神经递质是在神经元，肌细胞或感受器间的化学突触中充当信使作用的特殊分子，他们大都是分子量较小的简单分子，是生物学上重要的内源性化学信使，谷氨酸就是其中的一种，谷氨酸属于兴奋性递质与学习，记忆，神经系统发育等某些疾病有关，广泛存在于哺乳动物的中枢神经系统、脑组织和体液中。ICE团队利用液相色谱质联用法对谷氨酸检测进行方法学验证，通过检测动物模型与对照组小鼠体内的神经递质含量，来比较两者含量的差异性，确定谷氨酸的含量变化与某些神经疾病的相关性。北京爱思益普生物科技股份有限公司专注于从靶点发现验证、先导化合物筛选、优化到临床前候选分子阶段的创新药一体化生物学服务平台，覆盖在肿瘤，免疫，心血管，中枢神经系统等疾病领域，整合蛋白科学、酶学、细胞学、体内外药物代谢动力学、药理学等平台，支持创新药物研发项目，支持基础科研与临床转化医学业务。

一．模型背景精神分裂症是一种慢性衰弱性神经精神疾病，影响着全球约1%的人口。症状分为三类：积极（包括听觉和视觉幻觉、妄想、概念混乱和思维障碍）、消极（情绪迟钝、社交退缩、快感缺乏、意志丧失、思想和言语内容匮乏）和认知功能障碍。精神分裂症是一种非常严重的精神疾病，给家庭和社会带来了沉重的负担。目前的研究主要是给予SD大鼠 NMDA 受体拈抗剂快速阻断受体功能，而引起异常行为，如活动增多、刻板行为、社会功能障碍、感觉运动门控障碍、以及学习和记忆功能障碍等。用典型抗精神病药物只能改善部分症状，其代表药物有氯胺酮、PCP、MK-801。其中MK-801可以模拟精神分裂的阳、阴性症状。二．造模方法1.SD大鼠环境适应适7天；2.大鼠在第8-13天腹腔注射MK801，连续6天；3.第14-18天测定PPI（提前适应PPI）、高架十字迷宫、旷场试验；4.在第35-37天给予阳性药Risperidone，连续3周；5.在测定PPI、高架十字迷宫、旷场试验。三．数据展示1.矿场检测结果2.高架十字迷宫检测结果3.前脉冲抑制检测结果4.结果评价l旷场试验结果：Fig.1显示，与Control组相比，Model组运动总距离明显提高，穿过中心区域的次数明显增加，有显著差异（P<0.001）；给药后与Model组相比，Risperidone组运动总距离明显降低，穿过中心区域的次数明显减少，有显著差异（P<0.001）；l高架十字迷宫结果：Fig.2显示，与Control组相比，Model组运动总距离明显提高（P<0.001），进入闭臂的次数有明显增加（P<0.01），有显著差异；给药后与Model组相比，Risperidone组运动总距离明显降低（P<0.001），进入闭臂的次数明显减少（P<0.01），有显著差异；lPPI（前脉冲抑制）结果：Fig.3显示，与Control组相比，Model组前脉冲抑制明显减弱甚至消失，Risperidone给药后，前脉冲抑制得到明显恢复（P<0.001）。综上所述：通过行为学检测发现MK801诱导的精神分裂模型建立成功；检测发现阳性药Risperidone对精神分裂疾病有一定的疗效。北京爱思益普生物科技股份有限公司专注于从靶点发现验证、先导化合物筛选、优化到临床前候选分子阶段的创新药一体化生物学服务平台，覆盖在肿瘤，免疫，心血管，中枢神经系统等疾病领域，整合蛋白科学、酶学、细胞学、体内外药物代谢动力学、药理学等平台，支持创新药物研发项目，支持基础科研与临床转化医学业务

在电生理hERG试验中，经常会出现药效减弱的情况。其中一种原因是因为有些药物的稳定性较差，配制完成后静置一段时间就会发生降解而引起了药效变化，不仅导致药效减弱而且会引起药物变质生成有毒物质。影响药物稳定性有很多因素，例如光照，温度，湿度等等都会影响药物的稳定性。所以药物的稳定性对药品的安全性至关重要。预测药物制剂的有效期，既能减少药物的损耗，也能保障药物的安全有效。我们利用供试品分析考察了某种药物的稳定性，首先配制出三个不同浓度的制剂，仪器分析合格后在室温遮光条件下放置6h后，再次取样检测分析，测得0.30 μM制剂中浓度均值为0.25 μM，准确度偏差为-16.67 %；3.00μM制剂浓度均值为2.57 μM，准确度偏差为-14.22%；30.0 μM 制剂中浓度均值为29.67 μM，准确度偏差为-1.11%；结果表明这种药物低中浓度稳定性均不合格（判定标准为RE%<10%），需现配现用进行试验，供试品分析对药物的稳定性评价，具有至关重要的作用。北京爱思益普生物科技股份有限公司专注于从靶点发现验证、先导化合物筛选、优化到临床前候选分子阶段的创新药一体化生物学服务平台，覆盖在肿瘤，免疫，心血管，中枢神经系统等疾病领域，整合蛋白科学、酶学、细胞学、体内外药物代谢动力学、药理学等平台，支持创新药物研发项目，支持基础科研与临床转化医学业务。

双电极电压钳（Two Electrode Voltage Clamp）系统是一套运用于巨大细胞（例如乌贼轴突、爪蟾卵母细胞等）的双电极全细胞电压钳记录设备，主要用于受体和离子通道的研究。近年来，随着分子生物学和电生理技术的发展，卵母细胞表达系统成为研究转运体和离子通道的重要手段。大量的实验采用卵母细胞表达系统研究离子通道与受体的功能和结构。双电极电压钳技术是卵母细胞电生理研究的基本方法。双电极电压钳（Two Electrode Voltage Clamp）系统是一套运用于巨大细胞（例如乌贼轴突、爪蟾卵母细胞等）的双电极全细胞电压钳记录设备，主要用于受体和离子通道的研究。双电极电压钳主要应用的是电压钳技术。电压钳技术（ voltage clamp ）是由 Cole 和 Marmont 设计的，后经英国剑桥大学的 Hodgkin 和 Huxley 成功 改进。电压钳技术的原理是通过一个反馈电路向细胞膜内注入电流，使膜电位始终与指令电位保持一致，如此 ， 便可在膜电位被钳制于任何一个给定水平的状态下记录膜电流的变化。 Hodgkin 和 Huxley 在枪乌贼巨大神经轴突上测得了的离子流。于1963年与澳大利亚科学家 John Carew Eccles （ 1903~1997 ） 因研究神经脉冲、神经纤维传递而共同获得诺贝尔生理学或医学奖。电生理实验的目的在于通过细胞级层面的研究，了解离子通道或转运体的功能。目前，对这些研究的理解受表达模型系统的限制，很难找到一个十分适合的模型。大多数细胞都会同时表达多个不同通道的并相互影响。因此，单独研究某一种离子通道的特性是很困难的。通常需要加入干扰通道的对应抑制剂或通过控制钳制电压以达到所需的研究目的。但缺点是使细胞失去一些正常的生理活性。爪蟾卵母细胞表达系统能较好的解决这一问题。该系统是由Gurdon在1971年提出，用于研究基因表达控制的多种特性。可以将来自其他种属细胞的DNA或mRNA注射到细胞质中，待其表达后，便可开始实验研究。例如，将日本单鳍电鳐的电器官细胞中的mRNA注射到卵母细胞中，可以表达功能性乙酰胆碱通道；而将大鼠脑细胞中的mRNA注射到卵母细胞中，则可以表达多种电压门控的钠离子或如NMDA受体GABA受体等的配体门控通道的表达；也可将拟南芥叶片细胞中的mRNA注射到卵母细胞中，可以记录到电压门控的钙离子通道等等。卵母细胞表达系统主要有如下优点：1. 一只成年爪蟾可以一次性获得上百个活性卵母细胞。这些细胞通过外科手术获得，不需处死爪蟾。一只爪蟾可以反复取卵多次。2. 卵母细胞分离后，不需要很复杂的设备便可以实施培养。3. 卵母细胞个头较大，肉眼可见，故而易于注射DNA和RNA。4. 卵母细胞可以表达包括动植物在内不同种属的RNA。5. 细胞自身具有的离子通道较少，主要为钙离子激活的氯离子通道，对要研究的通道影响很小。6. 成熟的细胞，体积巨大，动物极呈深棕色，两个半球之间有一条清晰的亮环赤道带，直径大约为1200～1300μm，巨大的细胞核中含有大量的酶。单个卵母细胞每天可合成大约400ng的蛋白质，平均每小时合成20ng的蛋白质，不过不合成DNA。外源性的mRNA和内源性的mRNA互相竞争，约有高达50%的蛋白质可直接由外源性的mRNA翻译合成，平均每小时合成10ng蛋白质，因此可以说其是非常理想的表达外源基因的体系。随着分子生物学和电生理技术的发展，卵母细胞表达系统在探究一些单细胞上不易表达记录的通道（如乙酰胆碱受体等配体门控通道）有着卓越的贡献。肌肉型乙酰胆碱激动作用EC50肌肉型乙酰胆碱受Adiphenine抑制作用IC50

乙酰胆碱（Ach）是一种小分子兴奋性神经递质，广泛存在于哺乳动物的中枢神经系统，脑组织和体液中。是中枢胆碱能系统中重要的神经递质之一，其主要功能是维持意识的清醒，在学习记忆中起着重要作用。在人脑组织中有大量的乙酰胆碱，但乙酰胆碱会随着年纪的增加而减少，记忆力也随之下降，补充一定的乙酰胆碱，会明显减少记忆力的减退，其含量测定对神经运动学，运动生理学，临床医学等疾病诊断都有重要的意义。ICE团队利用液相色谱质联用法对Ach检测进行方法学验证，并开展了动物模型脑内神经递质的含量测试。对于神经递质检测，与传统的HPLC-ECD检测相比，UPLC-MS或UPLC-MS/MS具有灵敏度高，特异性强，检测时间短的优势。从而为客户提供更全面更细致有关神经递质相关的服务。北京爱思益普生物科技股份有限公司专注于从靶点发现验证、先导化合物筛选、优化到临床前候选分子阶段的创新药一体化生物学服务平台，覆盖在肿瘤，免疫，心血管，中枢神经系统等疾病领域，整合蛋白科学、酶学、细胞学、体内外药物代谢动力学、药理学等平台，支持创新药物研发项目，支持基础科研与临床转化医学业务。

一 Social Defeat模型研究背景：社交挫败抑郁，也称为社交心理障碍，表现为与人交往时（尤其是大众场合下），会不由自主地感到紧张、害怕，以致手足无措、语无伦次，严重的甚至害怕见人，常称为社交恐惧症、人际恐怖症。其中有些人主要表现为对异性的恐惧，称为异性恐惧症。在社会交往中想象成功的体验少，想象失败的体验多，缺乏自信，总认为自己不行，缺乏交往的勇气和信心。社会交往中过多地约束自己的言行，以致无法充分地表达自己的思想感情，阻碍了人际关系的正常发展等。随着人类文明的进步以及生活节奏的加快，越来越多的人受到不良情绪带来的负面影响，因此建立用于研究抑郁症的模型是研究精神心理学问题的重要基础。由于以下原因Social defeat模型被人们认为是可靠且可重复性的抑郁模型：1.实验周期较短，实验的稳定性和可重复性较高。2.可以较好的同时满足疾病同源性，表象一致性，药物可预见性。3.社会挫败应激的影响可以持续一个月，因此筛选抗抑郁剂和评估阳性药引起生理变化时,可以在 10d模型后连续给药观察，这样不会因造模过程中给药带来的外伤刺激影响模型的成败。二 Social Defeat模型建立：1、雄性ICR小鼠单笼饲养1-2天，用C57小鼠对其进行攻击性筛选：从C57放入ICR鼠笼中开始计时，记录ICR小鼠的攻击潜伏期以及3min内ICR小鼠攻击C57小鼠的次数，连续筛选3-4天；2、筛选出ICR中至少连续3天攻击潜伏期＜60s且攻击次数＞2的ICR小鼠参与后续建模；3、筛选出的ICR小鼠放进改造过的大鼠笼至少24h，然后将参与建模的C57小鼠放入鼠笼中ICR一侧，让ICR小鼠攻击C57小鼠10min，10min后将C57小鼠放在鼠笼分隔出的另一边24h，两只小鼠中间用带孔的隔板隔断；4、第二天C57小鼠交换一个ICR鼠笼，继续上述操作，连续10天；5、第11天，对建模后的动物使用社交回避实验筛选易感小鼠，同时对建模成功的小鼠检测其抑郁样行为——悬尾实验，2%蔗糖偏好实验；三 Social Defeat模型检测方法1、悬尾测试1）实验开始前所有实验动物均在测试环境下适应1h；2）使用医用纸胶带在距小鼠尾尖2cm处将小鼠悬挂到实验设备上；3）记录动物从挂上仪器开始，6min内的状态；并对后4min的小鼠静止不动时间进行统计分析；2、糖水偏好测试1）配制2%浓度的蔗糖溶液，在单笼饲养的小鼠笼上分别放置一瓶糖水和一瓶白水；2）24h后将鼠笼上的白水和糖水交换位置，避免产生位置偏好；3）24h后，糖水适应性饲养结束；每只小鼠禁水禁食24h；4）重新配制糖水，并在给水前称量白水和糖水的质量；5）每只小鼠分别给一瓶糖水和白水，不给予饲料；6）24h后再次称量白水和糖水的质量，计算糖水减少量占总水量减少量的百分比作为糖水偏好率。四 结果分析通过悬尾试验、糖水偏好试验评价小鼠抑郁样行为。在糖水偏好实验中，模型组与正常组相比糖水消耗率存在极显著差异，反映出在造模后模型组小鼠出现了快感缺失，而阳性药和待测化合物均可带来明显改善。在悬尾试验中模型组与对照组的不动时间相比具有显著差异，反映出在造模后模型组小鼠出现了绝望行为，而阳性药和待测化合物亦可带来明显改善。快感缺失与绝望行为是抑郁症的两大主要症状。同时，使用ELISA法测定不同脑区内MAO(单胺氧化酶）的含量，结果显示在黑质、海马和中缝背核等脑区，模型组的MAO-A和MAO-B的表达量都出现显著上升，而阳性药和待测化合物能起到改善作用北京爱思益普生物科技股份有限公司专注于从靶点发现验证、先导化合物筛选、优化到临床前候选分子阶段的创新药一体化生物学服务平台，覆盖在肿瘤，免疫，心血管，中枢神经系统等疾病领域，整合蛋白科学、酶学、细胞学、体内外药物代谢动力学、药理学等平台，支持创新药物研发项目，支持基础科研与临床转化医学业务

爱思益普疼痛动物模型包括： 慢性坐骨神经缩窄性损伤模型（CCI，（大鼠/小鼠） 坐骨神经分支选择性损伤结扎模型（SNI，大鼠/小鼠） 脊神经选择性结扎模型（SNL，大鼠/小鼠） 完全弗氏佐剂（CFA）诱导的炎性疼痛模型醋酸扭体（大鼠/小鼠） 内脏痛模型（大鼠）研究内容脑缺血模型低氧无糖（OGD）模型化学损伤模型动物局灶性脑缺血模型（MCAO）全脑缺血模型（1）脑缺血模型MCAO大脑中动脉栓塞实验目前我们采用线栓法进行大小鼠(C57♂26-30g、SD♂240-270g)造模，线栓从颈外动脉插入颈总动脉后再进入颈内动脉，最后到达颅内。栓塞时间60-120min，再灌注24h。（2）MCAO大脑中动脉栓塞实验（大鼠）（3）MCAO大脑中动脉栓塞实验（小鼠）

DDR(DNA损伤反应)是一个由蛋白质磷酸化驱动的信号转导通路，而ATR在其中起主导作用。 ATR(共济失调毛细血管扩张突变基因Rad3相关激酶)是磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K)相关激酶(PIKK)蛋白家族的成员，主要参与DNA单链断裂修复。当细胞内有DNA复制压力或DNA损伤产生时，ATR与其配体ATRIP结合并被招募到损伤区域，同时自身发生自身磷酸化并被激活，从而引发一系列级联反应，磷酸化相应的下游蛋白Chk1和Chk2等,调节细胞周期各个检查点,引起细胞周期阻滞,使DNA损伤得以修复。ATR在维持基因组的稳定性中起到至关重要的作用。由于肿瘤细胞的多种DNA修复通路存在缺陷，因此相对于正常细胞，肿瘤细胞更依赖ATR修复通路并对ATR抑制剂更加敏感。ICE目前提供包含ATR靶点在内的多种DDR靶点的检测服务。北京爱思益普生物科技股份有限公司专注于从靶点发现验证、先导化合物筛选、优化到临床前候选分子阶段的创新药一体化生物学服务平台，覆盖在肿瘤，免疫，心血管，中枢神经系统等疾病领域，整合蛋白科学、酶学、细胞学、体内外药物代谢动力学、药理学等平台，支持创新药物研发项目，支持基础科研与临床转化医学业务。

背根神经节（Sorasal root ganglion，DRG）是感觉传导的初级神经元，具有传输和调节机体感觉，接收和传导伤害性感受的功能。现在已成为神经病理疼痛治疗的重要模型，在疼痛机制中的作用和疼痛治疗等领域成为研究热点。而与疼痛密切相关的离子通道及其受体是实现背根神经节靶向阵痛的关键。在背根神经节上存在多种离子通道，与疼痛等疾病相关的是钠离子通道。神经损伤后，电压门控钠离子通道活性改变，使得神经元兴奋性增加，产生异常的自发性放电。近些年研究表明，多种电压门控性钠通道均参与了神经疼痛相关机制，其中主要是Nav1.7和Nav1.8通道。Nav1.8通道是河豚毒素（TTX）不敏感的钠离子通道，主要表达在背根神经节小直径C纤维神经元。Nav1.8通道主要参与炎症疼痛相关和神经病理性疼痛外周敏化的形成。在动物实验中，炎症性疼痛和神经病理性疼痛大鼠模型的Nav1.8通道表达量显著上升。A803467 可以显著的抑制DRG神经元中TIX不敏感的钠离子通道：状态依赖性A803467对DRG神经元动作电位的影响DRG神经元动作电位

心脏复极毒性（QT间期延长及尖端扭转型室性心动过速）是严重而广泛的不良反应，撤市的药物中1/3由于药物致心律失常不良反应导致。抑制hERG钾通道，是致心律失常毒性的主要原因。2005年颁布的ICHS7B要求所有申报阶段的供试品必须有对hERG抑制率的数据，cFDA（NMPA）的“药物QT间期延长潜在作用非临床研究技术指导原则”（2014）也有相应规定。 hERG作为评价药物致心律失常毒性的主要指标，敏感性和特异性都存在比较严重的问题，因此，2013年FDA开始推动综合性体外致心律失常评价（CiPA, Comprehensive in vitro Proarrhythmia Assay）。CiPA包括四个核心环节：（1）心脏多种离子通道评价（2）动作电位的计算机虚拟重建（3）iPSC诱导分化心肌细胞模型（4）临床心电图评估。 ICH关于CiPA的时间计划表：2020年6月，将以ICHS7B Q&A的更新形式推出。爱思益普体外心脏安全性评价服务1. 心脏多离子通道作用研究2. 干细胞诱导分化心肌细胞动作电位3. 浦肯野纤维动作电位