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武汉戴安生物技术有限公司成立于2015年，位于武汉光谷生物城生物技术研究院，是一家由资深免疫学专家和海外留学人员创建的高科技生物技术企业。公司专注于诊断试剂及其核心原料的研发生产及技术服务工作。公司拥有完善的蛋白质表达体系，抗体制备体系，诊断试剂研发体系，研发人员拥有十余年从业经验，技术积累深厚，设备精良完善，在重组蛋白质表达纯化、天然蛋白质提取、抗体研发和生产方面达到行业顶尖水平，已建立了从诊断试剂抗原抗体原料开发，到诊断试剂制备的研发生产路线，拥有诊断用抗原抗体的研发及放大生产技术平台，生化试剂大包装研发生产平台，核心产品包括SAA，AFP，PCT，铁蛋白等项目的抗体、校准品和生化试剂。公司也为客户提供专业的抗体定制及相关技术服务，包括科研用多克隆抗体和单克隆抗体定制，药物阻断用抗体筛选，中和抗体制备等技术服务。一． 背景信息HA-Tag （YPYDVPDYA），常用于真核蛋白质重组表达标记。 Anti-HA标签（YPYDVPDYA）亲和凝胶， 由高品质的HA兔多克隆抗体与Sepharose 4B琼脂糖颗粒共价偶联制成， 具有高载量（至少为1.2mg protein/ml凝胶），高特异性，性质稳定，可反复使用的特点，可用于HA标签融合蛋白的亲和纯化及免疫（共）沉淀。二． 性能指标三． 使用方法 （以下步骤仅供参考，客户可根据经验自行调整）细胞裂解液制备 (以培养的哺乳动物细胞为例)1) 悬浮细胞和半贴壁细胞从细胞培养瓶上吹下来后放入离心管中，1000rpm 离心5分钟。贴壁细胞用细胞刮子轻轻从瓶壁上刮下来，放入离心管中1000rpm离心5分钟。2) 预冷的PBS重悬细胞，1000rpm离心3min，弃上清。重复一次。3) 根据细胞的量加入相应体积的细胞裂解液，反复吹打后冰上放置10-20min，让细胞充分裂解。4) 用超声破碎仪将细胞裂解液超声，直至细胞裂解液透明，不再粘稠。冰上放置30min之后，12000rpm，4℃离心10min。取上清，冷冻保存。应用一. 免疫（共）沉淀法检测HA标签蛋白质1) 重悬Anti-HA标签亲和凝胶至均一，转移30ul混合液(约含15ul凝胶)至离心管中，加入5倍凝胶体积PBS，5000rpm x 30sec，弃上清，重复该步骤清洗凝胶三次。2) 加入适量含有目标蛋白的真核细胞裂解液，室温孵育2hr或者4℃孵育过夜。3) 加入5倍凝胶体积PBS，用上述离心法清洗凝胶三次； 预冷的5倍凝胶体积pH 5.0酸性预洗液洗涤凝胶, 除去非特异性结合蛋白。离心，弃上清。4) 加入蛋白质5x上样缓冲液，煮沸5min，冷却至室温并离心。5) 取上清进行SDS-PAGE或Western Blotting检测。应用二. 亲和纯化HA标签蛋白质1) 根据使用目的选用重力柱或离心管，移入适量亲和凝胶，10倍凝胶体积PBS清洗亲和凝胶。2) 加入适量含有目标蛋白的真核细胞裂解液，室温孵育2hr或者4℃孵育过夜。3) 5倍凝胶体积PBS洗凝胶三次； 用预冷的5倍凝胶体积pH 5.0酸性预洗液洗涤纯化凝胶, 除去非特异性结合蛋白。4) 预冷的10倍凝胶体积pH 3.0的酸性洗脱液进行洗脱, 每次收集1ml, 收集管中预先放入中和液50μl。注意：酸性环境会缩短亲和纯化凝胶的使用寿命，应尽量缩短亲和纯化凝胶与酸性洗脱液的接触时间。5) 用紫外检测仪测定收集峰, 合并收集峰。6) SDS-PAGE鉴定蛋白质纯度及浓度，并按照需求处理和保存蛋白质。
武汉戴安生物技术有限公司成立于2015年，位于武汉光谷生物城生物技术研究院，是一家由资深免疫学专家和海外留学人员创建的高科技生物技术企业。公司专注于诊断试剂及其核心原料的研发生产及技术服务工作。公司拥有完善的蛋白质表达体系，抗体制备体系，诊断试剂研发体系，研发人员拥有十余年从业经验，技术积累深厚，设备精良完善，在重组蛋白质表达纯化、天然蛋白质提取、抗体研发和生产方面达到行业顶尖水平，已建立了从诊断试剂抗原抗体原料开发，到诊断试剂制备的研发生产路线，拥有诊断用抗原抗体的研发及放大生产技术平台，生化试剂大包装研发生产平台，核心产品包括SAA，AFP，PCT，铁蛋白等项目的抗体、校准品和生化试剂。公司也为客户提供专业的抗体定制及相关技术服务，包括科研用多克隆抗体和单克隆抗体定制，药物阻断用抗体筛选，中和抗体制备等技术服务。现货标签内参抗体均为自主研发，严格质检，质量优良。一． 背景信息Flag-Tag（DYKDDDDK）， 常用于真核蛋白质重组表达标记。 FLAG标签（DYKDDDDK）亲和凝胶，由高品质的Flag兔多克隆抗体与Sepharose 4B琼脂糖颗粒共价偶联制成，具有高载量（至少为1.2mg protein/ml凝胶），高特异性，性质稳定，可反复使用的特点，可用于Flag标签融合蛋白的亲和纯化及免疫（共）沉淀。二． 性能指标应用范围： 可用于Met修饰的N端Flag融合蛋白（Met-Flag–Protein），N端Flag融合蛋白（Flag–Protein）和C端Flag融合蛋白（Protein-Flag）的亲和纯化及免疫（共）沉淀。载量： 1ml Sepharose 4B琼脂糖颗粒，共价偶联800μg Anti-Flag兔多克隆抗体，可纯化或沉淀至少1.2mg Flag融合蛋白。强度： 重力柱纯化，可反复使用5次以上。成分： 共价偶联Anti-Flag抗体的Sepharose 4B琼脂糖颗粒, 1ml溶于2ml PBS+50%甘油中。保存方法： 在加入了50%甘油和0.2‰叠氮钠的PBS保存液中，-20℃可保存1年。三． 使用方法细胞裂解液制备1) 悬浮细胞和半贴壁细胞从细胞培养瓶上吹下来后放入离心管中， 1000rpm 离心5分钟。贴壁细胞用细胞刮子轻轻从瓶壁上刮下来，放入离心管中1000rpm离心5分钟。2) 预冷的PBS重悬细胞，1000rpm离心3min，弃上清。重复一次。3) 根据细胞的量加入相应体积的细胞裂解液， 反复吹打后冰上放置10-20min，让细胞充分裂解。4) 用超声破碎仪将细胞裂解液超声，直至细胞裂解液透明，不再粘稠。冰上放置30min之后，12000rpm，4℃离心10min。取上清，冷冻保存。应用一. 免疫（共）沉淀法检测FLAG标签蛋白质1) 重悬Anti-FLAG标签亲和凝胶至均一，转移30ul混合液(约含15ul凝胶)至离心管中，加入5倍凝胶体积PBS，5000rpm x 30sec，弃上清，重复该步骤清洗凝胶三次。2) 加入适量含有目标蛋白的真核细胞裂解液，室温孵育2hr或者4℃孵育过夜。3) 加入5倍凝胶体积PBS，用上述离心法清洗凝胶三次； 预冷的5倍凝胶体积pH 5.0酸性预洗液洗涤凝胶, 除去非特异性结合蛋白。离心，弃上清。4) 加入5x上样缓冲液，煮沸5min，冷却至室温并离心。5) 取上清进行SDS-PAGE或Western Blotting检测。应用二. 亲和纯化FLAG标签蛋白质1) 根据使用目的选用重力柱或离心管，移入适量亲和凝胶，10倍凝胶体积PBS清洗亲和凝胶。2) 加入适量含有目标蛋白的真核细胞裂解液，室温孵育2hr或者4℃孵育过夜。3) 5倍凝胶体积PBS洗凝胶三次； 用预冷的5倍凝胶体积pH 5.0酸性预洗液洗涤纯化凝胶, 除去非特异性结合蛋白。根据需要从以下两种洗脱液中选择a. 预冷的10倍柱体积pH 3.0的酸性洗脱液进行洗脱， 每次收集1ml, 收集管中预先放入中和液50μl。注意：酸性环境会缩短亲和纯化凝胶的使用寿命，应尽量缩短亲和纯化凝胶与酸性洗脱液的接触时间。b. 加入10倍凝胶体积 3×Flag peptide洗脱液进行洗脱， 每次收集1ml。4) 用紫外检测仪测定收集峰, 合并收集峰。5) SDS-PAGE鉴定蛋白质纯度及浓度，并按照需求处理和保存蛋白质。 四． 推荐缓冲液配方以下配方仅为本公司推荐，客户应根据具体情况进行调整。细胞裂解液： 150mM NaCl, 50 mM Tris-HCL(PH8.0)，1% Triton X-100，5 mM EDTA 3×Flag peptide洗脱液： 3xFlag peptide干粉，使用前溶于10 ml 1xPBS，工作浓度为100μg/ml酸性洗脱液： 0.15M Gly-HCl缓冲液，pH3.0中和液： 1M Tris HCl缓冲液，pH8.010xPBS： 1.5M PBS buffer， pH7.5，with 2‰ Azide （使用时须用双蒸水稀释10倍）酸性预洗液： 0.15M PBS buffer，pH5.0
武汉戴安生物技术有限公司成立于2015年，位于武汉光谷生物城生物技术研究院，是一家由资深免疫学专家和海外留学人员创建的高科技生物技术企业。公司专注于诊断试剂及其核心原料的研发生产及技术服务工作。公司拥有完善的蛋白质表达体系，抗体制备体系，诊断试剂研发体系，研发人员拥有十余年从业经验，技术积累深厚，设备精良完善，在重组蛋白质表达纯化、天然蛋白质提取、抗体研发和生产方面达到行业顶尖水平，已建立了从诊断试剂抗原抗体原料开发，到诊断试剂制备的研发生产路线，拥有诊断用抗原抗体的研发及放大生产技术平台，生化试剂大包装研发生产平台，核心产品包括SAA，AFP，PCT，铁蛋白等项目的抗体、校准品和生化试剂。公司也为客户提供专业的抗体定制及相关技术服务，包括科研用多克隆抗体和单克隆抗体定制，药物阻断用抗体筛选，中和抗体制备等技术服务。 1.背景信息Flag-Tag（DYKDDDDK）， 常用于真核蛋白质重组表达标记。 FLAG标签（DYKDDDDK）蛋白免疫沉淀(Immunoprecipitation)试剂盒， 主要成分是Anti-Flag亲和纯化凝胶（Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel），由高品质的Flag兔多克隆抗体与Sepharose 4B琼脂糖颗粒共价偶联制成，具有高载量（至少为1.2mg protein/ml凝胶），高特异性，性质稳定，可反复使用的特点，可用于Flag标签融合蛋白的纯化及免疫（共）沉淀(Immunoprecipitation, Co-Immunoprecipitation)。2. 性能指标应用范围： 可用于Met修饰的N端Flag融合蛋白（Met-Flag–Protein），N端Flag融合蛋白（Flag–Protein）,C端Flag融合蛋白（Protein-Flag）及中部Flag融合蛋白的纯化及免疫（共）沉淀。载量： 1ml Sepharose 4B琼脂糖颗粒，共价偶联800μg Anti-Flag 兔多克隆抗体，可至少做40次Flag标签融合蛋白的免疫（共）沉淀。保存方法： 在加入了50%甘油和0.2‰叠氮钠的PBS保存液后，预装纯化柱可于-20℃可保存1年。3. 试剂盒组成注意事项（开箱前必读） 本试剂盒冷藏条件下运输，如果暂时不用，请将纯化柱（空柱）取出，室温保存；亲和凝胶保存于-20℃；试剂盒及其它成分保存于4℃。 有文献显示，与传统的Glycine-HCl洗脱液相比，本试剂盒提供的pH3.0的Arginine-HCl做为洗脱液，可以减少蛋白质变性，延长抗体亲和纯化柱的使用寿命。客户也可以根据实际情况自行选用配制。4. 使用方法（所有步骤尽可能在冰上进行，以避免目标蛋白质降解。）4.1 细胞裂解液制备4.1.1 悬浮细胞和半贴壁细胞从细胞培养瓶上吹下来后放入离心管中， 1000rpm离心5分钟。贴壁细胞用细胞刮子轻轻从瓶壁上刮下来，放入离心管中1000rpm离心5分钟。4.1.2 预冷的PBS工作液重悬细胞，1000rpm离心3min，弃上清。重复一次。4.1.3 根据细胞的量加入相应体积的细胞裂解液， 反复吹打后冰上放置10-20min，让细胞充分裂解。4.1.4 用超声破碎仪将细胞裂解液超声，直至细胞裂解液透明，不再粘稠。冰上放置30min之后，12000rpm，4℃离心10min。取上清，-80℃冷冻保存。4.2 装柱及孵育4.2.1 温和重悬Anti-Flag亲和纯化凝胶，至均匀混合，用剪去末端的枪头吸取适量的凝胶至空纯化柱中。通常50μl凝胶（含25μl琼脂糖颗粒）可沉淀约30μgFlag标签融合蛋白。如果设置对照组，应同时准备对照组凝胶及纯化柱。4.2.2 将纯化柱安装在收集管上，5000-8000g离心30秒，弃去流穿液，保留沉淀。4.2.3 1ml PBS重悬凝胶，5000-8000g离心30秒，弃去流穿液，重复五次。4.2.4 加入适量含有Flag标签融合蛋白（或者阳性对照，阴性对照）的细胞裂解液， 4℃旋转孵育过夜。4.2.5 根据实验目的，在4.3和4.4中选择合适的方法进行蛋白质洗脱。4.3 酸性洗脱液酸性洗脱（该步骤使用的收集管请使用自备的灭菌1.5ml离心管，收集管中预先放入中和液50μl）4.3.1 将纯化柱安装在收集管上，5000-8000g离心30秒，弃去流穿液，保留沉淀。4.3.2 1ml PBS重悬凝胶，5000-8000g离心30秒，弃去流穿液，重复五次。4.3.3 预冷的pH 5.0酸性预洗液重悬凝胶，5000-8000g离心30秒，弃去流穿液，重复五次，以除去非特异性结合蛋白。4.3.4 预冷的pH 3.0的酸性洗脱液重悬凝胶，5000-8000g离心30秒， 用新的灭菌1.5ml离心管收集洗脱液（收集管中预先放入中和液50μl），重复十次，每次收集1ml。注意：酸性环境会缩短亲和纯化柱的使用寿命，引起目的蛋白质变性，应尽量缩短亲和纯化柱与酸性洗脱液的接触时间。4.3.5 用紫外检测仪测定收集峰, 合并收集峰。4.3.6 SDS-PAGE鉴定蛋白质纯度及浓度，并按照需求处理和保存蛋白质。4.4 变性洗脱检测目的蛋白4.4.1 将纯化柱安装在收集管上，5000-8000g离心30秒，弃去流穿液，保留沉淀。4.4.2 1ml PBS重悬凝胶，5000-8000g离心30秒，弃去流穿液，重复五次。4.4.3 加入足量 2×蛋白上样缓冲液，移入1.5ml离心管中，煮沸5 min，冷却至室温。4.4.4 取上清进行SDS-PAGE及Western Blotting检测。5. 使用中的常见问题
GFP–Tag Mouse mAb Cat#: 2057 Synonyms:GFP;Green fluorescent proteinAttribute:Mouse Monoclonal Antibody Isotype:IgG1Purity:Antigen Affinity PurificationApplication:ELISA, WB, IP, IFCalculated MW:27kDaObserved MW:27kDaReactivity：Human,Mouse,Rat,Zebra fishImmunogen：Recombinant Human GFP protein expressed by E.Coli Buffer：PBS with 0.1% sodium azide and 50% glycerol, pH 7.2Storage:Store at -20℃. Do not aliquotRecommended Dilution:WB: 1:2000-5000IP: 1:2000-5000IF: 1:100-200Background：The green fluorescent protein (GFP) is a protein that exhibits bright green fluorescence when exposed to light in the blue to ultraviolet range. It is first isolated from the jellyfish Aequorea victoria and is frequently used as a reporter of expression. GFP is widely used in gene expression, tracing and protein subcellualr localization..
GAPDH Mouse Monoclonal AntibodyCat#: 2058 Synonyms:GAPDHAttribute:Mouse Monoclonal Antibody Isotype:IgG1 Purity:Protein A PurifiedApplication:ELISA, WB, IPCalculated MW:36kDaObserved MW:36kDaReactivity：Mouse, Rat, Rabbit, Chicken, Hamster, Cat, Dog, Human, Pig, Xenopus laevis, Fish, Monkey, Zebrafish.Immunogen：Recombinant Human GAPDH protein expressed by E.Coli Buffer：PBS with 0.1% sodium azide and 50% glycerol, pH 7.2Storage:Store at -20℃. Do not aliquotRecommended Dilution:WB: 1:2000-5000IP: 1:5000-10000IF: 1:100-200Background：GAPDH is an enzyme of 37kDa that catalyzes the sixth step of glycolysis and thus serves to break down glucose for energy and carbon molecules. Because the GAPDH gene is often stably and constitutively expressed at high levels in most tissues and cells, it is commonly used as a loading control for western blot and as a control for qPCR.
PCNA Mouse Monoclonal Antibody Cat#: 2059 Synonyms:PCNA；Proliferating cell nuclear antigenAttribute:Mouse Monoclonal Antibody Isotype:IgG1Purity:Antigen Affinity PurificationApplication:ELISA, WB, IP, IFCalculated MW:35kDa Observed MW:35kDa Reactivity：Human, mouse, rat, Zebra fishImmunogen：Recombinant Human PCNA protein expressed by E.Coli Buffer：PBS with 0.1% sodium azide and 50% glycerol, pH 7.2Storage:Store at -20℃. Do not aliquotRecommended Dilution:WB: 1:1000-2000IP: 1:5000-10000IF: 1:100-200Background：Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) is a DNA clamp that acts as a processivity factor for DNA polymerase δ in eukaryotic cells and is essential for replication. PCNA is a homotrimer and achieves its processivity by encircling the DNA, where it acts as a scaffold to recruit proteins involved in DNA replication, DNA repair, chromatin remodeling and epigenetics. PCNA gene is often stably and constitutively expressed in most tissues and cells, it is commonly used as a loading control for western blot and other test.
HA-Tag mouse mAb Cat#: 2063 Synonyms:YPYDVPDYAAttribute:Mouse Monoclonal Antibody Isotype:IgG2aPurity:Antigen Affinity PurificationApplication:ELISA, WB, IP, IFCalculated MW:Observed MW:Reactivity：Human,Mouse,Rat,Zebra fishImmunogen：Peptide YPYDVPDYA Buffer：PBS with 0.1% sodium azide and 50% glycerol, pH 7.2Storage:Store at -20℃. Do not aliquotRecommended Dilution:WB: 1:2000-5000IP: 1:5000-10000IF: 1:100-200Background：The HA tag is derived from the HA-molecule corresponding to amino acids 98-106. It has been extensively used as a general epitope tag in expression vectors. Many recombinant proteins have been engineered to express the HA tag, which does not appear to interfere with the bioactivity or the biodistribution of the recombinant protein.
FLAG-Tag mouse mAb Cat#: 2064Synonyms:DYKDDDDKAttribute:Mouse Monoclonal Antibody Isotype:IgG2aPurity:Antigen Affinity PurificationApplication:ELISA, WB, IP, IFCalculated MW:Observed MW:Reactivity：Human,Mouse,Rat,Zebra fishImmunogen：Peptide DYKDDDDK Buffer：PBS with 0.1% sodium azide and 50% glycerol, pH 7.2Storage:Store at -20℃. Do not aliquotRecommended Dilution:WB: 1:5000-10000IP: 3ug/sampleIF: 1:100-200Background：FLAG-tag is a polypeptide protein tag that can be added to a protein using recombinant DNA technology, having the sequence motif DYKDDDDK. It has been used for studying proteins in living cells and for protein purification by affinity chromatography. This antibody detects FLAG tag in most applications..
6xHIS-Tag mouse mAb Cat#: 2088Synonyms:HHHHHHAttribute:Mouse Monoclonal Antibody Isotype:IgG1Purity:Protein A/G Affinity PurificationApplication:ELISA, WB, IPReactivity：Human,Mouse,Rat,Zebra fishImmunogen：Peptide HHHHHH Buffer：PBS with 0.1% sodium azide and 50% glycerol, pH 7.2Storage:Store at -20℃. Do not aliquotRecommended Dilution:WB: 1:2000-5000IP: 1:5000-10000 Background：The 6xHis tag, also known as polyhistidine tag, His6 tag and/or hexa histidine tag, is an amino acid motif consisting of at least 6 histidine residues fused to the carboxyl (C-) or amino (N-) terminus of a target protein in transfected cells. It is one of the simplest and most widely used purification tags in the world.
GFP-Tag Rabbit PAbCat#: 3057 Synonyms:GFP;Green fluorescent proteinAttribute:Rabbit Polyclonal AntibodyIsotype:Purity:Antigen Affinity PurificationApplication:ELISA, WB, IP, IFCalculated MW:27kDaObserved MW:27kDaReactivity：Human,Mouse,Rat,Zebra fishImmunogen：Recombinant Human GFP protein expressed by E.Coli Buffer：PBS with 0.1% sodium azide and 50% glycerol, pH 7.2Storage:Store at -20℃. Do not aliquotRecommended Dilution:WB: 1:2000-5000IP: 1:2000-5000IF: 1:100-200Background：The green fluorescent protein (GFP) is a protein that exhibits bright green fluorescence when exposed to light in the blue to ultraviolet range. It is first isolated from the jellyfish Aequorea victoria and is frequently used as a reporter of expression. GFP is widely used in gene expression, tracing and protein subcellualr localization.
HA-Tag Rabbit pAb Cat#: 3063 Synonyms:YPYDVPDYAAttribute:Rabbit Polyclonal Antibody Isotype:IgGPurity:Antigen Affinity PurificationApplication:ELISA, WB, IP, IFCalculated MW:Observed MW:Reactivity：Human,Mouse,Rat,Zebra fishImmunogen：Peptide YPYDVPDYA Buffer：PBS with 0.1% sodium azide and 50% glycerol, pH 7.2Storage:Store at -20℃. Do not aliquotRecommended Dilution:WB: 1:2000-5000IP: 1:5000-10000IF: 1:100-200Background：The HA tag is derived from the HA-molecule corresponding to amino acids 98-106. It has been extensively used as a general epitope tag in expression vectors. Many recombinant proteins have been engineered to express the HA tag, which does not appear to interfere with the bioactivity or the biodistribution of the recombinant protein.
FLAG-Tag rabbit pAb Cat#: 3064Synonyms:DYKDDDDKAttribute:Rabbit Polyclonal AntibodyIsotype:Purity:Antigen Affinity PurificationApplication:ELISA, WB, IP, IFCalculated MW:34kDaObserved MW:34kDaReactivity：Human,Mouse,Rat,Zebra fishImmunogen：Peptide DYKDDDDK Buffer：PBS with 0.1% sodium azide and 50% glycerol, pH 7.2Storage:Store at -20℃. Do not aliquotRecommended Dilution:WB: 1:2000-50000IP: 3ug/sampleIF: 1:100-200Background：FLAG-tag is a polypeptide protein tag that can be added to a protein using recombinant DNA technology, having the sequence motif DYKDDDDK. It has been used for studying proteins in living cells and for protein purification by affinity chromatography. This antibody detects FLAG tag in most applications..
MYC-Tag Rabbit pAb Cat#: 3097 Synonyms:EQKLISEEDLAttribute:Rabbit Polyclonal Antibody Isotype:IgGPurity:Antigen Affinity PurificationApplication:ELISA, WB, IP, IFCalculated MW:N/AObserved MW:N/A Reactivity：Human, Mouse, Rat, Zebra fishImmunogen：Peptide EQKLISEEDL Buffer：PBS with 0.1% sodium azide and 50% glycerol, pH 7.2Storage:Store at -20℃. Do not aliquotRecommended Dilution:WB: 1:2000-5000IP: 1:5000-10000IF: 1:100-200Background：The MYC tag, derived from the c-MYC protein, is a popular epitope tag for detecting the expression of recombinant proteins in yeast, bacteria, insect, and mammalian cell systems. It can be used for affinity chromatography, then used to separate recombinant, overexpressed protein from wild type protein expressed by the host organism. It can also be used in the isolation of protein complexes with multiple subunits.
Caspase-3 Rabbit Polyclonal Antibody 3082Synonyms:apoptosis-related cysteine protease a; casp3aAttribute:Rabbit Polyclonal Antibody Isotype:PolyclonalPurity:Antigen Affinity PurificationApplication:ELISA, WB, IP, IFCalculated MW:40kDaObserved MW:12+30+40kDa Reactivity：Zebra fishImmunogen：Peptide corresponding to Zebra fish Casapase-3Buffer：PBS with 0.1% sodium azide and 50% glycerol, pH 7.2Storage:Store at -20℃. Do not aliquotRecommended Dilution:WB: 1:1000-2000IP: 1:5000-10000IF: 1:100-200Background：15kDa-Caspase-3 is a caspase protein that interacts with caspase-8 and caspase-9. It is encoded by the CASP3 gene. CASP3 orthologs have been identified in numerous mammals for which complete genome data are available. Unique orthologs are also present in birds, lizards, lissamphibians, and teleosts.戴安生物精心研发一批斑马鱼凋亡抗体，经过严格验证，质量有保证，另戴安生物在水产物种抗体研究上经验丰富可定制斑马鱼，草鱼，鲫鱼，虹鳟，泥鳅，四膜虫等等的特异性抗体，欢迎咨询武汉戴安生物技术有限公司成立于2015年，位于武汉光谷生物城生物技术研究院，是一家由资深免疫学专家和海外留学人员创建的高科技生物技术企业。公司专注于诊断试剂及其核心原料的研发生产及技术服务工作。公司拥有完善的蛋白质表达体系，抗体制备体系，诊断试剂研发体系，研发人员拥有十余年从业经验，技术积累深厚，设备精良完善，在重组蛋白质表达纯化、天然蛋白质提取、抗体研发和生产方面达到行业顶尖水平，已建立了从诊断试剂抗原抗体原料开发，到诊断试剂制备的研发生产路线，拥有诊断用抗原抗体的研发及放大生产技术平台，生化试剂大包装研发生产平台，核心产品包括SAA，AFP，PCT，铁蛋白等项目的抗体、校准品和生化试剂。公司也为客户提供专业的抗体定制及相关技术服务，包括科研用多克隆抗体和单克隆抗体定制，药物阻断用抗体筛选，中和抗体制备等技术服务。
IL 1β Rabbit Polyclonal AntibodyCat#: 3083 Synonyms:IL1 beta, Catabolin, IL1 BETA, IL1B, IL1beta, IL1F2, IL-1β, Interleukin 1 betaAttribute:Rabbit Polyclonal Antibody Isotype:PolyclonalPurity:Antigen Affinity PurificationApplication:ELISA, WB, IPCalculated MW:30kDaObserved MW:30kDa; 20kDa; 18kDaReactivity：Zebra FishImmunogen：Recombinant ZebraFish IL 1β protein expressed by E.Coli Buffer：PBS with 0.1% sodium azide and 50% glycerol, pH 7.2Storage:Store at -20℃. Do not aliquotRecommended Dilution:WB: 1:1000-2000IP: 1:5000-10000IF: 1:100-200Background：There are two genes for interleukin-1 : IL-1 alpha and IL-1 beta. IL-1β precursor is cleaved by cytosolic caspase 1 (interleukin 1 beta convertase) to form mature IL-1β. The multiple biologic activities that define IL1 are properties of a 15- to 18-kD protein that is derived from a 30- to 35-kD precursor. It is a pro-inflammatory cytokine against infection, playing an important role in the pathogenesis of cancers. It signals through various adaptor proteins and kinases that lead to activation of numerous downstream targets. The expression level of IL-1B is very low.Western blot of Zebra Fish whole lysates with anti-IL 1β Rabbit Polyclonal Antibody at dilution of 1:1000
at#:2112 Anti-DNA-RNA Hybrid [S9.6] Antibody Synonyms:DNA-RNA hybrid; RNA/DNA hybridAttribute:Mouse Monoclonal AntibodyIsotype:Mouse IgG2aPurity:Protein A/G PurificationApplication:ELISA, IP, IF, CHIP, Dot BlotImmunogen：ΦX174 bacteriophage-derived synthetic DNA/RNABuffer：PBS with 0.1% sodium azide and 50% glycerol, pH 7.2Storage:Store at -20℃. Do not aliquotRecommended Dilution:WB: 1:1000-2000IP: 1:50-500ChIP:1:50-1:500IF: 1: 200Background：The DNA-RNA hybrids are a natural occurrence within eukaryotic cells and their level are high at sites of high transcriptional activity. They are non-canonical nucleic acid structures with transcriptional regulatory functions. Their presence is reported to predispose a locus to chromosomal breakage. The S9.6 monoclonal antibody recognizes DNA-RNA hybrids (also known as R-loops) and does not bind to single or double stranded DNA. The antibody has high affinity for DNA-RNA hybrids but also binds RNA-RNA hybrids that are AU-rich. The specificity of the antibody appears to be determined by a combination of sequence and structural dependency since R-loop sequence affects binding affinity.Immunofluorescentanalysis of ( 4% PFA) fixed HeLa cells usingDNA-RNA hybrid Mouse Monoclonal Antibody [S9.6] at dilution of 1:500and Alexa Fluor 647- conjugatedAffiniPure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)Chromatin immunoprecipitationanalysis of HeLa cellsgenomic DNA(gDNA)using DNA-RNA hybrid Mouse Monoclonal Antibody [S9.6] at dilution of 1:200
蛋白质翻译后修饰(Protein post-translational modification, PTM)在细胞生物调节中发挥着重要作用，PTM是翻译后蛋白质的酶促共价化学修饰，会潜在地改变蛋白质的物理或化学性质、组成、活性、细胞定位或稳定性。一些PTM可以被动态地添加或移除，这是一种可逆的蛋白质功能调控机制。目前超过400个特定的蛋白质修饰已被鉴定，也许还有更多的修饰类型有待发现。迄今为止常见的PTM有磷酸化、泛素化、亚硝基化、甲基化、乙酰化、糖基化及酰基化等。对蛋白质修饰常用的方法之一是用特异性抗体富集修饰性蛋白质，然后做质谱分析。市场上的蛋白质泛修饰抗体，很多由于亲和力不强，不能用于免疫沉淀或者效果不好，直接影响下游蛋白质组的质谱分析结果。戴安生物精心设计制备了赖氨酸乙酰化，甲基化，琥珀酰化和丙二醛-甲醛化等的泛修饰特异性抗体，灵敏度高，特异性强，均可用于Western Blotting和IP，助力您的修饰蛋白质组研究。乙酰化泛抗体|赖氨酸乙酰化抗体|蛋白质修饰泛抗体 戴安生物精心设计制备了赖氨酸乙酰化的泛修饰特异性抗体，灵敏度高，特异性强，均可用于Western Blotting和IP，助力您的修饰蛋白质组研究，可用于WB, IP实验。产品说明书：Attribute:Rabbit Polyclonal AntibodyIsotype:IgGPurity:Antigen Affinity PurificationApplication:WB, IPReactivity：Human, mouse, rat, Zebra fishImmunogen：Acetylated Protein Buffer：PBS with 0.1% sodium azide and 50% glycerol, pH 7.2Storage:Store at -20℃. Do not aliquotRecommended Dilution:WB: 1:1000-2000IP: 1:100-500Background：Acetylation is an important modification of proteins in cell biology. Acetylation occurs in thousands of proteins involved in control of cell cycle and metabolism, longevity, actin polymerization, and nuclear transport. Among these proteins, chromatin proteins and metabolic enzymes are highly represented, indicating that acetylation has a considerable impact on gene expression and metabolism. This antibody is a pan anti-acetylated lysine polyclonal antibody purified with acetylated lysine affinity chromatography. It specifically recognizes proteins with acetyl lysine residues. It works well in Western blotting and Immunoprecipitation, which makes it especially useful in systematically proteomic screening. 公司介绍：武汉戴安生物技术有限公司座落于武汉光谷生物城生物技术研究院，是一家由资深免疫学专家和海外留学人员创建的高科技生物技术企业。公司专注于体外诊断（IVD）试剂及其核心原料的研发生产及技术服务工作, 已成功建立了从IVD核心原料到试剂生产的研发生产路线，完成了原料开发à诊断试剂研发à诊断试剂放大生产的整个技术流程构建，拥有独立自主的抗原抗体的研发、放大生产技术平台及生化试剂大包装研发生产平台。磷酸化、泛素化、亚硝基化、甲基化、乙酰化、糖基化及酰基化等更多蛋白质修饰泛抗体请联系武汉戴安生物。
1背景信息Flag-Tag（DYKDDDDK）， 常用于真核蛋白质重组表达标记。 FLAG标签（DYKDDDDK）融合蛋白纯化试剂盒， 主要成分是Anti-Flag亲和纯化凝胶（Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel），由高品质的Flag抗体与Sepharose 4B琼脂糖颗粒共价偶联制成，具有高载量（至少为1.2mg protein/ml凝胶），高特异性，性质稳定，可反复使用的特点，可用于Flag标签融合蛋白的亲和纯化。2性能指标应用范围： 可用于Met修饰的N端Flag融合蛋白（Met-Flag–Protein），N端Flag融合蛋白（Flag–Protein）和C端Flag融合蛋白（Protein-Flag）的亲和纯化。载量： 1ml Sepharose 4B琼脂糖颗粒，共价偶联8mg Anti-Flag 抗体，可结合至少1.2mg Flag融合蛋白。强度：重力柱纯化，可反复使用5次以上。保存方法： 在加入了50%甘油和0.2‰叠氮钠的PBS保存液后，预装纯化柱可于-20℃可保存1年。3试剂盒组成4注意事项（开箱前必读）本试剂盒冷藏条件下运输，如果暂时不用，请将纯化柱（空柱）取出，室温保存。亲和凝胶于-20℃保存；试剂盒及其它成分保存于 4℃。3×Flag peptide溶解方法：该多肽为轻质粉末，开盖前应离心。多肽本身为酸性，建议将40ul 10xPBS溶液加至1mg多肽粉末中，彻底溶解后，加入160ul双蒸水，制成5mg/ml储存液，-20℃保存。使用时用1xPBS稀释至需要的浓度。按需求浓度稀释至工作浓度。有文献显示，与传统的Glycine-HCl洗脱液相比，本试剂盒提供的pH3.0的Arginine-HCl做为洗脱液，可以减少蛋白质变性，延长抗体亲和纯化柱的使用寿命。客户也可以根据实际情况自行选用配制。5使用方法（所有步骤尽可能在冰上进行，以避免目标蛋白质降解。）细胞裂解液制备悬浮细胞和半贴壁细胞从细胞培养瓶上吹下来后放入离心管中， 1000rpm离心5分钟。贴壁细胞用细胞刮子轻轻从瓶壁上刮下来，放入离心管中1000rpm离心5分钟。预冷的PBS工作液重悬细胞，1000rpm离心3min，弃上清。重复一次。根据细胞的量加入相应体积的细胞裂解液， 反复吹打后冰上放置10-20min，让细胞充分裂解。用超声破碎仪将细胞裂解液超声，直至细胞裂解液透明，不再粘稠。冰上放置30min之后，12000rpm，4℃离心10min。取上清，冷冻保存。装柱及孵育温和重悬Anti-Flag亲和纯化凝胶，至均匀混合，用剪去末端的枪头吸取适量的凝胶至空纯化柱中。10ml（10倍柱体积）PBS清洗Anti-Flag亲和纯化柱。加入含有目标蛋白的真核细胞裂解液， 4℃旋转孵育过夜。根据蛋白质性质选择洗脱方法，具体可参见第5部分问题和建议5.1。3xFlag peptide洗脱液竞争洗脱用1xPBS配制3×Flag peptide洗脱液，终浓度为500μg/ml，也可根据具体情况自行调整工作浓度。加入2ml 3×Flag peptide洗脱液（10倍柱体积），轻柔混匀，浸泡0.5小时后，收集洗脱液，每次收集1ml。如有必要，再次加入2ml 3×Flag peptide洗脱液（10倍柱体积），重复洗脱一次。用紫外检测仪测定收集液, 合并收集液。SDS-PAGE鉴定蛋白质纯度及浓度，并按照需求处理和保存蛋白质。酸性洗脱液酸性洗脱5ml PBS（5倍柱体积）洗柱三次。预冷的5ml pH 5.0酸性预洗液（5倍柱体积）洗涤纯化柱，除去非特异性结合蛋白。预冷的10ml pH 3.0的酸性洗脱液（10倍柱体积）进行洗脱， 每次收集1ml, 收集管中预先放入中和液50μl。注意：酸性环境放置太久会缩短亲和纯化柱的使用寿命，应尽量缩短亲和纯化柱与酸性洗脱液的接触时间。用紫外检测仪测定收集峰, 合并收集峰。SDS-PAGE鉴定蛋白质纯度及浓度，并按照需求处理和保存蛋白质。纯化柱的清洗与再生（洗脱后须立即进行纯化柱的清洗与再生）10倍柱体积PBS清洗纯化柱。酸性洗脱液（pH3.0）洗涤纯化柱，每次三倍柱体积。中和液（pH8.0）洗涤柱子三次，每次三倍柱体积。检测流穿液pH，如为中性，则进行下一步；如仍为酸性，则重复4.5.2和4.5.3。用1xPBS（含50%甘油，0.2‰叠氮钠）清洗，再加入适量该保存溶液至填料中，保存在-20℃。6保存纯化产物加入50%甘油保存在-80度，用于后续功能性实验。 7问题与建议如何选择竞争性洗脱和酸性洗脱？3×Flag peptide洗脱液与蛋白质上的Flag标签竞争亲和纯化柱上的抗体，使蛋白质与抗体的结合被取代而脱离纯化柱，从而被洗脱下来。这种洗脱的特点有：洗脱条件温和，一般不会造成蛋白质变性；有利于亲和纯化柱的保存和反复使用。由于亲和吸附达到平衡比较慢，所以往往需要较长的时间和较大的洗脱体积。特异性强，可以进一步消除非特异性吸附的影响，从而得到较高的分辨率。基本上不会有anti-Flag的抗体被洗脱下来。酸性洗脱是通过改变环境pH，破坏抗原抗体的结合从而使蛋白质脱离纯化柱被洗脱下来，这种洗脱方式的特点有：成本低廉。纯化速度较快。酸性pH会造成部分蛋白质变性，引起目的蛋白质沉淀，降解或失活。有时会有少部分Anti-Flag抗体被洗脱，造成非特异性信号。反复使用酸性洗脱，会造成抗体脱落，也会破坏纯化柱的理化性质，减少纯化柱的反复使用次数。常见的蛋白质的后续处理方法有哪些？透析与超滤透析法是利用半膜将分子大小不同的蛋白质分开。超滤法是利用高压力或离心，强使水和其他小的溶质分子通过半透膜而蛋白留在超滤管内。两者都可以达到换液的目的。使用时需注意选择正确分子量的透析袋和超滤管。过滤除菌可采用微孔滤膜滤器操作，让蛋白质溶液通过0.22um滤膜，即可达到除菌的目的。蛋白质定量鉴定浓度。SDS-PAGE鉴定纯度。如何选择细胞/组织裂解液？本试剂盒提供的细胞裂解液成分如下：使用前可加入1%PMSF和0.5%原钒酸钠, 或其他蛋白酶抑制剂，避免蛋白质降解。客户可根据目的蛋白的性质和后继用途，自行配制细胞裂解液及选择是否加入蛋白酶抑制剂。 使用中的常见问题及解决方案
