【评价原理】

近年来，各种各样的美食迫使人们越来越关注胃肠道健康问题。斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，并拥有与人类结构和功能相似的胃肠道组织。斑马鱼胃肠道粘膜屏障系统由较完整的机械屏障、化学屏障和免疫屏障构成，与哺乳动物高度相似，可作为胃肠道粘膜屏障研究的动物模型。三硝基苯磺酸（TNBS）可破坏胃肠粘膜屏障，与肠组织蛋白结合形成抗原，发生变态反应，诱发溃疡性胃肠道损伤。胃肠道病变累及肌层和神经，导致胃肠壁张力减退，胃肠腔扩大。胃肠道病变时出现炎症反应，中性粒细胞募集到损伤部位。杯状细胞主要分泌黏蛋白，形成黏膜屏障以保护上皮细胞，胃肠黏膜损伤时杯状细胞数量减少。通过病理切片可观察胃肠道组织学改变（如溃疡形成等）的情况。

我们评价斑马鱼胃肠道粘膜损伤辅助保护功效有4个指标：1. 观察胃肠腔面积；2. 应用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼，观察胃肠道中性粒细胞数量；3. 应用特异性的染料（呈蓝色），观察肠道杯状细胞数目；4. 胃肠道病理切片。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用胃肠道粘膜辅助保护剂组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组与服用胃肠道粘膜辅助保护剂组都摄入了等量的TNBS（TNBS通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用胃肠道粘膜辅助保护剂组在TNBS诱导胃肠道粘膜损伤之后摄入常欣卫口服液之类的胃肠道粘膜辅助保护剂。

服用一段时间胃肠道粘膜辅助保护剂后，我们观察斑马鱼胃肠道表型，分析胃肠腔面积，胃肠道中性粒细胞数目和杯状细胞数目，同时制作成病理切片观察胃肠道的病理结构变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼胃肠道表型图（蓝色虚线区域为胃肠腔）

可以看到，服用胃肠道粘膜辅助保护组的胃肠腔面积与正常对照组比较相似，没有明显的胃肠腔扩张。

图2. 斑马鱼胃肠道中性粒细胞表型图（黄色虚线区域为肠腔）

可以看到，服用胃肠道粘膜辅助保护剂组的肠道中性粒细胞数量与正常对照组比较相似，没有明显的增多。

图3. 斑马鱼胃肠道杯状细胞表型图

可以看到，服用胃肠道粘膜辅助保护剂组的肠道杯状细胞数量与正常对照组比较相似，没有明显的减少。

图4. 斑马鱼胃肠道病理切片

可以看到，服用胃肠道粘膜辅助保护剂组的胃肠粘膜形态与正常对照组比较相似，没有明显的胃肠腔扩张、粘膜糜烂溃疡等症状。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用胃肠道粘膜辅助保护剂组的胃肠腔情况与正常对照组相似，并未出现模型对照组胃肠腔扩张、中性粒细胞数量增加、肠道杯状细胞数目减少、粘膜糜烂溃疡等情况。

2.本实验证实了常欣卫口服液具有明显胃肠道粘膜辅助保护功效。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】

随着电子产品的广泛使用，用眼的时间和强度已远超过去，用眼过度引起一系列视力问题。研究表明，高度近视、视网膜疾病、白内障、眼干燥关节综合征均与眼细胞凋亡相关。斑马鱼的眼部血管结构跟人非常相似，斑马鱼视网膜结构也跟人高度相似。用霉酚酸吗啉乙酯可以诱发斑马鱼眼细胞凋亡，模拟人的眼部疾病。

用特异性荧光染色（呈绿色），患有眼疾的斑马鱼眼细胞凋亡较正常斑马鱼明显增多，在荧光显微镜下可以观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和药物组。其中正常对照组未摄入霉酚酸吗啉乙酯，模型对照组与服用眼保护剂组都摄入了等量的霉酚酸吗啉乙酯（霉酚酸吗啉乙酯通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。眼保护剂组在摄入霉酚酸吗啉乙酯的同时摄入蓝莓叶黄素酯之类的眼保护剂。

服用一段时间眼保护剂后，我们对斑马鱼整体做凋亡细胞特异性染色，观察细胞凋亡，同时制作成病理切片观察眼部的病理结构变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼眼细胞凋亡表型图

黄色虚线区域为眼，绿色小点为凋亡细胞

可以看到，模型对照组的凋亡细胞较正常对照组明显增多，而眼保护剂组凋亡细胞与正常细胞相似。

图2. 眼部凋亡细胞病理切片

红色箭头指向凋亡细胞

从病理切片中也能看出来，模型对照组出现较多的凋亡细胞，表现为细胞固缩、染色质边集，而眼保护剂组细胞和正常斑马鱼中形态相似。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，眼保护剂组斑马鱼眼细胞与正常对照组相似，并未出现模型对照组的大面积细胞凋亡情况。

2.本实验证实了蓝莓叶黄素酯具有保护视力功效。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】

泼尼松是糖皮质激素的一种常用制剂，糖皮质激素由于其抗炎和免疫抑制作用，在临床上得到广泛运用。皮质类固醇治疗过程中引起骨保护素(OPG)与核因子KB受体激活因子(RANK)配体(RANKL)之间的比例发生改变，导致在前3～6个月时骨吸收增加，使其发生骨质疏松并增加骨折的风险的不良反应。钙黄绿素是一种特异性的荧光染料，可与钙化的骨结构进行特异性结合。故在实验终点，用钙黄绿素工作液对斑马鱼进行染色，并置于荧光显微镜下观察，可观察到骨质疏松的斑马鱼脊椎骨荧光强度，比正常对照组斑马鱼弱很多。

我们评价骨质疏松症有2个指标：1. 骨形态发生蛋白（BMP）表达水平；2. 骨密度（荧光信号强度）。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和增加骨密度药物组。其中正常对照组未加泼尼松，模型对照组与增加骨密度药物组都加入了等量的泼尼松（泼尼松通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用治疗骨质疏松药物组在加入泼尼松的同时加入依替膦酸二钠、特立帕肽之类的治疗骨质疏松的药物。服用药物后一段时间后，在显微镜下观察斑马鱼脊椎骨荧光强度同时测定基因的表达量。

【结果展示】

图1. 斑马鱼脊椎骨荧光表型图

框内为定量的脊椎骨

可以看到，服用治疗骨质疏松药物组的斑马鱼脊椎骨表型与未加入泼尼松的正常对照组比较相似，与模型对照组比较荧光信号明显增强，说明斑马鱼的骨密度有所恢复。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用治疗骨质疏松药物组的脊椎骨荧光强度与模型对照组比较明显增强，骨密度有所恢复；骨形态发生蛋白（BMP）表达量明显上调。

2.本实验证实了依替膦酸二钠、特立帕肽等治疗骨质疏松的药物具有增强骨密度的功效。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】

斑马鱼的基因与人类基因的相似度达到87％，与哺乳动物对外源化学物质的防御机制相当，包括酶的诱导和氧化应激。当生物暴露在环境污染物中，生物可能会发生氧化应激，主要表现为活性氧（ROS）产生和消耗的不平衡。在需氧生物的活细胞中，活性氧被一种由水和脂溶性低分子量自由基清除剂、特异性抗氧化酶组成的抗氧化防御机制解毒。

 应用ROS特异性荧光检测试剂，它的水解产物能被ROS氧化为高荧光物质，用多功能酶标仪检测荧光值反映氧化应激的程度。本方法已被授予国家发明专利。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是底物对照组、正常对照和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内），并加入ROS特异性荧光检测试剂。

服用供试品一段时间后，我们使用酶标仪对斑马鱼体内ROS进行荧光定量。

【结果展示】

图1. 斑马鱼体内ROS荧光值

可以看到，服用供试品组斑马鱼体内荧光值比正常对照组有明显升高。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用供试品组的斑马鱼ROS水平明显高于正常对照组，与正常对照组存在显著性差异。

2.本实验证实了该供试品诱发斑马鱼氧化应激。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】

斑马鱼和哺乳动物的心脏有相似的功能，包括血流方向、由专门的心内膜肌肉组织驱动的高压系统、由电子系统调节的心律以及与起搏活动相关的心跳。而且斑马鱼幼鱼通体透明，血细胞在心脏和血液循环系统的堆积非常容易观察，因而利用斑马鱼模型研究心血管毒性极为方便。

我们评价斑马鱼心血管毒性有4个指标：1.心率；2.心节律；3.心包水肿面积；4.静脉瘀血面积。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用/注射药物一段时间后，我们对斑马鱼的心脏进行观察评价。

【结果展示】

图1. 斑马鱼心血管毒性表型图

红色虚线框内为心脏

可以看到，服用/注射供试品组的斑马鱼出现明显的心包水肿。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼出现明显的心包水肿，与正常对照组存在明显的差别。

2.本实验证实了该供试品对斑马鱼有心血管毒性。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】

细胞色素P450酶是许多同工酶组成的超大家族，主要位于肝脏微粒体中，参与生物体许多内源性和外源性物质的生物转化。许多临床相关药物间的相互作用与抑制和/或诱导CYP酶有关，改变CYP酶的活性对药效有重要影响，有时甚至会威胁生命。在众多肝脏细胞色素P450酶家族中，CYP3A4和CYP2D6与70%以上的药物代谢有关，其中CYP3A4占50%以上，而CYP2D6占20%左右，因此目前药物代谢研究集中于评价药物对CYP3A4和CYP2D6的影响。

我们评价斑马鱼对细胞色素P450的影响作用有2个指标：1.对CYP3A4的影响作用；2.对CYP2D6的影响作用。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照和服用/注射供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中或注射的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用/注射药物一段时间后，利用特异性试剂盒检测斑马鱼体内细胞色素P450的活性。

【结果展示】

图1. 斑马鱼CYP3A4活性

与正常对照组比较，*** p < 0.001

图2. 斑马鱼CYP2D6活性

与正常对照组比较，*** p < 0.001

可以看到，服用/注射供试品组斑马鱼细胞色素P450活性抑制。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用/注射供试品组的斑马鱼细胞色素P450活性明显抑制，与正常对照组存在明显的差别。

2.本实验证实了该供试品对斑马鱼细胞色素P450有抑制作用。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】

静脉注射给予长春瑞滨造模斑马鱼免疫力低下模型。大剂量长春瑞滨骨髓抑制明显，导致血小板、红细胞及白细胞数目（中性粒细胞、巨噬细胞、T细胞等）减少和贫血，最终导致免疫力低下。人类与斑马鱼在免疫系统的细胞组成上极为相似，而且斑马鱼是目前所有同时具有特异性免疫和非特异性免疫动物个体中体积最小的，适合高通量评价调节免疫功效。斑马鱼静脉注射大剂量长春瑞滨后可造成免疫低下。

采用转基因巨噬细胞绿色荧光斑马鱼，可在荧光显微镜在观察到免疫力低下的斑马鱼体内的巨噬细胞荧光强度明显减弱。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用免疫调节剂组。其中正常对照组未注射长春瑞滨，模型对照组与服用免疫调节剂组都注射了等量的长春瑞滨（长春瑞滨通过静脉注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用免疫调节剂组在注射长春瑞滨后摄入盐酸小檗胺等免疫调节剂。

服用一段时间免疫调节剂后，我们观察巨噬细胞荧光强度变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼巨噬细胞表型图

绿色荧光颗粒代表巨噬细胞

可以看到，免疫调节剂组巨噬细胞荧光强度与正常对照组相似，没有出现巨噬细胞荧光强度明显减弱的情况。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，免疫调节剂组巨噬细胞数量与正常对照组相似，并未出现模型对照组免疫力低下的情况。

2.本实验证实了盐酸小檗胺具有增强免疫力的功效。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】

细菌感染是致病菌或条件致病菌侵入血循环中生长繁殖，产生毒素和其他代谢产物所引起的急性全身性感染。斑马鱼有着与哺乳动物非常相似的发育良好的免疫系统(包括特异性免疫和非特异性免疫），使得斑马鱼成为了研究病菌感染机制和筛选抗菌剂非常有用的动物模型。

经过荧光标记的细菌（呈红色）注射进入斑马鱼体内，生长繁殖，可以明显地被观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是模型对照组和服用抗菌剂组。模型对照组与服用细菌抑制剂组都注射了等量的细菌（细菌通过静脉注射的方式入到斑马鱼体内）。服用抗菌剂组在注射细菌后摄入阿奇霉素、比阿培南、利奈唑酮之类的抗菌剂。

服用一段时间抗菌剂后，我们将斑马鱼置于荧光显微镜下观察细菌数量的变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼体内细菌繁殖表型图

白色箭头所指红色颗粒为细菌

可以看到，服用抗菌剂组的体内细菌数量较模型对照组显著减少，未出现全身性感染。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用抗菌剂组的斑马鱼体内细菌数量较模型对照组显著减少，未出现全身性感染。

2.本实验证实了阿奇霉素、比阿培南、利奈唑酮等抗生素具有显著的抑制细菌作用。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】

静脉注射给予长春瑞滨造模斑马鱼免疫力低下模型。大剂量长春瑞滨骨髓抑制明显，导致血小板、红细胞及白细胞数目（中性粒细胞、巨噬细胞、T细胞等）减少和贫血，最终导致免疫力低下人类与斑马鱼在免疫系统的细胞组成上极为相似，而且斑马鱼是目前所有同时具有特异性免疫和非特异性免疫动物个体中体积最小的，适合高通量评价调节免疫功效。斑马鱼静脉注射大剂量长春瑞滨后可造成免疫低下。

采用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼，可在荧光显微镜在观察到免疫力低下的斑马鱼体内的中性粒细胞荧光强度明显减弱。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用免疫调节剂组。其中正常对照组未注射长春瑞滨，模型对照组与服用免疫调节剂组都注射了等量的长春瑞滨（长春瑞滨通过静脉注射的方式摄入到斑马鱼体内）。服用免疫调节剂组在注射长春瑞滨后摄入盐酸小檗胺等免疫调节剂。

服用一段时间免疫调节剂后，我们观察中性粒细胞荧光强度变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼中性粒细胞表型图

绿色荧光颗粒代表中性粒细胞

可以看到，免疫调节剂组中性粒细胞荧光强度与正常对照组相似，没有出现中性粒细胞荧光强度明显减弱的情况。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，免疫调节剂组中性粒细胞数量与正常对照组相似，并未出现模型对照组免疫力低下的情况。

2.本实验证实了盐酸小檗胺具有增强免疫力的功效。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）

【评价原理】

斑马鱼与人类具有高度的形态、生理和遗传同源性，神经系统与哺乳动物相似。氯化铝超过正常摄入量可导致动物行为异常，同时破坏胆碱能神经功能，还可增加淀粉样蛋白的产量，最终导致记忆力减退、学习能力降低。

我们用两种方法去评价斑马鱼的记忆力。1. 通过行为分析仪检测斑马鱼的对外界刺激的反应能力，经氯化铝诱发的记忆减退斑马鱼反应能力比正常斑马鱼差；2. 通过酶标仪检测斑马鱼的乙酰胆碱酯酶，经氯化铝诱发的记忆减退斑马鱼乙酰胆碱酯酶活性高于正常斑马鱼。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和改善记忆产品组。其中正常对照组未给予氯化铝造模，模型对照组与服用改善记忆产品组都给予等量的氯化铝（氯化铝通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。改善记忆产品组在给予氯化铝的同时摄入参枝苓口服液之类的改善记忆产品。

服用一段时间改善记忆产品后，我们对斑马鱼进行行为学检测，观察斑马鱼的外界光暗刺激的反应能力（反应速度）；同时酶标仪检测斑马鱼体内乙酰胆碱酯酶活性。

【结果展示】

图1. 反应能力轨迹图

可以看到，模型对照组反应能力比正常对照组显著降低，经过改善记忆产品处理的斑马鱼的反应能力比模型对照组明显改善。

图2. 乙酰胆碱酯酶检测

可以看到，模型对照组斑马鱼乙酰胆碱酯酶活性显著上升，而改善记忆产品组的乙酰胆碱酯酶活性显著降低与正常对照组相似。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用改善记忆产品的斑马鱼反应能力较模型对照组有明显的改善，且对氯化铝诱导的记忆减退斑马鱼的乙酰胆碱酯酶活性也有显著降低的作用。

2.本实验证实了参枝苓口服液有明显的改善记忆功效。

更多项目服务，请拨电话咨询：0571-83782130，项目经理手机 17364531293（微信同号）