【评价原理】

铅中毒的器官主要是造血系统、心脏和神经系统。对于儿童的神经系统损伤导致智商降低，注意力缺陷多动障碍以及阅读和学习能力下降，其毒性机制与神经元生长和轴索束变化相关。

通过斑马鱼体内铅含量、轴索荧光强度和运动神经长度检测，铅中毒的斑马鱼体内铅含量明显比正常斑马鱼的高很多，而轴索荧光强度和运动神经长度铅中毒斑马鱼均明显少于正常斑马鱼。由于斑马鱼可被整体免疫荧光染色以及转基因荧光鱼运动神经发荧光的特性，我们可以通过荧光强度观察到明显的轴索细胞和运动神经的变化。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成五组，分别是正常对照组、模型对照组和服用促排铅剂组。其中正常对照组未摄入铅，模型对照组与服用促排铅剂组都摄入了等量的铅（铅通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用促排铅剂组在摄入铅的同时摄入绿豆肽复方之类的促排铅剂。

服用一段时间促排铅剂后，我们（1）检测体内铅含量；（2）用荧光显微镜采集轴索荧光强度；（3）用荧光显微镜采集运动神经长度。

【结果展示】

（1）体内铅含量：

图1. 斑马鱼体内铅含量

与模型对照组比较，*p < 0.05

可以看到，服用排铅剂组的铅含量与摄入相同铅的模型对照组比较相似明显减少。

（2）轴索荧光强度：

可以看到，服用排铅剂组脑部轴索荧光强度与摄入相同铅的模型对照组比较明显增加。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用促排铅剂组的铅含量、轴索荧光强度和运动神经长度与未摄入铅的正常对照组相似，并未出现模型对照组的铅含量升高，轴索荧光强度和运动神经长度减少的情况。

2.本实验证实了绿豆多肽复方具有明显的促排铅功效。

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【评价原理】

抑郁症是一种常见的精神疾病，主要表现为情绪低落，兴趣减低，悲观，思维迟缓，缺乏主动性，自责自罪，饮食、睡眠差，担心自己患有各种疾病，感到全身多处不适，严重者可出现自杀念头和行为，目前国内的抑郁症情况越来越严峻，所以对于如何缓解抑郁迫在眉睫。

抑郁症患者单胺类神经递质含量较少，单胺氧化酶活性较平常人增高，单胺氧化酶抑制剂（MAO）能抑制单胺类酶活性，从而对机体内的神经递质例如5-HT，Dopamine能减少降解的作用，那么神经系统内的这些神经递质含量活性会持续性升高，从而有一定治疗抑郁症的结果。

我们评价斑马鱼抗抑郁作用指标：单胺氧化酶活性的检测。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组与抗抑郁剂组。其中正常对照组未经任何处理。之后通过化学发光法测量组织内单胺氧化酶的相对活性。

【结果展示】

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用抗抑郁剂情况与对照组相比较，机体内的单胺类氧化酶活性明显降低。

2.本实验证实了盐酸司来吉兰，吗氯贝氨等具有显著的降低单胺氧化酶活性的作用。

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空调、环境污染、季节转换带来的温度变化与压力，以及皮肤衰老、代谢减缓等因素，都会造成肌肤水份流失，令肌肤粗糙、黯哑、形成干纹、引发诸多肌肤问题。皮肤缺水可表现为表面失去光泽变得暗淡无光，失去弹性，出现细纹。补水保湿是护肤化妆品最基础的功效，通过斑马鱼技术能有效评价化妆品及其原料的补水保湿功效。

【评价原理】

斑马鱼用氯化钠处理，由于渗透压的原因皮肤表面将会失水皱缩，尾部面积因皱缩而变小，通过对尾部面积的影响评价化妆品的补水保湿效果。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和供试品组（供试品通过溶解到标准稀释水中的方式接触到斑马鱼皮肤）。

正常对照组不做处理，模型对照组用氯化钠溶液处理，供试品组在用氯化钠处理的同时定量加入受试的化妆品。孵育一段时间后，对斑马鱼进行拍照，以斑马鱼尾部面积评价供试品的补水保湿功效。

【结果展示】

图1 斑马鱼尾部面积（红色区域为尾部面积）

模型对照组斑马鱼尾鳍皱缩、面积明显减小

可以看到，供试品组斑马鱼的尾部面积与正常对照组相似，没有明显的皱缩。

【评价结论】

1.经过各组斑马鱼的对比实验，供试品组的斑马鱼尾部面积与正常对照组相似，没有出现明显的皱缩。

2.本实验证实了该供试品对具有明显的补水保湿功效。

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【评价原理】

斑马鱼的鳔从器官进化、组织结构以及生物学等多个层面都类似于哺乳动物的肺泡。

细菌性肺炎：注射给予LPS建立斑马鱼细菌性肺炎模型。LPS是脂质和多糖的复合物，来源于革兰氏阴性菌细胞壁的外膜，是内毒素的主要成分。接触一定量的LPS会引起机体支气管炎、肺炎、肝炎及脂多糖血症。

通过使用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼和转基因巨噬细胞绿色荧光斑马鱼，在荧光显微镜下可以直接观察斑马鱼中性粒细胞和巨噬细胞，并分时间点视频记录巨噬细胞和中性粒细胞溢出血管情况，使用实时荧光定量PCR仪可获得基因表达水平，通过制作组织病理切片观察斑马鱼鱼鳔部位的病理结构变化。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用抗炎药组。其中，模型对照组与抗炎药组都注射了等量的LPS建立细菌性肺炎模型。抗炎药组在注射了LPS的同时摄入吲哚美辛之类的抗肺炎抗炎药。

服用一段时间抗肺炎抗炎药后，我们在荧光显微镜下拍摄斑马鱼中性粒细胞和巨噬细胞的数量，并分时间点视频记录巨噬细胞和中性粒细胞溢出血管情况，用实时荧光定量PCR仪检测TNF-α、IL-1β值，同时制作成病理切片观察鱼鳔部位的病理结构变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼中性粒表型图

黄色虚线区域为鱼鳔，绿色荧光颗粒为中性粒细胞

可以看到，抗炎药组斑马鱼鱼鳔位置处的中性粒细胞聚集情况明显改善。

图2. 斑马鱼巨噬细胞表型图

黄色虚线区域为鱼鳔，绿色荧光为巨噬细胞

可以看到，抗炎药组斑马鱼鱼鳔位置处的巨噬细胞聚集情况明显改善。

图3. TNF-α基因表达水平

与模型对照组比较，*p < 0.05

可以看到，抗炎药组能显著抑制斑马鱼的炎症基因TNF-α表达水平。

图4. IL-1β基因表达水平

与模型对照组比较，**p < 0.01

可以看到，抗炎药组能显著抑制斑马鱼的炎症基因IL-1β表达水平。

图4. 鱼鳔部位病理切片

从病理切片中能看出来，抗炎药组斑马鱼鱼鳔病理结构与正常对照组相似，未出现模型对照组渗入的炎性细胞明显增多的情况。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，抗炎药组能显著抑制中性粒细胞和巨噬细胞的聚集，能显著抑制炎症基因表达水平，能改善炎性浸润情况。

2.本实验证实了吲哚美辛具有显著的细菌性肺炎防治作用。

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【评价原理】

醉酒实为急性乙醇中毒，使人大脑兴奋，引起行为异常。乙醇进入人体后90%进入肝脏进行代谢，乙醇脱氢酶（ADH）可以将其氧化为乙醛，在乙醛脱氧酶（ALDH）催化下，乙醛转化为乙酸，最后转化为二氧化碳和水。在ADH和ALDH两种酶的作用下，乙醇能够被机体代谢而避免引起机体损伤。由于斑马鱼拥有与人类相似的消化系统，如肝脏、肠道等，消化和营养的吸收及运输与人类高度相似，当乙醇被过量摄入后，经过代谢产生大量乙醛，致使乙醛在体内积累，出现醉酒现象。

解酒有两种评价方法：1. 总运动距离，应用行为分析仪分析斑马鱼的运动轨迹，醉酒斑马鱼的总运动距离比正常斑马鱼明显增多。2. ADH和ALDH两种酶的含量，通过检测斑马鱼体内ADH和ALDH两种酶的含量，分析两种酶的调节作用。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用解酒剂组。其中正常对照组未摄入酒精，模型对照组和服用解酒剂组都摄入了等量的酒精（酒精通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用解酒剂组在摄入酒精之前摄入RU21、海王金樽之类的解酒剂。

服用一段时间解酒剂后，应用行为分析仪分析摄入酒精后的斑马鱼总运动距离；同时用ALDH和ADH试剂盒检测两种酶的含量。

【结果展示】

图1. 斑马鱼运动轨迹图

黑线：慢速运动轨迹；绿线：中速运动；红线：快速运动，红线代表醉酒行为状态

可以看到，服用解酒剂组的运动轨迹与模型对照组比较，快速运动明显减少，醉酒行为有所改善。

从柱状图中可以出来，服用解酒剂组的ADH和ALDH两种酶含量与模型对照组比较明显增高。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用解酒剂组的总运动距离与模型对照组比较明显降低，并ADH和ALDH两种酶含量明显增高。

2.本实验证实了RU21、海王金樽具有明显的解酒功效。

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【评价原理】

由于硬骨鱼和人类在骨骼发育过程中的基因、信号通路有高度同源性，而且与其他的动物模型相比，斑马鱼具有个体小适合高通量化学筛选、幼鱼身体透明易于观察骨骼发育的特点，所以近年来以斑马鱼为模型的骨骼研究逐渐成为这一领域的热点。斑马鱼从前向后的脊椎发育过程是非连续的，而是分成两个不同的区域：前域（包括前3块椎骨）和后域（包括第4-31块椎骨）。将斑马鱼脊椎骨钙化过程分成两个不同区域是基于第2和第3椎骨的出现晚于第4椎骨。我们利用斑马鱼骨骼发育的规律，摄入生长发育促进剂的斑马鱼脊椎骨发育会加快。

脊椎骨染色应用与钙特异性结合的荧光染料（呈绿色），经荧光显微镜观察脊椎骨的数量。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组和服用生长发育促进剂组（维生素D3、碳酸钙之类的生长发育促进剂通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用一段时间生长发育促进剂后，我们对斑马鱼做骨骼特异性荧光染色，观察斑马鱼脊椎骨的发育情况。

【结果展示】

图1. 斑马鱼脊椎骨荧光图

黄色虚线区域为定量的脊椎骨

可以看到，服用生长发育促进剂的脊椎骨数量明显比正常对照组增多。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用生长发育促进剂的斑马鱼脊椎骨数量比正常对照组增多。

2.本实验证实了维生素D3、碳酸钙具有明显促进生长发育功效。

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【评价原理】

斑马鱼心血管系统的发育与人高度相似，虽然斑马鱼是单心房单心室，但其心脏结构及功能与人高度保守。同时，由于斑马鱼具有透明易观察等优点，开始被大量应用于心血管疾病研究和药物心血管毒性评价当中。

羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶 ( HMGCR) 是他汀类药物发挥抑制作用的直接作用点, HMGCR功能被抑制会影响血管的完整性和稳定性，诱发心脏出血。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和药物组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组与服用改善心脏出血药物组都摄入了等量的辛伐他汀（辛伐他汀通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。药物组在摄入辛伐他汀的同时摄入淫羊藿苷之类的改善心脏出血药物。

服用改善心脏出血药物一段时间后，我们通过解剖显微镜对斑马鱼进行心脏出血发生率的统计；对斑马鱼进行行为学分析；通过心跳血流分析系统采集斑马鱼血流影像，并分析血流速度改善作用。

【结果展示】

图1. 斑马鱼改善心脏出血表型图

可以看到，模型对照组的斑马鱼心脏有明显的出血，服用改善心脏出血药物组的心脏出血情况与正常对照组比较相似，没有明显的心脏出血。

图2. 斑马鱼运动改善表型图

可以看到，模型对照组的运动距离明显减少，服用改善心脏出血药物组的运动距离与正常对照组比较相似，没有明显的运动减少。

图3. 斑马鱼改善血流柱状图

可以看到，模型组的血流速度明显减慢，服用改善心脏出血药物组的血流速度与模型对照组比较血流速度增加，没有明显的血流速度减慢。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用改善心脏出血药物组的心脏出血情况、运动距离、血流速度均有明显改善作用。

2.本实验证实了淫羊藿苷具有明显改善心脏出血的功效。

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【评价原理】

贫血是指人体外周血红细胞容量减少，低于正常范围下限的一种常见的临床症状。斑马鱼造血系统的形成，包括红系、髓系、淋系及巨核系为主的造血系统，其相关的转录因子及信号转导通路同人类有高度的同源性，这些特点使斑马鱼在人类造血系统和血液疾病的研究中有着更加广泛的应用。由于斑马鱼早期出现血液循环时胚胎透明，可通过染色剂在显微镜直接观察心脏红细胞的数量。

苯肼导致红细胞外翻和氧化应激产生，红细胞外翻能够引起血细胞聚集，氧化应激产生导致内皮细胞损伤，进而导致血小板聚集、纤维蛋白原形成，最终诱导血栓发生。

用特异性红细胞染色剂（呈红色），贫血斑马鱼心脏部位的红细胞较正常斑马鱼明显减少，在解剖显微镜下可以观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用补血药物组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组与服用补血药物组都摄入了等量的苯肼（苯肼通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用补血药物组先摄入生血宁之类的改善贫血药物后再摄入苯肼。

服用改善贫血药物一段时间后，再加入苯肼共同处理一段时间后，我们对斑马鱼整体做红细胞特异性染色，最终分析斑马鱼的红细胞信号强度。

【结果展示】

图1. 斑马鱼贫血表型图

可以看到，模型对照组红细胞信号强度较正常对照组明显减少，服用补血药物组的红细胞信号强度与正常对照组比较相似，没有明显的红细胞减少情况。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用补血药物组的红细胞信号强度与正常对照组相似，并未出现模型对照组红细胞减少的情况。

2.本实验证实了生血宁具有明显改善贫血的功效。

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【评价原理】

正常成人的心率在每分钟60～100次之间，如果低于60次称为心动过缓，是心律失常的一个重要类型，患者平时有头晕、乏力、倦怠、精神差的症状。研究表明，斑马鱼心血管系统的发育与人高度相似，虽然斑马鱼是单心房单心室，但其心脏结构及功能与人高度保守。同时，由于斑马鱼具有透明易观察等优点，开始被大量应用于心血管疾病研究和药物心血管毒性评价当中。

维拉帕米能阻滞心肌细胞慢通道，抑制Ca2+向细胞的内流，阻碍心脏慢反应电活动，降低舒张期去极化速度，抑制窦房结的自律性，减慢心率；亦能延长房室结的有效不应期，减慢房室传导。

用解剖显微镜下观察斑马鱼心率，模型对照组斑马鱼心率较正常斑马鱼明显减慢。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和药物组。其中正常对照组未摄入维拉帕米，模型对照组与药物组都摄入了等量的维拉帕米（维拉帕米通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。药物组先摄入地高辛之类的改善心动过缓药物再摄入维拉帕米。

服用改善心动过缓药物后再加入维拉帕米共同处理至实验终点后，我们对斑马鱼统计斑马鱼的心率。

【结果展示】

图1. 斑马鱼心动过缓柱状图

可以看到，模型对照组心率明显减慢，服用药物组的心率与正常对照组比较相似，没有明显的心率减慢。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用改善心动过缓药物组的心率相较于模型对照组。

2.本实验证实了地高辛具有明显改善心动过缓的功效。

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