皮肤亮白是东方女性一直以来对美的直观追求，因此美白类化妆品成为了市场的宠儿。人体皮肤变黑的主要原因是酪氨酸酶的存在促进了黑色素的合成和黑色素基因的表达，而在斑马鱼皮肤上也有类似的表达过程，因此，可以通过斑马鱼技术有效评价化妆品的美白功效。

【评价原理】

斑马鱼在发育初期全身透明，胚胎发育至 24 h时黑色素开始从视网膜上皮生长。色素细胞起源于背部外胚层分化的一群细胞—神经嵴细胞，然后增殖、迁徙、分化成色素母细胞。在黑色素形成的过程中进行干预，可抑制黑色素的形成。

【实验方案】

我们将斑马鱼分成若干组，含正常对照组和供试品组。正常对照组不做处理，供试品组使用受试化妆品，孵育48 hpf后，对斑马鱼头部进行拍照，利用高级图像处理软件分析斑马鱼头部的黑色素信号强度，从而评价其美白功效。

此外，将斑马鱼进行匀浆处理，分别提取其中的酪氨酸酶和黑色素蛋白，进行OD值测定，通过酪氨酸酶活性和黑色素蛋白的含量反映化妆品的美白功效。

【结果展示】（展示图片仅供参考，实际实验组别依据合同而定）

图1. 斑马鱼头部黑色素表型图（蓝色为分析区域）

阳性对照组和化妆品组与正常对照组对比分析，得出美白功效作用。

图2 斑马鱼酪氨酸酶活力

与正常对照组比较，**p<0.01

供试品组与正常对照组相比，酪氨酸酶活性显著降低。

图3 斑马鱼黑色素蛋白含量

与正常对照组比较，***p<0.001

供试品组与正常对照组相比，黑色素含量显著降低。

【评价结论】

1.经过各组斑马鱼对比实验，阳性对照组和化妆品组与正常对照组对比，斑马鱼头部只有少量的黑色素。

2.经过对斑马鱼进行匀浆和蛋白质提取处理，可见供试品组与正常对照组相比，酪氨酸酶活性和黑色素蛋白含量均减少。

3.本实验证实了该化妆品具有美白的作用。

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环特生物，利用斑马鱼模型实验，为药品企业提供药效评价、药物功效与安全性评价、毒性毒理实验、临床前研究、药物筛选、活性成分筛选等生物检测服务，周期短、费用低、高效专业。助力药品企业做好研发、品控和宣传推广。

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环特生物公司已通过国家CNAS、CMA资质认定和AAALAC国际认证，自有2000m²生物评价实验室。

环特生物在斑马鱼技术研发与应用领域，已牵头起草发布团体标准10项，申请发明专利64余项，自主开发的主要斑马鱼模型150多种，发表SCI及核心期刊论文120余篇，已有7个新药项目成功将环特生物斑马鱼实验数据用于CFDA的临床试验申报，公司已累计完成项目超5000个，建立长期合作客户600多家。

环特生物是中国首家斑马鱼生物技术研究开发企业，专注于药物与大健康产品研发及毒理学评价等领域的技术外包服务，是中国首家通过AAALAC国际认证的斑马鱼研发机构，也是国家高新技术企业和国家火炬计划企业，并通过了中国合格评定国家认可委员会（CNAS，China National Accreditation Service for Conformity Assessment）和中国计量认证/认可（CMA，China Metrology Accredidation）的认证，检验检测项目表如下。

CNAS是由国家认证认可监督管理委员会批准设立并授权的国家认可机构，主要负责认证机构、实验室和检查机构等相关机构的认可工作。中国合格评定国家认可委员会是国际认可论坛（IAF）、国际实验室认可合作组织（IL-AC）、亚太实验室认可合作组织（APLAC）和太平洋认可合作组织（PAC）的正式成员，获得CNAS认证的实验室，也得到上述国际组织认可。

CMA是对检测机构的检测能力及可靠性进行全面的认证及评价。认证对象为所有对社会出具公正数据的产品质量监督检验机构及其他各类实验室如各种产品质量监督检验站、环境检测站、疾病预防控制中心等等。

下图为CNAS检测项目表：

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【评价原理】

人类在整个生命周期中,不断地更新血液成分、骨骼肌、皮肤等, 修复骨骼、 肌肉、指尖等部位较小的损伤。斑马鱼鱼鳍相当于人的手臂或腿，其修复再生能力比人类更加强大。紫外线通过破坏和蛋白质等生物大分子的结构，进而影响细胞和生物组织的正常生长和发育，引起细胞异常凋亡和发育畸形。长期暴露于紫外线辐射是导致皮肤光老化、光损伤和光致癌发生的主要环境因素，表现为皮炎、皮肤松弛增厚、变硬、皱纹增多、胶原降解和皮肤癌。被紫外线照射的斑马鱼尾鳍也会变得粗糙、皱缩并发生细胞凋亡。

在较短的时间内，斑马鱼尾鳍可完成修复，表现为在显微镜下可以被观察到尾鳍面积的恢复，同时用特异性的荧光染色（凋亡细胞呈绿色）可被观察到凋亡细胞的减少。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和使用防晒剂组。其中正常对照组未照射紫外线，模型对照组与使用防晒剂组都照射了同等强度的紫外线。防晒剂主要使用茶多酚、SOD等。

使用防晒剂一段时间后，我们将斑马鱼置于解剖显微镜下观察斑马鱼尾鳍面积变化；同时，使用特异性荧光染色，观察斑马鱼尾鳍凋亡细胞数量。

【结果展示】

图1. 斑马鱼紫外线照射尾鳍面积表型图

绿色虚线区域为斑马鱼尾鳍

可以看到，使用防晒剂组的斑马鱼尾鳍与未照射紫外线的正常对照组比较相似，没有模型的尾鳍面积缩小。

图2. 斑马鱼紫外线照射尾鳍凋亡细胞表型图

白色箭头指向尾鳍凋亡细胞

可以看到，使用防晒剂组的斑马鱼尾鳍凋亡细胞个数与未照射紫外线的正常对照组比较相似，没有明显的细胞凋亡。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，使用防晒剂组的尾鳍面积、凋亡细胞个数与未照射紫外线的正常对照组比较相似，没有模型对照组尾鳍面积缩小和细胞凋亡增多的情况。

2.本实验证实了茶多酚、SOD等具有显著的防晒（晒后修复）功效。

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【评价原理】

通常来说，炎症是机体的一种抗病反应，机体蒙受损坏后，机体的内坏境以及内境界和外坏境之间达到新的均衡的过程中会引发组装细胞的损坏，使片面组装细胞显现变性、坏死。

利用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼（MPO）作为模型，当体内炎症水平上升的时候，中性粒细胞的数量也就相对的增高，在荧光显微镜下，中性粒细胞的数量也就是表现出炎症反应程度的一个重要指标。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成两组，分别是正常对照与供试品组，通过服用/注射供试品一段时间后，我们在荧光显微镜下观察斑马鱼中性粒细胞的数量，同时检测体内炎症因子IL-6的表达情况。

【结果展示】

图1. 斑马鱼中性粒细胞数量

（白色箭头为斑马鱼侧线中性粒细胞）

从实验结果可以看到，供试品组相对正常对照组斑马鱼侧线位置中性粒细胞数显著增多。

图2：斑马鱼体内的中性粒细胞数量及体内炎症因子表达水平的变化

从实验结果可以看到，斑马鱼供试品组相对正常对照组，IL-6炎症因子相对表达量下降。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，相对于正常对照组，服用或者注射供试品组之后，中性粒细胞增多和炎症因子上升。

2.本实验证实了供试品组等具有增加中性粒细胞数量，以及促进炎性因子表达的功效。

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【评价原理】

由于斑马鱼拥有与人类相似的消化系统，如肝脏、肠道等，消化和营养的吸收及运输与人类高度相似。斑马鱼的卵黄囊70%左右是中性脂肪，如果能够促进斑马鱼卵黄囊的吸收，就相当于可以促进脂肪的分解和代谢，类似于体内脂肪燃烧。

经过脂肪特异性荧光染色（呈红色），斑马鱼的卵黄囊被染红，可以明显被观察到。

【实验方案】

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组和服用燃脂产品组。其中正常对照组未摄入其他物质，服用燃脂产品组摄入了白藜芦醇之类的燃脂产品（燃脂产品通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。

服用一段时间燃脂产品后，我们对斑马鱼卵黄囊做脂肪特异性荧光染色，观察卵黄囊的脂肪颜色变化。

【结果展示】

图1. 斑马鱼卵黄囊脂肪表型图

黄色虚线区域为斑马鱼卵黄囊

可以看到，服用燃脂产品的斑马鱼卵黄囊荧光强度与正常对照组明显减弱。

【评价结论】

1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用燃脂产品组卵黄囊荧光强度与正常对照组比较明显减弱。

2.本实验证实了白藜芦醇具有明显燃脂（促进脂肪代谢）功效。

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【评价原理】

半数致死浓度（LC50）是指在动物急性毒性实验中，使受试动物半数死亡的毒性浓度。在比较各种污染物的毒性，不同种或不同发育阶段的动物对污染物的敏感性以及环境因素对毒性影响等方面的研究中，都以LC50为依据。常规急性毒性实验常采用啮齿类和非啮齿类动物进行，能较准确地反映食品及保健食品的安全性，但实验周期一般较长，用量较大。用斑马鱼胚胎检验食品及保健食品的急性毒性，具有体积小，成本低，易于饲养，重复性好，便于观察，繁殖周期短，繁殖频率高，给药方式简单等诸多优点。因此斑马鱼是一种理想的试验模型，用以确定食品及保健品暴露在胚胎中的毒性效应，评价其半数致死浓度。

根据实验终点斑马鱼的死亡率，通过使用OriginPro 8.0统计学软件，拟合半数致死浓度。

【实验方案】

我们将供试品（保健食品）设置一系列浓度，并设置一个正常对照组。同时设置3个生物学重复。药物通过溶解到养鱼用水中或灌胃的方式摄入到斑马鱼体内进行3天的暴露实验。

每天观察记录斑马鱼死亡情况，药物处理结束后，统计各实验组的斑马鱼致死率，使用OriginPro 8.0统计学软件绘制最佳的剂量效应曲线，并计算LC50。

【结果展示】

图1. 斑马鱼“浓度-死亡率”效应曲线

可以看到，利用OriginPro 8.0软件模拟得出保健食品LC50= 8.0 μg/mL。

【评价结论】

1.根据保健食品“浓度-死亡率”统计数据，利用OriginPro 8.0软件模拟得出LC50=8.0 μg/mL。

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