小鼠中建立CDX肿瘤模型为体内抗体药效评价提供了一个强有力的临床前模型。数据表示为平均值±SEM。基于B-NDG hIL15小鼠的NK细胞重建新     B-NDG hIL15小鼠NK细胞重建后CD56+细胞的分析。利用分选试剂盒从人PBMC中纯化NK细胞,将分选后的NK细胞(2E6)静脉注射到纯合子B-NDG hIL15(雌性,6周龄,n=8)和B-NDG小鼠(雌性,6周龄,n=8)中。流式细胞术分析移植人NK细胞后的小鼠外周NK细胞的数量和比例。与B-NDG相比,B-NDG hIL15显示更高的人NK细胞百分比,并且在注射后6周仍然维持高水平重建。结果表明,人NK细胞在重建后的B-NDG hIL15小鼠中重建成功。B-NDG hIL15小鼠NK细胞重建后的NK细胞功能检测新 人NK细胞重建后的B-NDG hIL15小鼠中,功能性NK细胞标记物如Granzyme B、NKG2A、NKG2D、NKp46等数量显著增加,NK细胞具有杀伤功能,其他功能性NK标记物如perforin、CD107、NKp30、CD57等也有类似趋势(数据未在此显示)。基于NK细胞重建的B-NDG hIL15小鼠体内药效验证新抗人Claudin18.2抗体对B-NDG hIL15小鼠的抗肿瘤活性。从PBMC中纯化的人NK细胞(2E6)静脉注入纯合子B-NDG hIL15小鼠。A549-hClaudin18.2(1E7)植入B-NDG hIL15小鼠体内。当肿瘤体积达到约100-150mm3时,小鼠被分组(n=6),用抗人Claudin18.2抗体治疗。结果表明:Claudin18.2抗体(IMAB362,内部合成)对人NK免疫系统重建模型B-NDG hIL15小鼠有抑制肿瘤生长的作用。更多NDG girl女团成员,整装待发,踏浪而来,敬请期待。点击“阅读原文”获取更多NDG girl团员内部信息。NDG girl团员简介参考信息[1] Furuse M, Fujita K, Hiiragi T, Fujimoto K, Tsukita S. Claudin-1 and -2: novel integral membrane proteins localizing at tight junctions with no sequence similarity to occludin. Journal of Cell Biology. 1998;141(7):1539–1550.[2] Swisshelm K, Macek R, Kubbies M. Role of claudins in tumorigenesis. Advanced Drug Delivery Reviews. 2005;57(6):919–928.[3] Morin PJ. Claudin proteins in human cancer: promising new targets for diagnosis and therapy. Cancer Research. 2005;65(21):9603–9606.[4] 余燕婷, 俞雨生. Claudin介导溶质转运与腹膜转运功能[J]. 肾脏病与透析肾移植杂志, 2009, 18(002):177-180.

伴随着日益升高的温度,整座城市都沉浸在粉红色的泡泡里,空气中弥漫着恋爱的气息,大家最近的巧克力还吃的完吗?吃不完小编可以帮忙呦。言归正传,在这甜蜜的五月下旬,我们的产品速递又来啦。众所周知,免疫细胞的活化和抑制需要不同的细胞外信号共同刺激,根据协同刺激分子的功能可将其分为共刺激分子和共抑制分子两类。前者产生正性信号,促进淋巴细胞增殖、分化以及细胞因子的分泌;后者产生负性信号,削弱、限制或终止淋巴细胞免疫应答。因此,正负信号的强弱变化可以调控免疫的强度和方向,如在抗病毒和肿瘤中提高免疫应答,而在免疫排斥和自身免疫性疾病中降低免疫应答[1]。图1、T细胞表面主要刺激性及抑制性受体[2]BTLA(B and T lymphocyte associated)是B细胞和T细胞衰减蛋白,是另一种Ig超家族的检查点负调分子,在结构上和CTLA-4及PD-1类似,不仅表达于B细胞、T细胞、NK细胞,在树突状细胞和巨噬细胞中也有表达。BTLA与其配体HVEM结合(HVEM是肿瘤坏死因子受体超家族成员)结合传递共抑制信号,在机体抗肿瘤免疫应答中发挥负性调节作用,并与肿瘤的免疫逃逸机制相关。BTLA抑制剂可以增强TCR信号通路,并恢复T细胞功能,成为肿瘤生物治疗潜在的新靶点。百奥赛图的B-hBTLA 小鼠可以检测BTLA相关的人源化抗体药效,助力药物的临床前研究。B-hBTLA蛋白表达分析图2、B-hBTLA人源化小鼠脾细胞活化及流式检测结果显示:在C57BL/6小鼠的B细胞中可检测到mBTLA+细胞。在B-hBTLA纯合鼠的B细胞中,可检测到hBTLA+细胞。抗人BTLA抗体药效验证图3、利用B-hBTLA小鼠进行抗人BTLA抗体药效验证实验将改造过的小鼠结肠癌MC38细胞(人源化HVEM并去除小鼠HVEM)移植到B-hBTLA纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=6)。结果显示:相同剂量下,不同抗人BTLA抗体展现对肿瘤的抑制效果不同;同一抗人BTLA抗体,不同剂量下也展现出不同抑瘤效果。A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。 结果证明: B-hBTLA小鼠是评估人BTLA抗体体内药效的有力工具。今年3月君实生物开发出全球首个(First in human, FIH)特异性针对B-和T-淋巴细胞衰减因子(BTLA)的重组人源化IgG4κ单克隆抗体(TAB004,或JS004)。其新药临床试验申请(IND)已于3月22日获得美国食品药品监督管理局(FDA)受理,拟适用于晚期不可切除或转移性实体瘤(包括淋巴瘤)的治疗。体外和体内研究表明,JS004可以促进肿瘤特异性T淋巴细胞增殖和提高淋巴细胞功能,在BTLA人源化小鼠的肿瘤模型里减轻肿瘤负荷并提高存活率。据悉,君实生物计划在PD-1抗体耐药的实体瘤病人里展开JS004的1期爬坡试验,并在1期扩展组进行与特瑞普利单抗的联合治疗的尝试。这款新药给肿瘤患者带来了新的治疗选择,BTLA在肿瘤免疫研究中十分具有潜力,希望BTLA未来可以在肿瘤治疗中发挥更大的作用。综上所述,B-hBTLA是一种理想的评估人BTLA抗体体内药效的人源化小鼠模型。百奥赛图拥有多种人源化小鼠模型,并提供模型构建和药效服务。想了解更多小鼠模型及相关服务,请联系我们哦~参考文献[1]刘艳平,BTLA信号在T细胞活化启动和早期阶段的调节作用[J].江苏:苏州大学,2012[2]http://pic.sogou.com/d?query=T%CF%B8%B0%FB% BB%EE%BB%AF%D3%EB%D2%D6%D6%C6&mode=1&did=155#did154

GITR抗体药效验证GITR(TNFRSF18)基因功能简介GITR( glucocorticoid-induced TNFR-related protein)是TNF受体超家族成员,在包括T细胞在内的多种细胞表达,T细胞激活后其表达量上升,是T细胞的共刺激信号,在T细胞增殖和抗肿瘤方面具有起作用。该蛋白被认为在CD25+/CD4+调节性T细胞介导的免疫耐受中起主要作用,GITR的激活抗体可以逆转调节性T细胞所致的免疫耐受,在多种肿瘤模型中可表现出抗肿瘤效果。 B-hGITR抗体药效验证图1. 利用B-hGITR小鼠进行抗人GITR抗体药效验证实验将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hGITR杂合小鼠皮下,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=6) 。结果显示:相同剂量下,不同抗人GITR抗体对肿瘤生长有不同程度的抑制作用。A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。结果证明:B-hGITR小鼠是评估人GITR抗体体内药效的有力工具。抗人BTLA抗体药效验证BTLA基因功能简介BTLA(B and T lymphocyte associated)是B细胞和T细胞衰减蛋白,是另一种Ig超家族的检查点负调分子,在结构上和CTLA-4及PD-1类似,不仅表达于B细胞、T细胞、NK细胞,在树突状细胞和巨噬细胞中也有表达。BTLA与其配体HVEM结合(HVEM是肿瘤坏死因子受体超家族成员)结合传递共抑制信号,在机体抗肿瘤免疫应答中发挥负性调节作用,并与肿瘤的免疫逃逸机制相关。 BTLA抑制剂可以增强TCR信号通路,并恢复T细胞功能,成为肿瘤生物治疗潜在的新靶点。抗人BTLA抗体药效验证图1. 利用B-hBTLA小鼠进行抗人BTLA抗体药效验证实验将改造过的小鼠结肠癌MC38细胞(人源化HVEM并去除小鼠HVEM)移植到B-hBTLA纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=6)。结果显示:相同剂量下,不同抗人BTLA抗体展现对肿瘤的抑制效果不同;同一抗人BTLA抗体,不同剂量下也展现出不同抑瘤效果。A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。 结果证明: B-hBTLA小鼠是评估人BTLA抗体体内药效的有力工具。抗人LAG3抗体药效验证模型LAG3基因功能简介LAG3(Lymphocyte activation gene 3,CD223)为淋巴细胞激活基因,Ig家族成员,主要表达于激活型T细胞、NK细胞、B细胞以及浆细胞样DC细胞,是免疫负调节因子。主要和MHC-Ⅱ类分子结合,以调节树突状细胞的功能。LAG3的表达与特异性T细胞的免疫负调节功能相关,抑制LAG3分子功能可以增强特异性CD8+T细胞的抗肿瘤作用,该分子是一个潜在的肿瘤免疫治疗靶点。LAG3抗体药效验证图1. 利用B-hLAG3小鼠进行抗人LAG3抗体药效验证实验将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hLAG3纯合小鼠皮下,待肿瘤体积约100mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=5)。结果显示:抗人LAG3抗体Ab2对肿瘤生长有抑制作用,人LAG3抗体Ab1对肿瘤生长无抑制作用。A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。结果证明: B-hLAG3小鼠是评估人LAG3抗体体内药效的有力工具。抗人TIGIT抗体药效验证模型TIGIT基因功能简介TIGIT(T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains), 属于 PVR (poliovirus receptor)免疫球蛋白家族成员,含Ig及ITIM结构域的T细胞免疫受体,是Ⅰ型跨膜蛋白,包括IgV胞外段以及免疫球蛋白酪氨酸尾巴样磷酸化片段。 TIGIT主要表达于记忆T细胞表面、 Tregs和NK细胞。与PD-1、TIM3及LAG3相似,TIGIT在肿瘤组织中高表达,其与NK细胞表面的TIGIT受体和DNAM-1蛋白竞争结合。DNAM-1蛋白能够刺激NK细胞功能,从而增加其清除肿瘤细胞的能力,如果TIGIT受体与肿瘤细胞发生结合就会降低NK细胞的杀伤效率。因此抗TIGIT抗体能够增强DNAM-1蛋白的功能,进一步增强NK细胞摧毁肿瘤细胞的能力,成为新一代肿瘤症免疫治疗靶点。抗人TIGIT抗体药效验证图1. 利用B-hTIGIT小鼠进行抗人TIGIT抗体药效验证实验将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hTIGIT纯合小鼠皮下,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=5)。结果显示:抗人TIGIT抗体对肿瘤生长有抑制作用。A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。结果证明: B-hTIGIT小鼠是评估人TIGIT抗体体内药效的有力工具。

抗人CTLA4抗体药效验证模型 CTLA4基因功能CTLA4(cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4,又称CD152), 在T细胞的激活中起重要调节作用。是表达在T细胞表面的细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白,当其和抗原提呈细胞(APCs)表面的B7-1(CD80)和B7-2(CD86)结合时,可以竞争性抑制B7与T细胞表面的CD28的结合,进而抑制T细胞的激活过程。因此通过抑制性抗体抑制CTLA4可以阻断这一机制,进而达到增强T细胞活性的目的。CTLA4是第一个临床关注的免疫靶点,在免疫应答的负性调控方面发挥着重要作用。CTLA4抗体也是FDA批准用于治疗晚期黑色素瘤的抗体药物。CTLA4(Yervoy)抗体在MC38结肠癌模型上药效验证图1.利用B-hCTLA4小鼠进行抗人CTLA4抗体药效验证实验将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hCTLA4纯合小鼠皮下,待肿瘤体积约100mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=5)。结果显示:抗人CTLA4抗体Yervoy低剂量对肿瘤生长无抑制作用,中高剂量对肿瘤生长均有非常明显的抑制作用。A. 肿瘤平均体积±SEM,B.小鼠平均体重±SEM。结果证明:B-hCTLA4小鼠是评估人CTLA4抗体体内药效的有力工具。OX40抗体药效验证模型OX40基因功能 OX40,又名Tnfrsf4(Tumor necrosis factor receptor superfamily, member 4),主要表达于激活的CD4+和CD8+T细胞表面,和OX40配体结合可以刺激CD8+T细胞的活化。通过OX40/OX40L信号的共激活效应,T细胞的功能,包括细胞因子的产生、增殖和T细胞的存活等作用被进一步加强。OX40抗体激活剂(Agonist)可降低肿瘤内Tregs,提高抗肿瘤活性。OX40抗体药效验证:杂合鼠图1. 利用B-hOX40小鼠进行抗人OX40抗体药效验证实验将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hOX40杂合小鼠皮下,待肿瘤体积约100mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=5)。结果显示:3个剂量组的TGI均在50%左右,0.1mg/kg组在实验终点的药效有所下降,1mg/kg和10mg/kg两组与对照相比,均有统计学差异(p<0.05)。给药对肿瘤生长有明显的抑制作用。A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。结果证明:B-hOX40小鼠是评估人OX40抗体体内药效的有力工具。OX40抗体药效验证:纯合鼠图2. 利用B-hOX40小鼠进行抗人OX40抗体药效验证实验将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hOX40纯合小鼠皮下,待肿瘤体积约100mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=5)。结果显示:抗人OX40抗体对肿瘤生长有抑制作用。A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。结果证明: B-hOX40小鼠是评估人OX40抗体体内药效的有力工具。抗人CD27抗体药效验证模型 CD27基因功能简介CD27( CD27 molecule )是TNF受体超家族成员 ,表达于T细胞、B细胞表面,对产生和维持长期的T细胞免疫至关重要,CD27与配体CD70结合为T、B细胞的活化、增殖和B细胞产生免疫球蛋白提供共刺激信号。已有实验证实CD27激活型抗体能够有效激活小鼠肿瘤免疫应答。利用CD27激活型抗体处理小鼠能够有效增强对淋巴癌和B16黑色素瘤的抗肿瘤免疫效应,为肿瘤免疫治疗提供了潜在新靶点。CD27抗体药效验证图1. 利用CD27小鼠进行抗人CD27抗体药效验证实验将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hCD27杂合小鼠皮下,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=5)。结果显示:抗人CD27抗体对肿瘤生长均有非常明显的抑制作用。A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。结果证明:B-hCD27小鼠是评估人CD27抗体体内药效的有力工具。抗人TIM3抗体药效验证TIM3基因功能简介TIM3(T-cell immunoglobulin and mucin domains-containing protein 3)为T细胞免疫球蛋白及黏蛋白家族成员,是一类特异性表达于Th1细胞表面的受体。其配体为galectin-9, galectin-9在肿瘤微环境中大量表达,TIM3可以通过与galectin-9的结合来抑制Th1细胞的活性。因此抗TIM3抗体通过抑制TIM3与其配体的结合,可以解除对Th1细胞活性的抑制,阻止其对免疫系统的负向调节,达到治疗肿瘤的目的。抗人TIM3抗体药效验证图1. 利用B-hTIM3小鼠进行抗人TIM3抗体药效验证实验将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hTIM3纯合小鼠皮下,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=5)。结果显示:抗人TIM3抗体对肿瘤生长有抑制作用。A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。结果证明: B-hTIM3小鼠是评估人TIM3抗体体内药效的有力工具。

在这个元气满满的周一,百奥赛图知识拓展课堂如期而至,大家是不是早已经压抑不住自己熊熊燃烧的学习之魂啦?今天小编给大家带来了TNFR2靶点,下边就让我们一起来了解一下这个在肿瘤免疫领域牢牢占据着一席之地的靶点吧~ TNFR2基因功能简介 TNFRSF1B(TNF receptor superfamily member 1b) 为TNF受体超家族成员, 也称为TNFR2,主要表达在肿瘤微环境中的Treg细胞和多种肿瘤细胞中(如卵巢癌和肠癌)。其配体TNF主要识别TNFR1进行凋亡,依赖TNFR2进行与T细胞存活相关的功能——通过NF-κB信号促进pro-survival基因的转录,从而促进细胞增殖和生存。许多实验表明阻断型抗体可以特异性杀伤肿瘤微环境中的Treg细胞和肿瘤细胞,用于治疗多种肿瘤;而激活型抗体可以激活Treg细胞,进而抑制Teff细胞,从而治疗自身免疫疾病,为免疫治疗提供了新的靶点。图1 TNFR1和TNFR2介导了不同的信号和作用[1]百奥赛图自主研发了TNFR2人源化小鼠,助力抗体药物研发。 基本信息 表型分析1B-hTNFR2小鼠mRNA表达分析通过RT-PCR对WT和B-hTNFR2小鼠中TNFR2基因表达进行品系特异性分析。在C57BL/6小鼠中可检测到mTNFR2 mRNA,而hTNFR2 mRNA仅在B-hTNFR2纯合鼠中检测到。2B-hTNFR2小鼠蛋白表达分析通过流式细胞术对野生型C57BL/6和B-hTNFR2纯合鼠中TNFR2蛋白表达进行分析。用抗小鼠CD3ε抗体体内刺激野生型C57BL/6和B-hTNFR2纯合鼠,收集脾细胞,并用种属特异性抗TNFR2抗体进行流式细胞术分析。结果显示:在C57BL/6小鼠B细胞表面检测到mTNFR2,在B-hTNFR2纯合鼠B细胞表面检测到hTNFR2。用抗小鼠CD3ε抗体体内刺激野生型C57BL/6和B-hTNFR2纯合鼠,收集脾细胞,并用种属特异性抗TNFR2抗体进行流式细胞术分析。结果显示:在C57BL/6小鼠T细胞表面检测到mTNFR2,在B-hTNFR2纯合鼠T细胞表面检测到hTNFR2。用抗小鼠CD3ε抗体体内刺激野生型C57BL/6和B-hTNFR2纯合鼠,收集脾细胞,并用种属特异性抗TNFR2抗体进行流式细胞术分析。结果显示:在C57BL/6小鼠Treg细胞表面检测到mTNFR2,在B-hTNFR2纯合鼠Treg细胞表面检测到hTNFR2。今天的知识拓展课堂到这儿就结束了,还没看过瘾的小主们咱们下期不见不散呀~最后告诉大家一个小秘密,点击“原文阅读”可以了解更多免疫检查点人源化小鼠哦。参考文献[1]Faustman D, Davis M. TNF receptor 2 pathway: drug target for autoimmune diseases. Nat Rev Drug Discov 2010, 9(6): 482-493.原文链接:https://biocytogen.com/animal-cell-models/ 扫码关注百奥赛图了解更多资讯哦

hello,大家好呀,炎炎夏日,没有小编的产品推广,想必你们一定不适应。近年来免疫检查点药物成为癌症治疗中一类重要新药,今天就为各位宝宝们介绍一种免疫检查点人源化小鼠,同时作为小编内心的消暑神器——hOX40小鼠。当当当,那我们就赶紧进入正题吧~OX40基因功能简介OX40,又名Tnfrsf4(Tumor necrosis factor receptor superfamily, member 4),主要在表达于激活的CD4+和CD8+T细胞表面,和OX40配体结合可以刺激CD8+T细胞的活化。通过OX40/OX40L信号的共激活效应,T细胞的功能,包括细胞因子的产生、增殖和T细胞的存活等作用被进一步加强。OX40抗体激活剂(Agonist)可降低肿瘤内Tregs,提高抗肿瘤活性。 图1. OX40/OX40L interactions impact the four phases of the T cell lifespan[1]目前公开的数据显示,有多种OX40的抗体药物已经进入临床研究阶段,后续越来越多的OX40抗体药物将会进入到临床阶段,OX40靶点药物研发市场将具有很大的开发潜力,最终造福人类医学事业。部分进展见下表:表1. OX40抗体药物临床来源信息[2]百奥赛图开发的B-hTNFRSF4(OX40)人源化小鼠为科学家们研发该靶点抗体药物的有效验证提供了有力的工具。基本信息基因编辑策略B-hOX40蛋白表达分析图2. B-hOX40人源化小鼠脾细胞活化及流式检测结果显示:在C57BL/6小鼠中可检测到mOX40+细胞。在B-hOX40纯合鼠中,可检测到hOX40+细胞。OX40抗体药效验证:杂合鼠图3. 利用B-hOX40小鼠进行抗人OX40抗体药效验证实验   将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hOX40杂合小鼠皮下,待肿瘤体积约100mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=5)。结果显示:3个剂量组的TGI均在50%左右,0.1mg/kg组在实验终点的药效有所下降,1mg/kg和10mg/kg两组与对照相比,均有统计学差异(p<0.05)。给药对肿瘤生长有明显的抑制作用。A.肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。结果证明:B-hOX40小鼠是评估人OX40抗体体内药效的有力工具。OX40抗体药效验证:纯合鼠图4. 利用B-hOX40小鼠进行抗人OX40抗体药效验证实验     将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hOX40纯合小鼠皮下,待肿瘤体积约100mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=5)。结果显示:抗人OX40抗体对肿瘤生长有抑制作用。 A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。结果证明: B-hOX40小鼠是评估人OX40抗体体内药效的有力工具。人OX40抗体(MOXR0916 Analog)药效验证图5. 利用B-hOX40小鼠进行抗人OX40抗体(MOXR0916 Analog)药效验证实验将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hOX40纯合小鼠皮下,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=5)。结果显示:抗人OX40抗体(MOXR0916 Analog)对肿瘤生长有抑制作用。结果也证明了B-hOX40小鼠是评估人OX40抗体体内药效的有力工具。现在生物医药产业的飞速发展,促使各大药企研发新抗体药物的热情只增不减,百奥赛图盛产各类基因打靶小鼠,欢迎大家垂询哦~ 参考资料[1].Jensen,S.M.,Maston,L.D.,Gough,M.J.Signaling Through OX40 Enhances Antitumor Immunity[J].Seminars in Oncology,2010 Oct;37(5):524-32.[2].https://clinicaltrials.gov/ct2/results?cond=OX40&term=&cntry=&state=&city=&dist=

   目前和肿瘤免疫治疗相关的一些药物(PD-1抗体等)已经用于治疗,已有药品上市并应用在多个适应症,但临床实践已经证明,单一的免疫治疗策略治疗效果有限,在临床中一般需要结合两种或多种免疫治疗手段进行。开发更多可以用于提高免疫系统对肿瘤识别及杀伤能力的药物一直是免疫学研究的热点之一。SIRPα(Signal regulatory proteinα)是SIRP家族中的一个典型的抑制性免疫受体,其可以选择性地表达于髓系细胞和神经细胞膜表面;CD47是一种各种细胞广泛表达的类Ig膜蛋白,可与多种细胞表面受体相互作用。 SIRPα可与其配体CD47结合,产生“别吃我”信号,阻止巨噬细胞吞噬健康的细胞。然而这一机制被狡猾的癌细胞所利用,欺骗免疫系统,开发SIRPα抗体或CD47抗体可激活巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬等杀伤作用,为肿瘤免疫治疗提供新的方法。Mark P. Chao,et al. Curr Opin Immunol. 2012, 24(2): 225–232目前SIRPα和CD47靶点的药物研发进展:尚未有上市药物,继天境生物CD47抗体TJC4 在1月25日获批FDA临床试验许可后,9个药物已进入临床初期阶段(国内已有4家成功抢占先机),临床前研究药物9个以上。CD47靶点药物研发市场将具有很大的开发潜力。详细进展见下表:百奥赛图开发的B-hSIRPA/hCD47 人源化小鼠为科学家们研发该靶点抗体药物的有效验证提供了有力的工具。01基本信息02打靶方式03蛋白表达分析图1. B-hSIRPA/hCD47人源化小鼠脾细胞活化及流式检测结果显示:在C57BL/6小鼠中可检测到mCD47+细胞。在B-hSIRPA/hCD47纯合鼠中,可检测到hCD47+细胞。图2. B-hSIRPA/hCD47人源化小鼠脾细胞活化及流式检测结果显示:在C57BL/6小鼠活化腹腔细胞里,可检测到mSIRPα+细胞。在B-hSIRPA/hCD47纯合鼠活化腹腔淋巴细胞里,可检测到hSIRPα+细胞。但B-hSIRPA/hCD47纯合鼠活化腹腔淋巴细胞里,可检测到mSIRPα+细胞,原因可能是anti-mSIRPα抗体交叉识别hSIRPα 。04人SIRPA抗体体内药效实验将小鼠结肠癌MC38-hCD47细胞移植到B-hSIRPA/hCD47纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物分组(n=5)。结果显示:不同的人SIRPA抗体对肿瘤生长抑制作用不同, 证明B-hSIRPA/hCD47小鼠是评估人SIPRA抗体体内药效检测的有力工具。 A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。05人CD47抗体体内药效实验将小鼠结肠癌MC38-hCD47细胞(人源化CD47并去除小鼠CD47)移植到B-hSIRPA/hCD47纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物分组(n=5)。结果显示:不同的人CD47抗体对肿瘤生长抑制作用不同, 证明B-hSIRPA/hCD47小鼠是评估人CD47抗体体内药效检测的有力工具。 A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。06人CD47抗体毒性实验-血常规给药(第0天)后第2天取血,进行血常规检测。07人CD47抗体毒性实验-血生化给药(第0天)后第2天取血,进行血生化检测。08人CD47抗体毒性实验-实验终点在实验终点取血,进行血常规检测。09人CD47抗体毒性实验-实验终点在实验终点取血,进行血生化检测。有实验表明,SIRPα的多样性是人源造血干细胞抑制的关键,尤其是在肿瘤抑制方面,SIRPα-CD47结合信号的抑制对多种肿瘤治疗具有显著效果,许多人都将SIRPα/CD47抗体看成PD-1/PD-L1抗体之后,下一代肿瘤免疫抑制剂明星靶点!10参考资料[1] Mark P. Chao, Irving L. Weissman, Ravindra Majeti. The CD47-SIRPα Pathway in Cancer Immune Evasion and Potential Therapeutic Implications.Curr Opin Immunol. 2012, 24(2): 225–232.[2] E Sick, A Jeanne1, C Schneider,et al.CD47 update: a multifaceted actor in the tumour microenvironment of potential therapeut interest. British Journal of Pharmacology. 2012, 167 1415–1430.[3] https://clinicaltrials.gov[4] http://alxoncology.com/science-main.html[5] https://www.novimmune.com[6]https://ose-immuno.com/en/ose-product/ose-172/[7] https://kahr-medical.com/products/dsp107/[8] http://www.i-mabbiopharma.com/en/article-294.aspx

背景介绍CD3e(CD3emolecule)编码CD3-epsilon多肽,与CD3-gamma,-delta,-zeta和体细胞受体alpha/beta或gamma/delta共同构成TCR-CD3复合物。此复合物在抗原识别和细胞内信号转导途径方面起着非常重要的作用。近年来,利用人CD3和肿瘤相关抗原(TAA)的双特异性抗体进行抗肿瘤治疗手段被广泛研究。但由于小鼠CD3复合体的胞外区与人类种间同源性相对较低,人CD3特异性治疗抗体不能有效激活小鼠效应T细胞,需建立一个适合于评估人类CD3特异性治疗的实验动物模型。 百奥赛图人源化CD3e小鼠(B-hCD3e),为双抗的药效验证提供了有力工具。  TCR-CD3 complex and its signal pathway[1] mCD3e全人源化小鼠分析将mCD3e全人源化替换为hCD3e,对纯合后代脾脏,胸腺,PBMC及淋巴结进行流式细胞分析,观察小鼠T细胞发育是否正常。以上研究结果表明,相对于野生型,hCD3e全人源化纯合小鼠脾脏,胸腺,PBMC及淋巴结中mCD3+细胞含量较低且CD4、CD8分化差异较大,表明全人源化策略导致T细胞发育过程受阻,此方案制备的小鼠不适于后续药理药效的评价。 基于此,考虑到全人源化可能对mCD3e胞内信号传递的影响,百奥赛图重新优化打靶方案,仅对mCD3e进行胞外区人源化改造,保留其鼠源的信号传导功能。得到B-hCD3e mice,同样对纯合后代脾脏,胸腺,PBMC及淋巴结进行流式细胞分析,结果如下:以上研究结果表明,mCD3e胞外区人源化纯合小鼠(B-hCD3e mice)脾脏,胸腺,PBMC及淋巴结中,各细胞细胞比例与野生型小鼠相比无显著差异,表明T细胞分化未受胞外区人源化改造影响。不是所有人源化小鼠都能有正常功能,不是所有CD3人源化小鼠都叫B-hCD3e mice哦!后续基于B-hCD3e mice模型的体外检测及体内药效等实验数据也进一步证明了该模型的优势所在,具体信息如下所示: B-hCD3e mice基本信息 B-hCD3e mice打靶策略 B-hCD3e mice蛋白表达分析 流式分析结果显示:野生型 C57BL/6 小鼠中检测到mCD3+蛋白表达,纯合B-hCD3e小鼠中检测到hCD3+蛋白表达。 体外检测CD3抗体激活T细胞 从野生型C57BL/6和纯合B-hCD3e小鼠的脾细胞中分离T细胞 (n=4), 与抗CD3抗体(B-hCD3e, anti-hCD3;C57BL/6, anti-mCD3)及抗mCD28抗体孵育24h, 48h,72h。ELISA检测IFN-γ and IL-2.结果表明:IFN-γ 和 IL-2的表达水平在B-hCD3e和C57BL/6中无显著差异。CD3 抗体药效实验 C57BL/6(A) 和B-hCD3e(B)接种MC38细胞系,待肿瘤体积约150±50mm3 后分组(n=5),结果显示:两种小鼠模型中,mPD-1抗体均显著抑制肿瘤生长,表明:胞外区人源化改造对B-hCD3e小鼠T细胞的胞内信号传递无明显影响。同时,hCD3e抗体显著促进B-hCD3e小鼠肿瘤生长。表明:给药(hCD3e抗体)后出现AICD效应,B-hCD3e mice T细胞被清除,进而促进肿瘤生长。流式检测外周血中B细胞和T细胞比例结果显示:hCD3抗体组中,由于hCD3e抗体引起AICD效应,T细胞比例显著降低。,但B细胞比例无明显变化。(A)与hIgG Ab相比,CD19细胞各组间无显著性差异。(B)与hIgG Ab相比,h-CD3 Ab治疗后血液中TCR-β%降低。基于B-hCD3e小鼠的双特异性抗体药效实验 接种hCD19-MC38细胞系至小鼠皮下,肿瘤组织接近150±50 mm3时进行分组(n=6),注射高、中、低不同剂量的Blinatumomab。结果表明:高剂量的hCD3e双特异性抗体(Blinatumomab)能够显著抑制肿瘤生长。证明B-hCD3e小鼠可以评估双特异性抗体体内药效。A.肿瘤体积±SEM B.小鼠平均体重±SEM。 参考文献:[1]Immunology. 2018 Jan;153(1):42-50. doi: 10.1111/imm.12809. Epub 2017 Sep 5. 百奥赛图双抗动物模型列表  百奥赛图双抗细胞系模型列表 

SIPRA抗体或CD47抗体体内药效人CD47抗体体内药效及毒性检测图1. 将小鼠结肠癌MC38-hCD47细胞(人源化CD47并去除小鼠CD47)移植到B-hSIRPA/hCD47纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物分组(n=5)。结果显示:不同的人CD47抗体对肿瘤生长抑制作用不同, 证明B-hSIRPA/hCD47小鼠是评估人CD47抗体体内药效和毒性检测的有力工具。 A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。人CD47抗体体内药效及毒性检测图2. CD47抗体药效实验中,给药后第2天取血,进行血常规检测。人CD47抗体体内药效及毒性检测图3. CD47抗体药效实验中,给药后第2天取血,进行血生化检。人CD47抗体体内药效及毒性检测-实验终点图4. CD47抗体药效实验中,在实验终点取血,进行血常规检测。人CD47抗体体内药效及毒性检测-实验终点图5. CD47抗体药效实验中,在实验终点取血,进行血生化检。人CD47抗体体内药效实验图6. 将小鼠结肠癌MC38-hCD47细胞(人源化CD47并去除小鼠CD47)移植到B-hSIRPA/hCD47纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物分组(n=5)。结果显示:不同的人CD47抗体对肿瘤生长抑制作用不同, 证明B-hSIRPA/hCD47小鼠是评估人CD47抗体体内药效的有力工具。 A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。人SIRPA抗体体内药效实验图7. 将小鼠结肠癌MC38-hCD47细胞(人源化CD47并去除小鼠CD47)移植到B-hSIRPA/hCD47纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物分组(n=6)。结果显示:不同的人SIRPA抗体对肿瘤生长抑制作用不同, 证明B-hSIRPA/hCD47小鼠是评估人SIRPA抗体体内药效的有力工具。 A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。

TIGIT是T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域蛋白,它在淋巴细胞中表达,表达最高的是效应和调节性CD4+ T细胞、滤泡辅助CD4+T细胞、效应CD8+T细胞和自然杀伤(NK)细胞。CD155(PVR)是TIGIT的高亲和力受体,也有实验表明CD112和CD113也与TIGIT结合,但亲和力较弱。CD155和CD112同时也是CD226的配体,CD226是启动NK细胞杀伤肿瘤细胞的主要活化性受体之一。CD226与TIGIT竞争,刺激T细胞活性。而肿瘤表面高表达的CD155一旦与NK或T细胞表面的TIGIT结合,它们对肿瘤细胞的杀伤作用就会被抑制。临床前研究显示,抑制TIGIT可能促进T细胞的增殖和功能[1]。 TIGIT在肿瘤免疫周期的多个步骤中起抑制作用,如下图所示:①TIGIT可以抑制NK细胞效应功能,从而使肿瘤细胞逃避杀伤并且阻止癌细胞抗原的释放。②T细胞表达TIGIT可以抑制树突细胞共刺激能力,导致癌症抗原呈递减少,但抗炎细胞因子如IL-10增加,TIGIT还可以在其他细胞如肿瘤细胞上诱导CD155信号传导。③TIGIT+ Tregs或CD155刺激的骨髓细胞可以抑制CD8+ T细胞效应功能或向CD4+ T细胞极化。④TIGIT可以直接抑制CD8+ T细胞效应功能,或TIGIT+ Tregs可以抑制CD8 + T细胞效应功能并阻止癌细胞的清除[2]。  据相关研究表明,在癌症模型中,大量的细胞毒T细胞和辅助T细胞表达PD-1或CTLA-4,意味着这些T细胞处于耗竭状态,但研究发现只有一小部分NK细胞表面有PD-1或CTLA-4。肿瘤内的大部分NK细胞表达TIGIT,它们产细胞因子能力显著下降,出现凋亡。这说明采用PD-1抗体或CTLA-4抗体治疗癌症,有可能不能恢复大多数NK细胞的战斗力。后来的动物模型研究发现,即使是没有T细胞,TIGIT抗体仍旧可以逆转NK细胞的耗竭,延缓肿瘤的生长速度,缩小肿瘤的体积。由于NK细胞识别癌细胞是不依赖于肿瘤抗原的,所以恢复NK细胞的战斗力很关键,而且有助于重新活化细胞毒T细胞[3]。TIGIT在NK细胞中构成了一个以前未被重视的检查点,单独或联合其他检查点受体靶向TIGIT是一种很有前途的抗癌治疗策略。目前尚无TIGIT靶点相关上市药物,其相关药物在肿瘤治疗领域中的研究情况如下图所示: 百奥赛图研发的TIGIT人源化小鼠模型,是评估人TIGIT抗体药物体内药效的有效工具。品系信息基因编辑策略蛋白表达分析采用流式细胞仪对野生型(WT) C57BL/6和纯合子B-hTIGIT小鼠脾细胞进行检测分析。实验结果显示WT小鼠检测到mTIGIT+细胞,纯合B-hTIGIT小鼠检测到hTIGIT+细胞,说明TIGIT人源化小鼠模型建立成功。体内药效验证数据用B-hTIGIT小鼠进行TIGIT Ab功效评估实验将小鼠结肠癌MC38细胞皮下植入纯合B-hTIGIT小鼠中。当肿瘤体积为约150±50mm3时,将小鼠分成对照组和治疗组(n = 7)。实验数据结果表明抗人TIGIT抗体抑制纯合B-hTIGIT小鼠中的肿瘤生长,说明B-hTIGIT小鼠模型是体内hTIGIT抗体功效研究的有效工具。(A)肿瘤平均体积±SEM,(B)小鼠平均体重±SEM。人TIGIT抗体(Tiragolumab Analog)与人PD-1抗体联用药效实验        将小鼠结肠癌MC38细胞移植到B-hPD-1/hTIGIT纯合小鼠体内建立皮下肿瘤模型,待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=6)。结果显示:抗人PD-1抗体与抗人TIGIT抗体联用对肿瘤生长有明显的抑制作用。A. 肿瘤平均体积±SEM,B. 小鼠平均体重±SEM。TIGIT靶点是目前的热门靶点,百奥赛图可以为您提供TIGIT人源化小鼠模型,助力您的科学研究。参考文献:[1] Yu X, Harden K, Gonzalez LC, et al. The surface protein TIGIT suppresses T cell activation by promoting the generationof mature immunoregulatory dendritic cells. Nat Immunol. 2009 Jan;10(1):48-57.doi:10.1038/ni.1674[2] Manieri NA, Chiang EY, Grogan JL. TIGIT: A Key Inhibitor of the Cancer Immunity Cycle. Trends Immunol. 2017 Jan;38(1):20-28. doi: 10.1016/j.it.2016.10.002.[3] Qing Z , Jiacheng B , Xiaodong Z , et al. Blockade of the checkpoint receptor TIGIT prevents NK cell exhaustion and elicits potent anti-tumor immunity[J]. Nature Immunology, 2018.Jun 18. doi: org/10.1038/s41590-018-0132-0.

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