【评价原理】

糖尿病是一种由遗传基因决定的与感染、肥胖等环境因素促发有关的疾病，其基本病理生理为绝对或相对性胰岛素分泌不足引起的代谢紊乱。高血脂患者由于血液中胆固醇、油脂含量过多，就会使过多油脂沉积于血管壁上，容易使动脉管壁增厚、变硬、失去弹性，导致动脉硬化。斑马鱼食欲调节（如血清素）和胰岛素调节功能与人类相似，斑马鱼其他涉及葡萄糖体内平衡的器官系统（包括脑、肝、脂肪细胞组织和骨骼肌）的发育和功能也与哺乳动物类似。斑马鱼在糖脂负荷状态下表现出持续高血糖、高血脂现象，用高糖高脂饲料可以诱发斑马鱼高血糖，模拟人的二型糖尿病。

用转基因绿色血管荧光斑马鱼（呈绿色），患有高糖高脂的斑马鱼眼部血管壁厚度较正常斑马鱼明显增厚，在共聚焦显微镜下可以观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和降糖降脂产品组。其中正常对照组未摄入高糖高脂饲料，模型对照组与服用降糖降脂产品组都摄入了等量的高糖高脂饲料（高糖高脂饲料通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。降糖降脂产品组在摄入高糖高脂饲料的同时摄入松花蛹虫草之类的降糖降脂产品。

服用一段时间降糖降脂产品后，我们用共聚焦显微镜下观察斑马鱼眼部血管壁厚度。

【结果展示】

图1. 斑马鱼眼部血管壁厚度

白色箭头所指为血管壁

可以看到，模型对照组的眼部血管壁厚度较正常对照组明显增厚，而降糖降脂产品组斑马鱼眼部血管壁厚度与正常对照组相近。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，降糖降脂产品组斑马鱼眼部血管壁厚度与正常对照组相近，并未出现模型对照组眼部血管壁增厚的情况。

2.本实验证实了松花蛹虫草具有眼部血管壁厚度增厚改善功效。

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【评价原理】

糖尿病是一种由遗传基因决定的与感染、肥胖等环境因素促发有关的疾病，其基本病理生理为绝对或相对性胰岛素分泌不足引起的代谢紊乱。持续的高血糖水平导致糖尿病并发症发生，高血糖累及中枢和周围神经病变，出现神经炎症。感觉神经受损较为多见，出现麻木、触电、发热、蚁行感，运动神经受损则出现肌力下降。斑马鱼胰腺的形态发生和基本细胞结构、排列方式类似于哺乳动物，斑马鱼食欲调节（如血清素）和胰岛素调节功能与人类相似，斑马鱼其他涉及葡萄糖体内平衡的器官系统（包括脑、肝、脂肪细胞组织和骨骼肌）的发育和功能也与哺乳动物类似。斑马鱼在糖负荷状态下表现出持续高血糖现象，用高糖高脂饲料可以诱发斑马鱼高血糖，模拟人的二型糖尿病的神经并发症。

用转基因运动神经荧光斑马鱼（呈绿色），患有高血糖的斑马鱼运动神经细胞损伤、荧光强度减弱，在荧光显微镜下可以观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用降糖产品组。其中正常对照组未摄入高糖高脂饲料，模型对照组与服用降糖产品组都摄入了等量的高糖高脂饲料（高糖高脂饲料通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内。降糖产品组在摄入高糖高脂饲料的同时摄入松花蛹虫草之类的降糖产品。

服用一段时间降糖产品后，我们用荧光显微镜观察斑马鱼周围运动神经荧光强度。

【结果展示】

图1. 斑马鱼周围运动神经荧光强度

白色箭头代表运动神经

可以看到，模型对照组周围运动神经荧光强度较正常对照组明显减弱，而降糖产品组斑马鱼周围运动神经荧光强度明显增强。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，降糖产品组斑马鱼周围运动神经荧光强度与模型对照组比较明显增强。

2.本实验证实了松花蛹虫草之类的产品具有神经保护作用。

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紫外线是导致皮肤损伤或病变的重要因素，未进行防晒的皮肤暴露在紫外线下可能出现皮炎、红斑、黑色素增多等现象，类似的，斑马鱼的尾鳍受紫外线照射后将出现尾鳍褶皱，面积缩小等现象，使用化妆品后，通过定量评价斑马鱼尾鳍面积的复苏情况评价其抗光老化功效。

【评价原理】

通过紫外光照射使斑马鱼尾鳍形成损伤，添加化妆品后，采用拍照方式对斑马鱼尾鳍进行图像采集，分析斑马鱼尾鳍损伤程度并判定抗光老化功效。

【实验方案】

我们将斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组、化妆品组。正常对照组不做处理，模型对照组和化妆品组分别进行紫外光多次照射，随后化妆品组中定量加入受试化妆品，孵育一段时间后，三组斑马鱼分别进行尾鳍拍照处理，分析斑马鱼尾鳍面积，从而评价抗光老化功效。

【结果展示】

图1. 斑马鱼尾鳍损伤面积表型图（红色为分析区域）

【评价结论】

1.经过各组斑马鱼对比实验，与模型对照组尾鳍面积相比，化妆品组具有明显

改善作用。

2.本实验证实了该化妆品具有抗光老化的作用。

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【评价原理】

目前国际上公认的药物毒性与安全性评估实验方法分为体外与体内实验2种。斑马鱼实验为整体动物研究，能反映化合物吸收、分布、代谢与排泄的过程。而且，斑马鱼与人类基因组的相似度高达87%，有与人类近似的毒性特征和信号传导通路，斑马鱼的各种器官和组织在解剖学、生理学和分子水平上类似于哺乳动物，因此是一种可比性较强的模式生物，可以用于各种类型供试品的急性毒性评价。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼整体进行观察评价，观察斑马鱼心脏、脑部、耳、下颌、眼、肝脏、肠道、躯干/尾/脊索、肌肉/体节、鳍、体长、身体着色、循环系统、身体水肿和出血等毒性反应情况，统计毒性发生率。

【结果展示】

图1. 斑马鱼胚胎毒性表型图

可以看到，服用/注射供试品组的眼变小、心包水肿、肝脏变性、卵黄囊吸收延迟、肾性水肿、胃肠道发育延迟。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的组织器官产生明显的急性毒性表型，与正常对照组存在明显的差别。

2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有急性毒性。

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【评价原理】

斑马鱼和哺乳动物的心脏有相似的功能，包括血流方向、由专门的心内膜肌肉组织驱动的高压系统、由电子系统调节的心律以及与起搏活动相关的心跳。而且斑马鱼幼鱼通体透明，血细胞在心脏和血液循环系统的堆积非常容易观察，因而利用斑马鱼模型研究心血管毒性极为方便。

我们评价斑马鱼心血管毒性有4个指标：1.心率；2.心节律；3.心包水肿面积；4.静脉瘀血面积。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼的心脏进行观察评价。

【结果展示】

图1. 斑马鱼心血管毒性表型图

红色虚线框内为心脏

可以看到，服用/注射供试品组的斑马鱼出现明显的心包水肿。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼出现明显的心包水肿，与正常对照组存在明显的差别。

2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有心血管毒性。

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【评价原理】

糖尿病是一种由遗传基因决定的与感染、肥胖等环境因素促发有关的疾病，其基本病理生理为绝对或相对性胰岛素分泌不足引起的代谢紊乱。斑马鱼胰腺的形态发生和基本细胞结构、排列方式类似于哺乳动物，斑马鱼食欲调节（如血清素）和胰岛素调节功能与人类相似，斑马鱼其他涉及葡萄糖体内平衡的器官系统（包括脑、肝、脂肪细胞组织和骨骼肌）的发育和功能也与哺乳动物类似。斑马鱼在糖负荷状态下表现出持续高血糖现象，用高糖高脂饲料可以诱发斑马鱼高血糖，模拟人的二型糖尿病。

用血糖仪对高糖高脂斑马鱼进行血糖检测。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用降糖产品组。其中正常对照组未摄入高糖高脂饲料，模型对照组与服用降糖产品组都摄入了等量的高糖高脂饲料（高糖高脂饲料通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。降糖产品组在摄入高糖高脂饲料的同时摄入蜂胶软胶囊、苦瓜素胶囊、苦瓜洋参软胶囊之类的降糖产品。

服用一段时间降糖产品后，我们对斑马鱼进行血糖检测。

【结果展示】

图1. 斑马鱼体内葡萄糖水平

与模型对照组比较，*** p < 0.001

可以看到，模型对照组的血糖值较正常对照组明显增高，而降糖产品组血糖值明显下降。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，降糖产品组斑马鱼血糖值与模型对照组比较血糖明显下降。

2.本实验证实了蜂胶软胶囊、苦瓜素胶囊、苦瓜洋参软胶囊之类的降糖产品具有降糖作用。

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【评价原理】

抑郁症是一种常见的精神疾病，主要表现为情绪低落，兴趣减低，悲观，思维迟缓，缺乏主动性，自责自罪，饮食、睡眠差，担心自己患有各种疾病，感到全身多处不适，严重者可出现自杀念头和行为，目前国内的抑郁症情况越来越严峻，所以对于如何缓解抑郁迫在眉睫。

抑郁症患者单胺类神经递质含量较少，单胺氧化酶活性较平常人增高，单胺氧化酶抑制剂（MAO）能抑制单胺类酶活性，从而对机体内的神经递质例如5-HT，Dopamine能减少降解的作用，那么神经系统内的这些神经递质含量活性会持续性升高，从而有一定治疗抑郁症的结果。

我们评价斑马鱼抗抑郁作用指标：单胺氧化酶活性的检测。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照组与抗抑郁剂组。其中正常对照组未经任何处理。之后通过化学发光法测量组织内单胺氧化酶的相对活性。

【结果展示】

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用抗抑郁剂情况与对照组相比较，机体内的单胺类氧化酶活性明显降低。

2.本实验证实了盐酸司来吉兰，吗氯贝氨等具有显著的降低单胺氧化酶活性的作用。

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【评价原理】

甲萘醌是一种氧化剂，通过细胞内还原酶系统（微粒体的P450还原酶和线粒体的呼吸链还原酶），产生不稳定的半醌，进入氧化还原循环，产生活性氧族。用甲萘醌可诱导斑马鱼建立氧化应激模型。

经过特异性荧光染色（呈绿色，主要定位于细胞核和线粒体），发生氧化应激反应斑马鱼全身明显比正常斑马鱼绿很多，可以用荧光显微镜下观察到斑马鱼体内的活性氧含量。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和抗氧化剂组。其中正常对照组未摄入甲萘醌，模型对照组与抗氧化剂组都摄入了等量的甲萘醌（甲萘醌通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。抗氧化剂组在摄入甲萘醌之后摄入还原型谷胱甘肽之类的抗氧化剂。

服用一定时间抗氧化剂后，我们对斑马鱼整体做活性氧染色，观察整体绿色荧光强度的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼活性氧表型图

绿色荧光为活性氧

可以看到，抗氧化剂组的荧光强度较正常对照组强，但较模型对照组明显减弱。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，抗氧化剂组的荧光强度比模型对照组弱。

2.本实验证实了还原型谷胱甘肽具有明显抗氧化功效。

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【评价原理】

斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，与哺乳动物对外源化学物质的防御机制相当，包括酶的诱导和氧化应激。当生物暴露在环境污染物中，生物可能会发生氧化应激，主要表现为活性氧（ROS）产生和消耗的不平衡。在需氧生物的活细胞中，活性氧被一种由水和脂溶性低分子量自由基清除剂、特异性抗氧化酶组成的抗氧化防御机制解毒。

 应用ROS特异性荧光检测试剂，它的水解产物能被ROS氧化为高荧光物质，用多功能酶标仪检测荧光值反映氧化应激的程度。本方法已被授予国家发明专利。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是底物对照组、正常对照和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内），并加入ROS特异性荧光检测试剂。

服用供试品一段时间后，我们使用酶标仪对斑马鱼体内ROS进行荧光定量。

【结果展示】

图1. 斑马鱼体内ROS荧光值

可以看到，服用供试品组斑马鱼体内荧光值比正常对照组有明显升高。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用供试品组的斑马鱼ROS水平明显高于正常对照组，与正常对照组存在显著性差异。

2.本实验证实了该供试品诱发斑马鱼氧化应激。

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